一、无蛋白质医用手套问世（论文文献综述）
王素华[1]（2016）在《稀土氧化钕致大鼠肺损伤作用机制的实验研究》文中研究表明研究目的稀土元素及其化合物由于具有独特的理化性质,在多个领域已得到广泛应用。与此同时,稀土的广泛应用也使稀土元素不可避免地带来相应的毒理学问题。稀土氧化钕（Nb2O3）为轻稀土氧化物,在工业上用途广泛,上世纪八十年代以后,以金属钕为原料的新一代磁性材料钕铁硼问世,并在诸多领域得到应用,金属钕需求剧增。随着金属钕应用市场的不断扩大,其生产规模发展迅速。作为生产金属钕的原料氧化钕的用量也必将随之增加,接触氧化钕的职业人群也将增多。大量的职业人员接触外源性化学物稀土氧化钕粉尘,对接触者究竟会造成什么样的健康损害特别是对呼吸系统的损伤程度及机制目前还不太清楚。因此,为探究稀土氧化钕的肺损伤作用及机制,为接触人群的安全暴露和作业场所职业接触限值的制定提供科学依据,以保障劳动者在工作过程中的安全与健康,推动我国经济发展和社会文明程度,我们进行了本实验研究。研究方法1.将SD大鼠按体重随机分为氧化钕染尘组（100mg/kg）和对照组,采用非暴露式气管内灌注法一次性进行染毒。分别在染毒后的第3d、7d、14d、 21d、28d五个时间点处死大鼠。2.收集大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）,分析BALF中细胞成分,测定BALF中总蛋白含量,采用酶联免疫法（ELISA法）测定BALF中MCP-1、MIP-1α、 ICAM-1、IL-1β、TNF-α、IL-6的含量。3.收集大鼠肺组织标本,取部分标本采用HE染色法,染色后通过普通光镜下观察肺组织病理学改变；同时取部分标本进行天狼猩红染色,染色后用Nikon Eclipse E800偏振光显微镜及Image-Pro Plus Version 4.5 forwindowsTM图象分析系统分析大鼠肺组织中胶原纤维变化情况。4.提取大鼠肺组织蛋白,采用Western blotting法及非放射性凝胶迁移实验EMSA （Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA）法测定大鼠肺组织中NF-KBp65、p-NFκBp65、p-IKK beta及NF-κB的表达。5.培养NR8383细胞,采用MTT法测定稀土氧化钕对细胞的毒性作用；采用透射电镜法及流式细胞法观察细胞超微结构变化及凋亡情况；采用酶联免疫法（ELISA法）测定细胞培养液上清中MCP-1、MIP-1α、TGF-β1、IL-1β、TNF-α、IL-8的含量。6.提取染毒后细胞蛋白,Western blotting法测定细胞中P-NFκB P65、p-IκKβ和Caspase-3的表达研究结果1.实验大鼠体重及肺脏器系数变化大鼠染毒后第3、7、14、21和28d体重均低于对照组大鼠体重,差异有统计学意义（P<0.05）,而大鼠肺脏器系数均高于对照组（P<0.05）,提示可能是氧化钕粉尘致大鼠肺组织发生炎症反应致充血、水肿或组织增生。2.染尘大鼠肺组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原面积百分比变化情况与对照组比较,染尘组大鼠各观察点肺组织Ⅰ型胶原面积百分比均有不同程度的增加,第7天、第14天、第21天和第28天时差异具有统计学意义（P<0.05）。随着染尘时间的延长,Ⅰ型胶原面积百分比逐渐增加。第28d时,Ⅰ型胶原面积百分比增加了1倍。与对照组比较,染尘组大鼠各观察时间点肺组织Ⅲ型胶原面积百分比均呈现出不同程度的增加,除了第3d外,其它各组与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）。随着染尘时间的延长,大鼠肺组织中Ⅲ型胶原面积百分比呈现增加的趋势（P<0.05）。3.染尘大鼠BALF中细胞因子水平的测定与对照组相比,氧化钕染尘组大鼠BALF中IL-1和TNF-α的表达水平显着增加（P<0.05）,染尘组大鼠BALF中IL-6表达水平增加,差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组相比,氧化钕染尘组大鼠BALF中炎症趋化因子（MCP-1, MIP-1α和ICAM-1）的表达水平呈增高趋势。MCP-1和MIP-1α仅在第28天时表达水平显着增加（P<0.05）。4.染尘组大鼠NF-κB相关蛋白表达情况氧化钕染尘组,大鼠肺组织内P-NF-κB P65蛋白表达量的增加,而大鼠肺组织内NF-κB P65总蛋白水平并没有发生变化；在染尘第14天,大鼠肺组织内p-IKKβ及P-NF-κB P65的表达水平达到高峰,到第28天呈现下降趋势。对照组中大鼠肺组织内P-NF-κB P65, NF-κB P65和p-IKKβ的表达未观察到变化。氧化钕染尘组,大鼠肺组织NF-κB P50/P65的核转位被诱导,与蛋白印迹法测定的结果相一致。更重要的是,大鼠肺组织内NF-κB P50/P65的迁移在第3天增加,第14天达高峰,在第21天开始下降。5.稀土氧化钕颗粒物对NR8383细胞的毒性作用NR8383细胞经稀土氧化钕颗粒物混悬液处理12h、24h、48h后,1.56、3.125、6.25μg/mL染毒组在各时间点的细胞抑制率与对照组相比,差异均无统计学意义（p>0.05）；随着稀土氧化钕颗粒物浓度的增加,细胞抑制率呈现上升趋势（R2值分别为0.959、0.948、0.943）；在染毒浓度为50、100、200μg/mL时,不同染毒时间点的细胞抑制率差异均有统计学意义（F=9.54, P<0.05; F=17.596, P<0.05; F=9.332, P<0.05）;稀土氧化钕颗粒物作用于NR8383细胞,细胞毒性呈现剂量-效应关系和时间-效应关系。6.不同浓度稀土氧化钕颗粒物暴露对NR8383细胞凋亡的影响NR8383细胞经不同浓度稀土氧化钕颗粒物混悬液处理24h后,各染毒组早期凋亡细胞百分比呈现不同程度的增加,6.25、12.5μg/mL染毒组早期凋亡细胞百分比与对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）,12.5μg/mL染毒组早期凋亡细胞百分比是对照组的7.2倍。在/mL浓度范围内,随着染毒浓度的增加,晚期凋亡细胞百分比（1.8%、2.4%、2.6%、3.8%、4.1%）逐渐增加,12.5、25、50μg/mL染毒组晚期凋亡细胞百分比与对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。至50μg/mL时,凋亡细胞百分比开始下降。7.不同浓度稀土氧化钕颗粒物刺激对NR8383细胞上清中IL-1β、TNF-α、IL-8、 MCP-1、MIP-1α、TGF-β1分泌的影响稀土氧化钕颗粒物刺激NR8383细胞24h后,染毒组NR8383细胞分泌IL-1β、TNF-α、IL-8、MCP-1、MIP-1α及TGF-β1的含量均高于阴性对照组,差异有统计学意义（p<0.05）,且染毒组细胞分泌IL-1β、TNF-α、IL-8、MCP-1、MIP-1α及TGF-β1的含量随着染毒剂量的增加呈现增高趋势（R2值分别为0.986、0.923、0.922、0.990、0.985、0.984）,不同染毒组之间两两比较差异有统计学意义（p<0.05）。8.细胞毒性与细胞因子之间的相关性分析稀土氧化钕颗粒物刺激NR8383细胞24h后,细胞抑制率与上清中TNF-α、 IL-1β、IL-8、MCP-1、MIP-1α及TGF-β1的含量均呈正相关（P<0.01）；且TGF-β1、MIP-1α MCP-1、TNF-α、L-1β及IL-8的含量与细胞抑制率之间的相关系数分别0.912、0.932、0.933、0.935、0.943、0.962。9.NR8383细胞中Caspase-3、p-NF-κB p65和p-IκKβ的表达NR8383细胞给予稀土氧化钕颗粒物刺激24h后,各染毒组细胞表达p-NFκBp65、p-IκKβ的量均高于对照组,且浓度为12.5、25、50ug/mL时差异具有统计学意义（P<0.05）；各染毒组细胞Caspase-3的表达量均高于对照组,差异均具有统计学意义（P<0.05）。10.细胞因子与NF-κB相关蛋白之间的相关性分析稀土氧化钕颗粒物刺激NR8383细胞24h后, NF-κB相关蛋白（p-κF-κBP65、 p-IKKβ）与上清中’TNF-α、IL-1β、IL-8、MCP-1、MIP-1α及TGF-β1的含量均呈正相关；IL-1β、IL-8、TNF-α、MCP-1、MIP-1α及TGF-β1的含量与P-NF-κBP65之间的相关系数分别为0.484、0.359、0.539、0.527、0.535、0.598；；IL-1β、IL-8、TNF-α、MCP-κ MIP-1α及TGF-β1的含量与p-IKKβ之间的相关系数分别为0.326、0.299、0.406、0.397、0.407、0.391。11.细胞因子与Caspase-3之间的相关性分析稀土氧化钕颗粒物刺激NR8383细胞24h后,Caspase-3与上清中TNF-α、 IL-1β、IL-8、MCP-1、MIP-1α及TGF-β1的含量均呈正相关,IL-1β、IL-8、 TNF-α、MCP-1、MIP-1α及TGF-β1的含量与Caspase-3之间的相关系数分别为0.177、0.121、0.300、0.258、0.300、0.277。结论（1）稀土Nd203颗粒物通过非气管暴露的方式进入大鼠肺组织,可致大鼠发生急性肺组织损伤,早期表现以炎性损伤为主,晚期可形成纤维细胞性结卫。（2）在稀土氧化钕颗粒物致大鼠急性肺损伤过程中,促炎和抗炎细胞因子以及蛋白表达显着增加,NF-κB由细胞浆向细胞核转移并活化,NF-κB炎性通路被激活,说明NFκkB在稀土氧化钕颗粒物导致肺损伤过程中具有重要作用。（3）培养液上清中的炎性细胞因子及趋化因子的含量显着升高,肺泡巨噬细胞的p-NF-κBP65、p-IKKβ蛋白表达显着升高,NF-κB信号通路激活。（4）肺泡巨噬细胞的凋亡程度随着炎性细胞因子和趋化因子及Caspase-3表达水平的升高而升高,炎性细胞因子与Caspase-3呈正相关,TNF-a/TNFR /NF-κB信号通路对肺泡巨噬细胞的凋亡可能具有促进作用。（5）细胞分泌的炎性细胞因子水平、p-NF-κBP65、p-IKKβ蛋白的表达水平、肺泡巨噬细胞的凋亡水平以及其相互作用关系,说明NF-κB信号通路激活、肺泡巨噬细胞凋亡启动是稀土氧化钕颗粒物致肺损伤的重要机制。
沈国强[2]（2014）在《华蟾素抑制TGF-β1诱导的人结肠癌SW480细胞上皮-间质化的实验研究》文中指出目的：1、研究中成药华蟾素注射液是否能够影响TGF-β1诱导的人结肠癌SW480细胞的上皮-间质化过程。2、研究华蟾素对TGF-β1诱导的人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭与迁移能力的影响。方法：1、将体外培养的人结肠癌SW480细胞分为：空白对照组； TGF-β1单独诱导组，TGF-β1剂量为10ng/ml；不同剂量华蟾素干预组（分别选择2.5、5、10、20、40、80mg/ml剂量华蟾素与TGF-β1共培养），且TGF-β1剂量均为10ng/ml。体外培养48小时。2、利用倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化。3、CCK8检测各组细胞增殖情况。4、Transwell小室实验检测空白对照组、TGF-β1单独诱导组和2.5、5mg/ml剂量华蟾素干预组的细胞侵袭与迁移能力变化。5、QRT-PCR和Western blot分别检测空白对照组、TGF-β1单独诱导组和2.5、5mg/ml剂量华蟾素干预组细胞E-钙粘蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）的mRNA及蛋白水平。结果：1、倒置相差显微镜观察结果表明，与空白对照组相比，TGF-β1单独诱导组、2.5mg/ml剂量华蟾素干预组SW480细胞呈现典型的间质化表型，5、10、20、40、80mg/ml剂量华蟾素干预组细胞均显示出典型的上皮表型。2、CCK8结果显示，与空白对照组相比，TGF-β1单独诱导组SW480细胞增殖活力未发生明显变化（P>0.05），与TGF-β1单独诱导组比较，2.5、5mg/ml剂量华蟾素干预组细胞增殖活力未发生明显变化（P>0.05），10、20、40、80mg/ml剂量华蟾素干预组细胞增殖活力均受到显着抑制（P<0.05）。3、Transwell小室实验结果表明，与空白对照组相比较，TGF-β1单独诱导组侵袭及迁移能力均明显增强（P<0.01），与TGF-β1单独诱导组比较，2.5、5mg/ml剂量华蟾素干预组侵袭和迁移能力均明显减弱（P<0.01）。4、QRT-PCR检测结果显示，与空白对照组比较，TGF-β1单独诱导组E-cadherin表达明显减弱（P<0.01），Vimentin表达水平明显增强（P<0.01）；与TGF-β1单独诱导组比较，2.5mg/ml、5mg/ml剂量华蟾素干预组E-cadherin表达显着增强（P<0.05），Vimentin表达水平显着降低（P<0.05）。5、Western blot检测结果表明，空白对照组、TGF-β1单独诱导组和2.5、5mg/ml剂量华蟾素干预组E-cadherin、Vimentin灰度值分别为（0.9427±0.0254、0.4098±0.0679）、（0.3629±0.0303、0.7612±0.0472）、（0.50831±0.0165、0.6304±0.0114）、（0.7194±0.0804、0.5365±0.0199），TGF-β1单独诱导组E-cadherin表达最低，而Vimentin表达最高，与空白对照组相比，TGF-β1单独诱导组E-cadherin表达显着减弱（P<0.05），Vimentin表达水平明显增强（P<0.05），2.5、5mg/ml华蟾素干预组E-cadherin表达较TGF-β1单独诱导组明显增强（P<0.05），而Vimentin表达显着降低（P<0.05）。结论：1、 TGF-β1可诱导人结肠癌SW480细胞发生EMT并增强细胞的侵袭及迁移能力。2、华蟾素对TGF-β1诱导的人结肠癌SW480细胞的EMT有抑制作用。3、华蟾素能够抑制TGF-β1诱导的人结肠癌SW480细胞的增殖活力，并降低其侵袭与迁移能力。
刘海涛[3]（2014）在《瑞京乳胶制品公司发展战略研究》文中研究表明瑞京乳胶制品公司虽然近些年取得了快速的发展,但是随着外部环境日益复杂以及市场竞争日趋激烈,其所面临的经营形势十分严峻。在这种背景下,研究并制定瑞京乳胶制品公司的科学的企业发展战略并用其指导公司的经营发展已成为企业长期全面、协调、可持续发展的重要内容,具有指导性的意义。本文主要研究瑞京乳胶制品公司的发展战略问题。首先,在回顾相关理论的基础上,本文应用PEST分析方法分析了瑞京乳胶制品公司公司所处的外部宏观环境,继而应用波特五力竞争模型分析了其所处的行业环境,结果表明瑞京乳胶制品公司在利用机会与回避威胁方面与行业的平均水平相当。其次,本文从企业价值链、资源条件以及企业能力的角度研究了瑞京乳胶制品公司的内部环境,结论是其内部优势因素比劣势因素多且重要。再次,在外部环境分析和内部环境分析的基础上,本文制定了瑞京乳胶制品公司的总体战略目标,并且应用SWOT矩阵分析方法和战略群模型分析方法确定了该公司应该实施稳步发展型战略。最后,为了实现战略目标,本文提出了瑞京乳胶制品公司发展战略的实施重点是同心多样化战略和市场定向战略。另外,本文也从调整组织结构等内容讨论了相关的战略保障措施。希望通过本文的研究,能为瑞京乳胶制品公司持续和健康发展提供有益的探索。并且能够将研究成果运用于公司管理活动之中,促进公司不断改善运营管理水平,提高管理效率以取得良好地发展。
宣敏[4]（2014）在《自噬参与衰老皮肤创面愈合的相关实验研究》文中提出衰老（aging）又称老化,是机体在退化时期功能下降及生理紊乱的综合表现,以多器官系统进行性的功能结构减退为特征。衰老一方面受机体预定的基因程序调控,另一方面由内外“磨损和消耗”所引起,二者发生于细胞和分子水平,表现为DNA、蛋白质、脂类物质以及细胞器等的损伤和有害修饰积累。既往认为,机体细胞的发育过程皆由未分化到分化、从分化到衰老、再由衰老至凋亡的过程。伴随自噬（autophagy）概念的出现,这一生命科学领域热门的研究方向让人们开始重新认识衰老及相关疾患机制。细胞的自稳是通过对细胞内成分合成和降解的精确调节而实现。无论细胞处于正常生理还是病理状态下,自噬作为机体一种重要的防御和保护机制,它能够维持细胞的自我稳态或保证细胞的生存。研究发现,细胞自噬在各种真核生物衰老进程中发挥重要的调节机制,但自噬功能随着年龄增长而衰退,这种衰退可能是由于年龄相关的细胞结构改变及功能下降所致。皮肤组织作为生物体有机整体的一部分,其老化也可能与自噬有关。国外学者发现,年长女性的皮肤真皮中成纤维细胞的自噬体量相对年轻女性升高。体外实验表明,自噬降解步骤在年长供体的皮肤成纤维细胞中被抑制,进而导致自噬体的积累,这提示自噬功能在老年皮肤成纤维细胞中的受损,可能导致皮肤的完整性和皮肤强度受影响。细胞应激反应是胞外的条件下的变化或波动的反应造成大分子结构和功能的损坏。不同的应激因子触发不同的细胞反应,即诱导细胞修复机制,诱导一些应激因子短暂适应引起的细胞反应,诱导自噬或触发细胞死亡。创面的修复是一个复杂的过程,主要依靠修复细胞、炎性细胞、胞外基质和生长因子的协同作用来重建受损的软组织。在衰老哺乳动物,自噬系统的功能发生障碍,当遭遇创伤、感染、缺氧等打击后,由于自噬功能改变,可能无法维持细胞稳态,而向着延期愈合的方向发展。目前自噬对衰老皮肤创而愈合产生怎样的影响及机制尚未有相关研究,本项研究有助于了解自噬在老年创面愈合中扮演的角色,真正阐明衰老皮肤愈合的机制。第一部分自噬在不同年龄组大鼠皮肤急性创面愈合过程中的表达研究目的：通过研究不同年龄组大鼠急性创而愈合过程中,自噬相关基因LC3、Beclin-1、 p62的表达变化,观察老年和年轻大鼠正常皮肤中及在创面愈合过程中的自噬活动差异。方法：1.建立SD大鼠急性切创皮肤全层缺损模型,对不同年龄组创面组织进行HE和Masson三色染色,观察创面组织炎症、真皮微血管形成、胶原沉积、附属器发育以及再上皮化情况。2.透射电子显微镜观察不同年龄组大鼠正常皮肤成纤维细胞及角质形成细胞自噬体形态、结构。3.采用Envision免疫组化法和qRT-PCR、 Western blotting法检测LC3、 Beclin-1、p62在不同年龄组创面愈合中各时相点（Od、4d、7d、14d、21d）的表达差异。结果：1.光镜下情况：正常皮肤中,年轻组（3月龄）大鼠表皮较厚,皮下组织与真皮界限不十分清楚。老年组（18月龄）大鼠表皮厚度变薄,表皮与真皮连接变平坦、松弛。真皮中胶原纤维、弹性纤维数量减少,排列不规则,且常断裂成碎片。4d时,年轻组真皮可见毛细血管明显扩张,有大量中性粒细胞、巨噬细胞浸润,已有大量肉芽组织形成；老年组中性粒细胞浸润及真皮毛细血管数量均较年轻组少。7d时,年轻组可见创口已基本为肉芽组织填平,炎性细胞减少；老年组创口尚未被肉芽组织填平,仍有大量炎性细胞浸润。21d时,年轻组创口基本愈合,肉芽组织纤维化,向瘢痕组织转变。Masson三色染色可见胶原纤维数量较老年组增多,排列规则。老年组在21天后才完全或接近愈合,21d时仍可见少量炎性浸润,新生的真皮胶原积累松散,数量较少,排列不规则,多呈碎片弥漫状,规则积累的胶原蛋白较少。3.电镜观察情况：在年轻组和老年组大鼠正常皮肤的角质形成细胞及成纤维细胞中,均可见胞浆内双层膜或多层膜的自噬泡,其内可见细胞器如线粒体、内质网、核糖体残留,老年组自噬泡数量较年轻组多。4.免疫组织化学染色：LC3、 Beclin-1在年轻组和老年组大鼠正常皮肤的表皮及真皮均有表达,在创缘处表皮层、真皮层及毛囊、新生肉芽组织血管内皮细胞、巨噬细胞及成纤维细胞中均可见阳性表达。创伤前老年组两种蛋白在皮肤的表达均多于年轻组,LC3、 Beclin-1蛋白的表达均随时间呈上升趋势。在4d、7d、14d、21d时LC3的表达在年轻组较多,而Beclin-1则是老年组表达较多。5.不同年龄组创面愈合过程中LC3、 Beclin-1、 p62的mRNA表达情况：（1）不同年龄组大鼠LC3皮肤创面的mRNA表达变化量的比较在各时相点,两组LC3的表达增加均有显着性差异（P<0.05）,均为4d<14d<7d<21d;在14d,年轻鼠组LC3的表达增加显着高于老年鼠组（P<0.05）。（2）不同年龄组大鼠皮肤创面Beclin-1的mRNA表达变化量的比较在各时相点,两组Beclin-1的表达增加有显着性差异（P<0.05）,其中4d<14d<7d<21d;在各时相点,年轻鼠组中Beclin-1的表达增加均显着低于老年鼠组（P<0.05）。（3）不同年龄组大鼠皮肤创面的p62mRNA表达变化量的比较在各时相点,两组p62的表达减少有显着性差异（P<0.05）,均为4d>7d>14d>21d;在4d、7d,年轻鼠组和老年鼠组的表达减少无显着性差异（P>0.05）；在14d、21d,年轻鼠组p62表达减少显着低于老年鼠组（P<0.05）。6. Western blotting检测不同年龄组创面愈合过程中LC3、Beclin-1、p62的蛋白表达情况：两组在创伤4d、7d、14d、21d时,LC3-Ⅱ Beclin-1蛋白表达均是逐渐升高的,而p62蛋白表达是逐渐下降的。LC3-Ⅱ Beclin-1p62的蛋白水平表达与基因水平表达相一致。结论：1.在正常衰老皮肤中自噬相关基因的表达高于正常年轻组皮肤,提示自噬与皮肤衰老密切相关,可能与衰老皮肤细胞的自噬降解能力下降,造成自噬体的蓄积,进而加快了皮肤老化进程有关。2.在皮肤创面愈合过程中,年轻及衰老皮肤细胞自噬相关蛋白的表达均有变化,提示自噬参与了皮肤创面愈合。年轻皮肤能够维持细胞的稳态,将自噬活动控制在正常范围内,从而促进创伤修复。而衰老皮肤由于本身自噬系统调控功能发生障碍,导致出现与自身不相适应的过度的自噬发生,从而造成细胞不可逆的损伤而延缓了创面愈合。第二部分富血小板血浆（PRP）对老年大鼠皮肤急性创面愈合过程中细胞自噬的影响目的：制作大鼠背部急性全层皮肤缺损模型,观察富血小板血浆（PRP）对创面愈合的疗效,并检测创面愈合过程中LC3、Beclin-1、 p62和CD31的表达情况,探讨PRP对自噬的影响,及自噬和创面愈合的相互关系。方法：1.建立SD大鼠急性切创皮肤全层缺损模型,分为生理盐水组（对照组）、富血小板血浆组（PRP组）、少血小板血浆组（PPP组）,取第Od、4d、7d、14d皮肤创面标本,进行HE和Masson三色染色,观察创面愈合情况。2.透射电镜观察三组大鼠在各时相点的皮肤细胞自噬体形态、结构。3.比较三组创面愈合率。4.采用Envision免疫组化法、qRT-PCR、 Western-blotting法检测LC3、Beclin-1、 p62、 CD31在不同年龄组创面愈合中各时相点（4d、7d、14d、21d）的表达差异,在mRNA水平上分析各个基因之间的相关性。结果：1.光镜观察三组在各时相点的创面愈合情况（1）胶原纤维情况：在4d时,三组创面中心的成纤维细胞数量均增加,14d开始减少。7d时,增生的肉芽组织中有少量胶原纤维。14d时,PRP组不仅胶原纤维数量较多,而且胶原纤维的排列比较整齐,而在对照组中,上皮连接仍留有间隙,胶原纤维不成熟,数量较少,排列不规则。PPP组的胶原纤维生成情况介于两组之间。（2）新生血管及附属器情况：创伤4d三组创面组织中均可见少量血管内皮细胞及成纤维细胞。血管内皮细胞可见少量CD31表达,而对照组几乎未观察到血管内皮细胞及成纤维细胞。7d时,PRP组肉芽组织增长优于其他两组,三组的血管内皮细胞、成纤维细胞及新生毛细血管数量均增多,CD31表达量增多。在14d,PRP组出现新生毛细血管,管腔增大,可见血管平滑肌细胞,并初步形成毛细血管网。21d时PRP组毛细血管较多,毛细血管网结构正常,腺体增多。PPP组毛细血管及腺体数量相对PRP组较少,对照组则在三组中最少。2.电镜观察情况：在创伤4d,成纤维细胞和角质形成细胞内的自噬泡数量均增加,PRP组的自噬体数量增加相对于PPP组和对照组较少。3.三组创面愈合率的比较：PRP组愈合时间最短,再上皮化速度最快,优于另外两组,有显着性差异（P<0.05）。4.免疫组织化学染色：LC3、 Beclin-1蛋白在创面的表达特点同前,两个蛋白在PRP组的表达弱于其他两组。5.三组创面愈合过程中LC3、 Beclin-1、 p62的mRNA表达情况：LC3在各组内的各时相点表达量均有显着性差异（P<0.05）,在14d、21d时三组之间有显着性差异（P<0.05）。 Beclin-1的表达量在7d、14d、21d时各组间均有显着差异（P＜0.05）, PRP组表达量在这三个时相点均低于其他两组。p62的表达在三组均呈下降趋势,PRP在4d、7d时的表达量均小于正常对照组。相关性分析显示,在4d和7d时,CD31与Beclin-1呈负相关,与p62呈正相关。6. Western blotting检测三组创面愈合过程中LC3、 Beclin-1、p62的蛋白表达情况：在三组不同处理组中,LC3-Ⅱ、 Beclin-1、 CD31蛋白表达均随时间逐渐升高,p62蛋白表达随着时间变化逐渐下降。LC3-Ⅱ、Beclin-1、CD31、p62的蛋白水平表达与基因水平表达一致。结论：1.PRP在老年皮肤创面愈合中可能通过对细胞自噬的影响,参与促进创面愈合的作用。2.在衰老皮肤创面愈合过程中,自噬相关蛋白Beclin-1、 p62与CD31相关,提示自噬参与了创面愈合中新生血管、再上皮化等不同阶段。
杜晓明[5]（2012）在《人源性TRAb Fab段抗体库的构建筛选与鉴定》文中提出背景和目的Graves病患者血清中的促甲状腺素受体抗体（TRAb）分为:（1）TSH受体刺激性抗体（TSAb）;（2）TSH受体刺激阻断性抗体（TSBAb）;（3）中性TSH受体抗体。随着基因工程技术的发展,运用噬菌体展示技术,通过对人源性促甲状腺素抗体Fab片段抗体库的构建筛选、鉴定,得到TRAb单克隆抗体,为进一步建立TRAb的定量分析方法及探索免疫干预治疗奠定基础。方法（1）从血清TRAb浓度大于40IU/L的自身免疫性甲状腺疾病患者外周血中,抽提总RNA,反转录获取cDNA。以获取的cDNA为模版,PCR法扩增免疫球蛋白分子轻链λ、λ基因及重链Fd基因。将轻链克隆入pComb3Hss载体以构建轻链文库。将重链基因载入κ/λ-pComb3Hss载体,构建完成组合文库。（2）将重组质粒转化大肠杆菌XL1-Blue,用辅助噬菌体M13K07感染,随机的组合文库表达于丝状噬菌体表面,完成噬菌体表面展示。（3）应用固相化抗原（TSHR-N）吸附筛选法通过数轮"吸附—洗脱—扩增"富集噬菌体抗体,筛选阳性克隆。（4）取阳性克隆的噬菌体DNA,切除gⅢ基因片段,自连接后转化大肠杆菌XL1-B1ue,以IPTG诱导表达可溶性TRAb Fab片段,应用间接ELISA法对表达产物进行鉴定。（5）利用亲和层析柱纯化人源性TRAb Fab片段,Western blotting鉴定纯化产物。（6）对表达较好的阳性克隆进行测序分析,轻链和重链可变区的DNA序列采用双向测序。结果（1）从外周血单个核细胞中抽提得到总RNA,并成功反转录获得cDNA文库。（2）PCR法扩增了大小均为680bp左右的轻链κ、λ基因及重链Fd基因,并成功构建了库容为1.32 × 105基因抗体库（轻链库）和库容为2.28 × 1 05Fab抗体库（组合文库）。（3）通过噬菌体表面展示技术,在辅助噬菌体M13K07的帮助下,在组合文库的基础上获得了富含TRAb Fab片段的人源性噬菌体抗体库。（4）以TSHR-N为抗原,通过固相化抗原吸附筛选法对构建的Fab噬菌体抗体库进行5轮富集筛选,初步成功筛选到特异性TRAb Fab噬菌体抗体,富集效应约77倍。（5）通过Phage-ELISA检测,结果鉴定出了具有抗原结合活性的单克隆。提取阳性克隆的噬菌体DNA,切除gⅢ基因片段,实现了可溶性人源性TRAb Fab片段的表达。（6）利用Ni2+金属敖合层析法获得纯化的人源性TRAb Fab片段。（7）间接ELISA法检测结果显示:制备的可溶性人源性TRAb Fab片段具有特异性结合TSHR-N端的免疫学活性。（8）经GenBank检索DNA序列分析,证实该克隆的轻链可变区与人的免疫球蛋白λ链同源性达到94.4%,重链可变区与人的免疫球蛋白IgG重链VH4同源性为88.9%。结论本研究通过噬菌体展示技术成功构建了人源性TRAb Fab片段组合文库,并通过固相化抗原吸附筛选法筛选获得阳性克隆,实现了可溶性TRAb Fab片段的表达,基因测序证实其轻重链与人免疫球蛋白可变区具有同源性,ELISA结果显示其具有特异性结合TSHR-N端的免疫学活性。
刘志滨[6]（2009）在《腺病毒介导人促红细胞生成素在兔乳腺高效表达的研究》文中认为腺病毒载体是目前国际转基因治疗人类疾病中应用得最广泛的载体,有宿主范围广、对人致病性低、安全可靠等优点,在治疗癌症、遗传病等方面取得了可喜的进展,有良好的发展势头。腺病毒载体可以感染各种分裂和不分裂的哺乳动物细胞,腺病毒载体并不插入宿主染色体,所以避免了造成宿主基因突变,安全性有所保障;但是这也决定了腺病毒只能在宿主细胞内瞬时表达。腺病毒用于基因治疗,转染宿主细胞的效率是关键。提高腺病毒的转染效率,就可以使用更少的腺病毒达到治疗目地,也就提高了经济效益和安全性。如何用更少的腺病毒获得需要的表达水平,是学者们孜孜不倦地追求的目标。钙离子螯合剂EGTA被证实能大幅提高腺病毒的转染效率,但是EGTA难溶于中性水,需要用强碱溶液（比如氢氧化钠）溶解,而强碱溶液对于机体有很大的副作用,从而限制了EGTA在医学上的应用。BAPTA是日本同仁化学研究所推出的一种新型钙离子螯合剂,螯合钙离子的能力比EGTA要强许多,而且不需要强碱溶解,可以直接在生理酸碱度下发挥作用。BAPTA目前尚未用于提高腺病毒转染效率,本研究将BAPTA用于提高腺病毒转染效率,并与EGTA做对照,以此验证BAPTA代替EGTA用于提高腺病毒转染率的可行性。哺乳动物乳腺生物反应器是时下生物技术领域的研究热点。哺乳动物乳房是一种天然、高效的合成蛋白质的器官,而且本身具有良好的渗透屏障,能有效地限制外源基因表达的产物进入体液循环。可以通过技术手段把哺乳动物乳腺改造成生物反应器,以期源源不断地生产出目标药物蛋白。目标基因在动物乳腺上皮细胞中表达,并分泌到乳汁中,从而在动物乳汁中获得重组蛋白药物。其优势在于:（1）不需要构建乳腺特异表达载体,程序简单,并且不需要昂贵、精密仪器;（2）试验样本不需要经过残酷的淘汰筛选,成功率高;（3）腺病毒载体不干扰动物乳腺染色体稳定体系,经过短期高效表达,腺病毒自动失活,不会影响子代动物的遗传特征;（4）目标药物蛋白在乳腺中表达,条件容易掌握,表达水平稳定。本研究以人促红细胞生成素重组腺病毒为载体,进行了乳腺表达生产人促红细胞生成素的试验研究,以期探索出高效、简便的蛋白药物生产方法,从而为蛋白药物生产提供新的途径。本研究分为如下五个部分:1.克隆人促红细胞生成素序列,并构建真核表达载体。从流产胎儿的肝脏组织提取人总RNA,利用RT-PCR技术,获得人促红细胞生成素的全长cDNA序列,经DNA测序分析,所得cDNA序列与GeneBank序列（ACCESSION NM000799）一致。以pcDNA3.1、pIRES为基础质粒,构建了含有人促红细胞生成素基因的重组真核表达载体p3IG和p3EIG。2.人促红细胞生成素的细胞表达试验。将上述构建的人促红细胞生成素真核表达载体分别在CHO、和HEK293细胞中进行蛋白表达试验。将其转染进细胞后,CHO和HEK293细胞经G418抗性筛选,获得阳性克隆细胞,并克隆化培养,RT-PCR和Western blot分析显示,培养上清液中有hEPO mRNA和蛋白表达。3.细菌内高效制备重组人促红细胞生成素腺病毒pAD-hEPO载体的研究。将体外真核表达验证正确的人促红细胞生成素基因亚克隆至穿梭质粒pShuttle-cmv中,酶切鉴定后得到重组质粒pShIG和pShEIG。经PmeI酶切线性化,转化含有腺病毒骨架质粒pAdeasy的大肠杆菌BJ5183,所获阳性菌落酶切鉴定正确,获得的重组人促红细胞生成素腺病毒载体pAD-IG和pAD-EIG。经过PCR和酶切验证,结果符合预期。4.腺病毒包装和感染兔乳腺上皮细胞试验。腺病毒载体pAD-IG和pAD-EIG经PacI消化后,将大片段纯化后转染HEK293细胞,包装获得腺病毒pAD-IG和pAD-EIG,感染HEK293细胞后表达绿色荧光蛋白,进一步说明腺病毒载体构建正确。将腺病毒pAD-IG和pAD-EIG转染体外培养的兔乳腺上皮细胞, Western blot检测到pAD-EIG感染细胞上清中含有人促红细胞生成素的表达,腺病毒pAD-IG感染细胞上清没有检测到人促红细胞生成素的表达,符合预期。结果表明,腺病毒pAD-EIG可以在兔乳腺上皮细胞表达。5.重组腺病毒pAD-EIG在兔乳腺中高效表达的研究。兔乳腺经过EGTA、PBS和不同浓度BAPBA处理,然后通过乳孔注入腺病毒pAD-EIG和pAD-IG,24 h后收集兔奶,用ELISA试剂盒检测兔奶中的hEPO含量,结果表明BAPBA处理的乳腺分泌乳中hEPO浓度明显高于同等浓度EGTA处理组。用Western blot鉴定乳清中的hEPO,证明腺病毒pAD-EIG转染的的乳腺表达了hEPO。BALB/c小鼠的血液网织红细胞数量对EPO在1IU -10IU/只范围内呈现良好的线性关系,用BALB/c小鼠网织红细胞计数法检测兔乳清中人促红细胞生成素的生物活性为67IU/μg。
马英智[7]（2009）在《利用人表皮干细胞和人真皮成纤维细胞体外构建组织工程复合皮肤的研究》文中提出组织工程皮肤是组织工程研究中最成熟的技术之一,但目前应用于临床的组织工程皮肤的种子细胞均来自异体,难以成为永久性皮肤替代物。因此,本实验以人表皮干细胞（hKSCs）和人真皮成纤维细胞（hDFs）作为种子细胞,利用鼠尾胶原制备真皮支架材料,体外构建组织工程复合皮肤,为永久性皮肤替代物的研究进行有益的探索。应用联合酶消化、快速贴壁筛选和无血清培养法,自成人包皮中快速分离hKSCs;同时应用联合酶消化、差速贴壁法分离hDFs,通过显微镜观察、免疫细胞化学、间接免疫荧光、流式细胞术、RT-PCR及Western blot等方法,从形态学、分子标志物、细胞周期等方面对获得的hKSCs和hDFs的生物学特性进行检测。用醋酸溶解法制备鼠尾胶原凝胶,经真空冻干法制备真皮支架材料,利用显微镜观察、免疫荧光等方法对真皮支架材料的形态结构、稳定性、生物相容性等理化特性进行检测。分别将15代以内的hDFs及分离自同一成人包皮组织的hKSCs和hDFs接种于支架材料上,进行共培养及气液面培养,通过HE染色、免疫组织化学、双重免疫荧光及扫描电镜等对构建的组织工程皮肤进行观察。结果显示:1.获得的hKSCs、hDFs具有较高的纯度、较好的活力和良好的增殖能力,能够进行稳定的传代培养及冻存、复苏,为组织工程提供充足的种子细胞来源;2.制备的真皮支架材料具有多层孔隙结构,各孔隙互相交通,并具有良好的孔隙率、稳定性、生物可降解性、细胞相容性及安全性,能够诱导细胞长入及新生血管形成,是构建组织工程皮肤理想的支架材料;3. hDFs均匀分布于真皮支架中,不仅保持稳定的增殖能力,而且可能开始分泌细胞外基质成分,发挥着天然真皮中成纤维细胞的功能。hKSCs粘附于含有活的hDFs的真皮支架材料上,伸展良好,经气液面培养形成复层表皮结构,具备表皮层和真皮层。综上所述,我们建立了高效分离、纯化、培养及扩增hKSCs和hDFs的方法,制备了具有合理的空间结构及良好的稳定性、生物可降解性、细胞相容性和安全性的真皮支架材料,成功构建具有表皮层和真皮层的组织工程复合皮肤,为开展无免疫排斥的个性化治疗及永久性皮肤替代物的研究打下坚实的实验基础。
段玲欣[8]（2009）在《旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因抗肿瘤效应研究》文中提出为筛选旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因,观察其抗肿瘤效果,以探讨其抗肿瘤机制,本研究首先构建了旋毛虫cDNA表达文库,用抗Sp2/0骨髓瘤细胞的多克隆抗体对文库进行筛选,获得旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因,利用5’-RACE技术进行末端快速扩增获得全长后,将该基因在真核表达载体中表达。应用斑点杂交技术对相关抗原基因进行定位,并进行小鼠抗肿瘤试验。实验结果表明,成功构建了旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库,文库容量为1.9×106pfu/mL,重组率为97.5%,扩增后文库滴度为1.6×109pfu/mL。经过3轮筛选,获得一个旋毛虫肌幼虫相关抗原基因片段,通过5’-RACE扩增该基因全长,测序结果显示TS2全长为569bp,含有一大小为411bp的开放阅读框。将其命名为TS2。登陆NCBI进行Blast比对发现该基因为核糖体蛋白S24基因,与DNA修复、细胞发育调控和细胞分化有关。ELM服务器分析结构域,表明此序列蛋白质含有4个精氨酸二元转移酶切割位点,1个羧基肽酰胺化位点和1个氨基葡聚糖附着位点。核酸疫苗重组质粒pVAX1-TS2转染Hela细胞,PCR和Western blotting检测结果表明目的基因在其中得到正确转录和表达,表达蛋白具有反应原性。应用核酸疫苗重组质粒免疫小鼠进行的体内抗肿瘤试验表明,试验组小鼠产生了特异的细胞免疫应答,CD3+、CD4+T淋巴细胞均进行了有效增殖。试验组和对照组肿瘤体积和重量的统计学分析比较表明,旋毛虫核酸疫苗重组质粒的抑瘤效果明显高于对照组。
林嘉鹏[9]（2009）在《新疆褐牛Toll样受体4外显子Ⅲ多态性与奶牛体细胞评分的相关性研究》文中研究表明Toll-样受体（Toll like receptors,TLRs）可以通过识别病原微生物启动天然免疫并激活适应性免疫。本研究以中国荷斯坦奶牛和新疆褐牛为研究对象,对TLR4基因外显子3进行了序列分析,并对发现的多态性位点进行PCR-RFLP分析,共发现TLR4 E3+1656、TLR4E3+2021和TLR4 E3+2414三个多态位点,其中TLR4 E3+1656位点发生T/C的碱基突变,但没有引起氨基酸变化;TLR4 E3+2021位点C/T的碱基突变,导致编码氨基酸由苏氨酸变为异亮氨酸;TLR4 E+2414位点发生G/A突变,引起氨基酸由精氨酸变为谷氨酸。但由于TLR4 E+2414位点只发现2个AB基因型个体,其余均为BB基因型个体,不具有统计意义,因此只对TLR4 E3+1656和TLR4E3+2021位点χ2检验表明:两个品种这两个位点的突变均处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）。运用最小二乘法分析表明:TLR4 E3+1656位点的各基因型个体间的平均SCS差异不显着（P>0.05）;而TLR4 E3+2021位点中AA与AB基因型SCS水平差异显着（P<0.05）,AA与BB基因型SCS水平差异极显着（P<0.01）,但AB与BB基因型SCS水平差异不显着（P>0.05）,说明TLR4 E3+2021位点的AA基因型可能与抗乳房炎的抗性有关,A等位基因是乳房炎抗性的有利基因。为进一步研究TLR4 E3+2021位点不同基因型对奶牛SCS的影响,采用Quantitative Real-Time PCR技术检测了新疆褐牛不同基因型个体中TLRs信号通路下游的部分基因mRNA的表达水平,结果显示:NF-κB1、NF-κB2和IL-1β基因mRNA表达水平与TLR4 E3+2021位点AB和BB两种基因型差异显着（P<0.05）,TNF、TLR4、IL-10、IL-8、MD-2和Myd88基因mRNA表达水平与TLR4 E3+2021位点AB和BB两种基因型差异不显着（P>0.05）。这些结果提示我们TLR4 E3+2021位点碱基的改变可能引起了核内转录因子NF-κB表达量的变化,从而进一步导致IL-1β的mRNA表达量改变。
徐冬兰[10]（2008）在《BLG/hLF基因转染山羊乳腺上皮细胞及TSA对转染基因表达的影响》文中认为转基因动物乳腺生物反应器是当前生物工程研究的热点。当人们将外源基因转染入哺乳动物细胞以后,总是希望外源基因能高效表达,并通过转基因动物克隆技术制作转基因动物,使其要求导入的外源基因在动物个体高水平表达所需要的新性状。然而事与愿违的是,许多转基因实验都导致了外源基因在哺乳动物细胞水平或动物个体水平不表达。研究表明在许多情况下外源基因整合进基因组后,其表达和转基因沉默有关。世界各国对转基因沉默机理及其防制展开了广泛研究,克服转基因沉默来提高外源基因的表达己经成为基因工程的一个重要课题。因此,有效预防转基因沉默,对提高外源基因的表达,提高制作转基因动物的成功率具有重要的理论和实际意义。本研究构建了BLG/hLF乳腺特异性表达载体BLC-14,建立了体外培养奶山羊乳腺上皮细胞（GMEC）系,并将构建的乳腺特异性表达载体BLC-14转染奶山羊乳腺上皮细胞,获得了阳性单克隆细胞株并用TSA处理,通过细胞水平的整合和表达检测,探讨了组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能否克服转基因沉默,解除转染入山羊乳腺上皮细胞基因组中的BLG/hLF基因表达受抑制的现象,从而提高BLG/hLF基因在乳腺上皮细胞中的表达水平,为研制乳腺特异性高效表达载体提供依据,为后期转基因体细胞核移植制备高表达转基因克隆动物乳腺生物反应器提供具有表达潜能的体（供核）细胞。1乳腺特异性表达载体的构建本实验利用实验室已有的人乳铁蛋白cDNA、奶山羊β-乳球蛋白（β-BLG）5`端（4.2Kb）、3`端（1.8Kb）表达调控序列、Neor、增强子序列构建出了BLG/hLF乳腺特异性表达载体BLC-14。2奶山羊乳腺上皮细胞系的建立用胶原酶消化法从经过催乳的刚成年奶山羊或者处于泌乳中后期的青年奶山羊乳腺实质组织中分离得到乳腺上皮细胞。采用分步消化法进行纯化,经过一到二次选择性传代培养,获得纯化的乳腺上皮细胞。用DMEM/F12+10%FCS培养液体外培养20代仍保持正常细胞繁殖扩增能力,生长良好。3 BLG /hLF基因转染奶山羊乳腺上皮细胞及TSA的处理BLG/hLF乳腺特异性表达载体BLC-14通过电转染法导入纯化的P1或者P2奶山羊乳腺上皮细胞中,共转染5个细胞系。经400μg﹒mL-1G418筛选培养液筛选三周后,得到有抗性的细胞株。挑取单克隆细胞株并进行扩大培养,共获得89株。随机取7株细胞DNA进行PCR检测,结果均为阳性。将单克隆细胞株分成实验组与对照组,实验组加入5μM催乳素、1μMTSA的诱导培养液,对照组只加入5μM催乳素的诱导培养液。诱导培养24小时后,利用间接ELISA检测,实验组与对照组均获得11株细胞能稳定表达人乳铁蛋白。实验组的平均表达水平是0.781μg﹒mL-1（106个细胞）,未用TSA处理的对照组表达水平是0.558μg﹒mL-1（106个细胞）。经统计学分析,TSA处理后的实验组要明显高于对照组。实验结果表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能提高BLG/hLF基因在奶山羊乳腺上皮细胞中的表达水平。所得到的高表达BLG/hLF的单克隆细胞将用作细胞核移植的供核细胞进行转基因克隆羊的制作。
二、无蛋白质医用手套问世（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、无蛋白质医用手套问世（论文提纲范文）
（1）稀土氧化钕致大鼠肺损伤作用机制的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 第一章 综述 |
| 参考文献 |
| 第二章 NF-κB信号通路在氧化钕所致肺急性损伤中的调控作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 第三章 稀土氧化钕颗粒物致大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)损伤过程中的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4. 结论 |
| 5 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 学位论文评阅及笞辩情况表 |
| 发表论文 |
（2）华蟾素抑制TGF-β1诱导的人结肠癌SW480细胞上皮-间质化的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩写词 |
| 引言 |
| 技术路线 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）瑞京乳胶制品公司发展战略研究（论文提纲范文）
| 学位论文数据集 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景和研究意义 |
| 1.2 研究内容和研究方法 |
| 1.3 研究思路和研究框架 |
| 第二章 相关理论综述 |
| 2.1 战略管理理论 |
| 2.2 战略管理的过程 |
| 2.3 战略管理研究工具 |
| 2.3.1 PEST分析方法 |
| 2.3.2 波特竞争模型 |
| 2.3.3 SWOT分析模型 |
| 2.3.4 价值链分析 |
| 2.4 国内研究现状 |
| 第三章 瑞京乳胶制品公司外部环境分析 |
| 3.1 公司简介 |
| 3.2 宏观环境分析 |
| 3.2.1 政治法律环境 |
| 3.2.2 经济环境 |
| 3.2.3 社会文化环境 |
| 3.2.4 技术环境 |
| 3.3 行业环境分析 |
| 3.3.1 供方议价能力 |
| 3.3.2 买方议价能力 |
| 3.3.3 潜在进入者的威胁 |
| 3.3.4 替代品的威胁 |
| 3.3.5 现有竞争者的威胁 |
| 3.4 外部因素评价矩阵分析(EFE) |
| 第四章 瑞京乳胶制品公司内部环境分析 |
| 4.1 企业价值链分析 |
| 4.2 资源条件分析 |
| 4.2.1 财务资源 |
| 4.2.2 物质资源 |
| 4.2.3 人力资源 |
| 4.2.4 技术资源 |
| 4.2.5 商誉资源 |
| 4.3 企业能力分析 |
| 4.3.1 财务能力 |
| 4.3.2 投融资能力 |
| 4.3.3 营销能力 |
| 4.3.4 管理能力 |
| 4.4 内部因素评价矩阵分析(IFE) |
| 第五章 瑞京乳胶制品公司发展战略制定 |
| 5.1 企业使命和愿景 |
| 5.2 总体战略目标 |
| 5.3 发展战略选择制定 |
| 5.3.1 SWOT模型分析 |
| 5.3.2 公司现行战略分析 |
| 5.3.3 公司备选战略 |
| 5.3.4 公司发展战略选择 |
| 第六章 瑞京乳胶制品公司发展战略实施重点与保障措施 |
| 6.1 战略实施重点 |
| 6.1.1 同心多样化战略 |
| 6.1.2 市场定向战略 |
| 6.2 战略实施的保障措施 |
| 6.2.1 调整组织结构 |
| 6.2.2 加强人力资源管理 |
| 6.2.3 建立卓越的企业文化 |
| 6.2.4 加强财务管理 |
| 第七章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者介绍和导师介绍 |
| 附件 |
（4）自噬参与衰老皮肤创面愈合的相关实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 衰老和皮肤老化 |
| 1.2 机体的自稳定、衰老与自噬 |
| 1.3 老年皮肤的创面修复 |
| 1.4 本课题的研究的意义、目的及主要内容 |
| 第二章 自噬在不同年龄组大鼠皮肤急性创面愈合过程中的表达差异及相关性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料和对象 |
| 2.3 实验方法和步骤 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 富血小板血浆(PRP)对老年大鼠皮肤急性创面愈合过程中细胞自噬的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 富血小板血浆的来源和制备 |
| 3.3 实验动物选择和分组、取材 |
| 3.4 实验方法和步骤 |
| 3.5 结果 |
| 3.6 讨论 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词对照表 |
| 综述1 |
| 参考文献 |
| 综述2 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间成果及论文 |
| 致谢 |
| 统计学审稿证明 |
（5）人源性TRAb Fab段抗体库的构建筛选与鉴定（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 技术流程图 |
| 第一部分 人源性促甲状腺素受体抗体Fab片段噬菌体抗体库的构建 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.1.1 材料 |
| 1.1.2 PCR引物 |
| 1.1.3 方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 外周血总RNA提取 |
| 1.2.2 轻、重链基因PCR扩增 |
| 1.2.3 噬粒pComb3Hss的扩增 |
| 1.2.4 轻链库的构建 |
| 1.2.5 噬菌体Fab抗体库的构建和鉴定 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 单克隆抗体的发展 |
| 1.3.2 噬菌体抗体库成功构建的必要条件 |
| 1.3.3 辅助噬菌体作用机理以及扩增 |
| 1.3.4 噬菌体抗体库的机遇和挑战 |
| 1.4 小结 |
| 第二部分 人源性TRAb Fab片段的筛选及初步鉴定 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 TRAb Fab噬菌体抗体的筛选结果 |
| 2.2.2 Phage-ELISA检测噬菌体抗体 |
| 2.2.3 TRAb阳性克隆的鉴定 |
| 2.2.4 TRAb Fab片段的获取 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 用于筛选的抗原 |
| 2.3.2 噬菌体抗体库的筛选技术的原理及影响因素 |
| 2.3.3 人源性TRAb Fab噬菌体抗体的筛选 |
| 2.4 小结 |
| 第三部分 人源性TRAb Fab片段的初步纯化及鉴定 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 可溶性TRAb Fab ELISA鉴定 |
| 3.2.2 SDS-PAGE电泳结果 |
| 3.2.3 免疫学活性鉴定:Western-Blotting |
| 3.2.4 采用CBG定量法对可溶性TRAbFab的表达蛋白定量 |
| 3.2.5 抗体重链和轻链可变区DNA序列的测序分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 创新点及展望 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 |
| 综述 促甲状腺素受体及其抗体 |
| 综述 噬菌体抗体库 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）腺病毒介导人促红细胞生成素在兔乳腺高效表达的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 动物生物反应器研究进展 |
| 1.1.1 动物生物反应器的分类 |
| 1.1.2 构建动物生物反应器的技术路线 |
| 1.1.3 动物生物反应器的问题和展望 |
| 1.2 腺病毒及其载体的研究进展 |
| 1.2.1 腺病毒基本特征 |
| 1.2.2 合成腺病毒表达载体 |
| 1.2.3 腺病毒载体的优势 |
| 1.2.4 腺病毒载体的实际应用 |
| 1.3 人促红细胞生成素研究进展 |
| 1.3.1 人促红细胞生成素受体和分布 |
| 1.3.2 人促红细胞生成素器官保护功能 |
| 1.3.3 人促红细胞生成素调节免疫作用 |
| 1.3.4 人促红细胞生成素和治疗肿瘤的关系 |
| 1.3.5 人促红细胞生成素检测与鉴定 |
| 第二章 人促红细胞生成素基因克隆载体构建 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 试验结果 |
| 2.2.1 人促红细胞生成素基因的克隆和测序 |
| 2.2.2 载体 pShIG 和 pShEIG 的构建 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 人促红细胞生成素基因序列的克隆 |
| 2.3.2 利用 Trizol 试剂提取 RNA 注意事项 |
| 2.4 总结 |
| 第三章 人促红细胞生成素基因的离体细胞表达 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 试验结果 |
| 3.2.1 细胞转染绿色荧光观察 |
| 3.2.2 逆转录PCR 检测载体表达 |
| 3.2.3 蛋白质印记分析结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 细胞培养 |
| 3.3.2 绿色荧光蛋白筛选 |
| 3.3.3 细胞转染 |
| 3.4 总结 |
| 第四章 同源重组构建腺病毒载体 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 试验结果 |
| 4.2.1 载体线性化处理 |
| 4.2.2 腺病毒载体加载目标基因的验证 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 制备BJ5183 感受态 |
| 4.3.2 同源重组 |
| 4.4 总结 |
| 第五章 腺病毒扩增和离体细胞中的表达 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.2 试验结果 |
| 5.2.1 包装病毒 |
| 5.2.2 腺病毒增殖 |
| 5.2.3 纯化腺病毒和滴度检测 |
| 5.2.4 腺病毒感染离体培养兔乳腺上皮细胞 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 总结 |
| 第六章 腺病毒在活体兔乳腺表达 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 材料 |
| 6.1.2 方法 |
| 6.2 试验结果 |
| 6.2.1 兔乳腺表达rhEPO |
| 6.2.2 兔乳腺表达rhEPO 生物活性测定 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 总结 |
| 结论及创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略词和中英文对照表 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）利用人表皮干细胞和人真皮成纤维细胞体外构建组织工程复合皮肤的研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| 英文缩略词表 |
| 第1篇 前言 |
| 第2篇 文献综述 |
| 第1章 表皮干细胞 |
| 1.1 表皮干细胞的分布及其特性 |
| 1.2 表皮干细胞的分离与培养 |
| 1.3 表皮干细胞的鉴定 |
| 1.4 表皮干细胞增殖分化的调控机制 |
| 1.5 表皮干细胞的应用 |
| 第2章 组织工程皮肤 |
| 2.1 组织工程皮肤的种子细胞 |
| 2.2 组织工程皮肤的支架材料 |
| 2.3 组织工程皮肤的分类 |
| 2.4 展望 |
| 第3篇 实验研究 |
| 第1章 hKSCs的分离培养及其生物学特性 |
| 1.1 hKSCs的分离培养 |
| 1.2 hKSCs的一般生物学特性 |
| 1.3 讨论 |
| 第2章 hDFs的分离培养及其生物学特性 |
| 2.1 hDFs的分离培养 |
| 2.2 hDFs的一般生物学特性 |
| 2.3 讨论 |
| 第3章 真皮支架材料的制备及其理化特性 |
| 3.1 真皮支架材料的制备 |
| 3.2 支架材料的理化特性 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 构建组织工程复合皮肤的实验研究 |
| 4.1 组织工程真皮的制备 |
| 4.2 组织工程复合皮肤的制备 |
| 4.3 讨论 |
| 第4篇 结论 |
| 课题创新性总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
（8）旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因抗肿瘤效应研究（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 天然抗肿瘤药物的研究进展 |
| 1.1 抗肿瘤植物药 |
| 1.2 微生物抗肿瘤 |
| 1.3 动物毒素抗肿瘤 |
| 1.4 寄生虫的抗肿瘤作用 |
| 1.5 结语 |
| 第2章 肿瘤DNA 疫苗研究进展 |
| 2.1 抗肿瘤DNA 疫苗可能的免疫机制 |
| 2.2 抗肿瘤DNA 疫苗的基本结构 |
| 2.3 提高肿瘤DNA 疫苗抗肿瘤效果的研究进展 |
| 2.4 DNA 疫苗的免疫途径 |
| 2.5 结语 |
| 第3章 旋毛虫抗肿瘤机制研究进展 |
| 3.1 肿瘤的生物治疗 |
| 3.2 旋毛虫抗肿瘤研究进展 |
| 3.3 旋毛虫抗肿瘤的机理 |
| 3.4 结语 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第1章 旋毛虫cDNA 表达文库的构建 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第2章 旋毛虫与Sp2/0 肿瘤相关抗原基因的筛选 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 旋毛虫与Sp2/0 骨髓瘤细胞相关抗原基因全长的克隆 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 旋毛虫与Sp2/0 骨髓瘤相关抗原基因核酸疫苗的制备 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 旋毛虫核酸疫苗对Balb/C 小鼠体内Sp2/0 肿瘤抑制作用观察 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻博期间发表的学术论文及其他成果 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| CURRICULUM VITAE |
（9）新疆褐牛Toll样受体4外显子Ⅲ多态性与奶牛体细胞评分的相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 研究背景 |
| 1.1 炎症研究进展 |
| 1.1.1 概述 |
| 1.1.2 炎症的分类 |
| 1.1.3 炎症的原因及其影响因素 |
| 1.2 奶牛乳房炎研究概况 |
| 1.2.1 奶牛乳房炎的分类 |
| 1.2.2 奶牛乳房炎的病因 |
| 1.2.3 奶牛乳房炎的发病机理 |
| 1.2.4 奶牛乳房炎的诊断 |
| 1.2.5 体细胞评分(Somatic cell seore,SCS) |
| 1.2.6 乳房炎抗性功能基因的筛选及研究 |
| 1.3 TLRs(Toll-like Receptors)研究进展 |
| 1.3.1 TLRs 的发现 |
| 1.3.2 TLRs 结构及分布 |
| 1.3.3 TLRs 成员及其配体 |
| 1.3.4 TLRs 介导的信号传导通路 |
| 1.3.5 TLR4 与疾病 |
| 1.4 本试验中涉及的分子生物学方法 |
| 1.4.1 限制性片断长度多态性 |
| 1.4.2 实时定量PCR |
| 1.5 本试验的试验思路与意义 |
| 第二章 采用测序技术对TLR4 基因外显子3 多态位点进行检测 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验样本的采集 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要分析工具软件 |
| 2.1.4 试验试剂 |
| 2.1.5 试剂配制 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 牛血液基因组DNA 的提取 |
| 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳检测 |
| 2.2.3 TLR4 基因外显子3 的 PCR 扩增 |
| 2.2.4 PCR 产物的检测 |
| 2.2.5 PCR 产物胶回收(杭州博日试剂盒) |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 牛血液基因组DNA 提取结果 |
| 2.3.2 TLR4 基因外显子3 PCR 扩增结果及测序结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 DNA 提取的优化 |
| 2.4.2 对试验中所采用的PCR 产物直接测序方法的讨论 |
| 第三章 TLR4 基因外显子3 多态性位点的 PCR-RFLP 检测 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验样本的采集 |
| 3.1.2 主要仪器设备 |
| 3.1.3 主要分析工具软件 |
| 3.1.4 试验试剂 |
| 3.1.5 试剂配制 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 牛血液基因组DNA 的提取 |
| 3.2.2 TLR4 基因外显子3 多态性位点的 PCR-RFLP 检测 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 TLR4 基因外显子3 多态位点PCR-RFLP 结果 |
| 3.3.2 TLR4基因外显子3 TLR4 E3+1656和E3+2021位点等位基因频率和基因型频率 |
| 3.3.3 TLR4 基因外显子3 TLR4 E3+1656 和E3+2021 位点在奶牛群体中的遗传特性 |
| 3.3.4 TLR4 基因外显子3 酶切多态性与奶牛乳房炎的关联分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 关于TLR4 基因多态性及群体遗传分析 |
| 3.4.2 TLR4 基因多态性与奶牛乳房炎的关系 |
| 3.4.3 TLR4 基因多态性与奶牛品种和年龄的关系 |
| 第四章 处于TLR 信号通路上相关基因的定量分析 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验样本的选择 |
| 4.1.2 主要仪器设备 |
| 4.1.3 主要分析工具软件 |
| 4.1.4 试验试剂 |
| 4.1.5 试剂配制 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 总RNA 的提取及检测 |
| 4.2.2 RT-PCR 制备cDNA 及其纯化 |
| 4.2.3 TLR4 E3+2021 位点不同基因型个体的基因表达定量分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 牛血液总RNA 提取结果 |
| 4.3.2 目的基因cDNA 片段普通PCR 产物电泳 |
| 4.3.3 目的基因质粒DNA 线性化 |
| 4.3.4 基因测序结果 |
| 4.3.5 基因标准曲线 |
| 4.3.6 Quantitative Real-Time PCR 扩增曲线 |
| 4.3.7 基因熔解曲线 |
| 4.3.8 基因表达量与不同基因型个体的相关分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 关于RNA 操作的讨论 |
| 4.4.2 关于Quantitative Real-Time PCR |
| 4.4.3 TLR4 基因多态性与基因mRNA 表达量的关系 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（10）BLG/hLF基因转染山羊乳腺上皮细胞及TSA对转染基因表达的影响（论文提纲范文）
| 缩略词 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 转基因动物乳腺生物反应器的研究进展 |
| 1.1 国外转基因动物乳腺生物反应器的研究进展 |
| 1.2 国内转基因动物乳腺生物反应器的研究进展 |
| 1.3 转基因动物乳腺生物反应器的优点 |
| 第二节 体细胞介导的转基因动物乳腺生物反应器研究进展 |
| 2.1 体细胞介导的核移植技术制备转基因动物成为可能 |
| 2.2 体细胞转基因的优势 |
| 2.3 体细胞核移植制备动物乳腺生物反应器目前存在的问题 |
| 第三节 转基因沉默的研究进展 |
| 3.1 转基因沉默的机制 |
| 3.1.1 组蛋白的乙酰化与去乙酰化与转基因沉默 |
| 3.1.2 DNA 甲基化与转基因沉默 |
| 3.1.3 组蛋白甲基化与转基因沉默 |
| 3.2 组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACis)及其作用机制 |
| 第二章 转染用人乳铁蛋白CDNA 乳腺特异性表达载体的准备 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 仪器 |
| 1.1.2 分子生物学试剂 |
| 1.1.3 基因来源 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 主要试剂的配制 |
| 1.2.2 常规分子生物学操作方法 |
| 1.2.3 BLC-14 载体质粒的构建 |
| 1.2.4 乳腺特异性载体的制备 |
| 1.2.5 转染基因的酶切、回收 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三章 奶山羊乳腺上皮细胞的培养 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要器械与仪器 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 试剂的配置 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 鼠尾胶原的制备及使用 |
| 1.2.2 奶山羊乳腺上皮细胞的获得与培养 |
| 1.2.2.1 奶山羊的催乳 |
| 1.2.2.2 奶山羊乳腺组织的手术取得 |
| 1.2.2.3 胶原酶消化法分离乳腺上皮细胞 |
| 1.2.2.4 细胞活力的测定 |
| 1.2.2.5 细胞计数 |
| 1.2.2.6 乳腺上皮细胞的纯化 |
| 1.2.2.7 细胞生长状况的观察 |
| 1.2.2.7.1 细胞贴壁率的测定 |
| 1.2.2.7.2 细胞生长曲线的测定 |
| 1.2.2.8 细胞冻存与解冻 |
| 1.2.2.8.1 细胞冻存 |
| 1.2.2.8.2 细胞的解冻 |
| 1.2.2.8.3 细胞存活测试 |
| 2 结果 |
| 2.1 奶山羊乳腺上皮细胞的原代培养 |
| 2.2 奶山羊乳腺上皮细胞的纯化与传代 |
| 2.3 细胞的贴壁率 |
| 2.4 细胞生长曲线 |
| 2.5 细胞的冻存与复苏 |
| 3 讨论 |
| 第四章 人乳铁蛋白基因电转染山羊乳腺上皮细胞克隆的获得及TSA 的处理 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 仪器 |
| 1.1.2 试剂及试剂的配制 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 乳腺特异性载体的准备 |
| 1.2.2 转染基因的酶切、回收 |
| 1.2.3 电转染山羊乳腺上皮细胞 |
| 1.2.4 药物筛选 |
| 1.2.5 细胞株的获得与扩大培养 |
| 1.2.6 细胞株的PCR 检测 |
| 1.2.6.1 细胞株染色体 DNA 的提取 |
| 1.2.6.2 PCR 检测 |
| 1.2.7 TSA 处理及ELISA 检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 G418 筛选浓度的确定 |
| 2.2 电转染用电压、脉冲时间的确定 |
| 2.3 细胞电转染 |
| 2.4 转染细胞DNA 的PCR 检测 |
| 2.5 整合BLC-14 基因细胞的诱导表达及TSA 的处理 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 细胞的电转染 |
| 3.2 G418 的筛选 |
| 3.3 单细胞株的获得 |
| 3.4 体细胞来源和培养代数 |
| 3.5 TSA 的处理 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
四、无蛋白质医用手套问世（论文参考文献）
- [1]稀土氧化钕致大鼠肺损伤作用机制的实验研究[D]. 王素华. 山东大学, 2016(10)
- [2]华蟾素抑制TGF-β1诱导的人结肠癌SW480细胞上皮-间质化的实验研究[D]. 沈国强. 福建医科大学, 2014(02)
- [3]瑞京乳胶制品公司发展战略研究[D]. 刘海涛. 北京化工大学, 2014(08)
- [4]自噬参与衰老皮肤创面愈合的相关实验研究[D]. 宣敏. 南方医科大学, 2014(12)
- [5]人源性TRAb Fab段抗体库的构建筛选与鉴定[D]. 杜晓明. 天津医科大学, 2012(08)
- [6]腺病毒介导人促红细胞生成素在兔乳腺高效表达的研究[D]. 刘志滨. 西北农林科技大学, 2009(06)
- [7]利用人表皮干细胞和人真皮成纤维细胞体外构建组织工程复合皮肤的研究[D]. 马英智. 吉林大学, 2009(07)
- [8]旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因抗肿瘤效应研究[D]. 段玲欣. 吉林大学, 2009(08)
- [9]新疆褐牛Toll样受体4外显子Ⅲ多态性与奶牛体细胞评分的相关性研究[D]. 林嘉鹏. 新疆农业大学, 2009(11)
- [10]BLG/hLF基因转染山羊乳腺上皮细胞及TSA对转染基因表达的影响[D]. 徐冬兰. 扬州大学, 2008(02)