一、基质金属蛋白酶与弥漫性肺间质纤维化（论文文献综述）
陈红[1]（2021）在《结缔组织性疾病相关肺间质病变患者血清MMP-2、MMP-3、MMP-7及MMP-9的表达及临床相关性研究》文中进行了进一步梳理目的:探讨基质金属蛋白酶（MMPs）在结缔组织性疾病（CTD）相关肺间质病变（ILD）患者血清中的表达及与病情活动的相关性;分析CTD-ILD患者外周血中淋巴细胞亚群表达变化,探究淋巴细胞亚群的变化与CTD-ILD的进展的潜在相关性。方法:（1）选取右江民族医学院附属医院2019年10月至2020年10月期间收治的100例结缔组织性疾病患者（CTD组）、80例结缔组织性疾病相关肺间质病变患者（CTD-ILD组）、以及80例健康者（正常组）作为研究对象。（2）由临床收集数据分析三组受试者的血清MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9水平。（3）临床检测CTD-ILD组患者的血清C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）、类风湿因子（RF）、免疫球蛋白A（Ig A）、免疫球蛋白G（Ig G）、免疫球蛋白M（Ig M）和补体（C3、C4）的表达量。（4）分析血清中MMPs的水平与第一秒用力呼气量（FEV1）、FEV1与用力肺活量的比值（FEV1/FVC）、用力肺活量（FVC）这些病情活动性指标的相关性。（5）使用流式细胞术检测淋巴细胞标记物CD3/CD16+56/CD45/CD4/CD19/CD8在CTD-ILD患者外周血中的表达水平。结果:（1）CTD-ILD组患者血清中MMP-3、MMP-7、MMP-9水平显着高于CTD组和正常组（P<0.05）患者,而MMP-2的表达量显着低于CTD组和正常组患者（P<0.05）。（2）CTD组患者血清中MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9显着高于正常组（P<0.05）。（3）CTD-ILD组患者血清MMP-7表达量与CRP、ESR、RF均呈现为显着正相关关系（P<0.05）,与Ig G和C3呈现为显着负相关关系（P<0.05）,而MMP-2、MMP-3、MMP-9水平与CRP、ESR、RF、Ig A、Ig G、Ig M无显着相关性（P>0.05）。（4）CTD-ILD患者血清MMP-7表达量与FEV1%、FEV1/FVC、FVC均呈现为显着正相关关系（P<0.05）,而MMP-2、MMP-3、MMP-9水平与FEV1%、FEV1/FVC、FVC无显着相关性（P>0.05）。（5）三组患者外周血中CD3/CD16+56/CD45/CD4/CD19/CD8标记的淋巴细胞表达无统计学差异（P>0.05）。（6）pearson统计分析显示CTD-ILD患者清中MMP-7表达水平与B细胞百分比呈现出显着的正相关关系（P<0.05）。结论:结缔组织性疾病以及相关肺间质病变患者血清中MMP-3、MMP-7、MMP-9的表达量显着增高,MMP-7水平增高提示肺部活动性病变,有可能作为早期诊断及评估病情进展的生物标志物。
蔡松[2]（2021）在《肺纤维化的六经辨证研究及大黄（？）虫丸干预肺纤维化大鼠的实验研究》文中进行了进一步梳理目的通过临床研究,总结肺纤维化的六经分布规律,研究肺纤维化六经辨证分型与一般情况、主要症状、评分指标及血瘀兼证的相关性,探讨血瘀兼证在肺纤维化六经辨证中的意义,为肺纤维化临床辨证论治提供思路延展。通过动物实验,探究大黄（?）虫丸对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠肺功能及生存状态的影响,并从大黄（?）虫丸对TGF-β1/Smad3信号通路的影响探讨其干预肺纤维化的作用机制。方法临床部分:本研究通过调查问卷的方式采集入组患者的一般资料、病史、四诊信息等,进行六经辨证分型,并对血瘀兼证患者进行积分量化,使用SPSS软件进行统计学分析,以期总结出肺纤维化患者的六经辨证分型特点及与一般情况、主要症状、评分指标、血瘀兼证之间的关系,以研究肺纤维化的六经辨证规律。实验部分:采用气管内滴入博来霉素复制大鼠肺纤维化模型。大鼠随机分为空白组（A）、模型组（B）、吡非尼酮组（C）、大黄（?）虫丸大剂量组（D）、大黄（?）虫丸中剂量组（E）、大黄（?）虫丸小剂量组（F）六组。观察大鼠的生存状态,给药28天后检测肺功能。取肺组织观察病理变化,实时PCR检测TGF-β1、Ⅰ型胶原及Smad3蛋白的mRNA表达;Western blot法检测Smad3、p-smad3的蛋白表达水平。结果临床部分:1.99例患者中男性患者59例,女性患者40例,其中患者年龄最小的为28岁,年龄最大的为93岁,所有患者平均年龄为63.18±12.06岁,年龄分布以61-70岁之间最多,病程在1-3年之间最多。有吸烟史的患者有46例,其中男性占绝大多数。接触异物的患中接触粉尘的最多。合并循环、呼吸系统疾病者较多。2.有咳嗽症状的患者有88例,轻度咳嗽者居多,咳嗽无明显规律的患者最多。64例患者有咯痰,咳痰量为中量、黄白相兼的粘稠痰者最为多见,咯痰难易无明显差异。93.9%的患者出现气短,61-70岁这一年龄段的患者最多,轻度气短的患者最多。87.9%的患者出现喘息,轻度喘息的患者最多,61-70岁之间的患者最多。出现最多的症状为口干,口苦,胸闷,乏力,面色萎黄;舌暗红,苔薄黄,脉弦细最为多见。3.属于血瘀证的患者有89例。其积分最小的为3分,最大的为12分,平均值为5.87±1.65分,中度血瘀的患者最多。mMRC呼吸困难指数评分为1分的患者最多,占比为46.5%;4.六经辨证中单经病76例,其中少阳病为最多见,有46例;最少的是太阳病,仅有1例,占比为1.0%。两经合病22例,有四种合病类型,分别是太阳少阳、阳明少阳、少阳太阴、阳明太阴,其中以阳明少阳合病最为多见,有13例;太阳少阳合病与阳明太阴合病最少,各仅有1例。四经合病仅有1例,为阳明少阳太阴少阴合病。5.肺纤维化的六经辨证与患者性别、年龄、病程、咳嗽程度、气短程度、喘息程度、mMRC评分不具有明显相关性。6.肺纤维化的六经单经辨证分型与咯痰量有关,咯痰量大者与少阴病有关,咯痰量少者与太阴病有关;肺纤维化的六经合病辨证分型与血瘀兼证的分级有关,中度血瘀者与阳明少阳合病、少阳太阴合病有关;重度血瘀者与少阳太阴合病有关。实验部分:1.模型组～中剂量组大鼠死亡率相近,小剂量组造模后无死亡;与空白组相比,模型组FVC、FEV0.2、CL降低（P<0.05）,Ri、Re、0.2秒率升高（P<0.05）;与模型组比较,吡非尼酮组～小剂量组Ri、Re降低（P<0.05）,CL升高（P<0.05）,中剂量组、小剂量组FVC、FEV0.2升高（P<0.05）,0.2秒率降低（P<0.05）,小剂量组PEF升高（P<0.05）;病理可见模型组大鼠肺泡结构破坏,炎细胞浸润,胶原大量沉积,纤维化改变明显,吡非尼酮组～小剂量组纤维化程度较模型组减轻,以小剂量组最为明显。2.病理:模型组纤维化改变明显,小剂量组纤维化程度为各用药组中最轻。PCR:较空白组相比,模型组～中剂量组大鼠TGF-β1、Smad3及Collagen Ⅰ的基因表达均显着升高（P<0.01）,小剂量组Smad3、Collagen Ⅰ的基因表达显着升高（P<0.01）,TGF-β1的基因表达明显升高（P<0.05）;较模型组相比,小剂量组TGF-β1、Smad3的基因表达显着降低（P<0.01）,Collagen Ⅰ的基因表达明显降低（P<0.05）;较吡非尼酮组相比,小剂量组TGF-β1的基因表达显着降低（P<0.01）,Smad3、Collagen Ⅰ的基因表达明显降低（P<0.05）。Western blot:与空白组相比,模型组Smad3蛋白表达明显升高（P<0.05）、模型组～大剂量组p-smad3蛋白表达均显着升高（P<0.01）,中剂量组p-smad3蛋白表达明显升高（P<0.05）;与模型组相比,中剂量组Smad3、大剂量组p-smad3蛋白表达明显降低（P<0.05）,中剂量、小剂量组p-smad3蛋白表达均显着降低（P<0.01）;与吡非尼酮组相比,小剂量组p-smad3蛋白表达显着降低（P<0.01）。结论从99例肺纤维化患者资料临床观察结果分析,可以认为:1.肺纤维化的六经单经病以少阳病为主,两经合病以少阳阳明合病为多,多经合病可见阳明少阳太阴少阴合病。2.肺纤维化的六经辨证与患者性别、年龄、病程、咳嗽程度、气短程度、喘息程度、mMRC评分不具有明显相关性。3.肺纤维化的六经单经辨证分型与咯痰量有关,咯痰量大者与少阴病有关,咯痰量少者与太阴病有关;肺纤维化的六经合病辨证分型与血瘀兼证的分级有关,中度血瘀者与阳明少阳合病、少阳太阴合病有关;重度血瘀者与少阳太阴合病有关。4.肺纤维化患者多兼见血瘀证,血瘀程度以中度者为多,结合肺纤维化的六经辨证特点,提示肺纤维化与少阳三焦及血瘀兼证关系密切。从本研究实验部分的结果分析,可以认为:大黄（?）虫丸可改善博来霉素致肺纤维化大鼠肺功能指标及疾病状态,小剂量使用效果更佳,对肺纤维化大鼠的存活有保护作用,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减少细胞外基质沉积有关。但小剂量是否为大黄（?）虫丸的最佳使用剂量,仍需更多的重复实验及更进一步的研究后方能最终确定。
李珂珂,葛春蕾,张兴彩[3]（2021）在《槲皮素治疗肺间质纤维化作用机制研究进展》文中指出肺间质纤维化是一种慢性、进行性间质性肺疾病,以弥漫性肺泡炎及肺泡结构破坏为特征。肺纤维化病因复杂,发病机制尚不明确,尚未有明确、有效的治疗手段,为呼吸系统难治性疾病。槲皮素是自然界广泛存在的天然黄酮类化合物,具有多种生物活性。各项研究表明,槲皮素能够对抗肺间质纤维化的形成,有安全性高、价格低廉、简便易得等优点。该文旨在整理、归纳近年来槲皮素治疗肺纤维化作用机制,以期能够为肺纤维化的治疗提供资料。
王灿[4]（2020）在《探讨仙茅—淫羊藿药对对肺纤维化大鼠VEGF、PDGF干预作用及临床分析》文中研究表明目的:本研究通过对张伟教授诊疗间质性肺疾病患者的门诊处方,进行数据挖掘,分析其内在用药规律,发现治疗间质性肺疾病肾虚证患者常用药物,后开展动物实验,通过动物实验建立肺纤维化大鼠模型,从病理、VEGF和PDGF等相关生物因子多角度观察分析淫羊藿、仙茅、“淫羊藿-仙茅”药对对肺纤维化大鼠模型的影响作用,以期为中医药治疗肺纤维化探索新的方法。方法:通过对2019年6月-2019年12月门诊处方进行整理,筛选出符合纳入标准的门诊病历,应用SPSS Modeler 18.0软件进行数据挖掘,数据挖掘模型运用关联规则Apriori算法建立,绘制药物关联Web图,发现使用频率最高的药物及其经典药对进行动物实验,将60只SPF级SD大鼠随机分为6组:A空白组、B激素对照组、X模型对照组、H仙茅对照组、I淫羊藿对照组、K二仙药对对照组,每组各10只,采用气管插管快速灌注博莱霉素方法制作肺纤维化大鼠模型,并按照对应药物进行灌胃干预,分别于14天、28天随机处死,光镜下观察大鼠HE染色后肺组织切片的病理变化,Elisa法测定腹主动脉血中VEGF、PDGF表达水平。应用SPSS26.0统计软件进行数据处理,计量资料以均数±标准差（x±s）表示,组间比较采用方差分析,多重比较字母标记法进行分组,组内比较采用单因素方差分析。结果:通过对临床门诊228例处方归纳分析后发现补气药累计应用频次最高达895次,中药“淫羊藿”累计使用频次最高达226次。后进行动物实验研究发现,仙茅组、淫羊藿组、二仙药对组同模型组比较,均具有明显差异（P<0.01）,VEGF的表达水平明显低于模型组,仙茅组PDGF-BB含量低于模型组,具有统计学意义（P<0.05）。结论:通过研究发现,临床处方中“淫羊藿”使用频率较高,以“淫羊藿”为抓手,探求其经典药对“二仙药对”对肺纤维化的治疗作用,进行动物实验研究,发现仙茅组、淫羊藿组、二仙药对组可以显着降低VEGF的含量,从而起到对肺纤维化的抑制作用,且效果优于激素。进一步分析发现,二仙药对组安全性优于淫羊藿组与仙茅组。“淫羊藿-仙茅”作为药对具有相须、相杀的作用进一步被证实,为临床治疗提供指导建议。
冯菲菲[5]（2020）在《丹参酮IIA对矽肺肺损伤及纤维化的保护作用及机制研究》文中指出研究背景目前,职业性尘肺病依然是我国最为严重的职业病,而矽肺是尘肺中最常见的类型。矽肺由长久暴露于含大量游离二氧化硅的粉尘所引起,以肺脏弥漫性结节性纤维化为特征,并呈进行性发展,最终严重损害肺功能,导致呼吸衰竭甚至死亡。近年来,由于工业化进程的发展,矽肺的发病率和流行率一直在上升,特别是在发展中国家。中国拥有最大的矽肺患者人群,每年全国因矽肺病导致的直接经济损失达80多亿,间接损失难以计数。在发达国家,矽肺同样也是一个备受瞩目的职业健康问题。但矽肺的发病机制目前尚不明确,且缺乏有效的治疗措施,因此,研究和探索矽肺的发病机制及新的防治方法十分必要。矽肺的发病与进展是一个多因素的复杂过程,其中包括二氧化硅引起的持续性肺部炎症和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的过度沉积,最终导致正常肺组织结构的不可逆性破坏和肺纤维化。既往研究已经发现了许多矽肺的重要致病机制,其中氧化应激是调节多种生物过程和信号转导途径的重要分子机制。当机体吸入二氧化硅颗粒时,它们被肺泡巨噬细胞吞噬并持续存在,通过活性氧（reactive oxygen species,ROS）和活性氮的形成引起氧化应激反应。氧化应激可导致上皮细胞表型异常,包括激发细胞因子产生、促进上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）和诱导上皮细胞凋亡,导致成纤维细胞的增殖和ECM在肺组织中的过度沉积,并进一步诱导细胞毒性、氧化应激和肺部炎症,最终导致矽肺的发生。在此过程中,许多细胞因子成分参与了对肺纤维化的正向或负向的调节,其中转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）是强有力的致纤维化的关键细胞因子。TGF-β1主要通过经典的TGF-β1/Smad信号途径对纤维化疾病中的细胞增殖、分化、迁移、免疫调节及ECM转变过程具有重要的调控功能。大量研究表明TGF-β1/Smad信号通路的失调是组织纤维化的重要致病机制,其作为一种有效的抗纤维化治疗靶点受到了越来越多的关注,因此,抑制TGF-β1/Smad信号通路可能是缓解矽肺肺纤维化的一种治疗策略。为了保持适当的氧化还原平衡,我们的机体形成了一套复杂的氧化应激应答系统,包括一系列内源性抗氧化酶。肺损伤可同时导致TGF-β1和氧化应激水平的升高。越来越多的证据表明,ROS和氧化应激的产生与许多细胞因子和促纤维化生长因子的产生和激活有关。TGF-β1/Smad信号通路的激活是纤维化形成的主要驱动力,而氧化应激是与TGF-β1的促纤维化活性有关的重要有害促进因素。在整个纤维化过程中,TGF-β1与氧化应激信号之间有明显的相关性。TGF-β1可提高肺组织的ROS水平,ROS反过来刺激TGF-β1相关的成纤维细胞活化和肌成纤维细胞分化。研究发现与TGF-β1相关的纤维化事件与活性氧清除酶的降低和/或ROS产生酶的诱导生成增加有关。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH）氧化酶（NADPH oxidases,NOX）是内源性ROS产生的主要来源。其中NOX4具有独特的组成活性,作为细胞外ROS产生的主要酶源,NOX4衍生的ROS已被公认为氧化应激的主要来源。NOX4作为TGF-β1诱导的促纤维化反应的下游介质,诱导ROS的形成,并通过调节TGF-β1诱导的成纤维细胞活化、肌成纤维细胞分化参与了纤维化的发病机制。研究表明NOX4在纤维化疾病中上调,对肝、肾、肺和心脏纤维化的发病机制有重要贡献。NOX4被认为是肺纤维化与TGF-β1信号传导增强相关的潜在治疗靶点。核因子-红系 2 相关因子-2（nuclear factor erythroid 2-related factor-2,Nrf2）是一个重要的氧化还原敏感转录因子,参与宿主防御氧化应激。Nrf2在静止时与其抑制剂胞浆蛋白Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Kelch-like ECH-associated protein-1,Keap1）结合,在组织损伤介导的ROS或亲电刺激下从Keap1释放,进入细胞核,激活抗氧化反应原件（antioxidantresponse element,ARE）,诱导下游抗氧化剂和解毒酶的表达,包括血红素加氧酶-1（Hemeoxygenase-1,HO-1）和NADPH 醌氧化还原酶（NADPH quinone oxidoreductase,NQO-1）等,是维持细胞氧化还原稳态的必需因素。研究证明Nrf2参与了纤维化形成的动态过程,并似乎是组织纤维化的负调节因子。Nrf2不仅平衡氧化应激,而且对TGF-β1介导的纤维化促进信号转导有负调节作用。研究证明Nrf2似乎可发挥细胞自主抗纤维化的作用。在持续性的器官纤维化中,Nrf2激活受损,从而改变了 NOX4-Nrf2氧化还原平衡和导致肌成纤维细胞获得抗凋亡表型。Nrf2作为多种抗氧化、抗炎和抗纤维化通路的主调节器的证据使其具有作为治疗目标的潜在价值,Nrf2信号的激活可减轻肺损伤和肺纤维化的进展,提示靶向Nrf2/ARE信号通路的策略具有抗矽肺肺纤维化的潜能。天然产物在药物的研发中起着非常重要的作用。丹参酮ⅡA（Tanshinone ⅡA,Tan ⅡA）是中药丹参中最重要的有效活性成分,具有良好的生物利用度和多种药理效用,其在多种器官中被报道具有抗炎、抗氧化、抗纤维化等特性。然而,对丹参酮ⅡA治疗矽肺的疗效研究甚少,丹参酮ⅡA是否具有对矽肺的治疗作用,以及其分子作用机制仍然未知。它是否可以有效缓解矽肺的肺损伤及肺纤维化呢?研究目的1.研究丹参酮ⅡA腹腔注射对矽肺大鼠模型的治疗作用,从肺组织病理学、气道炎症细胞募集、肺组织炎症因子含量等方面观察丹参酮ⅡA对矽肺的保护和治疗作用。2.体内实验研究丹参酮ⅡA是否可抑制矽肺大鼠的TGF-β1/Smad信号通路;体外实验研究丹参酮ⅡA是否可抑制二氧化硅诱导的A549及HBE细胞的上皮间充质转化（EMT）及TGF-β1/Smad信号通路的激活,从而减轻二氧化硅诱导的肺纤维化。3.体内及体外实验探讨丹参酮ⅡA是否能减轻二氧化硅导致的氧化应激,并通过抑制NOX4表达、激活Nrf2/ARE抗氧化应激信号通路来发挥对二氧化硅诱导的肺损伤及纤维化的保护作用。实验方法1.体内实验1.1动物造模及给药处理1)48只SD大鼠（年龄6～8周,体重200±20g）随机分为四组（每组12只）:ⅰ)对照组;ⅱ)丹参酮ⅡA组;ⅲ)矽肺组;ⅳ)矽肺+丹参酮ⅢA组。气管插管法建立矽肺大鼠模型:SD大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠（40 mg/kg）麻醉后,矽肺组及矽肺+丹参酮ⅡA组大鼠气管内置入硬膜外麻醉导管,然后将1 ml二氧化硅粉尘悬浮液（50mg/ml）及0.25ml空气灌入气管。之后,立即旋转大鼠,使注射液均匀地分布在肺部。对照组及丹参酮ⅡA组气管插管法灌入等量生理盐水及空气。2)造模2天后,给予丹参酮ⅡA组和矽肺+丹参酮ⅡA组大鼠每日腹腔注射25 mg/kg体重的丹参酮ⅡA共40天,对照组和矽肺组大鼠同时每日腹腔注射等量无菌生理盐水。造模42天后,4组大鼠均收集支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）,后麻醉处死获取肺组织。1.2观察丹参酮ⅡA对矽肺大鼠的治疗作用1)测量各组大鼠肺组织的湿/干重比。2)取各组大鼠肺组织石蜡包埋切片行H&E染色和Masson染色。3)免疫组织化学染色及RT-PCR法检测各组大鼠肺组织中Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）、纤维连接蛋白1（FN1）及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达水平。4)Giemsa染色法计数各组大鼠BALF中的总细胞数及中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞的数量。5)ELISA试剂盒测定各组大鼠肺组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）和白介素1β（IL-1β）的含量。1.3检测各组大鼠肺组织内氧化应激水平采用活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）检测试剂盒检测各组大鼠肺组织内氧化应激水平。1.4 TGF-β1/Smad信号通路关键因子测定1)采用定量RT-PCR法检测各组大鼠肺组织中Tgfb1及其下游Smad2、Smad3和Smad7的mRNA表达水平;2)采用 Western Blot 法检测肺组织中 TGF-β1、p-Smad2/3、Smad2/3、p-Smad3、Smad3及Smad7的蛋白表达水平。1.5 NOX4及Nrf2/ARE信号通路关键因子的测定1)采用定量RT-PCR法检测各组大鼠肺组织中Nox4、Nrf2、Keap1及其下游Ho1、Nqo1的mRNA表达水平;2)采用Western Blot法定量检测各组大鼠肺组织中NOX4、细胞质Nrf2、细胞核Nrf2、Keap1及其下游HO-1、NQO-1的蛋白表达水平。2.体外实验2.1二氧化硅（Si02）及丹参酮ⅡA处理浓度筛选体外培养A549及HBE细胞,接种于96孔板,应用CCK-8试剂盒测定不同浓度二氧化硅及丹参酮ⅡA对A549和HBE细胞活力的影响。将细胞分别用不同浓度的 Si02（0、25、50、100、200、400、800μg/ml）或丹参酮 ⅡA（0、2.5、5、10、20、40、80μM）处理24h。CCK-8试剂盒检测细胞活性。筛选适当的Si02及丹参酮ⅡA处理浓度用于后续实验。2.2细胞分组及处理体外培养A549及HBE细胞,更换无血清培养基后,将A549细胞和HBE细胞分为以下几组:1)空白对照组;2)Si02组:单独Si02（100 μg/ml）处理细胞24 h;3)Si02+丹参酮ⅡA组:Si02（100μg/ml）联合不同剂量的丹参酮ⅡA（5、10 或 20μM）处理细胞 24 h。2.3 EMT标志物及TGF-β1/Smad信号通路关键因子测定1)采用 Western Blot 法检测各组细胞中 E-cadherin、Vimentin、FN1、CollagenⅠ和α-SMA的蛋白表达水平。2)采用 Western Blot 法检测各组细胞中 TGF-β1、p-Smad3、Smad3 及 Smad7 的蛋白表达水平。3)采用细胞免疫荧光法检测各组细胞中TGF-β1的表达水平。2.4检测各组细胞中的ROS水平应用ROS检测试剂盒检测各组细胞中的ROS水平。2.5 NOX4及Nrf2/ARE信号通路关键因子的测定1)采用 Western Blot 法检测各组细胞中 NOX4、Nrf2、Keap1、HO-1 及 NQO-1的蛋白表达水平。2)采用细胞免疫荧光法检测各组细胞中Nrf2的表达水平。3.统计学分析应用IBM SPSS Statistics 19.0统计学软件进行数据处理,计量资料若符合正态分布以平均值±标准差（Mean±SD）表示,组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）或Kruskal-Wallis非参数检验,组间两两比较采用LSD法或Dunn-Bonferroni法。P<0.05为差异有统计学意义。实验结果1.丹参酮ⅡA对矽肺大鼠的治疗作用1.1丹参酮ⅡA可缓解矽肺大鼠的肺损伤及纤维化矽肺组大鼠的肺湿/干重比较对照组显着增加,经丹参酮ⅡA治疗后显着下降。对各组大鼠肺组织进行组织病理染色,H&E染色显示矽肺组大鼠肺组织失去正常肺泡结构,肺泡壁增厚,伴有大量炎性细胞浸润,并在支气管树和血管床周围形成特征性的矽肺结节,表现为弥漫性肺纤维化,而经丹参酮ⅡA治疗后这些破坏作用得到缓解。Masson染色结果提示丹参酮ⅡA治疗能显着降低矽肺大鼠肺组织中的胶原沉积。免疫组织化学染色及RT-PCR检测显示丹参酮ⅡA治疗能显着降低矽肺大鼠肺组织中的Collagen Ⅰ、FN1及α-SMA的表达水平。以上结果表明丹参酮ⅡA治疗可减轻矽肺大鼠的肺损伤及纤维化。1.2丹参酮ⅡA可降低矽肺大鼠的炎症水平与对照组相比,矽肺组大鼠肺泡灌洗液中的总细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞数量均显着增加,而经丹参酮ⅡA治疗后显着减少;矽肺组大鼠肺组织中炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β的水平较对照组显着增加,而经丹参酮ⅡA治疗后显着下降。2.丹参酮ⅡA可抑制二氧化硅诱导的EMT及TGF-β1/Smad信号通路的激活2.1丹参酮ⅡA可抑制矽肺大鼠TGF-β1/Smad信号通路的激活通过RT-PCR和Western Blot分析,我们测定了 TGF-β1及其下游信号通路Smad2、Smad3和Smad7的活性。结果显示,矽肺大鼠肺组织的TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平均显着升高,而经丹参酮ⅡA治疗后显着下降;矽肺大鼠肺组织的Smad2和Smad3的mRNA和蛋白水平均无显着改变,而p-Smad3和p-Smad2/3的蛋白表达水平显着升高,而经丹参酮ⅡA治疗后显着下降;作为TGF-β1/Smad通路的负调控因子,Smad7的mRNA和蛋白表达水平在矽肺大鼠肺组织中显着下调,而经丹参酮ⅡA治疗后显着上调。上述结果表明丹参酮ⅡA对TGF-β1/Smad信号通路的抑制作用与其对矽肺肺纤维化的保护作用有关。2.2丹参酮ⅡA抑制二氧化硅诱导的A549和HBE细胞的上皮间质转化（EMT）及TGF-β1/Smad信号通路的激活2.2.1丹参酮ⅡA可抑制二氧化硅诱导的A549及HBE细胞的EMT我们用Western Blot检测丹参酮ⅡA对二氧化硅（Si02）诱导的A549和HBE细胞的EMT的抑制作用。结果显示:用Si02（100μg/ml）处理A549和HBE细胞24 h后,其上皮标志物E-cadherin表达下调,间充质标志物Vimentin、FN1、Collagen Ⅰ和α-SMA的表达均上调。而丹参酮ⅡA共处理可上调两种细胞中E-cadherin的表达,下调Vimentin、FN1、CollagenⅠ和α-SMA的表达,并呈剂量依赖性。这些结果表明丹参酮ⅡA可抑制二氧化硅诱导的A549和HBE细胞的EMT。2.2.2丹参酮ⅡA可抑制二氧化硅诱导的A549及HBE细胞的TGF-β1/Smad信号通路的激活我们用Western Blot检测丹参酮ⅡA对二氧化硅（Si02）诱导的A549和HBE细胞的TGF-β1/Smad信号通路激活的抑制作用。结果显示:Si02（100 μg/ml）处理24 h后,A549和HBE细胞的TGF-β1及其下游p-Smad3表达显着上调,同时Smad7表达显着下调,而Smad3表达无显着变化,表明SiO2刺激对A549和HBE细胞中TGF-β1/Smad信号通路具有激活作用。而丹参酮ⅡA共处理可显着下调TGF-β1和p-Smad3的表达,上调Smad7的表达,并呈剂量依赖性。细胞免疫荧光分析也证实了丹参酮ⅡA对Si02诱导的A549和HBE细胞中TGF-β1表达的抑制作用。以上结果表明,丹参酮ⅡA在体外部分通过抑制TGF-β1/Smad信号通路的激活抑制二氧化硅诱导的肺纤维化。3.丹参酮ⅡA可减轻二氧化硅诱导的氧化应激,抑制NOX4的表达并激活Nrf2/ARE信号通路3.1丹参酮ⅡA可减轻矽肺大鼠的氧化应激,抑制NOX4的表达并激活Nrf2/ARE信号通路我们采用活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）检测试剂盒检测各组大鼠肺组织内氧化应激水平,结果可见矽肺组大鼠的ROS和MDA含量升高,伴随着SOD和GSH-Px活性的下降,而矽肺+丹参酮ⅡA治疗组大鼠的ROS和MDA含量相对于矽肺组大鼠下降,SOD和GSH-Px活性上升。以上结果表明丹参酮ⅡA具有减轻矽肺大鼠氧化应激的作用。我们通过RT-PCR和Western Blot检测丹参酮ⅡA是否可抑制NOX4的表达,并激活矽肺大鼠的Nrf2/ARE信号通路,从而对矽肺大鼠的氧化应激损伤起保护作用。结果显示矽肺组大鼠肺组织中NOX4的mRNA及蛋白表达水平显着升高,经丹参酮ⅡA治疗后其mRNA及蛋白表达水平均显着下降。矽肺组Nrf2及其下游HO-1和NQO-1的mRNA水平显着升高,经丹参酮ⅡA治疗后进一步上调。由于Nrf2核移位是Nrf2活化的必要步骤,因此我们分别评估了 Nrf2在细胞核内和细胞质中的表达,结果显示:矽肺组细胞核Nrf2蛋白表达上调,而胞质Nrf2蛋白表达降低,经丹参酮ⅡA治疗后这些作用进一步增强。与Nrf2一致,其下游蛋白HO-1和NQO-1的蛋白表达水平在矽肺组也显着上调,而丹参酮ⅡA治疗后这两种蛋白的表达水平进一步上调。与Nrf2相反,其抑制剂Keap1的mRNA和蛋白表达水平在矽肺组下调,而丹参酮ⅡA治疗进一步下调了 Keap1的表达。以上结果表明,丹参酮ⅡA部分通过抑制NOX4的表达并激活Nrf2/ARE信号通路,来对矽肺的氧化应激损伤起保护作用。3.2丹参酮ⅡA减轻二氧化硅诱导的A549和HBE细胞的氧化应激,抑制NOX4的表达并激活Nrf2/ARE信号通路我们采用活性氧（ROS）检测试剂盒检测丹参酮ⅡA对二氧化硅（Si02）诱导的A549和HBE细胞的氧化应激的抑制作用。用SiO2（100μg/ml）处理A549和HBE细胞24 h后,采用DCFH-DA检测ROS显示,A549细胞和HBE细胞的绿色荧光强度显着增强,而与丹参酮ⅡA共处理组绿色荧光强度显着下降。为了进一步阐明丹参酮ⅡA的抗氧化机制,我们用Western Blot检测了 A549和HBE细胞中NOX4的表达及Nrf2/ARE信号通路的活性。结果显示,Si02刺激导致细胞中NOX4蛋白表达增加,而丹参酮ⅡA共处理抑制了 NOX4蛋白的表达。Si02刺激导致细胞中Nrf2蛋白表达增加,而丹参酮ⅡA共处理进一步增加了 Nrf2蛋白的表达。细胞免疫荧光分析显示丹参酮ⅡA可增加Nrf2的表达并促进其在A549和HBE细胞中的核内聚集。相应的,SiO2刺激导致Nrf2下游HO-1和NQO-1的蛋白表达水平上调,丹参酮ⅡA共处理可进一步上调其表达。与Nrf2相反,其抑制剂Keap1的蛋白表达水平在SiO2组下调,而丹参酮ⅡA共处理进一步下调其表达。这些数据表明,丹参酮ⅡA在体外部分通过抑制NOX4的表达并激活Nrf2/ARE信号通路来减轻二氧化硅诱导的氧化应激。结论1.丹参酮ⅡA可有效缓解矽肺大鼠的肺组织结构破坏及纤维化,并减轻矽肺大鼠的肺部炎症反应。2.丹参酮ⅡA可抑制二氧化硅诱导的上皮间充质转化（EMT）及TGF-β1/Smad致纤维化信号通路的激活。3.丹参酮ⅡA可通过抑制NOX4的表达、激活Nrf2/ARE信号通路来减轻二氧化硅诱导的氧化应激,从而发挥对矽肺的保护作用。意义在本研究中,我们应用矽肺大鼠模型和体外细胞实验,明确了中药单体丹参酮ⅡA对矽肺的抗炎、抗氧化及抗纤维化的保护作用,并进一步探讨了其分子效用机制,证明了丹参酮ⅡA可通过抑制二氧化硅诱导的上皮间充质转化（EMT）及TGF-β1/Smad信号通路的激活来减轻矽肺肺纤维化,并通过抑制NOX4的表达并激活Nrf2/ARE信号通路来减轻二氧化硅诱导的氧化应激,从而发挥对矽肺肺损伤及纤维化的保护和治疗作用。本研究表明丹参酮ⅡA可作为矽肺治疗的潜在药物,为矽肺防治提供了理论支持,并为新药的研发提供了理论基础。
吴丽娟[6]（2020）在《大黄?虫丸基于TGF-β1/Smad信号通路抑制矽肺纤维化的作用机制研究》文中研究表明研究目的矽肺是世界范围内最主要的职业病,尽管各国不断在改进预防矽肺的方法,但无论在发达国家还是在中低收入国家,每年仍然有大量的新发病例。二氧化硅（Si O2）在肺组织中的沉积是矽肺的主要致病原因。Si O2进入肺部后所引起的肺纤维化病变是不可逆的,患者因此而导致肺功能逐渐下降乃至衰竭。迄今国内外均没有针对矽肺纤维化特殊的治疗药物和措施。因此,研究矽肺的发病机制,进行中医药的相关探索,为治疗矽肺另辟蹊径非常重要。大黄?虫丸是《金匮要略》中的经典名方,我们的前期预实验表明,它对于小鼠矽肺纤维化有改善作用。本研究通过动物实验和细胞实验,由TGF-β1/Smad信号通路入手,从整体、细胞和分子水平揭示大黄?虫丸治疗矽肺纤维化的作用机制。研究方法第一部分:小鼠矽肺纤维化模型造模方案的确定将80只SPF级昆明种小鼠随机分为正常对照组、暴露气管注射组、气管插管组、鼻腔滴入组和静式染毒组,共5组,每组16只,其中正常对照组不做任何干预。第1-4组一次性造模后第40天,第5组连续造模40天,比较各组小鼠体重、肺脏系数、存活率、肺组织病理情况,综合确定实验造模方案。第二部分:大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠的作用机制研究小鼠共108只,其中90只用静式染毒法造模40天后随机分成模型对照组、汉防己甲素组、大黄?虫丸高、中、低剂量组5组,每组18只。不染毒小鼠18只为正常对照组。低、中、高剂量组按照临床大黄?虫丸成人等效剂量的1倍、1.5倍和3倍剂量灌胃给药,一日一次。汉防己甲素按照临床成人等效剂量一天一次灌胃给药;正常对照组和模型对照组每次灌胃等量生理盐水。分别在给药后14、21、28天每组各处死6只小鼠,计算肺脏系数,取血清检测TNF-α、IL-6、IL-1β、HYP的含量,并用HE、Masson染色观察病理改变,用Western-Blot法检测大黄?虫丸对TGF-β1/Smad通路相关蛋白（TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad7）表达的影响,用RT-PCR法检测大黄?虫丸对TGF-β1/Smad通路相关基因（TGF-β1m RNA、Smad2m RNA、Smad3m RNA、Smad7m RNA）表达的影响。第三部分:大黄?虫丸对Si O2诱导的矽肺纤维化体外细胞模型作用机制研究用Si O2诱导MH-S细胞构建矽肺纤维化细胞模型,提取大黄?虫丸大鼠含药血清,采用串联质谱法检测血清中主要药理成分,再用不同浓度的含药血清干预,观察细胞形态,用CCK8法检测细胞活性、Elisa法检测细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β的含量、Western-Blot法检测含药血清对TGF-β1/Smad通路相关蛋白（TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad7）表达的影响,通过免疫荧光染色法观察以上蛋白的表达。研究结果第一部分:将静式染毒法作为本实验的造模方法1 各组一般情况正常对照组一般情况正常。各造模组小鼠后期体重增长缓慢,明显低于正常对照组,皮毛稀疏缺乏光泽,污秽粘连。静式染毒组小鼠时有挠鼻现象,可见鼻尖、嘴唇暗紫。2各组存活率及肺脏系数比较正常对照组为100%,暴露气管注射组为62.5%、气管插管组为87.5%,鼻腔滴入组为93.8%,静式染毒组为100%,静式染毒组明显高于其余三组。各模型组小鼠肺脏系数与正常组相比,均具有显着性差异（P<0.01）。3各组肺组织病理结果肺组织HE染色结果:正常对照组肺泡结构正常。各造模组均可见部分肺泡腔萎陷,局部肺泡上皮细胞变性坏死,胞核固缩。其中,暴露气管注射组、气管插管组及静式染毒组肺间质不同程度的增厚,伴纤维组织增生和新生上皮细胞增生,炎细胞浸润,主要为圆形深染的淋巴细胞。Masson染色结果显示,正常对照组肺组织形态无明显改变。四个模型组小鼠肺泡结构破坏,肺泡间隔增宽,肺野内见大量密集的弥漫性蓝色胶原纤维增生,呈片状或束状分布。4本部分实验结论综上,暴露气管注射法、气管插管法、静式染毒法三种方式皆可以成功复制小鼠矽肺弥漫性纤维化模型,鼻腔滴入法相对成功率低,这可能是因为小鼠经鼻滴最终进入食道而未进入呼吸道所致。综合造模方法和真实疾病形成的拟合程度、成功率、存活率等相关因素,实验选取静式染毒法作为造模方法。第二部分:大黄?虫丸能够通过调控TGF-β1/Smad通路抑制小鼠矽肺模型的肺纤维化进程1大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠一般情况的影响结果造模期间,正常组小鼠一般情况状态良好。模型组小鼠精神逐渐萎靡,时有挠鼻现象,活动减少,体重增加不明显,皮毛稀疏缺乏光泽,污秽粘连,鼻尖、嘴唇较正常组偏暗,部分尾部可见散在紫色血丝。给药后大黄?虫丸高剂量组精神状态良好,接近正常组,中剂量组与模型组相比情况有改善,低剂量组总体情况不如高、中组,但优于模型组。2 大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠肺脏系数的影响结果肺脏系数:模型组显着高于正常组（P<0.01）;在给药14天后,可见大黄?虫丸高剂量组低于模型组,有统计学意义（P<0.05）;给药21天后,大黄?虫丸高、中剂量组显着低于模型组（P<0.01）。28天后,高、中、低组均显着低于模型组（P<0.01）。3 大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠肺组织病理染色的影响结果肺组织病理结果:HE染色:正常对照组肺泡形态结构正常;模型组组织充血,肺泡的萎陷、融合,上皮细胞变性坏死,胞核固缩。不同程度的肺泡间隔增厚,纤维组织增生或上皮细胞增生;以及局部淋巴细胞浸润。大黄?虫丸高剂量组肺组织形态结构改善明显,最接近正常组。Masson染色:正常对照组未见明显的蓝染胶原沉积;模型组可见弥漫性蓝染的胶原纤维,肺泡壁厚薄不一;大黄?虫丸治疗后,不同程度地减少了肺组织中胶原纤维沉积,其中以大黄?虫丸高剂量（1.170 g/kg）改变最为明显,蓝染颜色明显变浅,面积也明显减少。两种染色方法都说明大黄?虫丸高剂量组对肺组织炎症和纤维化有明显的改善作用。4 大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠细胞因子的影响结果模型组小鼠血清中HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显着高于正常组（P<0.01）。14天时,大黄?虫丸高、中剂量组HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β显着低于模型组（P<0.01）,低剂量组TNF-α、IL-6也显着低于模型组（P<0.01）。21天时,大黄?虫丸高剂量组HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β显着低于模型组（P<0.01）;中剂量组HYP、IL-6、IL-1β均显着低于模型组（P<0.01）;低剂量组IL-1β的含量显着低于模型组（P<0.01）。28天时,大黄?虫丸高剂量组HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显着低于模型组（P<0.01）,中剂量组的IL-1β也显着低于模型组（P<0.01）。5 大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠TGF-β1/Smad通路蛋白表达的影响结果模型组TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量与正常组相比显着增加（P<0.01）,Smad7显着降低（P<0.01）。14天时,大黄?虫丸高剂量组TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3的蛋白含量较模型组显着降低（P<0.01）,Smad7显着增加（P<0.01）。大黄?虫丸中剂量组Smad2较模型组显着降低（P<0.01）,α-SMA、Smad3较模型组降低,有统计学意义（P<0.05）;Smad7显着增加（P<0.01）。低剂量组Smad2蛋白含量较模型组显着降低（P<0.01）,Smad7显着增加（P<0.01）。21天时,除低剂量组的Smad2低于模型组,具有统计学意义外,其余大黄?虫丸高、中、低剂量组的TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量较模型组显着降低（P<0.01）,Smad7显着增加（P<0.01）。28天时,大黄?虫丸高剂量组TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量较模型组明显降低,Smad7明显增加,其中TGF-β1、Smad2与模型组的差异具有统计学意义（P<0.05）,其余三个指标差异均显着（P<0.01）。大黄?虫丸中、低剂量组Smad3的蛋白含量较模型组显着降低（P<0.01）,Smad7显着增加（P<0.01）。6 大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠TGF-β1/Smad通路基因表达水平的影响结果模型组Smad2m RNA在14天、21天,Smad3m RNA在14天表达水平高于正常组,具有统计学意义（P<0.05）;Smad7m RNA在21天表达水平低于正常组具有统计学意义（P<0.05）。其余各时间段模型组TGF-β1m RNA、Smad2m RNA、Smad3m RNA表达水平显着高于正常组（P<0.01）,Smad7m RNA表达水平均显着低于正常组（P<0.01）。14天时,大黄?虫丸高剂量组与模型组相比,Smad2m RNA、Smad3m RNA降低（P<0.05）,TGF-β1m RNA降低（P<0.01）,Smad7m RNA升高（P<0.01）。中、低剂量组TGF-β1m RNA较模型组显着降低（P<0.01）,Smad7m RNA显着升高（P<0.01）。中剂量Smad2m RNA较模型组降低,有统计学意义（P<0.05）。21天时,高剂量组TGF-β1m RNA、Smad3m RNA表达水平与模型组相比显着降低（P<0.01）,Smad2m RNA表达比模型组低（P<0.05）,Smad7m RNA表达比模型组高（P<0.05）。中、低剂量组TGF-β1m RNA、Smad3m RNA显着低于模型组（P<0.01）。28天时,大黄?虫丸高、中、低剂量组TGF-β1m RNA、Smad2m RNA、Smad3m RNA明显降低,与模型组相比均具有显着性差异（P<0.01）;Smad7m RNA的表达水平明显升高,同样与模型组相比具有显着性差异（P<0.01）。第三部分:大黄?虫丸含药血清能够通过调控TGF-β1/Smad通路抑制体外细胞的纤维化水平1大黄?虫丸含药血清对Si O2诱导的MH-S细胞活力的影响结果经过Si O2混悬液刺激细胞后,细胞活力明显下降（P<0.05）。大黄?虫丸不同浓度干预后,细胞活力均高于模型对照组,且呈浓度依赖性。2大黄?虫丸含药血清对Si O2诱导的MH-S细胞因子的影响结果模型对照组细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β的含量显着高于正常对照组（P<0.01）,大黄?虫丸含药血清15%组及含药血清10%组的IL-6含量显着低于正常对照组（P<0.01）,含药血清15%组的TNF-α及IL-1β含量低于模型组,有统计学意义（P<0.05）。含药血清10%组的TNF-α含量低于模型组,有统计学意义（P<0.05）。3大黄?虫丸含药血清对Si O2诱导的MH-S细胞系TGF-β1/Smad通路蛋白表达的影响结果（1）Western-Blot结果:模型对照组TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白表达显着高于正常对照组（P<0.01）,Smad7表达相反,模型对照组低于正常组,且具有统计学意义（P<0.05）。大黄?虫丸含药血清15%组的TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白表达显着低于模型对照组（P<0.01）,Smad7蛋白表达相反,高于模型组,有统计学意义（P<0.05）。含药血清10%组的TGF-β1、α-SMA、Smad2蛋白表达显着低于模型对照组（P<0.01）。含药血清5%组α-SMA蛋白表达显着低于模型对照组（P<0.01）,TGF-β1、Smad2的蛋白表达低于模型组,具有统计学意义（P<0.05）。（2）细胞免疫荧光结果:从细胞免疫荧光的结果可以看出,模型对照组TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3表达的平均光密度值（average optical,AO）,显着高于正常对照组（P<0.01）,Smad7表达的AO值低于正常对照组（P<0.01）。加入大黄?虫丸含药血清后,15%含药血清组的TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3的AO值显着低于模型对照组（P<0.01）,Smad7的AO值明显高于模型对照组（P<0.01）;10%含药血清组TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3的AO值显着低于模型对照组（P<0.01）,Smad7表达的AO值高于模型对照组,有统计学意义（P<0.05）;5%含药血清组α-SMA、Smad2的AO值显着低于模型对照组（P<0.01）,TGF-β1、Smad3的AO值低于模型对照组,有统计学意义（P<0.05）,Smad7表达的AO值显着高于模型对照组（P<0.01）。说明大黄?虫丸能够明显降低TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3的AO值,同时增强Smad7的AO值,尤其是15%含药血清组的效果更加明显,结论同Western-Blot相一致。研究结论1、通过造模实验研究,显示暴露气管注射法、气管插管法和静式染毒法三种方式皆可以成功复制小鼠矽肺纤维化模型,但是为了减少造模过程中创伤的影响,降低小鼠的死亡率,更加贴合和接近真实矽肺发生的条件,最终选择了静式染毒法作为本课题造模方法。2、从动物实验的肺系数、病理;血清HYP含量、血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量;肺组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7蛋白表达;肺组织TGF-β1m RNA、Smad2m RNA、Smad3m RNA、Smad7m RNA表达,证实大黄?虫丸可通过调控TGF-β1/Smad通路抑制小鼠矽肺模型肺纤维化进程,且存在一定的剂量和时间依赖性。3、体外细胞实验用大黄?虫丸含药血清干预Si O2诱导的肺泡巨噬细胞MH-S细胞系,CCK8测试细胞活力,同样观察相关炎性因子含量,以及Western-Blot和免疫荧光法检测TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad7蛋白的表达,结论同动物实验一致,证明大黄?虫丸在体外细胞水平也可以通过调控TGF-β1/Smad通路抑制肺纤维化,且存在浓度依赖性。
吴美姿[7]（2020）在《不同类型间质性肺疾病患者基质金属蛋白酶-7、肺弥散功能差异及其临床意义》文中提出目的:间质性肺疾病（Interstitial lung disease,ILD）代表着一组肺部疾病,常常出现弥漫、多灶性的肺部改变。目前国内外将ILD公认为是一种难以诊断和治疗的疾病,而且发病逐渐趋向年轻化,长期困扰着医疗工作者[1]。本研究分别对不同类型的ILD患者及健康对照组的血清基质金属蛋白酶-7（Matrix metalloproteinase-7,MMP-7）水平及肺一氧化碳弥散量（diffusing capacity of the lung for carbon monoxide,DLCO）占预计值的百分比（%）进行了比较,旨在观察其在不同类型ILD患者及健康人群中的水平差异,探讨其临床意义,为ILD的早期预测及诊断、病情评估及预后等提供指导。方法:本课题采用前瞻性研究方法,收集2017年11月～2019年10月期间首次因ILD于承德市中心医院呼吸内科住院,后于承德市中心医院或上一级医院明确分类的ILD患者,共计52例。其中包括,已知原因的ILD患者25例（结缔组织病相关14例,尘肺病8例,放射性损伤/药物相关3例）,为A组;特发性间质性肺炎（Idiopathic interstitial pneumonia,IIP）患者18例（特发性肺纤维化12例,特发性非特异性间质性肺炎3例,不能分类的特发性间质性肺炎3例）,为B组;肉芽肿性ILD患者9例（结节病3例,外源性过敏性肺泡炎4例,Wegener肉芽肿2例）,为C组。选取20例于承德市中心医院体检中心健康体检的退休人员作为对照组,为D组。采集72例纳入对象的基本信息（包括性别、年龄、以及存在的合并症和并发症等）,测定其血清MMP-7水平及DLCO%。对以上几组研究对象的血清MMP-7水平及DLCO%进行统计分析。数据处理及统计采用SPSS21.0统计软件,计量资料若符合正态分布采用均数±标准差（x±s）表示,采用单因素方差分析,不符合正态分布的进行数据转换,如仍不符合正态分布,则用中位数及四分位数间距表示,即M（q）,采用非参数检验;相关性分析符合正态分布的采用Pearson相关分析,不符合正态分布的采用Spearman相关分析;计数资料采用χ2检验。设定检验水准为0.05,P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1.一般资料本实验研究对象共72例,其中A组患者25例（男8例、女17例）,平均年龄（62.72±6.64）岁;B组患者18例（男8例、女10例）,平均年龄（63.28±6.20）岁;C组患者9例（男3例、女6例）,平均年龄（60.11±3.48）岁;D组20例（男10例、女10例）,平均年龄（60.90±4.12）岁。对比四组研究对象的年龄和性别,差异无统计学意义（P>0.05）。2.四组纳入对象的血清MMP-7水平A组患者血清MMP-7水平为0.282±0.021ng/ml,B组患者血清MMP-7水平为0.310±0.021ng/ml,C组患者血清MMP-7水平为0.277±0.011ng/ml,D组对照组血清MMP-7水平为0.230±0.025ng/ml。A组与C组患者血清中MMP-7水平对比后显示差异无统计学意义（P>0.05）,余各组之间血清MMP-7水平对比显示存在差异,且有统计学意义（P<0.05）。3.四组纳入对象的DLCO%A组患者DLCO%为45.90±4.20%,B组患者DLCO%为41.61±4.32%,C组患者DLCO%为47.73±2.76%,D组对照组DLCO%为91.38±3.74%。A组与C组患者DLCO%对比后显示差异无统计学意义（P>0.05）,余各组之间DLCO%对比显示存在差异,且有统计学意义（P<0.05）。4.纳入的52例ILD患者的血清MMP-7水平与DLCO%相关性分析相关性分析结果显示ILD患者的DLCO%与血清MMP-7有相关性（P<0.05）,且为负相关。结论:1.ILD患者血清MMP-7水平高于健康人群,由此推断MMP-7可为ILD的诊断提供一定程度的提示作用。2.特发性间质性肺炎组患者DLCO%最差,同时血清MMP-7水平升高最为显着,提示在纤维化基质重塑阶段MMP-7水平可能高于炎症阶段,可通过动态观察MMP-7水平判断ILD患者的病情发展阶段。3.DLCO检查是ILD患者早期评价肺功能损害敏感而有效的方法,可评价病情严重程度,本实验结果示ILD患者DLCO%均较健康对照组下降,血清MMP-7与DLCO%呈负相关,提示血清MMP-7亦可能作为ILD严重程度的参考指标,尤其对于不能配合完成肺功能检查的患者。
孟丽红[8]（2019）在《特发性肺纤维化中医证候观察及养阴益气合剂抗肺纤维化实验研究》文中提出特发性肺纤维化（IPF）是一种特殊类型的、原因不明的、以慢性炎症损伤及肺间质过度纤维沉积为特征的间质性肺炎,主要发生于老年人,病变局限于肺,其组织病理学或/和HRCT表现为UIP。本病预后不良,病死率高,随着疾病的进展,最终可能发展为呼吸衰竭而导致死亡。目前IPF尚无特异的治疗方法,当前临床使用的药物治疗效果都十分有限,而中医药治疗IPF表现出显着优势,已经逐渐成为研究热点。本研究分为三部分:第一部分为文献研究,主要阐述了IPF的中西医研究概况以及TGF-β/Smad通路及其介导的上皮间质转化（EMT）在IPF中的作用;第二部分为临床观察研究,探讨了IPF的中医证候分布及其与HRCT的关系,验证了养阴益气合剂的临床适应性;第三部分为动物实验研究,从TGF-β/Smad信号通路及TGF-β介导EMT角度探讨了养阴益气合剂干预博来霉素诱导的肺纤维化大鼠的疗效。研究目的收集IPF患者临床资料,探讨IPF的中医证候分布及其与HRCT关系,验证养阴益气合剂治疗IPF临床适用性;通过动物实验,从TGF-β/Smad信号通路及TGF-β介导EMT角度,研究养阴益气合剂干预博来霉素诱导的肺纤维化大鼠的疗效。研究方法临床观察:参照IPF的诊断标准,制定肺间质纤维化临床观察表,收集120例IPF患者的四诊信息及临床资料,采用SPSS20.0统计软件,通过因子分析法,探讨IPF患者中医证候分布并探讨其与HRCT相关性,验证养阴益气合剂治疗IPF临床适用性。动物实验:将120只大鼠分为6组:空白组、模型组、泼尼松组及养阴益气合剂低、中、高剂量组。通过气管内滴注3mg/kg博来霉素建立肺纤维化大鼠模型,分别以相应药物进行干预,14天及28天时随机分批进行动物处理及取材。观察对比大鼠生长状态、体重及肺肉眼下形态,光镜下观察HE和Masson染色切片比较大鼠肺组织病理变化,ELISA法检测肺纤维化大鼠模型血清TGF-β1、CTGF、IL-18及HYP含量,RT-PCR法检测TGF-β1及其受体TβRI、TβRII、Smad3、Smad7以及α-SMA、E-cadherin、LN、Collagen I mRNA表达。研究结果1、特发性肺纤维化中医证候1.1一般资料:120例IPF患者的HRCT评分与mMRC呼吸困难指数、症状总积分显着正相关（P<0.05）。1.2中医证候:本次研究中120例IPF患者,通过因子分析法最终得到6个证型,其中气虚型患者分布比例最大,约占42.5%,其次为阴虚证,后依次为血瘀证>痰湿证>痰热证>阳虚证。从证型分布来看,本病多为本虚标实之证,本虚表现为气虚、阴虚、阳虚,标实为血瘀、痰湿、痰热,其中以气虚、阴虚为最常见证型。阳虚型HRCT评分显着高于气虚型、阴虚型IPF患者（P<0.05）。2、养阴益气合剂干预肺纤维化实验研究2.1肺组织病理结果HE及Masson染色显示:空白组大鼠肺脏结构正常,肺泡腔清晰可见,未见出血、渗出物及明显炎性细胞浸润。模型组大鼠可见肺泡腔塌陷变形、间隔水肿增厚,肺间质及肺泡可见明显的炎性细胞浸润,气管及肺泡周围可见大量纤维沉积。泼尼松组及养阴益气合剂低、中、高剂量组大鼠肺组织病理变化与模型组相似,但病变较模型组轻,但与空白组相比则有明显损伤,其中以养阴益气合剂中、高剂量组肺泡炎及肺纤维化程度最轻。HE染色显示第28天炎性细胞浸润较第14天明显减轻,Masson染色显示第28天胶原纤维沉积较第14天明显加重。2.2肺纤维化大鼠血清TGF-β1、CTGF、IL-18及HYP表达与空白组相比,模型组TGF-β1、CTGF、IL-18、HYP表达明显升高（P<0.01）;泼尼松组和养阴益气合剂组TGF-β1、CTGF、HYP表达较模型组均显着下降（P<0.05,P<0.01）,且从趋势上看,养阴益气合剂中、高剂量组治疗效果优于泼尼松组;各治疗组IL-18表达较模型组虽有所下降,但差异无统计学意义。2.3养阴益气合剂对肺纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路影响与空白组相比,模型组TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad3 mRNA表达显着升高,Smad7表达明显减少。治疗后,各治疗组TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad3 mRNA水平较模型组下调（P<0.05,P<0.01）,且养阴益气合剂中、高剂量组效果优于泼尼松组（P<0.05）,尤以第28天明显;与模型组相比,各治疗组Smad7 mRNA表达显着上调（P<0.05）。2.4养阴益气合剂对肺纤维化大鼠TGF-β介导的EMT影响第14和28天时,与空白组相比,模型组大鼠α-SMA、Collagen I及LN mRNA表达均明显升高,而E-cadherin mRNA水平显着下降（P<0.05,P<0.01）。各治疗组在给药14天后,α-SMA、Collagen I、LN mRNA表达出现减少趋势,以LN最为明显,Ecadhein表达较模型组有所增加;28天时,与模型组相比,各治疗组α-SMA、Collagen I、LN mRNA表达减少（P<0.05,P<0.01）,E-cadherin mRNA表达增多（P<0.05）,且养阴益气合剂高剂量组治疗效果最佳。结论本次研究中120例IPF患者中,其HRCT评分与mMRC呼吸困难指数、症状总积分显着正相关。证候分布:气虚证>阴虚证>血瘀证>痰湿证>痰热证>阳虚证。气虚、阴虚为本病最常见证型,这与养阴益气合剂的益气养阴、活血化瘀的功效相适应。阳虚型IPF患者HRCT表现最严重。通过动物实验证实养阴益气合剂能够明显缓解博来霉素诱导的肺纤维化大鼠模型肺纤维化进展,其作用可能与抑制TGF-β/Smad信号通路及TGF-β介导的EMT有关;且养阴益气合剂中、高剂量组治疗效果优于泼尼松组。但养阴益气合剂对IL-18表达影响不显着。
余辞源[9]（2019）在《系统性硬化病肺间质病变外周血清生物标志物的研究》文中研究指明目的:通过比较和分析系统性硬化病（systemic sclerosis,SSc）合并间质性肺病（interstitial lung disease,ILD）病人组肺间质病变程度、外周血清生物标志物及相关临床因素的关系,探索早期诊断系统性硬化症相关肺间质病变（SSc-ILD）外周血清生物标志物及其与SSc-ILD疾病程度的相关性。方法:选取厦门大学附属第一医院风湿免疫科2012.9-2017.6入组的符合美国和欧洲风湿病协会SSc初步标准的45例患者,同时选取原发性（primary Sjogren’s syndrome,pSS）干燥综合征患者69例以及44例类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者作为同步检测。患者年龄均大于18岁。留取患者血清标本,并行胸部高分辨率CT（high resolution CT,HRCT）以及肺功能（pulmonary function tests,PFTs）检查,包括用力肺活量（forced vital capacity,FVC）、1 秒用力呼气量（forced expiratory volume in one second,FEV1）、1 秒用力呼气量/用力肺活量（FEV1/FVC）、一氧化碳弥散量（diffusing capacity for carbon monoxide of lung,DLCO）。依据每例患者HRCT中ILD病变范围、特征及程度,将患者分为ILD 0,1,2,3级。同时记录患者临床信息:疾病病程,吸烟史,用药情况,临床呼吸困难评分。采用多重酶联免疫吸附试验（Multiple Enzyme-linked Immunosorbent Assay,Elisas）、化学发光酶免疫分析（chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA）和Luminex-Xmap技术检测所有患者血清标本中与ILD发生发展密切相关的42种细胞因子/趋化因子、基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases,MMPs）、涎液化糖链抗原6（krebs von den lungen-6,KL-6）的血清水平。比较这些细胞因子水平在不同疾病不同ILD病变程度中的差异。使用线性回归方法进行数据分析,在多重比较中,错误发现率（false discovery rate,FDR）意义为错误拒绝（拒绝真的（原）假设）的个数占所有被拒绝的原假设个数的比例的期望值,即被用来调整p值以获得出错率,我们根据FDR小于0.10定义为显着关联。结果:KL-6、C-X-C motif chemokine 10/interferon gamma-induced protein 10（CXCL10/IP-10）、血清嗜酸细胞活化趋化因子（Eotaxin/CCL11）水平升高在SSc-ILD、pSS-ILD和RA-ILD三种疾病中与疾病进展显着相关（FDR<0.1）;在pSS-ILD和RA-ILD中,KL-6水平的升高与FVC水平的降低显着相关（FDR<0.1）,而在 SSc-ILD 中无显着相关性（FDR>0.1）;CXCL10/IP-10 水平越高,三种疾病伴ILD患者的FVC水平越低（FDR<0.1）;另外转化生长因子α（transforming growth factor-α,TGF-α）在 RA-ILD 中与 ILD 程度密切相关（FDR<0.1）;血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-a）水平的升高在pSS-ILD中与ILD程度增加有显着相关性（FDR<0.1）。受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve,ROC 曲线）用来进一步比较 KL-6、CXCL10/IP-10、Eotaxin/CCL11 三个因子在三种疾病中ILD从轻到重的相对敏感性和特异性,计算三个因子在三种疾病中生成曲线下的区域（areas under the curve,AUC）。KL-6 在 SSc-ILD 中的[AUC]值为0.82（敏感性为88.89%,特异性为78.95%）,在pSS-ILD中的[AUC]值为0.81（敏感性为77.14%,特异性91.43%）,在RA-ILD中的[AUC]值为0.90（敏感性为 81.82%,特异性为 90.91%）;Eotaxin/CCL11 在 SSc-ILD 中的[AUC]值为0.68（敏感性为70.37%,特异性为63.16%）,在pSS-ILD中的[AUC]值为0.69（敏感性为80.00%,特异性54.29%）,在RA-ILD中的[AUC]值为0.65（敏感性为59.09%,特异性 72.73%）;CXCL10/IP-10 在 SSc-ILD 中的[AUC]值为 0.62（敏感性为 36.84%,特异性为92.59%）,在RA-ILD中的[AUC]值为0.61（敏感性为59.09%,特异性为68.18%）,而在pSS-ILD中无意义。KL-6在三种疾病的肺间质病变的敏感性和特异性最高,Eotaxin/CCL11 比KL-6 低;对于 CXCL10/IP-10,在 SSc-ILD 和 RA-ILD 的比较中,在 SSc-ILD 的敏感性较高,特异性较低。结论:在SSc中,血清KL-6、CXCL10/IP-10和Eotaxin/CCL1 1水平的升高与ILD疾病严重程度相一致,三种因子水平越高,ILD疾病程度越严重。在pSS和RA中亦有相似结果。在SSc-ILD中CXCL10/IP-10水平的升高与用力肺活量水平下降相一致,KL-6水平的升高与用力肺活量下降无显着相关性。但在pSS-ILD和RA-ILD中,KL-6水平的升高与用力肺活量水平下降相一致。另外TGF-α水平升高与RA-ILD严重程度显着相关,VEGF和TNF-a水平升高与pSS-ILD严重程度显着相关。因此,KL-6、CXCL10/IP-10和Eotaxin/CCL11不仅可作为系统性硬化症肺间质病变早期诊断的有效血清生物标志物,也可作为干燥综合征和类风湿性关节炎肺间质病变的有效血清生物标志物。
李贤明[10]（2019）在《益肺逐瘀汤治疗特发性肺纤维化的临床研究》文中研究表明目的:评价益肺逐瘀汤联合糖皮质激素强的松治疗临床罕见性疾病特发性肺纤维化（IPF）的临床有效性和安全性,并通过中药对强的松的用药减量效果,为IPF的临床治疗提供参考,进一步推广中医药在IPF临床治疗上的运用。方法:将符合纳排标准的40例患者按照1:1随机分为2组,每组患者各20例。治疗组使用益肺逐瘀汤联合强的松治疗,对照组单用强的松治疗,两组患者观察时间为6个月。观察并分析两组患者治疗前后的HRCT计分、中医证候量化总积分、强的松用量、SGRQ生活质量问卷总分、6分钟步行距离的差异。结果:1.最终共37例患者顺利完成本项临床研究,其中治疗组19例,对照组18例。2.两组患者治疗后,治疗组HRCT计分较前无明显改变（P>0.05）,对照组HRCT计分较治疗前则明显增加（P<0.05）,治疗组HRCT计分明显优于对照组（P<0.05）,且治疗组HRCT计分增加的人数比例明显优于对照组（P<0.05）。治疗组的强的松用量减半人数比例明显多于对照组（P<0.05）。3.两组患者治疗后,治疗组中医证候量化总积分、SGRQ生活质量问卷总分和6分钟步行距离较治疗前有明显改善（P<0.05）,对照组三项数据无明显改善（P>0.05）。治疗组三项数据明显优于对照组（P<0.05）。4.两组患者观察结束时常规指标（血常规、尿常规、肝肾功能、心电图）均未出现明显的异常变化。结论:1.益肺逐瘀汤联合强的松治疗IPF,能有效延缓肺纤维化进程,显着改善其喘息、咳嗽、咯痰、气短等症状,提升患者的中医证候疗效,改善患者的生活质量。2.益肺逐瘀汤能有效减少部分患者的强的松用量,逐步替代强的松在IPF中的治疗。3.益肺逐瘀汤联合强的松治疗IPF,过程中未出现明显不良反应,具有安全可行性。
二、基质金属蛋白酶与弥漫性肺间质纤维化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、基质金属蛋白酶与弥漫性肺间质纤维化（论文提纲范文）
（1）结缔组织性疾病相关肺间质病变患者血清MMP-2、MMP-3、MMP-7及MMP-9的表达及临床相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 试剂和仪器 |
| 1.1.1 主要试剂及耗材 |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 研究对象 |
| 1.2.2 血清标本采集及检测 |
| 1.2.3 临床指标测定 |
| 1.2.4 实时荧光定量PCR检测患者血清中MMPs的含量 |
| 1.2.5 ELISA法检测患者血清中MMPs的含量 |
| 1.2.6 流式细胞术检测外周血中淋巴细胞 |
| 1.3 统计学处理 |
| 2.结果 |
| 2.1 三组受试者的一般资料 |
| 2.2 结缔组织性疾病相关肺间质病变患者血清中MMPs表达量 |
| 2.3 CTD-ILD 组患者外周血中淋巴细胞亚群的研究 |
| 3.讨论 |
| 4.不足和展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 MMPs 参与结缔组织性疾病及其肺间质病变的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（2）肺纤维化的六经辨证研究及大黄（？）虫丸干预肺纤维化大鼠的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 综述研究 |
| 综述一 特发性肺纤维化的研究进展 |
| 1 病因 |
| 1.1 吸烟 |
| 1.2 遗传倾向 |
| 1.3 环境及职业暴露 |
| 1.4 胃食管反流 |
| 1.5 其他 |
| 2 发病机制 |
| 2.1 IPF的发病机制 |
| 2.2 TGF-β1/Smad3信号通路在IPF形成过程中的作用 |
| 3 诊断 |
| 3.1 临床表现 |
| 3.2 胸部HRCT |
| 3.3 肺组织病理 |
| 3.4 诊断标准 |
| 3.5 诊断流程 |
| 4 治疗 |
| 4.1 非药物疗法 |
| 4.2 药物疗法 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 肺纤维化的中医认识 |
| 1 肺纤维化的中医病名认识 |
| 1.1 病名源流 |
| 1.2 肺疾论 |
| 1.3 肺痹论 |
| 1.4 痿、痹并重 |
| 2 肺纤维化的辨证论治 |
| 2.1 正气虚衰为肺纤维化的发病根本 |
| 2.2 痰浊、瘀血、毒邪均为本病的病理因素 |
| 2.3 肺络是肺纤维化的关键病位 |
| 2.4 分期论治肺纤维化 |
| 2.5 六经与肺纤维化 |
| 3 大黄(?)虫丸与肺纤维化 |
| 3.1 大黄(?)虫丸的方义 |
| 3.2 血瘀兼证与肺纤维化 |
| 3.3 大黄(?)虫丸治疗肺纤维化的实验研究进展 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 临床研究 |
| 1 资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 信息采集 |
| 2.2 六经辨证分型标准 |
| 2.3 血瘀证诊断、量化标准 |
| 2.4 主要症状分级标准 |
| 2.5 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 一般资料 |
| 3.2 症状特点 |
| 3.3 舌脉特点 |
| 3.4 评分指标 |
| 3.5 肺纤维化肺六经辨证分布 |
| 3.6 六经与病情的相关性分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 研究结果讨论 |
| 4.2 肺纤维化、少阳三焦及“干血”之间的关系探讨 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 大黄(?)虫丸对博来霉素致肺纤维化大鼠肺功能及生存状态的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药物与仪器 |
| 1.3 动物分组与造模 |
| 1.4 给药方法 |
| 1.5 肺功能检测 |
| 1.6 肺组织病理 |
| 1.7 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 一般情况 |
| 2.2 体重变化 |
| 2.3 死亡率 |
| 2.4 肺功能 |
| 2.5 肺组织病理 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 大黄(?)虫丸对博来霉素致肺纤维化大鼠TGF-β1/Smad3信号通路的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物及分组 |
| 1.2 药物及试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 造模与给药方法 |
| 1.5 标本采集 |
| 1.6 肺组织病理 |
| 1.7 RT-PCR法检测TGF-β1、Smad3及Collagen Ⅰ相关基因表达 |
| 1.8 Western blot法检测Smad3, p-smad3蛋白表达 |
| 1.9 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织病理 |
| 2.2 RT-PCR法测TGF-β1、Smad3及Collagen Ⅰ相关基因表达 |
| 2.3 Western blot法测Smad3,p-smad3蛋白表达 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录1 血瘀兼证诊断及量化标准 |
| 附录2 肺纤维化中临床特征信息调查表 |
| 个人简介 |
（3）槲皮素治疗肺间质纤维化作用机制研究进展（论文提纲范文）
| 1 改善氧化与抗氧化系统功能 |
| 2 抑制炎症反应 |
| 3 影响TGF-β1作用 |
| 4 调节成纤维细胞凋亡与增殖 |
| 5 影响MMPs/TIMP体系 |
| 6 结语与展望 |
（4）探讨仙茅—淫羊藿药对对肺纤维化大鼠VEGF、PDGF干预作用及临床分析（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 临床研究 |
| 一、临床资料 |
| (一)西医诊断标准 |
| (二)中医证候诊断标准 |
| (三)纳入标准 |
| (四)排除标准 |
| 二、研究方法 |
| (一)门诊处方收集 |
| (二)原始资料数据库建立 |
| (三)数据预处理 |
| (四)数据清洗 |
| (五)建立关联规则Apriori算法模型 |
| 三、研究结果 |
| (一)描述性分析 |
| (二)关联规则分析结果 |
| 第二部分 实验研究 |
| 一、实验材料 |
| (一)实验动物 |
| (二)实验药品 |
| (三)实验试剂 |
| (四)实验仪器 |
| 二、实验方法 |
| (一)实验分组 |
| (二)造模方法 |
| (三)给药方法 |
| 三、标本采集与指标检测 |
| (一)一般指标检测 |
| (二)标本采集 |
| (三)大鼠肺组织病理学观察 |
| (四)酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠腹主动脉血清中PDGF-BB、VEGF含量 |
| 四、统计处理 |
| 五、实验结果及分析 |
| (一)大鼠一般情况分析 |
| (二)各组实验鼠肺组织外观及病理学切片 |
| (三)腹主动脉血清VEGF含量比较及分析 |
| (四)腹主动脉血清PDGF-BB含量比较及分析 |
| (五)MVD阳性表达比较及分析 |
| 第三部分 讨论 |
| 一、中医药对间质性肺疾病的认识 |
| (一)病名推演 |
| (二)病因病机 |
| (三)肾阳虚在肺纤维化发展中的表现 |
| (四)温补肾阳治疗肺纤维化 |
| 二、现代医学对于肺纤维化病机的认识 |
| (一)炎症因子相关 |
| (二)血管新生相关 |
| 三、“淫羊藿-仙茅”药对在肺纤维中的应用 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 间质性肺疾病的中医研究和仙茅-淫羊藿药对的应用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 SPSS modeler 18.0 软件展示 |
（5）丹参酮IIA对矽肺肺损伤及纤维化的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 第一部分 丹参酮ⅡA对矽肺大鼠肺损伤及纤维化的保护作用研究前言 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 丹参酮ⅡA对二氧化硅诱导的EMT及TGF-β1/Smad信号通路激活的抑制作用研究前言 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 丹参酮ⅡA通过抑制NOX4表达、激活Nrf2/ARE信号通路减轻二氧化硅诱导的氧化应激研究前言 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 英文论文1 |
| 英文论文2 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（6）大黄?虫丸基于TGF-β1/Smad信号通路抑制矽肺纤维化的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 矽肺流行病学 |
| 2 矽肺发病机制简述 |
| 3 TGF-β1/Smad信号通路及其在矽肺纤维化发病中的重要性 |
| 4 中医对矽肺的认识 |
| 5 大黄?虫丸的简述 |
| 6 本实验的研究思路和技术路线图 |
| 第一部分 :小鼠矽肺纤维化模型造模方案的确定 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 主要仪器与试剂 |
| 1.3 其他器材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验前准备 |
| 2.2 四种造模方法 |
| 2.2.1 暴露气管注射法 |
| 2.2.2 气管插管法 |
| 2.2.3 鼻腔滴入法 |
| 2.2.4 静式染毒法 |
| 2.3 取材 |
| 2.4 数据统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 小鼠一般情况及肺组织形态学 |
| 3.2 小鼠存活率 |
| 3.3 体重及肺脏系数 |
| 3.4 小鼠肺组织HE和 Masson染色结果 |
| 4 第一部分实验结论 |
| 第二部分 :大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠的作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂和耗材 |
| 2 动物实验方法 |
| 2.1 动物模型制备及分组 |
| 2.2 大黄?虫丸药液制备 |
| 2.3 动物给药干预 |
| 2.4 动物标本采集及处理 |
| 2.5 Elisa法检测动物血清HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量 |
| 2.6 小鼠肺组织病理切片及HE、Masson染色操作方法 |
| 2.7 Western-Blot操作方法 |
| 2.7.1 实验仪器 |
| 2.7.2 化学试剂 |
| 2.7.3 抗体 |
| 2.7.4 相关试剂的配制 |
| 2.7.5 具体实验步骤 |
| 2.7.6 实验结果 |
| 2.8 实时定量PCR操作方法 |
| 2.8.1 实验仪器 |
| 2.8.2 化学试剂及耗材 |
| 2.8.3 具体实验步骤 |
| 3 动物实验结果 |
| 3.1 小鼠一般情况 |
| 3.2 肺脏系数 |
| 3.3 小鼠肺组织病理结果 |
| 3.4 Elisa法检测HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β结果 |
| 3.5 Western-Blot法检测TGF-β1/Smad通路相关蛋白的表达水平 |
| 3.6 RT-PCR法检测TGF-β1/Smad通路相关基因表达水平 |
| 4 动物实验小结 |
| 第三部分 :大黄?虫丸对SiO2诱导的矽肺纤维化细胞模型作用机制研究 |
| 1 实验方法 |
| 1.1 含药血清的制备 |
| 1.2 串联质谱法检测含药血清中三种主要指标成分 |
| 1.2.1 仪器与试剂 |
| 1.2.2 方法 |
| 1.2.2.1 样品制备 |
| 1.2.2.2 对照品溶液制备 |
| 1.2.2.3 分析条件 |
| 1.2.3 样品测定结果 |
| 1.2.4 讨论 |
| 1.3 细胞培养 |
| 1.3.1 实验材料 |
| 1.3.1.1 实验细胞 |
| 1.3.1.2 主要仪器 |
| 1.3.1.3 主要试剂和耗材 |
| 1.3.2 细胞复苏 |
| 1.3.3 细胞培养 |
| 1.3.4 细胞传代 |
| 1.3.5 细胞计数 |
| 1.3.6 细胞冻存 |
| 1.3.7 细胞模型建立 |
| 1.3.8 分组及给药 |
| 1.3.9 CCK8检测细胞活性 |
| 1.3.10 Elisa检测方法 |
| 1.3.11 Western-Blot操作方法 |
| 1.3.12 细胞免疫荧光操作方法 |
| 2 细胞实验结果 |
| 2.1 细胞一般情况 |
| 2.2 CCK8检测细胞活性 |
| 2.3 Elisa法检测细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β结果 |
| 2.4 Western-Blot检测TGF-β1/Smad通路相关蛋白的表达水平 |
| 2.5 细胞免疫荧光检测结果 |
| 3 细胞实验小结 |
| 第四部分 :总结与讨论 |
| 1 动物模型的评价 |
| 2 阳性药物的选择 |
| 3 各实验指标的结果分析 |
| 3.1 小鼠肺脏系数的分析 |
| 3.2 HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β结果分析 |
| 3.3 TGF-β1/Smad通路相关蛋白及基因结果分析 |
| 3.4 大黄?虫丸治疗作用与时间、剂量的关系 |
| 4 中医对矽肺的辨证治疗 |
| 4.1 矽肺的中医病名 |
| 4.2 矽肺的中医病机分析 |
| 5 大黄?虫丸方解及作用机制讨论 |
| 第五部分 结论 |
| 第六部分 创新点 |
| 第七部分 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 大黄?虫丸的现代临床运用及治疗多脏器纤维化疾病的研究进展 |
| 1 大黄?虫丸的方源及古代文献研究 |
| 2 大黄?虫丸方义分析 |
| 3 大黄?虫丸现代临床运用范围 |
| 4 大黄?虫丸用于治疗脏器纤维化的研究进展 |
| 4.1 关于大黄?虫丸治疗肝纤维化的临床及实验研究 |
| 4.2 关于大黄?虫丸治疗肾纤维化的研究现状 |
| 4.3 关于大黄?虫丸治疗其他脏器纤维化的研究现状 |
| 5 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附件:在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（7）不同类型间质性肺疾病患者基质金属蛋白酶-7、肺弥散功能差异及其临床意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 基质金属蛋白酶和肺功能检测在间质性肺疾病中作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）特发性肺纤维化中医证候观察及养阴益气合剂抗肺纤维化实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 肺间质纤维化的中医研究进展 |
| 1.病名 |
| 2.病因病机 |
| 3.中医药治疗 |
| 4.中医药治疗肺纤维化机制 |
| 5.养阴益气合剂治疗肺间质纤维化 |
| 6.结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 特发性肺纤维化的发病机制及治疗进展 |
| 1.病因 |
| 2.发病机制 |
| 3.治法 |
| 4.TGF-β/Smad信号通路在肺纤维化中作用 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 特发性肺纤维化中医证候研究 |
| 资料与方法 |
| 研究结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 养阴益气合剂对肺纤维化大鼠病理形态影响 |
| 1.材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 实验二 养阴益气合剂对肺纤维化大鼠血清TGF-β1、CTGF、IL-18、HYP表达影响 |
| 1.材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 实验三 养阴益气合剂对肺纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路的影响 |
| 1.材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 实验四 养阴益气合剂对肺纤维化大鼠TGF-β介导的EMT影响 |
| 1.材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 存在问题与不足 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（9）系统性硬化病肺间质病变外周血清生物标志物的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对应表 |
| 前言 |
| 第一章 研究对象与方法 |
| 1 研究对象与入组标准 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 入组标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 临床资料收集 |
| 2.2 血消标本收集 |
| 2.3 ILD程度评分计算 |
| 2.4 肺功能测试 |
| 2.5 ILD相关血清生物标志物的检测 |
| 3 统计学方法 |
| 第二章 结果 |
| 1 研究患者临床特征 |
| 1.1 系统性硬化病组 |
| 1.2 原发性干燥综合征组 |
| 1.3 类风湿性关节炎组 |
| 2 生物标志物KL-6与SSc-ILD、pSS-ILD、RA-ILD的相关性 |
| 2.1 在SSc-ILD、pSS-ILD、RA-ILD中KL-6与ILD分期 |
| 2.2 在SSc-ILD、pSS-ILD、RA-ILD中KL-6的ROC曲线 |
| 2.3 在SSc-ILD、pSS-ILD、RA-ILD中KL6水平与肺功能 |
| 3 生物标志物CXCL-10/IP-10与SSc-ILD、pSS-ILD、RA-ILD的相关性 |
| 3.1 在SSc-ILD、pSS-ILD、RA-ILD中CXCL-10/IP-I0水平与肺功能 |
| 3.2 在SSc-ILD、pSS-ILD、RA-ILD中CXCL10/IP-10的ROC曲线 |
| 3.3 在SSc-ILD、pSS-ILD、RA-ILD中CXCL-10/IP-10与ILD分期 |
| 4 生物标志物Eotaxin/CCL11与SSc-ILD、pSS-ILD、RA-ILD的相关性 |
| 4.1 在SSc-ILD、pSS-ILD、RA-ILD中Eotaxin/CCL11与ILD分期 |
| 4.2 在SSc-ILD、pSS-ILD、RA-ILD中Eotaxin/CCL11的ROC曲线 |
| 5 生物标志物VEGF、TNF-a、TGF-α在SSc-ILD、pSS-ILD、RA-ILD中与ILD分期的相关性 |
| 第三章 讨论 |
| 1 SSc、pSS和RA三种疾病肺间质病变的临床危险因素 |
| 2 KL-6与SSc、pSS和RA三种疾病肺间质病变发生关系 |
| 3 CXCL10/IP-10与SSc、pSS和RA三种疾病肺间质病变发生关系 |
| 4 Eotaxin/CCL11与SSc、pSS和RA三种疾病肺间质病变发生关系 |
| 5 VEGF和TNF-a与pSS-ILD发生关系 |
| 6 TGF-α与RA-ILD发生关系 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 |
| 附录二 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）益肺逐瘀汤治疗特发性肺纤维化的临床研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1.研究资料 |
| 1.1 研究病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 病例选择标准 |
| 2.研究方法 |
| 2.1 确定病例数 |
| 2.2 病例分组 |
| 2.3 治疗方法 |
| 2.4 观察指标 |
| 2.5 疗效判断标准 |
| 2.6 不良事件处理 |
| 2.7 质量控制 |
| 2.8 统计与分析 |
| 3.研究结果 |
| 3.1 性别、年龄、病程、血常规比较 |
| 3.2 治疗前样本基线比较 |
| 3.3 治疗前后疗效比较 |
| 3.4 安全性评价 |
| 4.讨论与分析 |
| 4.1 IPF的现代临床研究 |
| 4.2 中医对特发性肺纤维化的认识 |
| 4.3 益肺逐瘀汤的组方分析 |
| 4.4 益肺逐瘀汤的现代药理研究 |
| 4.5 研究结果分析 |
| 4.6 安全性分析 |
| 4.7 存在的问题及展望 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录一 文献综述 特发性肺纤维化的发病机制和中西医治疗现状 |
| 参考文献 |
| 附录二 HRCT计分 |
| 附录三 呼吸困难程度评级 |
| 附录四 圣乔治呼吸问卷(SGRQ)量表 |
四、基质金属蛋白酶与弥漫性肺间质纤维化（论文参考文献）
- [1]结缔组织性疾病相关肺间质病变患者血清MMP-2、MMP-3、MMP-7及MMP-9的表达及临床相关性研究[D]. 陈红. 右江民族医学院, 2021(01)
- [2]肺纤维化的六经辨证研究及大黄（？）虫丸干预肺纤维化大鼠的实验研究[D]. 蔡松. 北京中医药大学, 2021(08)
- [3]槲皮素治疗肺间质纤维化作用机制研究进展[J]. 李珂珂,葛春蕾,张兴彩. 辽宁中医药大学学报, 2021(02)
- [4]探讨仙茅—淫羊藿药对对肺纤维化大鼠VEGF、PDGF干预作用及临床分析[D]. 王灿. 山东中医药大学, 2020(01)
- [5]丹参酮IIA对矽肺肺损伤及纤维化的保护作用及机制研究[D]. 冯菲菲. 山东大学, 2020(11)
- [6]大黄?虫丸基于TGF-β1/Smad信号通路抑制矽肺纤维化的作用机制研究[D]. 吴丽娟. 成都中医药大学, 2020(02)
- [7]不同类型间质性肺疾病患者基质金属蛋白酶-7、肺弥散功能差异及其临床意义[D]. 吴美姿. 承德医学院, 2020(02)
- [8]特发性肺纤维化中医证候观察及养阴益气合剂抗肺纤维化实验研究[D]. 孟丽红. 北京中医药大学, 2019(04)
- [9]系统性硬化病肺间质病变外周血清生物标志物的研究[D]. 余辞源. 厦门大学, 2019(01)
- [10]益肺逐瘀汤治疗特发性肺纤维化的临床研究[D]. 李贤明. 上海中医药大学, 2019(03)