一、大鼠动力性肺动脉高压模型的建立及低压性缺氧对其影响的研究（论文文献综述）
蒲小燕[1]（2021）在《医学地理视角下高海拔环境对机体肺损伤机制的研究》文中指出青海省五分之四以上的地区为高原,高海拔低氧环境是引发高原肺水肿的重要地理环境因素。仅从医学角度分析肺水肿的发生过程,不利于明确地理环境对该疾病的影响;而仅从地理学角度分析肺水肿的诱发因素,又无法深入明确高原肺水肿的发病机制。因此,利用医学研究的相关技术和方法,从医学地理角度分析高原肺水肿的发病机制以及地理环境因子对其的影响,有针对性地找到治疗和预防高原肺水肿的有效药物,是更好地解决高原肺水肿的途径之一。为了明确不同海拔地理环境因子对机体肺功能的影响及其分子机制,并根据肺损伤的分子机制,准确地选择有效的预防药物,本文通过分析青海省海拔相差1 000 m的三个旅游胜地（西宁、门源、玛多）地理环境因子的相关性;以SPF级雄性SD大鼠为研究对象,分析了三个地区的气温、降水量、归一化植被指数、氧含量和海拔等地理环境因子与大鼠动脉血氧分压、氧饱和度、肺动脉压和肺组织含水量的相关性;在4 200 m低氧胁迫不同时间后,应用转录组学方法,筛选差异表达的基因,并进行了验证;应用分子生物学等实验方法,检测了不同海拔各组大鼠肺组织中内质网应激相关蛋白、炎症因子和肺组织细胞凋亡因子的表达;通过构建Fdft 1沉默的sh-Fdft 1腺病毒载体和阴性对照载体,利用腺病毒载体和维生素D3对大鼠进行预处理后,研究低氧对它们的血氧分压、血氧饱和度和肺动脉压、肺组织含水量变化以及肺组织细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响。研究结果表明,（1）大气中氧浓度与温度、归一化植被指数呈强正相关性（r值分别为0.967,1.000）,与海拔呈强负相关性（r=-0.994）,海拔每上升1 000m,气压下降10 Kpa,氧浓度下降约28 g/m3。（2）在4 200 m低氧环境中,持续低氧胁迫导致肺动脉压极显着升高（P<0.01）,和氧饱和度极显着下降（P<0.01）,肺组织中抗氧化酶（GSH-Px和SOD）活力极显着下降（P<0.01）,丙二醛含量极显着升高（P<0.01）,肺组织含水量极显着升高（P<0.01）,肺组织病理形态损伤明显,大量炎症因子浸润,随着胁迫时间的延长,损伤明显加重;在3 200 m海拔环境中,持续低氧胁迫造成大鼠上述生理和形态学指标轻度改变,损伤较轻;在2 200 m海拔环境中,大鼠以上指标变化不显着（P>0.05）。（3）环境地理因素中,海拔与血氧饱和度呈显着负相关（P<0.05）,海拔与肺含水量和肺动脉压显着正相关（P<0.05）,而空气氧浓度与血氧饱和度显着正相关（P<0.05）,空气中的氧浓度与肺含水量和肺动脉压显着负相关（P<0.05）。（4）转录组测序分析发现,4 200 m低氧损伤的大鼠肺组织差异基因主要富集在免疫、炎症和代谢相关通路中,其中NOD样受体及下游相关信号通路关键基因和类固醇激素合成通路的Fdft 1等基因极显着高表达（P<0.01）;在低氧损伤的大鼠肺组织中,NOD样受体下游p38 MAPK/NF-κB信号通路中的CARD9、MYD88、p-p38 MAPK和p-p65蛋白,以及内质网应激调控蛋白GRP78、PERK、IRE1、ATF6、CHOP和Caspase-12的表达水平显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）;低氧损伤的大鼠肺组织中细胞凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白表达显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）。（5）沉默Fdft 1后,低氧胁迫导致大鼠血氧分压和血氧饱和度极显着下降（P<0.01）,肺动脉压和肺组织含水量极显着升高（P<0.01）,肺组织中Bcl-2蛋白表达极显着降低（P<0.01）,而PCNA、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达极显着增加（P<0.01）。（6）维生素D3能极显着提高低氧胁迫组和Fdft 1沉默组大鼠血氧分压和饱和度,极显着抑制肺动脉压和肺组织含水量的增加以及肺中PCNA和凋亡相关蛋白表达水平（P<0.01）。上述结果提示,大气中氧浓度与归一化植被指数和温度呈正相关性,与海拔高度呈负相关性,海拔是影响大气氧浓度的最主要因素。随着海拔的升高,大鼠肺组织损伤逐步加重,当海拔升高到4 200 m时可导致大鼠肺动脉高压和高原肺水肿的发生。地理环境因素中,海拔高度是影响肺功能的主要因子。在高海拔环境中,大鼠肺组织中p38 MAPK/NF-κB通路和内质网应激介导的肺上皮细胞凋亡和炎症反应导致高原肺水肿的发生。沉默维生素D3合成过程中的关键基因（Fdft 1）可加剧大鼠低氧性肺动脉高压和高原肺水肿的发生。外源性补充维生素D3对缺氧性肺损伤的发生发展具有显着的预防和保护作用。
刘杰[2]（2021）在《肥大细胞在高原肺水肿相关肺动脉压增高过程中的作用研究》文中指出一、研究背景高原低氧环境是引发高原肺水肿（HAPE）的关键因素,其发病机制复杂,与急性低氧性肺动脉压（PAP）异常增高密切相关。近年有诸多文献报道肥大细胞（MCs）参与了慢性肺动脉高压的形成过程,但对于MCs在急性低氧性PAP增高、HAPE的发生中的作用机制文献报道较少。MCs作为重要的免疫细胞之一,在肺免疫监督方面发挥着重要的“哨兵”作用。MCs活化可以合成大量颗粒（多种生物活性介质）、脱颗粒释放胞内活性介质作用于不同的靶细胞,产生不同的生物学效应,如类胰蛋白酶（Tryptase）和类糜蛋白酶（Chymase）,可作为MCs活化和脱颗粒的特异性激活标志物,直接反映MCs数量多少和活性程度,MCs分为MCT（只富含Tryptase）和MCTC（富含Tryptase和Chymase）两型。Tryptase可以和IL-4,6等炎症介质触发MCs活化的级联“瀑布效应”,Chyptase可以不依赖血管紧张素转换酶（ACE）促进局部Ang II的生成;5-羟色胺（5-HT）、组胺（His）可以促进血管收缩、改变血管的通透性等。基于文献调研的基础,本研究开展急性低氧应激下肺MCs活化脱颗粒在HAPE相关PAP增高过程中的作用和机制的研究。二、研究的科学问题急性缺氧应激下肺MCs（数量、活性、分型、分布）发生了怎样的变化?→MCs的变化是否参与了HAPE相关PAP增高的过程?→肺MCs参与HAPE相关PAP增高过程的可能机制?三、研究内容设计为了开展实验研究,选用MCs脱颗粒抑制剂色苷酸钠（SCG）——作为工具药开展本实验。选用RBL-2H3细胞（大鼠嗜碱性白血病细胞,是文献报道作为研究MCs的模型细胞株）替代MCs开展有关MCs的体外研究。通过SCG预处理SD大鼠和SCG培养RBL-2H3细胞进行机体整体、组织、细胞三个层面开展本研究。四、结果1、整体层面:研究肺MCs活化脱颗粒在急性低氧性PAP增高过程中的作用通过气管插管15%O2通气复制急性常压低氧动物模型,Power Lab系统实时、动态监测SD大鼠PAP和Psa（系统动脉压）的变化。结果发现:SCG预处理后可降低PAP升高的幅度,但对Psa降低无明显改善,提示肺MCs活化在SD大鼠急性低氧性PAP升高的过程中起到参与甚或促进的作用。2、组织层面:肺MCs活化在HAPE相关的PAP增高过程中的作用机制研究通过HE、TB染色和IHC实验,研究不同急性低压低氧条件[低压舱,不同海拔高度（5000 m、7000 m）、不同低氧刺激时间（12、24、48、72 h）]下SD大鼠肺水肿发生情况、肺MCs的变化趋势。结果发现:（1）急性低压低氧应激下SD大鼠肺组织中MCs数量增多、活性增强;（2）(MCTC型)MCs在肺微小血管旁、细小支气管旁、气管粘膜下间质、肺被膜等处分布增多;（3）低压舱,海拔7000 m高度复制急性低氧性肺水肿效果优于5000 m,7000 m-12 h时MCs数量最多、活性最强。通过TB染色、透射电镜（TEM）、Western Blot（WB）、免疫荧光（IF）、ELISA实验结果发现:（1）选择给予SD大鼠SCG（100 mg/kg,i.p.）预处理、低压舱（海拔7000 m）,持续刺激12 h为SCG预处理和急性低压低氧动物造模条件;（2）急性低压低氧刺激下MCT和MCTC型MCs都增多,肺微小血管旁MCTC型MCs增多尤为明显;（3）肺MCs活化脱颗粒释放炎症介质IL-6增多和Tryptase一起启动MCs活化的“瀑布效应”;直接和间接释放His、5-HT、Ang II等缩血管物质增多参与甚至促进了急性低氧性PAP增高的发生。3、细胞层面:低氧培养的RBL-2H3细胞（MCs）上清液的代谢组学研究通过SCG处理低氧培养的各组RBL-2H3细胞（MCs）WB实验、细胞上清液ELISA实验,结果发现:（1）低氧环境下RBL-2H3细胞数量增多、活性增强、释放缩血管物质His增多;（2）确立选择37℃,1%O2+5%CO2培养RBL-2H3细胞48 h为细胞低氧培养的条件,SCG 10-6 g/ml为低氧培养RBL-2H3细胞48 h的药物浓度。通过SCG处理低氧（1%O2+5%CO2）培养RBL-2H3细胞上清液进行非靶代谢组学测序,结果发现:（1）低氧刺激可引起RBL-2H3细胞氨基酸、脂质代谢和糖代谢相关通路明显变化;（2）SCG处理后能减缓氨基酸尤其是组氨酸相关代谢物的不利影响、调节脂质代谢和糖代谢;（3）SCG处理可调控氨、组氨酸和谷氨酸代谢功能通路;（4）推测低氧刺激影响了RBL-2H3细胞（MCs）组氨酸代谢,通过组氨酸增多,生成His增多,促进肺小血管收缩的发生,PAP增高。六、实验结论急性低氧应激下肺MCs快速发生募集、在肺微小血管旁数量增多,活性增强、脱颗粒释放IL-6促进增多,与Tryptase参与肺MCs活化的“瀑布效应”,直接或间接释放缩血管物质His、5-HT、Ang II增多,参与甚至促进了低氧性PAP增高的过程;急性低氧应激下MCs活化后通过调节组氨酸代谢通路,促使His生成增多,导致肺小血管收缩,PAP增高,进一步促进HAPE的发生。
柯景彬[3]（2021）在《急性高原病心血管响应特征及其预警作用的研究》文中提出背景我国高原地区面积广大、资源丰富、发展潜力巨大。如今,越来越多的人进驻高原从事地区建设、国防发展、资源开发、商业贸易、高原旅游等活动。然而,高原地区的恶劣环境给居住和进驻的人群带来了严峻的挑战,甚至引发一系列高原疾病,严重影响人群的正常生活和活动。近年来高原医学研究取得了长足的进步,虽然研究成果的报道和应用降低了高原病的发生率和死亡率,但是仍然存在很多未解决的问题。人体进入高原低压性缺氧环境后会引发一系列生理性改变,机体通过这些改变以逐步适应高原环境的调整过程被称为高原习服。然而,当机体不能良好习服,往往会出现各种不适症状甚至发展为高原疾病。急性高原病（acute mountain sickness,AMS）是高原暴露后最常见的高原疾病之一,它是人群快速从平原地区进入高原地区,或者从高海拔地区进入更高海拔地区时机体未能良好习服而出现一系列不适症状的一种临床综合征。其中,头痛是AMS最主要的临床症状,通常伴随失眠、疲劳、头晕、厌食和恶心等其他症状。少数病情严重者会发展为高原脑水肿和/或高原肺水肿,如若得不到及时有效的治疗,往往会导致患者死亡。因此,研究AMS的早期预警和有效治疗具有重要的意义。心血管系统是高原暴露后首先及首要反应的系统之一。高原低压性缺氧直接影响肺血管和全身阻力血管的血管张力,心率加快、外周动脉血压和肺动脉压升高,每搏输出量降低,心输出量早期升高,并随着习服的进行而逐渐下降,心脏收缩功能基本维持。血容量和心室容积降低,舒张充盈模式改变。这种心血管系统的调整和变化对人体快速适应高原缺氧环境起着重要的作用,在大多数情况下,急性高原暴露后的心血管响应有助于个体耐受和适应低氧环境,但反过来在某些情况下,心血管响应不良也可能引发高原疾病,甚至可能导致AMS。截至目前,关于急性高原暴露后心血管系统响应与AMS之间关系的研究还很缺乏,人体平原基线心血管功能是否影响AMS的发生和进展、急性高原暴露后心血管系统的响应是否参与AMS的发生发展有待进一步的探索和研究。因而本研究将分三部分来研究急性高原暴露后心血管系统响应与AMS之间关系。三部分具体内容如下:1.AMS的流行病学特征;2.高原左心室响应特征及其对AMS的识别价值;3.平原人群心脏功能指标在AMS预警中的作用。目的1.明确平原健康人群以不同上升方式、不同习服程度情况下基于新、旧版路易斯湖急性高原反应评分系统的AMS的流行率、临床特征和相对风险的动态变化。2.查看急性高原暴露对平原人群左室功能的影响。筛查具有AMS的识别价值的左室功能指标,并分析左室功能指标间的相关性及贡献度,进而探讨急性高原暴露对左室功能的影响及其与AMS的潜在关联。3.筛查对AMS发生具有预警价值的平原人群基线心脏功能指标,并分析其对AMS发生的预测价值,探讨平原基线心脏功能对AMS的发生进展的影响,并进一步探索急性高原暴露后心脏功能变化对AMS发生发展的潜在意义。方法1.分别于2012年6月在成都（海拔500米）和2013年6月在重庆（海拔400米）纳入志愿者1283例和346例。2012年纳入的志愿者乘坐飞机在2小时内进驻拉萨（海拔3700米）,作为快速上升队列。在拉萨停留7天后,乘车进一步进驻西藏羊八井（海拔4400米）。2013年纳入的志愿者乘大巴在4天内进驻四川新都桥（海拔3450米）,作为缓慢上升队列。在新都桥停留3天后,乘车进一步进驻四川理塘（海拔4100米）。采集志愿者平原状态下、急性高原暴露后及急性高原暴露后短期习服进一步进驻更高海拔后的人口学数据资料及症状发生情况。分别根据旧版路易斯湖急性高原反应评分（LLS）系统和2018年新版LLS系统对人群进行评分和AMS的诊断。查看不同上升方式、不同习服程度情况下AMS及主要症状的流行率及动态变化。组间比较探讨不同上升方式及不同习服程度对人群AMS及主要症状发生情况的影响。Logistic回归分析不同上升方式及不同习服程度情况下AMS发生的危险因素。2.于2012年6月在成都（海拔500米）纳入志愿者589例,所有志愿者乘坐飞机在2小时内进驻拉萨（海拔3700米）。采集志愿者平原状态下和急性高原暴露后的人口学数据资料、基本生理参数资料、症状发生情况及超声心动图指标。组间比较志愿者进驻高原前后一般人口学数据、基本生理参数、超声心动图检测的基本左室功能指标的差异。根据2018年新版LLS系统对人群进行评分和AMS的诊断,根据是否发生AMS进行分组。组间比较人群指标参数,查看急性高原暴露后AMS+和AMS-组志愿者基本生理参数及左室功能的差异。ROC曲线筛查具有AMS识别意义的超声心动图指标,根据筛查的指标进行分组,组间比较AMS及其评分症状的发生情况,探讨该指标对AMS的识别价值,并线性回归分析左室功能指标间的相关性及贡献度,以探讨急性高原暴露后左室响应与AMS发生的潜在机制。3.于2013年6月在重庆（海拔400米）纳入志愿者106例,所有志愿者在7天内乘坐汽车进驻四川理塘（海拔4100米）。采集志愿者平原状态下和急性高原暴露后的人口学数据资料、基本生理参数资料、症状发生情况及超声心动图指标。根据2018年新版LLS系统对人群进行评分和AMS的诊断,根据是否发生AMS进行分组。组间比较和logistic回归分析筛查具有AMS发生预警价值的平原基线超声心动图指标,ROC曲线分析筛查后指标的cut-off值并依据该cut-off值进行分组,组间比较AMS及其评分症状的发生情况,分析筛查后指标对人群AMS发生的预测价值。组间比较急性高原暴露前后超声心动图心脏功能指标变化的差异,以探索急性高原暴露后心脏功能变化对AMS发生发展的潜在意义。结果1.采用旧版LLS和新版LLS诊断方法,快速上升队列人群在海拔3700米AMS发病率分别为68.4%和56.1%,进一步上升到海拔4400米后,发病率分别下降到21.4%和14.3%;缓慢上升队列人群在海拔3450米AMS发病率分别为30.3%和25.7%,进一步上升到海拔4100米后,发病率分别上升到36.6%和32.2%。除了在快速上升队列人群在海拔4400米处,头痛、头晕/眩晕和疲劳均为人群发生率最高的症状。快速上升方案是急性高原暴露AMS发病的危险因素,但经短期习服进一步上升到更高海拔后,快速上升方案成为急性高原暴露AMS发病的保护因素。2.急性高原暴露后,人群外周血氧饱和度、收缩末期容积指数、舒张末期容积指数（EDVi）、每搏输出量指数（SVi）、E峰速度和E/A比值均有所下降,而心率（HR）、射血分数、心脏指数和A峰速度均有所上升。相比于AMS未发病人群,AMS发病人群HR较高,EDVi、SVi、Ci、E峰速度和E/A比值较低。SVi是对人群发生AMS具有最优识别价值的指标SVi（AUC:0.804,95%CI:0.767-0.842）,而SVi的改变主要与EDVi的改变有关（R2=0.757,p<0.001）,EDVi的改变主要与E峰速度的变化有关（R2=0.522,p<0.001）。与最高SVi值组人群相比,中间SVi值组人群AMS的发病率更高（IRR:1.958,95%CI:1.333-2.876）,轻度头痛和胃肠道症状的发生率亦更高,而最低SVi值组人群AMS（IRR:4.710,95%CI:3.375-6.572）及所有AMS评分症状的发生率均最高。3.急性高原暴露后,33名志愿者（31.1%）被诊断为AMS。AMS发病人群平原基线二尖瓣环外侧壁组织运动位移(MV TMADlateral)较AMS未发病人群更低（13.09 vs.13.89mm,p=0.022）。回归分析结果提示,人群平原基线MV TMADlateral水平与AMS的发生显着相关（OR=0.717,CI:0.534～0.964,p=0.028）。与平原基线MV TMADlateral≥13.30mm的人群相比,平原基线MV TMADlateral<13.30 mm的人群AMS发病风险显着升高（OR:4.046,95%CI:1.648-9.933）。急性高原暴露后,平原基线MV TMADlateral<13.30 mm组人群HR（64 vs.74 bpm,p=0.001）和RV MPI（0.54 vs.0.69,p=0.009）增加,而LV GLS（21.50 vs.20.23%,p=0.002）、TV E/A（2.11 vs.1.89,p=0.019）以及MV EDT（169.60vs.156.90 ms,p=0.035）降低,而平原基线MV TMADlateral≥13.30 mm组人群中上述指标均无显着改变。结论1.根据评分方法、进驻方式和习服情况的不同,人群AMS的发生率介于14.3%～68.4%;头痛、头晕和疲劳是急性高原暴露后发生率最高的症状;快速进驻方式是人群AMS发病的危险因素。2.急性高原暴露后,SVi的降低与AMS的发生率和临床严重程度显着关联。同时,SVi的改变与左室充盈模式的改变有关。3.平原基线MV TMADlateral水平是人群AMS发生的潜在预测指标,这可能与平原不同基线MV TMADlateral水平的人群急性高原暴露后心室收缩和舒张功能的差异性改变有关。
麻海英[4]（2021）在《“井穴”放血预处理对大鼠急性高原肺损伤AngⅡ、ACE、ET-1的影响》文中研究表明目的:观察“手十二井穴”放血预处理对急性高原缺氧大鼠肺组织AngⅡ含量、血浆AngⅡ含量、肺组织ACEm RNA表达、肺组织ET-1含量的影响,为临床应用针灸疗法防治急性高原肺损伤提供一定的实验依据。方法:将SD雄性大鼠随机分组:空白A（n=8）,缺氧对照D,井穴放血干预组C。缺氧对照D（D6、D24、D48、D72）、井穴放血干预组C（C6、C24、C48、C72）。比较D组,C组均用采血针操作,先扎左前肢,再扎右前肢,计12穴。取穴:肺经少商穴,大肠经商阳穴,心包经中冲穴,三焦经关冲穴,心经少冲穴,小肠经少泽穴。空白组与缺氧对照组每日均施以与井穴放血干预组相同的刺激方式只抓取不针刺。5天后,C、D组同时入人工低压模拟舱,舱内海拔匀速升至7000m高度,暴露不同时间段以制备高原肺损伤大鼠模型。计算肺组织湿干重比W/D;HE观察肺组织病理改变。Elisa检测Ang II、ET-1含量变化;Real time PCR对比肺组织ACE m RNA的表达。结果:1.肺组织W/D:与A对照,D组W/D在各个时间段均显着增高,该数值随时间变化,48h达到峰值,表明低压低氧可以使肺组织W/D增加。2.HE结果:与A对照,D组病理切片均发生不同程度损伤,72h时损伤最严重。表明低压低氧会诱导大鼠肺组织发生损伤,随缺氧时间逐渐加重。同时间段针刺各组较模型各组肺组织损伤均呈现不同程度好转。3.Elisa结果:与A对照,D组Ang II、ET-1含量在各个时间段均显着增高,且随缺氧时间延长逐渐升高,提示低压低氧可以使肺部Ang II含量、ET-1的含量上升;同时间段针刺各组较模型各组Ang II含量、肺组织ET-1含量均呈下降趋势。4.Real time PCR结果:与A对照,D组ACEm RNA的表达在各个时间段均呈上调趋势,提示低压低氧可以使肺组织ACEm RNA表达上调。除72h外,其余3组不同时间段针刺干预后ACEm RNA表达均呈下降趋势。结论:1.通过本次实验,验证了人工所设低压氧舱设备会诱导正常大鼠发生肺部损伤。2.研究可知:模拟7000米、暴露72小时,能较好建立肺损伤大鼠模型。3.井穴放血预处理能够影响大鼠AngⅡ含量、ET-1含量及ACE m RNA表达,进而对大鼠急性高原缺氧肺组织损伤起到防治作用,为针灸防治高原低氧急性肺组织损伤提供实验依据。
沈慧萍[5]（2021）在《“井穴”放血预处理对西宁地区急性低氧大鼠肺损伤AQP-1、AQP-5的影响》文中指出目的:观察“井穴”放血预处理对西宁地区（海拔2261米）急性低氧模型大鼠动脉血气分析、肺湿干重比、肺组织病理学及肺组织中TNF-α含量及AQP1、AQP5m RNA表达的影响,为临床应用针灸防治急性低氧肺组织损伤提供新的思路与实验依据。方法:将成年雄性SD大鼠共72只按随机数字表法分为3组:空白对照（A）组、低氧模型（D）6h、24h、48h、72h组、“井穴”放血预处理（C）6h、24h、48h、72h组。C组大鼠使用刺血针点刺井穴（按少商、商阳、中冲、关冲、少冲、少泽顺序）放血预处理5天,同时每日对A、D组大鼠进行与C组大鼠相同的方式抓取并轻按压刺激双前爪一次。于第6d将C、D组大鼠置于西宁地区（海拔2261米）低氧模拟舱以制备急性低氧大鼠肺组织损伤模型,在舱内暴露相应时间后出舱,同时将A、C、D三组大鼠麻醉,腹主动脉采血,检测各组大鼠动脉血气分析,开胸取肺组织,计算肺湿干重比、观察各组大鼠肺组织病理变化、ELISA法检测肺组织TNF-α含量,RT-PCR技术检测肺组织中AQP1、AQP5m RNA表达。结果:（1）血气分析:与A组相比,C、D组各时间段大鼠动脉血氧分压（Pa O2）、氧饱和度（Sa O2）均降低（P<0.01）,同时间段C、D两组大鼠血气分析比较,C组Pa O2、Sa O2较D组升高。（2）肺组织湿干重比:与A组相比,C、D组各时间段肺组织湿干重比均升高;同时间段C、D两组相比,C组比值较D组均降低（P<0.01）。（3）肺组织病理学:与A组相比,C、D组各时间段大鼠肺组织病理学显示大鼠肺组织结构均出现损伤破坏,同时间段两组大鼠肺组织病理学相比,C组肺组织损伤程度较D组减轻。（4）肺组织TNF-α含量:与A组相比,C、D组各时间段大鼠肺组织TNF-α含量均升高（P<0.01）,同时间段两组大鼠表达相比,C组TNF-α含量较D组降低（P<0.01）（5）肺组织AQP1、AQP5m RNA表达:与A组大鼠相比较,C、D组各时间段大鼠肺组织AQP1表达均升高,AQP5表达均降低（P<0.05）,同时间段两组大鼠表达相比,除72h外C组AQP1表达均较D组降低（P<0.05）,AQP5表达较D组升高（P<0.05）。结论:1.急性低氧能导致大鼠动脉血氧分压、氧饱和度减低,肺组织中TNF-α含量及AQP1表达升高,AQP5表达降低,肺组织损伤。2.“井穴”放血预处理能够在一定程度上升高动脉血氧分压、氧饱和度,调节大鼠肺组织内AQP1、AQP5m RNA的表达,降低肺组织内TNF-α含量,减少肺组织的含水量,改善急性低氧导致的肺组织损伤。
单凯[6]（2021）在《回输正常小鼠针刺后血清外泌体（Acu-exo）对缺氧小鼠生存时间的作用规律及机制的初步探索》文中研究指明目的:探索正常小鼠针刺后血清外泌体（Acupunctuer-exosome,Acu-exo）腹腔注射对缺氧小鼠生存时间的影响及其起效的可能靶标,为针灸基础研究转化及中医治未病提供实验依据。方法:研究内容一电针足三里预处理对缺氧小鼠生存时间的观察研究本实验重复2次,第一次实验,将32只正常KM种雄性小鼠随机分为空白对照组、电针组,每组16只。电针预处理以针灸针（0.25×13 mm）刺入足三里穴（3-5mm）,电针参数为:频率10Hz,疏密波,时间15min,强度为5。电针结束后即刻将小鼠放入装有30g钠石灰的250m L广口瓶中,造成缺氧环境,以小鼠生存时间为观察指标。对照组不针刺仅进行缺氧模型复制。第二次实验,将30只正常KM种雄性小鼠随机分为空白对照组、电针组,每组15只。其余操作同第一次实验。研究内容二Acu-exo对缺氧小鼠生存时间作用规律的研究1.正常小鼠电针足三里穴不同天数后Acu-exo的提取与鉴定将32只正常KM种雄性小鼠随机分为空白对照组（E0）、电针1天组（E1）、电针4天组（E4）及电针7天组（E7）,每组8只,频次:1次/1天,参数同前。各组针刺后眼球取血,运用Exo Quick法于血清中提取Acu-exo,通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析、蛋白质免疫印迹法对外泌体大小及形态、标志物进行鉴定。2.注射溶剂PBS、DMSO对缺氧小鼠生存时间的观察研究将18只正常KM种雄性小鼠随机分为空白对照组、PBS组、DMSO组,每组6只。PBS组运用无菌PBS（0.1m L/10g）对正常小鼠进行腹腔注射,于0.5h后,复制缺氧模型;DMSO组运用DMSO（浓度为0.2%,0.1m L/10g）对正常小鼠腹腔注射,于1.25h后复制缺氧模型,以小鼠生存时间为观察指标。3.回输Acu-exo对缺氧小鼠生存时间的观察研究将50只正常KM种雄性小鼠随机分为空白对照组、回输E0外泌体组、回输E1外泌体组、回输E4外泌体组、回输E7外泌体组,每组10只,回输的各组外泌体,即实验1中提取E0、E1、E4、E7的外泌体,各组进行Acu-exo（4mg/kg,0.1ml/10g）腹腔注射,0.5h后,复制缺氧模型,以小鼠生存时间为观察指标。4.拮抗循环外泌体对缺氧小鼠生存时间的观察研究将40只正常KM种雄性小鼠随机分为空白对照组、电针组、电针+DMSO组、电针+GW4869组,每组10只。电针组进行电针干预,电针预处理以针灸针（0.25×13 mm）刺入足三里穴（3-5mm）,电针参数为:频率10Hz,疏密波,时间15min,强度为5。电针+DMSO组、电针+GW4869组分别进行腹腔注射DMSO（浓度为0.2%,0.1m L/10g）及GW4869（使用外泌体拮抗剂GW4869溶解于DMSO中,3mg/m L,0.1m L/10g）,1小时后,将小鼠进行电针预处理,电针参数同前。电针干预后即刻复制缺氧模型,以小鼠生存时间为观察指标。研究内容三Acu-exo提高缺氧生存时间作用机制的复杂网络分析运用非靶标定量蛋白组学技术（Label Free）测量对照组与正常针刺组提取血清外泌体所运载蛋白的种类和含量,筛选组间变化倍数大于1.5,p<0.05的针刺显着差异蛋白,将筛选出的263个正常针刺显着差异蛋白作为源数据,将显着差异蛋白运用Uniport蛋白数据库进行基因转换和HGNC人类基因组数据库进行基因映射为人类基因。运用OMIM数据库、Dis Ge NET数据库、Genecards数据库中筛选出与缺氧相关的人类基因,取两者交集筛选出共有靶标基因。再运用DAVID数据库对共有的靶标进行KEGG通路和GO功能数据库的建立,通过Gephi软件等构建显着差异靶标-KEGG通路网络连入图、显着差异靶标-KEGG通路网络连出图、显着差异靶标-GO功能网络连出图、气泡图,联合应用连入度、连出度等数据挖掘算法,筛选针刺后提取血清外泌体（Acu-exo）耐缺氧效应的可能作用靶标。结果:1.电针预处理可以提高缺氧小鼠的生存时间电针预处理后进行缺氧模型复制,重复2次实验,第一次实验,空白对照组生存时间:32.61±2.96min;电针组生存时间:50.84±3.89min。第二次实验,空白对照组生存时间:37.73±4.00min;电针组生存时间:50.35±6.35min,重复两次实验结果相似,电针组较对照组的生存时间明显提高,具有统计学差异（P<0.01）。2.外泌体的形态、大小及标志物符合细胞外囊泡协会鉴定的要求和标准将空白对照组（E0）、电针1天组（E1）、电针4天组（E4）、电针7天组（E7）提取的Acu-exo进行BCA蛋白浓度测定,E0、E1、E4和E7组的蛋白浓度为9.19mg/m L,11.22mg/m L,10.74mg/m L,15.69mg/m L。透射电镜检测显示,外泌体直径≥30,≤200nm,其中血清外泌体均呈圆形、类圆形囊泡的形状,或单个分布,或聚集成群。纳米颗粒跟踪分析发现E0、E1、E4和E7各组检测报告表明MODE曲线线性流畅,提示含有杂质少,粒径峰值分别为67.6nm、103.3nm、72.4nm和137.9nm,粒径峰值与理论外泌体尺寸值（30-200nm）相符。利用SDS-PAGE电泳分析E7组外泌体蛋白谱有条带,电泳显示蛋白条带CD63、CD9、Tsg101和Clanexin符合标准,提示提取外泌体未受杂蛋白干扰,纯化效果佳。3.溶剂PBS、0.2%DMSO对电针提高缺氧小鼠生存时间无明显影响空白对照组生存时间:33.25±2.38min;PBS组生存时间:34.22±3.19min;DMSO组生存时间:37.55±5.69min。对照组、PBS组、DMSO组缺氧小鼠生存时间无明显差异。4.腹腔回输Acu-exo可提高耐缺氧小鼠的生存时间空白对照组生存时间:33.29±2.84min;回输E0外泌体组生存时间:34.99±3.59min;回输E1外泌体组生存时间:38.00±4.22min;回输E4外泌体组生存时间:39.59±3.77min;回输E7外泌体组生存时间:40.94±2.70min。回输E1外泌体组、回输E4外泌体组、回输E7外泌体组的耐缺氧时间与空白对照组相比,具有统计学差异（p<0.01）;空白对照组与回输E0外泌体组的耐缺氧时间相比没有显着提高,不具有统计学差异（p>0.05）;回输E1外泌体组、回输E4外泌体组、回输E7外泌体组对小鼠耐缺氧时间有一定上升趋势。5.GW4869拮抗循环外泌体降低了电针提高耐缺氧小鼠生存时间的疗效空白对照组生存时间:29.88±2.35min;电针组生存时间:46.23±4.99min;电针+DMSO组生存时间:46.97±4.76min;电针+GW4869组生存时间:31.41±3.36min;针刺组与电针+GW4869组生存时间相比有显着提高,具有统计学差异（p<0.01）;电针组小鼠的耐缺氧时间与对照组相比有显着提高,具有统计学差异（p<0.01）;电针+GW4869组小鼠的耐缺氧时间与空白对照组相比没有明显差异。6.Acu-exo运载的表皮生长因子受体（EGFR）、血小板反应素-1（THBS1）、凝血因子II（F2）可能是针刺耐缺氧的有效靶标正常电针组与对照组血清外泌体显着差异蛋白映射人类基因有221个,OMIM数据库、Dis Ge NET数据库、Genecards数据库中与缺氧相关人类基因有6104个,共有基因有114个;复杂网络分析发现针刺后提取血清外泌体运载与缺氧相关的可能起效靶标以表皮生长因子受体（EGFR）、血小板反应素-1（THBS1）、凝血因子II（F2）为主。结论:1.Acu-exo可提高缺氧小鼠的生存时间,存在一定的量效规律。2.外泌体在电针提高缺氧小鼠生存时间中发挥重要作用。3.外泌体运载的EGFR、THBS1、F2可能是电针抗缺氧的起效靶标物质。
杨嵘[7]（2021）在《吡咯喹啉醌（PQQ）对急性高原暴露小鼠运动能力的作用及其机制研究》文中研究指明高原是我国领土的重要组成部分,占我国陆地面积的26%,低压低氧是其突出的环境因素特征。随着海拔升高,氧分压越低,尤其在海拔3500 m以上的地区,人体的体作业能力和劳动效率明显下降。然而,高原环境体作业能力下降的潜在分子机制尚不清楚,用于预防急性高原反应和提高运动能力的干预措施尚处于匮乏阶段。面对日益频繁的高原突发事件,寻找用于提高急进高原体作业能力的小分子药物,具有重要的现实和军事意义。吡咯喹啉醌（PQQ）是一种芳香族三环邻醌,在哺乳动物体内无法合成,主要通过饮食获得。实验证实,PQQ作为一种氧化还原辅助因子,可以刺激线粒体发生,保护线粒体免受自由基氧化损伤,提高能量利用率,调节基础能量代谢。关于PQQ对低氧条件下线粒体功能的影响还未见相关报道,因此,本研究主要探讨PQQ对模拟高原低氧条件下小鼠体作业能力的改善作用及其线粒体机制研究。目的探讨PQQ对急性高原低氧环境下小鼠运动能力的改善作用及其分子机制。方法1.不同低氧暴露时长对血液生化指标的影响。雄性昆明小鼠置于模拟海拔6000 m的低压氧舱中分别暴露12 h、7 d和28 d。采用全自动干式生化分析仪对小鼠血清中的葡萄糖（Glu）、甘油三酯（TG）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、α-羟丁酸脱氢酶（α-HBDH）、同型半胱氨酸（HCY）、乳酸脱氢酶（LDH）和CO2进行检测。2.PQQ对小鼠抗缺氧能力和急性低压低氧暴露小鼠运动能力的影响。雄性昆明小鼠灌胃给与不同剂量的PQQ（5、10 mg/kg.bid/d）和CoQ 10（20 mg/kg.qd/d）,灌胃给药7d。分别采用常压密闭缺氧实验和10000 m减压缺氧实验评价小鼠的常压缺氧耐受力和减压缺氧耐受力。采用模拟海拔4000 m的低氧负重游泳实验评价小鼠的运动能力。同时采用EKF便携式乳酸仪检测低氧游泳小鼠的血乳酸;采用生化试剂盒和生化分析仪检测肝糖原和血清超氧化物岐酶、血清丙二醛、血清尿素等指标变化。3.PQQ提高急性低压低氧暴露小鼠抗缺氧能力和运动能力的分子机制研究。雄性昆明小鼠灌胃给与不同剂量PQQ（5、10 mg/kg.bid/d）和CoQ 10（20 mg/kg.qd/d）,7 d后将暴露组小鼠放置于模拟海拔6000 m的低压氧舱中暴露12 h。利用实时荧光定量PCR检测心脏线粒体DNA相对拷贝数的变化,使用蛋白免疫印迹技术检测线粒体相关蛋白线粒体转录因子A（Tfam）、线粒体融合蛋白2（Mfn2）、视神经萎缩相关蛋白1（Opa1）、线粒体分裂蛋白1（Fis1）表达水平的变化。利用氧分压为1%的三气培养箱培养大鼠心肌细胞H9C2,同时给与不同浓度PQQ（5μmol/L、2 μmol/L、1 μmol/L、0.5 μmol/L、0.1μmol/L、0.01μmol/L）干预,分别培育12 h和24 h,用CCK8检测细胞活力,以确定PQQ的干预浓度。选取0.1 μmol/L和1 μmol/L浓度的PQQ分别干预12 h和24 h,采用荧光酶标仪检测细胞ROS水平;采用化学发光仪检测细胞ATP水平。结果1.与常氧对照组相比,12h和7d暴露组的GLU明显升高了（P<0.05）,而28 d暴露组的GLU显着降低（P<0.001）;12 h、7d和28 d暴露组的CO2显着降低（P<0.01）;12 h、7d和28 d暴露组的HCY和TG均显着升高（P<0.05）;12 h和7d暴露的CK、CK-MB、α-HBDH和LDH无显着变化,但28 d暴露组均显着升高了（P<0.05）。以上结果提示急性低氧与慢性低氧分子调控机制不同导致小鼠血清生化指标的变化也不相同。2.PQQ干预组显着提高小鼠常压密闭缺氧实验的存活时间（P<0.05）和10000 m急性减压缺氧的存活率,提示PQQ具有显着的抗缺氧效果。与低氧对照组相比,PQQ干预组的游泳力竭时间显着增加（P<0.05）,且上调肝糖原（P<0.05）和血清SOD水平（P<0.01）,下调血乳酸（P<0.05）、血尿素（P<0.05）和MDA水平。实验结果提示PQQ可提高急性低氧暴露小鼠的运动能力并降低氧化应激损伤。3.与常氧对照组相比,低氧对照组小鼠的心脏线粒体拷贝数、Tfam、Mfn2、Opa1蛋白的表达均下降,Fis1蛋白表达上升。与低氧对照组比,PQQ干预显着上调了线粒体拷贝数、Tfam、Mfn2、Opa1的表达,下调Fis1蛋白表达。低剂量的PQQ干预组H9C2细胞活力显着上升,但未显示出剂量依赖性。同时,0.1 μmol/L和1 μmol/LPQQ干预后,低氧培养的H9C2细胞的ATP水平明显上升,ROS水平明显下降。结果提示PQQ抗缺氧和运动能力的分子机制可能与其调控心脏线粒体生物发生、线粒体融合-分裂动态平衡、线粒体氧化应激和能量代谢相关。结论1.急性和慢性低压低氧暴露分子调控机制不同。2.PQQ具有提高急性高原低氧条件下抗缺氧能力和运动能力的效果,能够减缓低压低氧下的氧化应激损伤。3.PQQ提高急性高原低氧条件下抗缺氧能力和运动能力的分子机制,可能与其调控心脏线粒体的生物发生、线粒体融合-分裂动态平衡、线粒体氧化应激和能量代谢相关。
何纤[8]（2021）在《苦马豆素对小鼠抗缺氧及认知障碍的影响》文中进行了进一步梳理缺氧导致的机体损伤以及认知障碍等病理变化,对我国高原地区的国防军事、教育、经济与旅游的发展有着不可估量的破坏力,寻求安全有效且天然的本地治疗药物一直以来都备受关注。苦马豆素（Swainsonine,SW）在提高免疫力和减少氧化应激损伤等方面具有明显的药效作用。本论文以小鼠作为研究对象,采用索氏提取法对黄花棘豆中的SW提取条件进行优化,测定最终纯度;通过模拟小鼠缺氧实验对SW的抗缺氧耐力作用进行初步探讨;通过模拟动物缺氧模型造成的小鼠缺氧性损伤,对小鼠脑组织和心肌组织中的抗缺氧、抗氧化以及组织凋亡等相关生化指标进行检测,以进一步考察SW的抗缺氧损伤作用;对小鼠海马组织中的抗氧化应激、氧化损伤和乙酰胆碱等相关指标进行检测分析,初步考察SW对缺氧性认知障碍的作用。以期将SW作为新的天然抗缺氧药物与治疗缺氧性疾病药物开发利用,有利于高原本地植物资源的开发利用。本论文主要结果如下:1、黄花棘豆中SW的提取优化工艺研究中发现,黄花棘豆粉末与甲醇的料液比为1:12,连续提取48 h,得到纯度为90%的纯白色SW晶体物质。2、模拟小鼠抗缺氧耐受力研究中发现,SW 0.6 mg/kg组与空白对照组小鼠比较,其小鼠存活时间显着延长33.90%,缺氧性脑含水量和肺含水量均显着降低。3、小鼠抗缺氧机制研究中发现,与空白对照组和人参皂苷对照组小鼠脑和心肌组织中的指标比较,SW 0.3 mg/kg和0.6 mg/kg组的小鼠脑、心肌组织中LD、LDH水平和MDA、H2O2、Bax的含量均显着降低,SOD、GSH-PX和Bcl-2水平均显着升高。4、小鼠缺氧性认知障碍研究中,SW低、高剂量组小鼠海马组织中SOD活性和Ch AT活力均显着高于缺氧组,而MDA和Ach E含量均显着低于缺氧组。本论文主要结论如下:1、采用连续索氏提取法以及大孔吸附树脂优化的提取方法对SW进行提取,可提高SW的含量,优化纯度。2、小鼠常压密闭与亚硝酸中毒抗缺氧实验,综合缺氧性脑水肿与肺水肿含量的测定,说明SW具有很好的抗缺氧耐力作用。3、SW可能通过降低因缺氧导致的脂质过氧化、氧自由基和无糖酵解,保护脑组织与心肌组织,进而对缺氧机体组织具有一定的保护作用。4、SW可能是通过调节海马组织中氧化应激损伤水平以及乙酰胆碱含量,进而减轻因氧化应激损伤引发的学习记忆损伤,改善缺氧性认知障碍。
刘春杰[9]（2021）在《低氧环境下听觉习服相关Hippo/YAP信号通路的调控机制研究》文中认为研究背景随着我国西部地区经济的发展,因工作、学习、旅游等原因进入青藏高原地区的人群不断增多。然而人群从平原地区进入高原地区或从高海拔地区进入更高海拔地区,高原缺氧会对机体的血液系统、呼吸系统、循环系统、泌尿系统等产生一定的影响。我们前期工作发现大鼠移居高原第30天时,大鼠听力损伤最严重,听觉神经髓鞘化程度降低,结构不完整,随着大鼠暴露于高原低氧环境时间的延长,部分大鼠听力逐渐恢复,即大鼠听力经历损伤再修复的声习服过程,而大鼠听力未能随着暴露于高原低氧环境下时间延长恢复者,发展为听力减退,甚至是耳聋。移居高原大鼠受缺氧环境的影响会引起听觉神经髓鞘的损伤,雪旺细胞是一种星形胶质细胞,是形成听觉神经系统髓鞘的主要细胞。雪旺细胞形成髓鞘受多条通路和途径共同调控,其中Hippo信号通路是否参与调控低氧环境下听力损伤后雪旺细胞形成髓鞘的过程中尚不明确。Hippo信号通路参与调控多种细胞的增殖、分化等过程,YAP是Hippo通路的核心成分,当YAP转入细胞核中,促进雪旺细胞增殖,敲除YAP后,导致雪旺细胞分化减少,引起神经髓鞘化异常。由此可见,Hippo信号通路调控神经髓鞘的损伤再生和雪旺细胞的表型转换。但目前尚无Hippo信号通路调控低氧环境下听觉神经系统中雪旺细胞表型转换形成髓鞘的研究。研究目的利用平原移居高原大鼠模型,了解高原低氧环境对移居高原大鼠听觉系统的影响,探索Hippo/YAP信号通路是否参与调控低氧环境下听力损伤过程。研究方法将8周龄Wistar大鼠从成都（海拔500米）空运至西藏拉萨（海拔3658米）,以大鼠移居高原时间为分组标准,自大鼠到达高原第1天开始计算,到达高原第30天为高原组,同一批平原大鼠为对照组。高原组和平原对照组采用断头法处死大鼠后取听泡,解剖显微镜下取出耳蜗组织,提取RNA,行RNA-seq转录组测序。筛选高原组第30天和平原对照组中Hippo信号通路相关基因,并分析高原组第30天和平原对照组差异基因表达量情况。GO和KEGG分析听力损伤过程中的功能和通路。研究结果（1）Wistar大鼠从平原移居至高原第1天-第30天时间内,饮食饮水正常,活动正常,未出现自然死亡。随着大鼠移居高原时间的延长,体重明显增加,发育正常（P<0.05）。（2）高原组第30天和平原对照组GO分析结果:上调差异表达基因GO分析发现,其中生物过程（Biological process,BP）富集明显的为:肌肉收缩（muscle contraction）,心肌收缩（cardiac muscle contraction）,骨骼肌收缩（skeletal muscle contraction）;细胞组分（Cellular Component,CC）富集明显的为:肌原纤维（myofibril）,Z膜（Z disc）,蛋白质细胞外基质（proteinaceous extracellular matrix）;分子功能（Molecular Function,MF）富集明显的为:弹性蛋白结合（telethonin binding）,钙离子结合（calcium ion binding）,肌动蛋白丝结合（actin filament binding）。下调差异表达基因GO分析发现,其中生物过程（Biological process,BP）富集明显的为:化学突触传递（chemical synaptic transmission）,突触后膜的调节（regulation of postsynaptic membrane）,膜电位的调节（regulation of membrane potential）;细胞组分（Cellular Component,CC）富集明显的为:质膜的组成部分（integral component of plasma membrane）,突触后膜（postsynaptic membrane）,神经元投射（neuron projection）;分子功能（Molecular Function,MF）富集明显的为:递质门离子通道活性参与突触后膜电位的调节（transmitter-gated ion channel activity involved in regulation of postsynaptic membrane potential）,抑制性细胞外配体门控离子通道活性（inhibitory extracellular ligand-gated ion channel activity）,GABA-门控氯离子通道活性（GABA-gated chloride ion channel activity）。（3）KEGG分析发现高原组第30天与平原对照组比较:富集的通路有265条,其中Hippo信号通路富集到听力损伤过程中。（4）Hippo信号通路与听力损伤相关基因:高原组第30天与平原对照组比较,共筛选出13个Hippo信号通路中差异表达基因,其中上调的基因分别是:Bmp8a、Ctgf、Wnt1、Wnt10a、Wnt10b、Wnt5a;下调的基因分别是:Bmpr1b、Ccnd1、Crb1、Fzd10、Wnt7a、Wnt7b、Wnt9b。结论（1）大鼠自平原地区移居高原低氧环境,未出现自然死亡,生长发育正常。（2）Hippo信号通路参与调控高原组第30天低氧环境下大鼠听力损伤过程。
秦一冰[10]（2021）在《补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压临床及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:通过临床研究观察补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的有效性及安全性,利用网络药理学探索其治疗机制及主要通路,通过动物实验予以验证。材料与方法:1.补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的临床研究本研究采用前瞻性、随机、双盲、对照的研究方法,观察2019年6月—2020年08月就诊于辽宁中医药大学附属医院门诊及住院部的慢阻肺合并肺动脉高压（气虚血瘀证）的患者。纳入病例67人,随机分为治疗组和对照组,治疗组予补阳还五汤颗粒剂,对照组予形状、气味、外观与治疗组颗粒剂相同的补阳还五汤模拟颗粒剂,两组均根据患者实际病情联合氧疗、抗感染治疗、利尿剂、抗凝等治疗,疗程4周,第12周随访。设置肺功能和超声心动图作为筛选指标,肺功能、超声心动图、中医证候总积分、单项症状评分、慢阻肺CAT评分、6分钟步行试验、Borg量表、BODE指数评分、血气分析、NT-pro BNP、D-二聚体、纤维蛋白原为有效性观测指标,对补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的有效性进行评价,记录整个研究过程中出现的不良事件观察药物的安全性,对本研究患者的依从性和安全性进行评价。2.基于网络药理学探讨补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的机制通过TCMSP或BATMAN-TCM数据库获得补阳还五汤的活性成分及靶点,Gene Cards数据库获取慢阻肺和肺动脉高压的疾病靶点,提取交叉靶点作为慢阻肺合并肺动脉高压的疾病靶点,将药物靶点与疾病靶点进行映射,构建蛋白相互作用PPI网络,进行基因GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,筛选主要的通路。3.基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构的影响3.1实验一补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构干预作用的研究将大鼠随机分为空白组、模型组、中药组、西药组和中西医结合组,适应性喂养一周后将除空白组外的其余四组采用脂多糖、烟熏及低氧的方式造慢阻肺合并肺动脉高压大鼠模型,采用边造模边给药的方式进行实验。中药组予13.02g/（kg·d）补阳还五汤灌胃;西药组予12.6ug/（kg·d）贝前列素钠片灌胃;中西医结合组予13.02g/（kg·d）补阳还五汤+12.6ug/（kg·d）贝前列素钠片灌胃;三组均配置成2ml的药物溶液;正常组和模型组予等体积的生理盐水进行灌胃。造模、灌胃4w后,检测大鼠平均肺动脉压力（m PAP）、右心肥厚指数（RV/LV+S）、HE染色并观察肺血管管壁厚度/血管直径百分比（WT%）和血管壁面积/总血管面积百分比（WA%）,判断造模是否成功。制备组织标本后通过TUNEL法检测观察细胞凋亡情况,免疫组化法观察肺小动脉PI3K/Akt通路关键靶点的磷酸化表达。3.2实验二基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对PASMCs细胞增殖及凋亡的调控机制取出大鼠肺动脉,进行PASMCs的分离及培养,α-SMA抗体免疫荧光法对PASMCs进行鉴定,CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞技术检测细胞的凋亡率,western-blot法检测PI3K/Akt通路关键靶点的磷酸化表达及影响细胞增殖的m TOR、p27kip1和PCNA以及影响细胞凋亡相关的Bcl-2、Bax、Cyt c、Caspase-3、caspase-9。结果:1.补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的临床研究1.1两组患者治疗前后肺功能结果比较两组患者治疗前肺功能（FEV1占预计值%、FEV1/FVC）差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组与对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。1.2两组患者治疗前后超声心动图结果比较两组患者治疗前超声心动图各项结果无明显差异（P>0.05）,具有可比性;治疗后治疗组各项指标明显优于治疗前,且优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;对照组S、RVFAC与治疗前比较未见明显差异（P>0.05）,余各项指标明显优于治疗前,差异有统计学意义（P<0.05）。1.3两组患者治疗后中医证候疗效比较治疗后治疗组临床控制6例（20%）,显效12例（40%）,有效10例（33.33%）,无效2例（6.67%）;对照组临床控制2例（6.67%）,显效10例（33.33%）,有效12例（40%）,无效6例（20%）,治疗组治疗后中医证候疗效优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.4两组患者治疗前后中医证候总积分比较治疗前两组患者中医证候积分比较差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后两组均较治疗前有所改善,且同一时期治疗组优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组第12周时与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.5两组患者治疗前后单项症状积分比较治疗前两组患者在喘息、气短、咯痰、疲乏无力、胸闷或痛,痛有定处及面色暗淡等症状评分差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后两组患者各项评分均较治疗前明显改善,且同一时期治疗组各项评分优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;第12周时两组各症状评分与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.6两组患者治疗前后CAT评估量表比较两组患者治疗前CAT评分差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后两组患者各项评分均较治疗前明显改善,且同一时期治疗组各项评分优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;第12周时两组各症状评分与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.7两组患者治疗前后6分钟步行距离比较两组患者治疗前6分钟步行距离差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后两组均较治疗前有所改善,且同一时期治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组第12周与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.8两组患者治疗前后Borg量表比较两组患者治疗前Borg量表比较差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且同一时期治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组第12周与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.9两组患者治疗前后BODE指数比较两组患者治疗前BODE指数差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.10两组患者治疗前后血气分析比较两组患者治疗前血气分析（Pa O2、Pa CO2）差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.11两组患者治疗前后NT-pro BNP比较两组患者治疗前NT-pro BNP差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.12两组患者治疗前后D-二聚体比较两组患者治疗前D-二聚体差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.13两组患者治疗前后FIB比较两组患者治疗前FIB差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.14安全性指标对两组患者治疗前后血尿常规、肝肾功能以及心电图等进行监测,部分患者心电图出现右室大表现,个别指标呈现异常而无临床意义,未见明显异常。2.基于网络药理学探讨补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的机制研究应用网络药理学技术共获得96个有效化合物,对应的作用靶点共1140个,根据预设条件获得203个疾病靶点。GO富集分析得到具有显着意义的BP1416个、CC26个和MF68个。KEGG通路分析得到104个具有显着意义的通路。quercetin槲皮素、luteolin木犀草素、beta-caroteneβ胡萝卜素、kaempferol山奈酚和baicalein黄芩素等为主要成分,ALB、IL6、VEGFA、Akt1、IL1B等为主要靶点,AGE-RAGE、Relaxin、PI3K-Akt等为主要通路,分析后得出PI3K-Akt通路在本病中发挥着重要的作用。3.基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构的影响3.1实验一补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构干预作用的研究3.1.1气管注射LPS、烟熏联合低氧持续4w后模型组大鼠m PAP、右心肥厚指数、HE染色及肺小动脉血管重建指标WT%和WA%与正常组对比明显异常,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,成功造出COPD-PH的动物模型。3.1.2中药组、西药组和中西医结合组COPD-PH大鼠的一般生活状态明显优于对照组,m PAP、右心肥厚指数、HE染色及肺小动脉血管重建指标WT%和WA%水平较模型组明显改善,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,中药组与西药组无明显差异（P>0.05）,中西医结合组优于中药组与西药组,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。3.1.3肺小动脉TUNEL结果与空白对照组比较,模型组细胞凋亡数量显着减少,中药组、西药组及中西医结合组细胞凋亡数量明显升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组细胞凋亡数量增加,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,西药组细胞凋亡数无明显差异,差异无统计学意义（P>0.05）,中西医结合组细胞凋亡数增多,差异有统计学意义（P<0.01）;与西药组比较,中西医结合组细胞凋亡数显着增多,差异有统计学意义（P<0.01）。3.1.4免疫组化法检测肺小动脉PI3K/Akt通路相关指标与空白对照组比较,模型组、中药组、西药组及中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果上调,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,西药组p-PI3K和p-Akt表达无明显差异（P>0.05）,中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与西药组比较,中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2实验二基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤化裁方对PASMCs细胞增殖及凋亡的调控机制3.2.1免疫荧光法鉴定PASMCs结果细胞均呈α-SMA阳性绿色荧光,可见明显肌丝,呈与细胞平行的丝状梭形排列,大鼠肺动脉成功提取出PASMCs。3.2.2western-blot法检测各组PASMCs的p-PI3K、p-Akt的蛋白表达结果与空白对照组比较,模型组、中药组、西药组及中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果上调,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,西药组p-PI3K和p-Akt表达无明显差异（P>0.05）,中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与西药组比较,中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2.3CCK-8细胞增殖检测结果与空白对照组比较,模型组、中药组、西药组及中西医结合组细胞增殖活性明显增强,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组细胞增殖活性显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,西药组细胞增殖活性无明显差异,中西医结合组细胞增殖活性显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与西药组比较,中西医结合组细胞增殖活性显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2.4western-blot法检测各组PASMCs的p-m TOR、PCNA、p27kip1蛋白表达结果与空白对照组比较,模型组、中药组、西药组及中西医结合组p-m TOR、PCNA的表达显着上调,p27kip1的表达显着下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组p-m TOR、PCNA的表达显着下调,p27kip1的表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,中西医结合组p-m TOR、PCNA的表达显着下调,p27kip1的表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）,西药组p-m TOR、PCNA、p27kip1的表达与中药组无显着差异（P>0.05）;与西药组比较,中西医结合组p-m TOR、PCNA的表达显着下调,p27kip1的表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2.5流式细胞术检测细胞凋亡率结果与空白对照组比较,模型组细胞凋亡率降低,差异有差异有统计学意义（P<0.05）;中药组、西药组及中西医结合组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P<0.01）。与中药组比较,西药组细胞凋亡率无明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）,中西医结合组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P<0.01）。与西药组比较,中西医结合组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2.6western-blot法检测各组PASMCs的Bcl-2、Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3蛋白表达结果与空白对照组比较,模型组Bcl-2表达显着上调,中药组、西药组及中西医结合组Bcl-2表达显着下调,模型组Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3表达显着下调,中药组、西药组及中西医结合组Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组Bcl-2表达显着下调;Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。与中药组比较,西药组Bcl-2、Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3表达与中药组无明显差异（P>0.05）,中西医结合组Bcl-2显着下调,Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。与西药组比较,中西医结合组Bcl-2显着下调,Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:1.补阳还五汤能够改善气虚血瘀型COPD-PH患者喘促、气短等临床症状,改善低氧状态,改善心肺功能,增加运动耐力,同时改善生活质量,其机制可能与缓解缺氧、高碳酸血症和呼吸性酸中毒等导致的肺血管收缩痉挛,降低血液粘稠度、预防原位血栓形成等密切相关,临床安全性高。2.补阳还五汤中的槲皮素、木犀草素、山奈酚等有效成分,可以作用于ALB、IL6、VEGFA等靶点,通过调控AGE-RAGE、PI3K-Akt、TNF等信号通路,参与细胞凋亡、细胞增殖、炎症反应等多种生物过程达到治疗COPD-PH的作用。3.补阳还五汤能够调控PI3K/Akt信号通路起到抑制PASMCs增殖,促进PASMCs凋亡,抑制血管重构的作用,从而降低COPD-PH肺动脉压力的作用。
二、大鼠动力性肺动脉高压模型的建立及低压性缺氧对其影响的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、大鼠动力性肺动脉高压模型的建立及低压性缺氧对其影响的研究（论文提纲范文）
（1）医学地理视角下高海拔环境对机体肺损伤机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要符号表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 选题背景及意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 医学地理学研究现状 |
| 1.2.2 地理环境对健康的影响研究现状 |
| 1.2.2.1 气候对人体健康的影响 |
| 1.2.2.2 湿度对人体健康的影响 |
| 1.2.2.3 太阳辐射对人体健康的影响 |
| 1.2.2.4 气压对人体健康的影响 |
| 1.2.2.5 年降水量对人体健康的影响 |
| 1.2.3 高原低氧环境对健康的影响研究现状 |
| 1.2.3.1 HAPE临床症状的研究现状 |
| 1.2.3.2 HAPE的发病机制研究现状 |
| 1.2.3.3 HAPE的防治措施研究现状 |
| 1.3 国内外研究中存在问题 |
| 1.4 研究内容 |
| 1.5 技术路线图 |
| 1.6 研究目标及特色创新点 |
| 1.6.1 研究目标 |
| 1.6.2 研究特色创新点 |
| 第二章 研究区自然地理概况及各地理环境因子的相关性 |
| 2.1 青海省地理概况 |
| 2.1.1 气温 |
| 2.1.2 NDVI |
| 2.1.3 降水量 |
| 2.2 研究区环境因素的相关性 |
| 2.2.1 地理因素数据收集 |
| 2.2.2 数据统计与分析 |
| 2.2.3 结果 |
| 2.2.4 讨论 |
| 2.3 小结 |
| 第三章 不同海拔低氧对机体肺功能影响的差异 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.1.1 实验动物 |
| 3.1.1.2 实验试剂 |
| 3.1.1.3 实验仪器 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.2.1 动物分组 |
| 3.1.2.2 肺动脉压检测 |
| 3.1.2.3 腹主动脉血氧分压及血氧饱和度检测 |
| 3.1.2.4 肺组织含水量检测 |
| 3.1.2.5 HE染色 |
| 3.1.2.6 透射电镜 |
| 3.1.2.7 肺组织中氧化应激指标检测 |
| 3.1.2.8 数据统计与分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 不同海拔低氧胁迫大鼠生理指标的差异 |
| 3.2.2 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织含水量的差异 |
| 3.2.3 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织病理形态学差异 |
| 3.2.4 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织超微结构差异 |
| 3.2.5 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织中氧化应激因子的差异 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 大鼠肺损伤与地理环境因子相关性分析 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 动物分组 |
| 4.1.2 地理环境因子数据收集 |
| 4.1.3 数据统计与分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 腹主动脉氧分压与地理环境因子相关性分析 |
| 4.2.2 氧饱和度与地理环境因子相关性分析 |
| 4.2.3 肺动脉压与地理环境因子相关性分析 |
| 4.2.4 肺组织含水量与地理环境因子相关性分析 |
| 4.2.5 低氧胁迫SD大鼠各项生理指标相关性分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 不同海拔低氧胁迫导致肺损伤的分子机制 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.1.1 实验动物 |
| 5.1.1.2 实验试剂 |
| 5.1.1.3 实验仪器 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.1.2.1 动物分组和建模 |
| 5.1.2.2 组织总RNA提取 |
| 5.1.2.3 转录组测序 |
| 5.1.2.4 差异基因功能注释和分析 |
| 5.1.2.5 RT-PCR实验对差异基因准确性进行验证 |
| 5.1.2.6 蛋白免疫印迹法(Western Blot)对差异蛋白准确性进行验证 |
| 5.1.2.7 原位末端标记法(TUNEL)染色方法 |
| 5.1.2.8 数据统计与分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 肺损伤大鼠模型肺组织转录组测序数据 |
| 5.2.1.1 测序数据质量 |
| 5.2.1.2 差异基因筛选 |
| 5.2.1.3 差异基因GO功能注释 |
| 5.2.1.4 差异基因KEGG信号通路富集分析 |
| 5.2.2 关键通路关键节点基因的筛选及验证 |
| 5.2.3 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织p38 MAPK/NF-κB表达差异 |
| 5.2.4 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织炎症因子表达量的差异 |
| 5.2.5 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织内质网应激的差异 |
| 5.2.6 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织细胞凋亡的差异 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 维生素D_3对缺氧性肺损伤的预防效果 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 实验材料 |
| 6.1.1.1 实验动物 |
| 6.1.1.2 实验主要试剂 |
| 6.1.1.3 实验仪器 |
| 6.1.2 方法 |
| 6.1.2.1 构建Fdft 1沉默腺病毒载体 |
| 6.1.2.2 实验分组 |
| 6.1.2.3 肺动脉压检测 |
| 6.1.2.4 腹主动脉血氧分压及血氧饱和度检测 |
| 6.1.2.5 HE染色 |
| 6.1.2.6 透射电镜 |
| 6.1.2.7 免疫组化染色 |
| 6.1.2.8 RT-PCR方法 |
| 6.1.2.9 Western Blot方法 |
| 6.1.2.10 数据统计与分析 |
| 6.2 结果与分析 |
| 6.2.1 腺病毒sh-Fdft 1在H9C2细胞中的转染效率 |
| 6.2.2 Fdft 1在大鼠体内表达水平检测 |
| 6.2.3 Fdft 1和VD_3对低氧胁迫大鼠肺动脉压、血氧饱和度、血氧分压的影响 |
| 6.2.4 Fdft 1和VD_3对低氧胁迫大鼠肺组织含水量的影响 |
| 6.2.5 Fdft 1和VD_3对低氧胁迫大鼠肺组织病理形态的影响 |
| 6.2.6 Fdft 1和VD_3对低氧胁迫大鼠肺组织超微结构变化的影响 |
| 6.2.7 Fdft 1和VD_3对低氧胁迫后大鼠肺组织PCNA蛋白表达的影响 |
| 6.2.8 Fdft 1和VD_3对高原低氧胁迫大鼠肺组织中凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 结论与展望 |
| 7.1 主要结论 |
| 7.2 对进入高原人群的防护建议 |
| 7.3 展望与不足 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间科研成果 |
（2）肥大细胞在高原肺水肿相关肺动脉压增高过程中的作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要符号对照表 |
| 引言 |
| 第一部分 肺肥大细胞活化脱颗粒在急性低氧性肺动脉压增高过程中的作用 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物饲养 |
| 2.1.2 实验动物分组 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.1.5 手术器械 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 常压低氧实验动物造模方法 |
| 2.2.2 SD大鼠肺PAP、Psa指标监测方法 |
| 2.2.3 统计学处理 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 SCG预处理后在不同氧浓度、不同时间下PAP的变化结果 |
| 3.2 SCG预处理后在不同氧浓度、不同时间下Psa的变化结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第二部分 不同急性低压低氧条件下SD大鼠肺肥大细胞的变化趋势的研究 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物饲养 |
| 2.1.2 实验动物分组 |
| 2.1.3 实验试剂和耗材 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 急性低压低氧大鼠模型的制备 |
| 2.2.1 大鼠肺组织取材 |
| 2.2.3 肺组织HE染色 |
| 2.2.4 肺组织TB染色 |
| 2.2.5 肺组织IHC实验 |
| 2.2.6 统计方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 肺组织HE染色结果 |
| 3.2 肺组织TB染色结果 |
| 3.3 肺组织IHC实验结果 |
| 3.3.1 肺组织Tryptase IHC实验结果 |
| 3.3.2 肺组织Chymase IHC实验结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第三部分 肺肥大细胞活化脱颗粒在高原肺水肿相关肺动脉压增高过程中的作用机制研究 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物饲养 |
| 2.1.2 实验动物分组 |
| 2.1.3 实验试剂和耗材 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 急性低压低氧大鼠模型制备 |
| 2.2.2 大鼠肺组织取材 |
| 2.2.3 肺组织TB染色 |
| 2.2.4 肺组织TEM实验 |
| 2.2.5 肺组织WB实验 |
| 2.2.6 肺组织IF实验 |
| 2.2.7 肺组织ELISA实验 |
| 2.2.8 统计方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 肺组织TB染色结果 |
| 3.2 肺组织TEM实验结果 |
| 3.3 肺组织WB实验结果 |
| 3.4 肺组织IF实验结果 |
| 3.5 肺组织ELISA实验结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第四部分 SCG对低氧应激下RHL-2H3 细胞影响的研究 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 细胞株和细胞分组 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 细胞分组 |
| 2.1.3 实验试剂和耗材 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 收集细胞上清和细胞 |
| 2.2.3 RBL-2H3 细胞WB实验 |
| 2.2.4 RBL-2H3 细胞上清ELISA实验 |
| 2.2.5 统计方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 RBL-2H3 细胞低氧培养时间的摸索结果 |
| 3.2 SCG低氧培养RBL-2H3 细胞的浓度选择结果 |
| 3.3 低氧培养的RBL-2H3 细胞活化脱颗粒情况结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第五部分 低氧培养的RBL-2H3 细胞上清液代谢组学研究 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 细胞株和分组 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 RBL-2H3 细胞分组 |
| 2.2 细胞培养条件 |
| 2.3 细胞上清液的收集 |
| 2.4 实验试剂与耗材 |
| 2.5 实验仪器 |
| 第三章 分析方法 |
| 3.1 色谱条件和质谱条件 |
| 3.2 数据处理 |
| 第四章 实验结果 |
| 4.1 实验质量的监控 |
| 4.1.1 QC样本UHPLC-Q-TOF MS总离子流色谱图(TIC)的比较 |
| 4.1.2 PCA分析 |
| 4.1.3 QC样本相关性图谱 |
| 4.2 数据分析和结果 |
| 4.2.1 数据预处理 |
| 4.2.2 PCA分析 |
| 4.2.3 PLS-DA分析 |
| 4.2.4 OPLS-DA分析 |
| 4.2.5 单变量统计分析 |
| 4.2.6 显着性差异代谢产物分析 |
| 4.3 差异代谢产物分析 |
| 4.3.1 差异代谢物聚类分析 |
| 4.3.2 差异代谢物相关性分析 |
| 4.3.3 差异代谢物功能通路分析 |
| 第五章 讨论 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 肥大细胞脱颗粒与肺动脉高压形成 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（3）急性高原病心血管响应特征及其预警作用的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 急性高原病的流行病学特征 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 研究对象及方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 小结 |
| 第三章 高原左心室响应特征及其对AMS的识别价值 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 研究对象及方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 小结 |
| 第四章 平原人群心脏功能指标在AMS预警中的作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 研究对象及方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 小结 |
| 全文结论 |
| 本研究的局限性 |
| 参考文献 |
| 文献综述(一) 揭示高原心血管响应机制,助力高原地区健康事业发展 |
| 参考文献 |
| 文献综述(二) 超声心动图技术对左室收缩功能的评估 |
| 参考文献 |
| 附录:第三军医大学第二附属医院医学伦理委员会批件 |
| 学习期间撰写及发表的论文 |
| 致谢 |
（4）“井穴”放血预处理对大鼠急性高原肺损伤AngⅡ、ACE、ET-1的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 立题依据 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 RAS与 HAPE |
| 1.2.2 ET与HAPE |
| 1.2.3 ET-1、AngⅡ、ACE之间相互调节机制 |
| 1.2.4 刺络放血相关论述 |
| 1.2.5 手十二井穴的临床应用 |
| 1.2.6 肺与脑的关系 |
| 第二章 正文 |
| 2.1 研究目标与研究内容 |
| 2.1.1 研究目标 |
| 2.1.2 研究内容 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 研究方法 |
| 2.2.3 技术路线 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 大鼠W/D、AngⅡ、ET-1 的比对 |
| 3.1.1 空白与模型各组肺组织W/D对比 |
| 3.1.2 空白与模型各组AngⅡ含量的比较 |
| 3.1.3 空白与模型各组ET-1 含量的比较 |
| 3.2 肺组织显微结构变化 |
| 3.3 井穴放血对AngⅡ含量变化的影响 |
| 3.3.1 井穴放血对肺组织AngⅡ含量的变化 |
| 3.3.2 井穴放血对血浆AngⅡ含量的变化 |
| 3.4 井穴放血对组织ET-1 含量变化的影响 |
| 3.5 井穴放血对ACE m RNA表达的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第六章 创新点 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 作者在读期间科研成果 |
| 致谢 |
（5）“井穴”放血预处理对西宁地区急性低氧大鼠肺损伤AQP-1、AQP-5的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 立题依据 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 第二章 |
| 2.1 研究目标与研究内容 |
| 2.1.1 研究目标 |
| 2.1.2 研究内容 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 研究方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 肺组织形态学观察 |
| 3.2 各组大鼠动脉血气分析对比 |
| 3.3 各组大鼠肺组织湿干重比对比 |
| 3.4 肺组织TNF-α含量 |
| 3.5 肺组织AQP-1、AQP-5mRNA表达 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 创新点 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 作者在读期间科研成果简介 |
| 致谢 |
| 附录 |
（6）回输正常小鼠针刺后血清外泌体（Acu-exo）对缺氧小鼠生存时间的作用规律及机制的初步探索（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 研究内容一 电针足三里预处理对缺氧小鼠生存时间的观察研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 研究内容二 Acu-exo对缺氧小鼠生存时间作用规律的观察研究 |
| 实验1 正常小鼠电针足三里穴不同天数后Acu-exo的提取与鉴定 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验2 注射溶剂PBS、DMSO对缺氧小鼠生存时间的观察研究 |
| 1.实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验3 回输Acu-exo对缺氧小鼠生存时间的观察研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验4 拮抗循环外泌体对缺氧小鼠生存时间的观察研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 研究内容三 Acu-exo提高缺氧生存时间作用机制的复杂网络分析 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 外泌体在针刺信息传递中的作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）吡咯喹啉醌（PQQ）对急性高原暴露小鼠运动能力的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 不同低压低氧暴露时长对血液生化指标的影响 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.2.1 材料 |
| 1.2.2 方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 不同低氧时长对小鼠糖脂生化指标的影响 |
| 1.3.2 不同低氧时长对小鼠心肌功能生化指标的影响 |
| 1.3.3 不同低氧时长对小鼠血清HCY含量的影响 |
| 1.3.4 不同低氧时长对小鼠血清CO_2含量的影响 |
| 1.4 讨论 |
| 第二章 PQQ对急性低压低氧暴露小鼠抗缺氧能力和运动能力的影响 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 阳性药物的筛选 |
| 2.3.2 PQQ对常压密闭缺氧小鼠生存时间的影响 |
| 2.3.3 PQQ对10000 m减压缺氧小鼠生存率的影响 |
| 2.3.4 PQQ对模拟4000 m低氧游泳小鼠力竭时间的影响 |
| 2.3.5 PQQ对模拟4000 m低氧游泳小鼠代谢废物和肝糖原的影响 |
| 2.3.6 PQQ对模拟4000 m低氧游泳小鼠氧化应激指标的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 PQQ提高急性低压低氧暴露小鼠抗缺氧能力和运动能力的机制研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 心脏线粒体拷贝数的检测 |
| 3.3.2 线粒体生物发生相关蛋白Tfam表达的变化 |
| 3.3.3 线粒体融合裂变相关蛋白表达的变化 |
| 3.3.4 PQQ对低氧暴露H9C2 细胞细胞活力的影响 |
| 3.3.5 PQQ对低氧暴露H9C2 细胞内ROS水平的影响 |
| 3.3.6 PQQ对低氧暴露H9C2 细胞内ATP水平的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 A 低氧对线粒体功能及其代谢调控的研究进展 |
| 参考文献 |
| 作者在学期间取得的学术成果 |
| 主要简历 |
| 致谢 |
（8）苦马豆素对小鼠抗缺氧及认知障碍的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 前言 |
| 1.1 缺氧的研究进展 |
| 1.1.1 缺氧类型及假说 |
| 1.1.2 缺氧对机体产生的影响 |
| 1.1.3 缺氧与认知障碍的关系 |
| 1.1.4 抗缺氧研究的一般方法 |
| 1.2 苦马豆素(SW)的研究进展 |
| 1.2.1 植物次生代谢产物SW的生理生态学特征 |
| 1.2.2 苦马豆素的理化性质 |
| 1.2.3 苦马豆素的生化性质 |
| 1.2.4 苦马豆素的来源 |
| 1.2.5 苦马豆素的提取与分离 |
| 1.2.6 苦马豆素的检测方法 |
| 1.2.7 苦马豆素致病机理及致毒特性 |
| 1.2.8 苦马豆素的药理作用 |
| 1.3 研究内容 |
| 1.4 研究目的及意义 |
| 1.5 技术路线 |
| 第2章 黄花棘豆中苦马豆素提取工艺研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 SW的提取制备 |
| 2.1.3 提取物的纯化 |
| 2.1.4 重结晶与升华 |
| 2.1.5 缓冲液的配制 |
| 2.1.6 标准曲线绘制 |
| 2.1.7 正交试验设计 |
| 2.1.8 高效液相色谱(HPLC)测定 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 高效液相色谱波长检测 |
| 2.2.2 SW的标准曲线 |
| 2.2.3 SW的提取纯化 |
| 2.2.4 黄花棘豆晶体物质中SW含量的测定 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 苦马豆素对小鼠抗缺氧活性研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 实验动物 |
| 3.1.3 SW溶液配制 |
| 3.1.4 动物分组与处理 |
| 3.1.5 常压密闭缺氧实验 |
| 3.1.6 亚硝酸中毒实验 |
| 3.1.7 脑水肿测定 |
| 3.1.8 肺水肿测定 |
| 3.1.9 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 SW对缺氧小鼠一般情况的影响 |
| 3.2.2 SW对常压密闭抗缺氧小鼠存活时间及死亡率的影响 |
| 3.2.3 SW对亚硝酸中毒缺氧小鼠存活时间及死亡率的影响 |
| 3.2.4 SW对小鼠脑含水量、肺含水量的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 苦马豆素对小鼠抗缺氧机制研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 实验动物 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 SW溶液配制 |
| 4.2.2 动物分组及造模 |
| 4.2.3 缺氧模型 |
| 4.2.4 小鼠血清标本采集 |
| 4.2.5 小鼠组织匀浆液的制备及蛋白浓度测定 |
| 4.2.6 小鼠血清、脑组织和心肌组织中NOS浓度的测定 |
| 4.2.7 小鼠心肌组织与脑组织中抗氧化酶指标GSH-Px、SOD的检测 |
| 4.2.8 小鼠心肌组织与脑组织中糖酵解指标LD、LDH的检测 |
| 4.2.9 小鼠心肌组织与脑组织中脂质过氧化指标MDA、H_2O_2的检测 |
| 4.2.10 小鼠心肌组织与脑组织中凋亡蛋白Bcl-2、Bax的检测 |
| 4.2.11 统计分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 缺氧小鼠血浆、脑组织和心肌组织中NOS活力的变化 |
| 4.3.2 缺氧性小鼠脑组织和心肌组织中GSH-Px、SOD活力的变化 |
| 4.3.3 缺氧性小鼠脑组织和心肌组织中LD、LDH活力的变化 |
| 4.3.4 缺氧性小鼠脑组织和心肌组织中MDA、H_2O_2水平的变化 |
| 4.3.5 缺氧性小鼠脑组织和心肌组织中Bcl-2、Bax水平的变化 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 苦马豆素对小鼠缺氧性认知功能障碍的影响 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 主要试剂 |
| 5.1.2 实验动物 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 动物分组 |
| 5.2.2 动物模型复制 |
| 5.2.3 海马组织取材 |
| 5.2.4 海马组织中蛋白浓度的测定 |
| 5.2.5 海马组织SOD、MDA含量测定 |
| 5.2.6 海马组织AchE、ChAT活力测定 |
| 5.2.7 统计分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 SW对缺氧小鼠海马组织中SOD、MDA含量的影响 |
| 5.3.2 SW对缺氧小鼠海马组织中AchE、ChAT活力的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 研究结论 |
| 6.2 研究展望 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 在校期间取得的学术成果 |
| 缩略词表 |
（9）低氧环境下听觉习服相关Hippo/YAP信号通路的调控机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表(Abbreviation) |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 背景 |
| 第一节 高原环境对人群健康的影响 |
| 第二节 雪旺细胞与外周神经髓鞘 |
| 第二章 Hippo/YAP信号通路与低氧环境下大鼠耳蜗组织的转录组分析 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 全文总结 |
| 1.本研究发现 |
| 2.本研究的局限性 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
（10）补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压临床及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的临床研究 |
| 资料与方法 |
| 研究结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 基于网络药理学探讨补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 研究结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构的影响 |
| 实验一 补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构干预作用的研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验二 基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对PASMCs细胞增殖及凋亡的调控机制 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 中医药治疗慢阻肺合并肺动脉高压研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
四、大鼠动力性肺动脉高压模型的建立及低压性缺氧对其影响的研究（论文参考文献）
- [1]医学地理视角下高海拔环境对机体肺损伤机制的研究[D]. 蒲小燕. 青海师范大学, 2021
- [2]肥大细胞在高原肺水肿相关肺动脉压增高过程中的作用研究[D]. 刘杰. 青海大学, 2021
- [3]急性高原病心血管响应特征及其预警作用的研究[D]. 柯景彬. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021
- [4]“井穴”放血预处理对大鼠急性高原肺损伤AngⅡ、ACE、ET-1的影响[D]. 麻海英. 青海大学, 2021(01)
- [5]“井穴”放血预处理对西宁地区急性低氧大鼠肺损伤AQP-1、AQP-5的影响[D]. 沈慧萍. 青海大学, 2021(01)
- [6]回输正常小鼠针刺后血清外泌体（Acu-exo）对缺氧小鼠生存时间的作用规律及机制的初步探索[D]. 单凯. 天津中医药大学, 2021
- [7]吡咯喹啉醌（PQQ）对急性高原暴露小鼠运动能力的作用及其机制研究[D]. 杨嵘. 军事科学院, 2021
- [8]苦马豆素对小鼠抗缺氧及认知障碍的影响[D]. 何纤. 吉首大学, 2021
- [9]低氧环境下听觉习服相关Hippo/YAP信号通路的调控机制研究[D]. 刘春杰. 西藏大学, 2021(12)
- [10]补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压临床及机制研究[D]. 秦一冰. 辽宁中医药大学, 2021