一、多药耐药相关基因在胃癌的表达（论文文献综述）
杨宝玉[1]（2021）在《EZH2表达调控对胃癌生长及化疗敏感性的影响》文中研究说明目的:1.通过公共数据库、胃癌组织和胃癌细胞三方面分析EZH2在胃癌的表达情况及与临床病理参数、化疗疗效、无进展生存时间的关系。2.通过体内外实验探讨EZH2基因对胃癌生长和化疗敏感性的影响。3探索EZH2介导胃癌生长和耐药的相关分子生物学机制。方法:1.利用公共数据库生物信息学方法分析胃癌组织中EZH2基因的表达;用定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测胃癌细胞株中EZH2 m RNA和蛋白的表达;免疫组化法检测胃癌组织中EZH2蛋白的表达,并分析其与临床病理参数、化疗有效率和无进展生存期的相关性。2.构建慢病毒载体sh EZH2,慢病毒感染EZH2高表达人胃癌细胞株MGC803,并筛选出稳转株,应用Real-time Q-PCR和Western blot检测干扰效果。3.体外细胞学试验,采用CCK-8增殖试验、Transwell侵袭试验和划痕试验研究人胃癌细胞株MGC803在EZH2沉默前后增殖、侵袭和迁移的变化;通过CCK-8毒性实验对比EZH2沉默前后对紫杉醇、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶化疗敏感性的改变及EZH2小分子抑制剂GSK126与这些化疗药物是否具有协同作用。体内研究,构建EZH2沉默人胃癌细胞株裸鼠移植瘤模型,腹腔灌注紫杉醇,研究EZH2下调对胃癌生长和化疗敏感性的影响。4.首先我们以胃腺癌TCGA（The Cancer Genome Atlas,TCGA）转录组数据集进行KEGG信号通路富集分析,探讨受EZH2激活调节的下游途径;接着通过细胞转录组测序分析,进一步探索EZH2在胃癌的相关分子机制和信号通路;然后利用Western blot实验验证信号通路关键蛋白表达;最后通过Real-time Q-PCR技术检测EZH2下调对信号通路下游生长和耐药相关分子的影响,探索胃癌生长和耐药的分子机制。结果:1.公共数据库结果表明,胃癌中EZH2的表达高于正常组织或相应癌症相邻的组织;MGC803、BGC823、AGS和HGC27胃癌细胞株EZH2 m RNA和蛋白均有表达,其中MGC803表达最高;免疫组化结果显示:EZH2基因在晚期胃癌中呈现高表达,EZH2蛋白表达与病理类型及化疗疗效相关,且EZH2蛋白的表达与化疗疗效呈现负相关。EZH2高表达组中位TTP低于EZH2低表达组,具有统计学差异。2.EZH2-sh RNA慢病毒载体成功构建并转染人胃癌细胞系MGC803,应用Real-time Q-PCR和Western blot检测干扰效果,证明成功构建了稳定沉默EZH2的胃癌细胞株MGC803。3.体外细胞学实验:CCK-8增殖实验结果显示,EZH2沉默组的OD值和细胞增殖率较对照组显着下降,差异有统计学意义;Transwell实验表明,EZH2沉默组的转移细胞数量显着减少,具有统计学意义;划痕损伤实验表明,与对照组MGC803-Vector对比,MGC803-sh EZH2细胞划痕愈合率从12小时就有所下降,到36小时出现明显下降,差异均具有统计学意义。CCK8毒性实验表明,EZH2沉默使MGC803细胞对紫杉醇、奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的敏感性提高,IC50值明显下降,具有明显统计学差异;转化为抑制率曲线图,可以看出EZH2基因沉默后紫杉醇、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶作用于MGC803-sh EZH2细胞的抑制效果增强。药物协同研究发现,EZH2抑制剂GSK126和紫杉醇、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶均具有协同作用;其中GSK126联合紫杉醇的CI值随着紫杉醇剂量的增加而增大,说明小剂量的紫杉醇与GSK126表现出更好的协同作用。体内裸鼠移植瘤实验发现,沉默EZH2使胃癌细胞株MGC803的裸鼠皮下成瘤能力减弱,对紫杉醇的化疗敏感性提高。4.公共数据库KEGG信号通路富集分析结果显示,EZH2通过m TOR信号传导途径、MAPK信号传导途径、P53信号传导途径及ERBB信号传导途径介导胃癌的生物学特性。细胞转录组测序分析结果显示,EZH2沉默前后筛选鉴定出1735个DEGs,其中表达上调的1131个,表达下调的604个。GO功能富集分析显示上调的DEGs主要与靶向膜蛋白翻译、细胞质翻译、核糖核酸代谢、线粒体电子传递等有关,下调的DEGs主要与生长发育的调控、信号通路的调控、磷酸化的调控、蛋白激酶C活性的调节等有关。KEGG信号通路富集分析显示具有显着性意义的信号通路有19条,其中与胃癌相关的信号通路有肿瘤途径、PI3K-Akt信号通路、Fox O信号通路、Erb B信号通路、HIF-1信号通路、TGF-β信号通路等;蛋白印迹实验证实EZH2沉默使MGC803胃癌细胞PI3K和p-Akt蛋白的表达下调,而AKT的表达总量无明显变化,说明EZH2的下调可阻断AKT的磷酸化过程,从而抑制P13K-Akt信号通路的过度活化。Real-time Q-PCR技术检测EZH2参与调控胃癌生长和耐药的相关分子机制,结果显示EZH2沉默使胃癌凋亡分子P53 m RNA表达上调、Bcl-2 m RNA表达下调;胃癌耐药相关分子MDR-1、MRP-1、LRP、BCRP、GST-πm RNA表达下调,差异均具有统计学意义。结论:1.EZH2在胃癌中呈现高表达,且高表达的EZH2可能与肿瘤进展、预后不良及化疗敏感性差有关。2.成功构建了EZH2稳定沉默的人胃癌细胞株MGC803,为后来实验奠定了基础。3.体内外实验证实EZH2沉默使胃癌生长减慢、侵袭迁徙能力下降,对化疗药物的敏感性提高。4.EZH2抑制剂GSK126与紫杉醇、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶具有协同作用,EZH2基因有可能成为胃癌新的治疗靶点。5.EZH2激活PI3K-AKT信号通路是胃癌的重要机制之一;EZH2通过调控凋亡相关分子和耐药相关分子的表达介导胃癌的生长和耐药性。
刘媛[2]（2021）在《长链非编码RNA参与骨肉瘤和胃癌增殖、迁移与耐药的机制研究》文中进行了进一步梳理背景:恶性肿瘤是严重危害我国居民生命健康的主要慢性疾病。根据组织来源的不同,将上皮组织来源的恶性肿瘤统称为癌,而间叶组织来源的则统称为肉瘤,其中骨肉瘤是最常见的间叶组织恶性肿瘤,胃癌则是常见的腺癌。无论是骨肉瘤还是胃癌,探究其发病原因及机制,找到新的治疗靶点和生物标志物,仍是目前研究亟需解决的问题,从而为临床诊断和治疗提供了新的思路和理论基础。lncRNA是一种非编码的RNA转录物,它涉及调控多种机制,包括转录,翻译,蛋白质修饰以及某些信号通路,其中lncRNA可以作为miRNA的海绵,进而调节miRNA的水平和下游基因表达,发挥重要病理生理作用。LBX2-AS1是新近在食管鳞状上皮癌发现的一种促癌lncRNA,作为ceRNA调控靶基因的表达,且能促进胃癌、肝癌、卵巢癌、神经胶质瘤等多种肿瘤的发展和进程[1-6],但在骨肉瘤中作用却没有报道;LncRNA TUG1则在肺癌[7]、卵巢癌[8]、胰腺癌[9]等多种肿瘤中高表达,还参与调控细胞增殖、凋亡和EMT信号通路,但TUG1在胃癌中的作用还尚不清楚。本文选定恶性肿瘤两种不同组织来源的典型病理类型骨肉瘤及胃癌作为研究对象,探索lncRNAs参与骨肉瘤和胃癌的发生发展。第一部分:长链非编码RNA LBX2-AS1通过LBX2-AS1/miR-5010-5p/WNT7B轴促进骨肉瘤细胞的增殖和迁移目的:（1）阐明LBX2-AS1在骨肉瘤细胞中的表达水平并探究是否参与调控骨肉瘤的增殖和迁移。（2）阐明LBX2-AS1是否通过作为ceRNA竞争性吸附miR-5010-5p调控下游WNT7B表达,进而影响骨肉瘤的生物学功能。方法:首先培养人成骨细胞h FOB1.19和骨肉瘤Saos-2,143b细胞,通过荧光定量PCR检测LBX2-AS1在成骨细胞和骨肉瘤细胞的表达水平,然后在Saos-2与143b细胞中转染si-LBX2-AS1构建LBX2-AS1低表达细胞株,采用RT-PCR检测si-LBX2-AS1在细胞中的转染效率,通过CCK8实验、划痕实验和Transwell实验检测LBX2-AS1低表达细胞株增殖、迁移及侵袭能力。通过直接结合种子序列预测的方法预测LBX2-AS1调控的miRNA以及下游靶基因,通过荧光素酶报告、Western bolt和RT-PCR验证了LBX2-AS1与miR-5010-5p和WNT7B的关系。采用恢复实验分析LBX2-AS1和miR-5010-5p同时沉默对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:（1）荧光定量PCR的结果显示,与成骨细胞相比,LBX2-AS1在骨肉瘤细胞中的表达水平显着升高。（2）RT-PCR结果表明,对照组LBX2-AS1的表达量是转染si-LBX2-AS1骨肉瘤细胞株的3倍（p<0.05）,LBX2-AS1低表达细胞株构建成功。（3）CCK-8、划痕实验和Transwell实验结果验证了LBX2-AS1促进骨肉瘤细胞的增殖和迁移。（4）预测结果显示miR-5010-5p可能是LBX2-AS1调控的miRNA,而WNT7B则是被调控的下游靶基因,荧光素酶报告实验结果显示miR-5010-5p分别与LBX2-AS1（WT）和WNT7B（WT）共转染可以影响荧光素酶的强度,证明了LBX2-AS1可以与miR-5010-5p结合,而WNT7B则是miR-5010-5p的靶标,Western bolt和RT-qPCR结果验证了LBX2-AS1作为ceRNA吸附miR-5010-5p上调WNT7B。（5）CCK-8、划痕和迁移实验结果证明,在LBX2-AS1低表达细胞中沉默miR-5010-5p,因沉默LBX2-AS1而抑制的增殖和迁移可以被恢复,即LBX2-AS1通过调控miR-5010-5p/WNT7B轴促进骨肉瘤细胞增殖和迁移。结论:（1）LBX2-AS1在骨肉瘤中高表达并促进骨肉瘤的增殖和迁移。（2）LBX2-AS1作为ceRNA通过调控miR-5010-5p/WNT7B轴促进骨肉瘤进展。第二部分:TUG1在胃癌中作用的生物信息学分析及实验验证目的:（1）生物信息学分析TUG1在胃腺癌中的表达水平、与临床特征的相关性以及诊断价值。（2）生物信息学分析TUG1在胃腺癌中的潜在作用。（3）实验初步验证TUG1对胃癌多药耐药,迁移,侵袭的影响。方法:（1）下载TCGA数据库中胃腺癌相关的临床数据和RNAseq数据,分析TUG1在配对和非配对的正常组织和癌组织中的表达。（2）使用TCGA数据库中胃腺癌相关临床数据分析TUG1表达与临床特征之间的相关性。（3）使用KM plotter数据库分析TUG1对胃腺癌患者总生存率OS（n=881）、首次进展时间FP（n=645）、和无疾病进展时间PFS（n=503）的影响。（4）使用TCGA数据库中胃腺癌相关的临床数据和RNAseq数据分析TUG1在胃腺癌中的诊断价值。（5）分析TCGA数据库胃腺癌中TUG1的共表达基因,对其进行GO/KEGG富集分析。（6）将TCGA数据库中胃腺癌相关RNAseq数据按照TUG1的高低表达进行分组,GSEA分析TUG1相关的生物学过程和信号通路。（7）免疫组化验证TUG1在胃癌组织切片中的表达,同时分析其与临床病理特征的相关性及生存分析。（8）RT-PCR比较TUG1在胃癌细胞株及耐药细胞株的表达差异;（9）构建稳转的TUG1过表达的胃癌细胞株和沉默的耐药细胞株,通过流式细胞术和RT-PCR检测转染成功与否;（10）通过CCK-8、划痕和迁移实验检测TUG1过表达及沉默对胃癌细胞的增殖、迁移和耐药的影响。结果:（1）胃腺癌组织中的TUG1基因表达水平在配对样本和非配对样本中均显着高于正常组织。（2）TUG1的高表达与年龄（p=0.044）,抗反流治疗（p=0.001）,疾病特异性生存率（p=0.038）显着相关。（3）TUG1高表达与不良的总生存率,无进展生存率和首次进展率相关。（4）GO/KEGG富集分析结果表示TUG1参与调控细胞周期和DNA复制相关通路。（5）GSEA分析表示TUG1参与增殖的正向调节,底物依赖性细胞迁移以及凋亡执行阶段的调节。（6）RT-PCR结果显示TUG1在胃癌耐药株中表达高于胃癌细胞株。（7）TUG1过表达的胃癌细胞株及沉默的耐药细胞株构建成功。（8）CCK-8、划痕和迁移实验结果表明TUG1促进胃癌细胞的耐药、迁移和侵袭。结论:（1）生物信息学分析TUG1在胃腺癌中可以作为诊断的分子标志物,并参与调控增殖,迁移以及DNA复制相关通路（2）实验验证结果表明TUG1上调促进了细胞增殖和迁移进而增加胃癌耐药。
王旭[3]（2021）在《GCS参与调控维拉帕米逆转胃癌化疗多药耐药的作用研究》文中进行了进一步梳理研究背景:胃癌（gastric carcinoma）是消化系统最为常见的恶性肿瘤之一,其起源于胃腔内的粘膜上皮组织。据2021年资料数字统计,去年全球范围内新确诊胃癌的患者高达108万例,占比5.6%,位居第5位,因罹患胃癌而死亡的患者累计有76万例,高居恶性肿瘤死亡排行榜第4位。据2020年中国癌症年报统计,我国胃癌新发病几率和死亡人数均高居第三位。早期胃癌患者因无明显的症状通常被忽略,其具有隐蔽性且无特异性,可时隐时现,也可长期存在,等出现不适症状时就诊已确诊进展期,这也和由我国医学卫生资源的分配不平衡且癌症普查率较低有着密切关系,此时罹患胃癌的患者遗憾地错过了最佳的手术根治时机,临床上针对进展期胃癌患者则采用化学治疗、放射治疗、生物靶向精准治疗等综合治疗。同时由于胃癌对放疗的不敏感,而且放疗产生较多的副作用限制了放疗的使用,内科多线综合化疗已然成为治疗中晚期胃癌的主要手段之一,希望能以此延长患者的生命周期,提高患者的生活质量。对于早期胃癌患者,即使有机会行根治性手术,大约有80%的早期胃癌患者在手术根治治疗后的3年内出现局灶复发或远处脏器侵袭转移,其5年生存率低于30%。而中晚期胃癌的首选治疗方案是内科综合化疗,国内外多项研究表明:肿瘤多药耐药（multi drug resistance,MDR）是造成肿瘤内科化疗无效的关键因素。肿瘤多药耐药是指肿瘤细胞在一种抗癌药物治疗后所产生的耐药性,后期该肿瘤细胞对其它未曾接触过的、作用机制及分子结构完全不同的其它抗癌药物也同时产生交叉耐药的一种现象。肿瘤多药耐药分为天然耐药和获得性耐药。多因素共同导致的胃癌细胞对抗癌药物产生耐药性是当下治疗中晚期胃癌患者十分突出的问题。因此,如何克服肿瘤细胞的多药耐药,更进一步提高抗癌药物的疗效已然成为目前治疗肿瘤亟待解决的问题,进一步深入的研究胃癌细胞耐药所产生的分子机制、寻求能运用于临床的药物及方法,是研究胃癌治疗的重要契点。随着多种用于临床治疗的手段不断被发明和发展,特别是针对肿瘤治疗的方式也日益丰富,除手术、化疗、放疗外,新型的介入治疗学使肿瘤患者在整个治疗过程中受益。靶动脉灌注化疗是联合穿刺、插管,在X线引导下将导管精准地选择性插入瘤灶的供血靶动脉内,通过DSA对病灶的部位、数量、形态等进行分析、诊断后,将高浓度的抗癌药物通过导管精准地直接灌注于瘤体,而除瘤体外其它组织器官药物浓度低,极大地降低全身副反应。从19世纪80年代开始,有研究者开始尝试使用通过靶动脉精准局部灌注化疗药物以此来治疗食道恶性肿瘤,研究发现通过靶动脉灌注化疗药物的治疗方法能够显着提高抗癌治疗疗效,且副反应明显小于传统化疗。维拉帕米（Verapamil,VER）是一类Ca2+通道阻滞剂,是治疗心脏病的常见药物,同时维拉帕米也是早期发现的可以通过改变细胞内药物浓度从而降低肿瘤耐药性的药物。既往研究认为VER主要是通过抑制P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）的表达及活性来实现抗肿瘤多药耐药的,然而,近来多数研究发现VER还可通过其他非经典途径来增加其抗耐药性。体外实验表明,VER对多数肿瘤细胞具有抗耐药性,且有效作用浓度为6.0～10.0 μmol/L,但静脉用VER的安全浓度为1.0～2.0 μmoL/L,超出此范围则会导致心率下降、血压下降、房室传导阻滞等严重的不良反应,导致VER作为肿瘤耐药逆转剂不能在临床治疗晚期恶性肿瘤中广泛应用。本课题组通过前期犬实验证实,当VER在组织浓度是外周静脉血浓度的50-100倍时,VER能成功逆转肝恶性肿瘤的多药耐药,且实验犬未发生不良的心血管反应。本研究采用靶动脉灌注VER联合静脉应用抗癌药物治疗中晚期胃癌患者,结果表明能显着提高治疗疗效,但仍有近30%的患者治疗效果不理想。因此,寻找VER逆转肿瘤细胞耐药的关键基因,以期增强其疗效成为亟待解决的问题。有学者提出寻找凋亡相关因子,并验证其为肿瘤细胞多药耐药的新靶点。研究表明,抗凋亡基因Bcl-2在肿瘤耐药形成过程中表达量明显增高,导致肿瘤细胞的多药耐药。这些基因相互作用调控细胞的凋亡程序的同时,也在细胞耐药中也有一定影响。葡萄糖神经酰胺合成酶（glucosylcemmide synthase,GCS）是神经酰胺代谢合成葡糖脑苷脂的关键酶,其活性增高可导致肿瘤细胞获得性多药耐药的产生。本团队前期研究表明VER能够逆转部分晚期恶性肿瘤细胞的多药耐药。本研究通过筛选出有效预测VER逆转化疗耐药能力的个体差异的分子标志物,将为TACE+VER联合使用提供临床疗效预测手段和理论依据,对于完善VER个体化治疗有着重要意义。本课题组前期研究通过实时荧光定量PCR及Western blotting实验表明化疗联合VER通过抑制Bcl-2表达及活性从而促进恶性肿瘤细胞的凋亡、增强细胞对化疗敏感性,但其中的具体作用机制有待进一步深入研究,旨在寻找与VER逆转恶性肿瘤细胞耐药的关键基因,为靶动脉灌注VER治疗胃恶性肿瘤提供理论依据。第一章胃癌细胞hMDR1/P-gp表达水平与维拉帕米逆转化疗耐药能力相关性研究目的:探讨在胃癌细胞株中,hMDR1/P-gp水平与VER抗耐药能力差异的相关性。方法:1.实时荧光定量PCR和Western blot方法分别检测hMDR1/P-gp在3株胃癌细胞株（差分化人胃癌细胞株AGS、低分化人胃癌细胞株BGC-823和中分化人胃癌细胞株SGC-7901）中表达水平;2.CCK-8法分别检测不同胃癌细胞株对抗癌药物（5-Fu、ADM、DDP）的敏感性;3.CCK-8法分别检测胃癌细胞株对VER联合上述3种抗癌药物的药物敏感性;4.VER逆转胃癌化疗耐药能力的判断。结果:1.hMDR1/P-gp在基因和蛋白层面的表达水平在不同分化程度的胃癌细胞株中的表达水平差异明显,与SGC-7901相比,AGS中的表达量最高;2.BGC-823和AGS对顺铂耐药性大于SGC-7901;SGC-7901和AGS对阿霉素耐药性显着大于BGC-823,SGC-7901和AGS对5-氟尿嘧啶耐药性大于BGC-823;3.用固定浓度的VER（4.91μg/mL）联合抗癌药物分别处理胃癌细胞,均不同程度降低了胃癌细胞对3种抗癌药物的IC50值,提示VER提高了抗癌药物的敏感性;4.在SGC-7901细胞中,VER逆转ADM化疗耐药能力最强（Relative IC50=6.77）,与BGC-823细胞相比有显着性差异（Relative IC50=1.66）。结论:hMDR1/P-gp水平与VER逆转胃癌细胞对ADM化疗耐药能力之间无相关一致性。第二章胃癌耐药细胞株的构建并验证其耐药效率目的:建立人胃癌SGC-7901/5-Fu耐药细胞株。方法:应用间歇作用体外诱导法构建胃癌耐5-Fu细胞株SGC-7901/5-Fu,反复短期暴露并逐步增加5-Fu的浓度,每月做相关检测,CCK-8法对药物的敏感性进行检测,并在耐药细胞株成功构建后第3天、第15天、后每间隔15天对其稳定性进行检测。结果:经历6个月建成人胃癌5-氟尿嘧啶耐药细胞株SGC-7901/5-Fu,并与ADM抗癌药存在交叉耐药。结论:SGC-7901/5-Fu细胞株具有耐药性,且耐药性稳定。第三章介导维拉帕米逆转胃癌细胞化疗耐药能力差异性基因的筛选、验证及机制研究目的:筛选出介导VER逆转胃癌细胞化疗耐药能力的差异基因并验证,初步探讨其作用机制。方法:1.通过生物信息学分析及文献资料筛选出可能的差异基因;2.实时荧光定量PCR/Western blot法检测候选基因/蛋白在胃癌细胞中的表达;3.GCS基因表达沉默或过表达后,CCK-8法检测VER逆转胃癌耐药细胞对ADM化疗耐药能力的变化;4.GCS基因表达沉默及过表达后,Annexin V-PI双染法检测VER促胃癌细胞凋亡能力的变化。结果:1.我们筛选出8个候选基因,分别为hMDR1、LRP、GST-π、GCS、TOPO Ⅱ、PrPc、MGr1-Ag、CIAPIN1;2.实时荧光定量PCR验证表明经过VER处理后,LRP、GCS、TOPOⅡ的表达存在差异,其中GCS差异最为明显（p<0.01）;3.western blot验证经VER处理后GCS蛋白表达存在差异,结合实时荧光定量PCR结果,本研究着重从GCS出发,初步探讨其参与调控VER逆转耐药的可能机制;4.在SGC-7901和SGC-7901/5-Fu、SGC-7901/ADM细胞株中,过表达GCS基因（pEGFP-GCS）,VER逆转胃癌细胞ADM化疗耐药能力明显减弱,表达沉默GCS基因（siR-GCS）,VER逆转胃癌细胞ADM化疗耐药能力明显增强;5.过表达GCS基因（pEGFP-GCS）后,VER促进ADM胃癌细胞凋亡能力明显减弱,表达沉默GCS基因（siR-GCS）后,VER促进ADM胃癌细胞凋亡能力较前增强;6.western blot法检测沉默GCS基因（siR-GCS）后,VER促进ADM胃癌细胞凋亡蛋白Bcl-2及ERK表达量明显减弱。结论:GCS介导了 VER逆转胃癌细胞ADM化疗耐药能力差异,VER可能通过改变GCS基因表达水平,可明显改变其逆转ADM化疗耐药及促进细胞凋亡能力。第四章 临床研究P-gp、GCS蛋白在胃癌组织样本中的表达目的:临床研究P-gp、GCS蛋白在胃癌两组极端病例（治疗明显好转组/治疗疾病进展组）组织样本中的表达。方法:1.选取2014.1-2017.12入住我院就诊中晚期胃癌患者11例,均经胃镜技术提取病变标本,病理证实为胃癌,每位患者每月介入1次共介入2-4次,评估患者治疗疗效,分为两组:维拉帕米抗耐药治疗有效组（治疗明显好转病例,CR）7例,维拉帕米抗耐药治疗无效组（治疗疾病进展病例,PD）5例;2.免疫组化法检测P-gp、GCS蛋白在两组胃恶性肿瘤组织样本中的表达。结果:1.P-gp蛋白主要表达于癌细胞胞浆/胞膜中,有效组的P-gp蛋白平均光密度值与无效组比较无明显差异;2.GCS蛋白主要表达于癌细胞胞核/胞浆中,在癌组织中,有效组的GCS平均光密度值明显低于无效组（p<0.01）。结论:1.维拉帕米抗耐药治疗有效组P-gp蛋白表达水平与无效组比较无明显差异;2.维拉帕米抗耐药治疗有效组GCS蛋白表达水平明显低于抗耐药治疗无效组。
李彩琳[4]（2021）在《基于AMPK为靶点的美洲大蠊多肽PAE2逆转肝癌多药耐药作用及机制研究》文中认为目的:基于AMPK靶点在细胞水平及动物水平上探讨美洲大蠊多肽PAE2逆转肝癌多药耐药细胞BEL-7402/5-FU的作用及其机制研究。方法:（1）以人肝癌敏感BEL-7402细胞和人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/5-FU为试验对象,ELISA法检测美洲大蠊多肽PAE2对细胞内AMPK含量的影响。RT-PCR法检测美洲大蠊多肽PAE2对细胞中AMPK m RNA含量的影响。（2）噻唑蓝法（MTT）测定AMPK激活剂AICAR作用时间及浓度。（3）划痕试验检测BEL-7402细胞、BEL-7402/5-FU细胞的侵袭转移能力以及美洲大蠊多肽PAE2对耐药细胞侵袭转移能力的影响。（4）RT-PCR法检测美洲大蠊多肽PAE2对细胞中侵袭转移相关因子MMP2,MMP9,m TOR,AKT,4EBP1 m RNA含量的影响。（5）激光共聚焦显微镜观察多肽PAE2对细胞自噬流LC3B的影响。（6）免疫细胞化学法（ICC）检测美洲大蠊多肽PAE2对细胞自噬相关蛋白P62的影响。（7）RT-PCR检测美洲大蠊多肽PAE2对自噬相关因子ATG5,ATG7,BECLIN,PIK3C3,LC3B,P62等m RNA的影响。（8）以Balb/c-nude为试验对象,裸鼠腋下接种人肝癌BEL-7402和BEL-7402/5-FU细胞,建立裸鼠皮下移植瘤模型。给予相应受试药物14天,观察裸鼠一般状态。裸鼠每天称重,隔天用游标卡尺记录肿瘤长径和短径,计算瘤体积。（9）裸鼠取材计算脏器指数及肿瘤重量。（10）裸鼠眼球取血,进行生化指标测定。（11）H&E染色观察多肽PAE2对裸鼠皮下移植瘤肿瘤组织及肝组织病理学的影响。（12）RT-PCR法检测美洲大蠊多肽PAE2对裸鼠肿瘤组织中侵袭转移相关因子MMP2,MMP9,m TOR,AKT,4EBP1 m RNA含量的影响。（13）实时荧光定量法（RT-PCR）检测美洲大蠊多肽PAE2对侵袭转移相关因子ATG5,ATG7,BECLIN,PIK3C3,LC3B,P62等m RNA的影响。结果:（1）ELISA结果显示,肝癌耐药细胞中耐药细胞中AMPK含量明显升高;美洲大蠊多肽PAE2可显着降低耐药细胞中AMPK的含量（P<0.05）。RT-PCR结果显示耐药细胞中AMPK m RNA表达量显着升高,美洲大蠊多肽PAE2可显着降低耐药细胞中AMPK m RNA的表达（P<0.05）。（2）经MTT法确定AMPK激活剂的IC20为0.006m M即1.55ug/m L（分子量258.23）。并以IC20作用48h作为后续细胞试验中与美洲大蠊多肽PAE2不同剂量组合用。（3）划痕试验结果显示,耐药细胞比敏感细胞具有更强的划痕愈合能力即侵袭转移能力,而美洲大蠊多肽PAE2可抑制细胞24h,48h划痕试验愈合率（P<0.05）。美洲大蠊多肽PAE2和AMPK激活剂联用后可减弱美洲大蠊多肽PAE2对划痕愈合率的影响（P<0.05）。（4）RT-PCR结果显示,相比于敏感细胞,耐药细胞中侵袭转移正相关因子MMP2m RNA、MMP9 m RNA、AKT m RNA表达量显着增高（P<0.05）,肝癌耐药组中m TOR m RNA则呈现增高趋势,而4EBP1 m RNA表达无显着变化。美洲大蠊多肽PAE2可降低耐药细胞中MMP2 m RNA、MMP9 m RNA、AKT m RNA、m TOR m RNA、4EBP1 m RNA、的表达且这种影响可通过与AICAR联用后抵消,但这种抵消效果并不呈现剂量依赖性。（5）激光共聚焦结果显示,与敏感细胞相比,耐药细胞可能具有更强的自噬能力,耐药细胞给予美洲大蠊多肽PAE2后可降低细胞中自噬流的产生,美洲大蠊多肽PAE2和AICAR合用后可加强细胞的自噬。（6）免疫细胞化学法检测自噬标志性蛋白P62在细胞中的表达,免疫细胞化学法结果显示,与敏感细胞相比,耐药细胞中P62表达量相对更少（P<0.05）,而给予美洲大蠊多肽PAE2后,细胞中P62呈现高表达状态;和单独给予美洲大蠊多肽PAE2相比,美洲大蠊多肽PAE2和AICAR联用后对细胞中P62蛋白的降低效果极为显着（P<0.05）。（7）RT-PCR试验结果显示,和敏感细胞相比,耐药细胞中ATG5,ATG7,BECLIN,PIK3C3,LC3B等m RNA呈现高表达状态（P<0.05）,而P62 m RNA则呈现极低表达状态（P<0.05）;单独给予美洲大蠊多肽PAE2后可降低细胞中ATG5,ATG7,BECLIN,PIK3C3,LC3B等m RNA的表达,同时升高P62 m RNA的表达;美洲大蠊多肽PAE2合用AICAR后,可升高ATG5,ATG7,LC3B m RNA的表达,降低P62 m RNA的表达,但联用后各组对PIK3C3 m RNA,BECLIN m RNA的表达并无显着影响或略成降低趋势。（8）裸鼠腋下接种敏感细胞BEL-7402和耐药细胞BEL-7402/5-FU后状态稳定,饮食饮水正常,给药后裸鼠出现体重下降,消瘦等情况。接种敏感细胞的裸鼠皮下移植瘤更容易成瘤,且更稳定,耐药细胞接种肿瘤成瘤率更低,且易发生肿瘤转移。瘤体积计算结果显示,接种肿瘤后5天左右瘤稳定生长,化疗药及美洲大蠊多肽PAE2对肿瘤均有一定的抑制效果。（9）裸鼠取材后称量瘤种后可见,敏感组瘤重远远超过耐药组,美洲大蠊多肽PAE2和索拉非尼能明显降低肿瘤的重量,联合用药组降低肿瘤重量效果更为显着。脏器计算结果显示,皮下接种肝癌敏感细胞和耐药细胞对裸鼠的心、脾、肺、肝、肾指数均无明显影响;给予相应受试药物后索拉非尼组裸鼠肝脏指数明显上升,表明阳性药索拉非尼对裸鼠肝脏具有一定的保护作用。美洲大蠊多肽PAE2低剂量以及美洲大蠊多肽PAE2联合AICAR后裸鼠肺脏指数、肾脏指数升高,可能是由于药物对裸鼠脏器具有一定的保护作用。（10）血清生化指标检测结果显示,敏感组及耐药组谷草转氨酶含量明显升高（P<0.05）,耐药组中谷丙转氨酶明显升高（P<0.05）;单独给予美洲大蠊多肽PAE2及联合给药后裸鼠血清中肌酐尿素氮均呈现上升趋势。（11）从肿瘤组织H&E染色结果可见,与正常组裸鼠肝脏比较,接种肿瘤后裸鼠肝脏细胞排列不规则,有皱缩现象,而给予化疗药物及美洲大蠊多肽PAE2后对耐药细胞的影响并不是很显着。肝癌皮下移植瘤不规则形态,给予相应药物后肿瘤细胞均出现形态变化,细胞核缩小或核碎裂的情况,多呈不规则状,也出现成片坏死的状态。（12）裸鼠皮下移植瘤RT-PCR结果显示,与敏感组比较,耐药组肿瘤组织中侵袭转移因子MMP2、MMP9、m TOR、AKT、4EBP1等m RNA表达量均显着升高（P<0.05）;给予化疗药物索拉非尼及单独给予美洲大蠊多肽PAE2后侵袭转移因子m RNA均显着降低;但PAE2联合用AICAR后仅仅可升高MMP2、MMP9、4EBP1等m RNA的表达量,对组织中m TOR、AKT等m RNA的表达无显着影响。（13）裸鼠RT-PCR结果显示,与敏感组比较,耐药组肿瘤组织中自噬相关因子ATG5、ATG7、BECLIN、PIK3C3、LC3B、P62等m RNA表达量均显着升高（P<0.05）,给予美洲大蠊后自噬相关因子m RNA表达量均降低,美洲大蠊多肽PAE2联合AICAR后可升高肿瘤组织中ATG5、BECLIN、LC3B、P62等m RNA的表达,而对ATG7、PIK3C3等m RNA无显着影响,可降低肿瘤组织中P62 m RNA的表达。结论:（1）耐药细胞BEL-7402/5-FU中AMPK含量及AMPK m RNA呈高表达,美洲大蠊多肽PAE2可降低细胞中AMPK的含量及AMPK m RNA的表达。（2）肝癌BEL-7402/5-FU细胞比BEL-7402细胞具有更强的侵袭转移及自噬能力。（3）美洲大蠊多肽PAE2可抑制耐药细胞的侵袭转移及自噬的发生,且这种抑制作用可通过联用AICAR后部分抵消。（4）美洲大蠊多肽PAE2体外对肝癌细胞侵袭转移、自噬的作用可能是通过AMPK来实现的。自噬是个极其复杂的过程,美洲大蠊多肽PAE2可能只影响其中部分过程。（5）美洲大蠊多肽PAE2对裸鼠肿瘤具有很好的抑制性;接种肿瘤对裸鼠肝脏组织影响极为严重,但短期给予美洲大蠊多肽PAE2对这种损伤无明显效果。（6）接种肝癌肿瘤细胞对裸鼠的肝脏损伤较为明显,化疗药物索拉非尼对肝脏具有一定的保护作用;而化疗药物和多肽PAE2均会增加裸鼠的肾脏负担。（7）裸鼠皮下接种肿瘤后对肝功能具有损伤作用,美洲大蠊多肽PAE2则会增加裸鼠的肾脏负担,（8）在裸鼠皮下移植瘤模型中,美洲大蠊多肽PAE2对侵袭转移及自噬相关因子的影响呈现一定趋势但并不如在细胞中明显。
葛宁[5]（2021）在《KCNMA1的上调促进维拉帕米逆转食管鳞状细胞癌对顺铂的化学耐药》文中研究表明研究背景:食管癌（esophagus cancer,EC）是消化系统常见的恶性肿瘤之一,2018年,全球新增57万例EC患者,且有50万例患者死于EC[1]。全球食管癌新增和死亡病例约有一半发生在中国,其在我国的发病率和死亡率占第六和第四位[2]。食管癌主要包括食管鳞状细胞癌（sophageal squamous cell carcinoma,ESCC）和食管腺癌（esophageal adenocarcinoma,EAC）两个亚型,美国和欧洲国家主要以EAC亚型为主,而我国食管癌患者90%以上都是ESCC亚型。目前手术、放疗和化疗是ESCC三大主要治疗手段。手术是早期局限性病灶患者的首要治疗方式,但由于早期食管癌临床症状不明显,很多患者发现即为中晚期而不能手术。放疗做为食管癌局部治疗主要手段之一,对于颈段食管癌及非手术食管癌具有不可替代的作用,但对于病灶长度较长及放疗后复发的患者作用有限。化学治疗和靶向药物治疗可部分延长中晚期或术后食管癌患者生存时间,受肿瘤耐药性的限制,标准化疗方案对晚期食管癌的反应率只有30%左右。探索食管癌细胞对化疗药物的耐药性,对食管癌治疗具有非常重要的临床意义。肿瘤细胞的耐药性有单药耐药和多药耐药两种形式,多药耐药是较为多见的耐药形式。既往研究认为药物耐药性与细胞内药物的浓度与分布改变、抗氧化体系激活、DNA损伤修复系统活化和细胞外基质等各种因素相关。维拉帕米（Verapamil,VER）是一种L-型的钙离子通道抑制剂,主要用于治疗心脑血管系统疾病。随着对其深入研究发现它可逆转肿瘤细胞多药耐药性（multidrugresistance,MDR）,有效逆转肿瘤多药耐药的浓度为6.0-10.0umol/L。传统静脉注射的安全浓度为1.0～2.0umol/L,但此浓度达不到有效逆转耐药浓度,通过动脉灌注药物的方式可使其局部组织浓度达到外周血液浓度的3-10倍。研究表明,通过VER逆转肿瘤的多药耐药,改善了化学药物治疗临床疗效,其中包括肝细胞癌、大肠癌、胃癌、肺癌和恶性腹水等。最初研究表明VER是通过调节P-gp蛋白的表达抗肿瘤MDR,VER能够抑制或下调P-gp的表达,阻止药物外排提高肿瘤化疗药物的杀伤作用。最近研究表明VER逆转肿瘤多药耐药的机制很有可能与P-gp无关。我们通过高通量筛选实验发现 SLIT3、KCNMA1、KLK1、LPAR1、CHRDL1、NID1 这6个候选基因与维拉帕米逆转耐药相关。其中KCNMA1基因在VER逆转ESCC细胞对顺铂（DDP,cisplatin）耐药中表达显着升高。本课题通过细胞实验、动物实验及临床资料层面研究KCNMA1基因表达与VER逆转肿瘤顺铂耐药之间的关系。第一章:KCNMA1的表达在VER逆转ESCC细胞耐药中的作用目的:本研究通过研究KCNMA1基因在ESCC组织和细胞中的表达差异,来研究KCNMA1基因的表达差异与VER逆转ESCC肿瘤耐药可能存在的关系,为肿瘤耐药的ESCC患者靶向治疗提供理论依据。基于这些实验,我们检测了 KCNMA1基因在ESCC中的表达;通过过表达或沉默表达KCNMA1基因,研究肿瘤细胞对顺铂的敏感性差异;通过经增强KCNMA1表达研究对ESCC增殖和凋亡的作用。通过这些实验,我们对VER逆转肿瘤MDR的机制有了更深的认识,为治疗ESCC患者提供临床证据。方法:1.CCK-8实验和集落形成实验验证检测VER联合顺铂对KYSE150、KYSE180和KYSE450三种ESCC细胞活力影响;2.高通量筛选测序,比较KYSE150、KYSE180中DPP组和VER+DPP组中基因表达差异,同时用qRT-PCR验证这种差异;3.WB检测VER组、DPP组、以及VER+DPP组中KCNMA1蛋白的表达;4.免疫组织化学法检测VER联合顺铂治疗的ESCC患者组织样本中KCNMA1的蛋白表达;5.通过沉默或过表达KCNMA1基因的表达,再用CCK-8法检测ESCC细胞对顺铂的细胞活力;6.通过抗增殖实验和凋亡实验,研究KCNMA1基因的表达与ESCC细胞增殖和细胞凋亡关系。结果:1.CCK-8实验和集落形成实验结果显示VER增加了 ESCC细胞对顺铂的敏感性,尤其是对KYSE150细胞,而VER对KYSE180细胞的作用小。因此本实验选择KYSE150细胞作为VER逆转敏感细胞,选择KYSE180细胞作为抗逆转模型细胞进行进一步研究;2.高通量转录测序结果显示,SLIT3、KCNMA1、NID1、KLK1、LPAR1和CHRDL1基因表达均表现出差异,并通过qRT-PCR验证了这种差异。与KYSE150 DDP组相比,KYSE150 DDP+VER组的KCNMA1表达明显上调,且KYSE150细胞中的KCNMA1表达水平高于KYSE180细胞中的表达水平;3.WB结果显示在KYSE180 DDP组和KYSE180 DDP+VER组之间,KCNMA1的蛋白表达没有显着差异,而在KYSE150 DDP+VER组中,KCNMA1显着上调;4.免疫组化结果表明对VER逆转方案呈现阳性患者中,KCNMA1的表达显着升高,而阴性患者中KCNMA1的表达无显着差异;5.通过过表达KCNMA1基因,可以显着增加KYSE150细胞对顺铂的敏感性,而沉默KCNMA1基因的表达后,KYSE150细胞对顺铂的敏感性下降;6.增殖和凋亡实验结果表明,KCNMA1的表达能够增强了 VER对ESCC细胞的抗增殖作用,也可以增强VER对ESCC细胞的促凋亡作用。结论:VER能够促进KCNMA1的表达,增强KYSE150细胞对顺铂的敏感性,其存在的机制可能是KCNMA1的表达能够增强顺铂对KYSE150细胞的抗增殖和促凋亡作用。第二章:KCNMA1的表达促进顺铂对移植瘤裸鼠抑制作用研究目的:本研究旨在分析在食管鳞状细胞移植瘤裸鼠中,KCNMA1的表达与VER逆转肿瘤对顺铂敏感性的相关性,探讨KCNMA1对ESCC治疗中的作用.方法：1.构建过表达和沉默KCNMA1KYSE150细胞模型,2.将ESCC细胞经皮下注射裸鼠.构建食管鳞状细胞癌模型,分为五组包括Control组、DPP组、DPP+VER组、siRNA-KCNMAl组和Over-KCNMAl+DPP组.待肿瘤体积生长至50mm2时,腹膜内注射2.0mg/kg的顺铂和1.Omg/kg的VER,比较各组裸鼠的肿瘤大小、肿瘤抑制率;3.免疫组化实验比较各组裸鼠组织中KCNMA1蛋白表达;4.WB与qRT-PCR实验检测三组裸鼠中KCNMA1的表达;结果:1.通过质粒转染和慢病毒转染制备KCNMA1过表达和表达沉默的KYSE150细胞珠,qRT-PCR和WB结果显示,Over-KCNMAl组中KCNMA1蛋白的表达显着高于vector组,而siRNA-KCNMA1组中KCNMA1蛋白的表达显着低于sh-NC组,表示过表达和沉默表达KCNMA1细胞模型构建成功;2.本实验中所有裸鼠均成瘤,且在治疗期间各组裸鼠肿瘤体积均随着时间推移不断增大,Over-KCNMAl+DPP组和DPP+VER组在14天之后肿瘤体积大小明显小于单独DPP组,而沉默KCNMA1的表达后,肿瘤组织体积显着增加;3.裸鼠肿瘤组织WB和qRT-PCR结果显示,Over-KCNMAl组和DPP+VER组中KCNMA1蛋白表达显着高于Control组和DPP组.结论:过表达的KCNMA1能够提高食管鳞状细胞癌组织对顺铂的敏感性,抑制肿瘤组织体积的生长;而沉默KCNMA1的表达,降低顺铂对裸鼠肿瘤的抑制作用.第三章:临床研究KCNMA1基因在食管鳞状细胞癌患者组织样本中的表达目的：本研究旨在分析经过维拉帕米联合化疗动脉灌注治疗的食管鳞状细胞癌患者数据,通过免疫组化法对不同治疗效果病例KCNMA1基因表达情况检测,探讨KCNMA1在ESCC动脉灌注治疗中的作用。方法：1.所有患者釆用Seldinger技术经股动脉穿刺每月介入治疗1次,每例患者介入治疗2-3次,介人治疗结束后第4周对疗效进行评估。方案为:维拉帕米（25 mg）+化疗药物（顺钻+5-氟尿嘧啶）?方法为:术前常规静脉滴注喘啶（0.25 mg）和地塞米松（5?10mg）;灌注过程中用肝素盐水间断冲洗导管35次,同时静脉滴注昂丹司琼（816 mg）和地塞米松（510 mg）?2.收集经过维拉帕米联合化疗动脉灌注治疗的食管鳞状细胞癌患者临床病例3.根据治疗效果将上述食管鳞状细胞癌患者临床病例分为四组,包括临床治愈或显着改善（CR）、临床治疗改善（PR）、临床治疗疗稳定（SD）和进行性或恶化（PD）.将CR+PR组定义为治疗阳性组,SD+PD组定义为治疗阴性组4.免疫组化实验比较各组食管癌患者中KCNMA1表达;结果:1、在患有ESCC中期或晚期的患者中,11例完全缓解（complete remission,CR）,65例部分缓解（partial remission,PR）,13例未出现改变（SD）,5例进行性疾病（progressive disease,PD）.总缓解率（CR+PR）为80.85%2、通过免疫组织化学测定法测量对VER逆转治疗方案呈阳性（CR或PR）患者的组织样品中KCNMA1表达明显高于阴性（SD和PD）的患者。结论:经靶动脉灌注维拉帕米联合化疗药物治疗中、晚期食管鳞状细胞癌提高了食管鳞状细胞癌治疗的近期疗效,改善了患者的临床获益及临床症状。免疫组化结果显示对本治疗方案呈阳性患者组织中KCNMA1表达显着高于阴性反应组。
蔡晓燕[6]（2021）在《MACC1、MRP、LRP与肺腺癌顺铂耐药的相关性研究》文中进行了进一步梳理背景肺腺癌是多发于支气管黏膜上皮或大支气管黏液腺的恶性肿瘤。肺腺癌易发于年龄偏小、无吸烟史的女性中,且临床症状不明显。肺腺癌虽然肿瘤组织生长缓慢,但多在早期就出现多发转移,因此化疗是目前临床治疗肺腺癌的主要方法之一,但大约三分之一的肺腺癌患者化疗后会产生多药耐药,导致化疗失败。多药耐药是肿瘤细胞对多种化疗药物产生的交叉耐药现象。当今国内外多项研究表明,多药耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药蛋白（LRP）、结肠癌转移相关基因1（MACC1）与肺腺癌的多药耐药相关。顺铂是临床化学治疗肺腺癌的基本药物,肺腺癌患者对顺铂及顺铂类药物表现出的耐药性,是临床化疗肺腺癌疗效较差的直接原因,因此研发更有效的新型化疗药物已迫在眉睫。目的1.考察肺腺癌组织细胞对顺铂的耐药性。2.探究MACC1、MRP、LRP与肺腺癌顺铂耐药的相关性,为临床采用更为高效的顺铂化疗方案治疗肺腺癌提供实验室参考。方法1.取材及分组:收集手术切除的肺腺癌新鲜标本75例,所有患者进行手术前均未进行放化疗。每份标本均分为2份:1份进行原代细胞的体外培养,以噻唑蓝比色法（MTT法）检测肺腺癌细胞对含顺铂的药敏试验;1份标本处理后以免疫组化法检测腺癌组织细胞中MACC1、MRP、LRP的表达。2.药敏实验:采用MTT法检测肺腺癌细胞对顺铂的总体耐药性,考察不同分化程度、不同TNM分期肺腺癌细胞对顺铂的耐药性。3.MACC1表达与肺腺癌顺铂耐药之间的相关性:采用免疫组织化学实验考察肺腺癌组织细胞MACC1蛋白表达的情况,分析其表达情况与顺铂耐药之间的相关性。4.MRP表达与肺腺癌顺铂耐药之间的相关性:采用免疫组织化学实验考察肺腺癌组织细胞MRP蛋白表达的情况,分析其表达情况与顺铂耐药之间的相关性。5.LRP表达与肺腺癌顺铂耐药之间的相关性:采用免疫组织化学实验考察肺腺癌组织细胞LRP蛋白表达的情况,分析其表达情况与顺铂耐药之间的相关性。6.统计学方法:所有实验数据均带入SPSS17.0统计学软件系统处理。采用t检验进行组间比较,方差分析考察分化程度、TNM分期与肺腺癌对顺铂耐药的相关性,Spearman相关分析考察MACC1、MRP、LRP与肺腺癌对顺铂耐药性的相关性。检验水准α=0.05。结果1.在选取的75例肺腺癌组织中,采用MTT法检测肺腺癌细胞顺铂的耐药性可知:32例（42.67%）对8.0μg.ml-1的顺铂耐药,33例（44.00%）对6.0μg.ml-1的顺铂耐药,31例（41.33%）对4.0μg.ml-1的顺铂耐药,23例（30.67%）对2.0μg.ml-1的顺铂耐药,且对4.0μg.ml-1顺铂的耐药程度高于对2.0μg.ml-1顺铂的耐药程度（P<0.05）,对4.0μg.ml-1和6.0μg.ml-1顺铂的耐药性程度无差异,对6.0μg.ml-1和8.0μg.ml-1顺铂的耐药性程度无差异。肺腺癌细胞对顺铂的耐药性与分化程度和TNM分期无关（P>0.05）。2.MACC1在75例肺腺癌组织中的表达情况为16例（21.33%）-、21例（28.00%）+、27例（36.00%）++、11例（14.67）+++,MACC1的表达与肺腺癌细胞对顺铂的耐药性呈正相关（P<0.05）。3.MRP在75例肺腺癌组织中的表达情况为11例（14.66%）-、23例（30.67%）+、32例（42.67%）++、9例（12.00%）+++,MRP的表达与肺腺癌细胞对顺铂的耐药性呈正相关（P<0.05）。4.LRP在75例肺腺癌组织中的表达情况为0例（0.00%）-、25例（33.33%）+、31例（41.33%）++、19例（25.34%）+++,LRP的表达与肺腺癌细胞对顺铂的耐药性呈正相关（P<0.05）。结论1.肺腺癌存在对顺铂的化疗耐药性。2.MACC1的表达与肺腺癌细胞对顺铂的耐药性呈正相关,参与介导肺腺癌对顺铂的耐药。3.MRP的表达与肺腺癌细胞对顺铂的耐药性呈正相关,参与介导肺腺癌对顺铂的耐药。4.LRP的表达与肺腺癌细胞对顺铂的耐药性呈正相关,参与介导肺腺癌对顺铂的耐药。
于超[7]（2021）在《三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）与胃癌组织中HER2表达的相关性及机制研究》文中进行了进一步梳理目的探究三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（adenosine triphosphate combined transport protein G superfamily member 2 ABCG2）基因对HER2基因阳性的人胃癌细胞株NCI-N87和MKN-7的影响,并进一步探究其可能存在的分子水平的影响机制。方法收集安徽医科大学第一附属医院普外科八病区在2018年1月-2019年12月经胃癌根治手术后且经病理科免疫组化确诊的HER2基因阳性的胃癌患者临床病理标本84例,利用免疫组织化学染色（IHC）检测HER2基因阳性的胃癌组织中ABCG2基因蛋白的表达情况,并分析84例HER2基因阳性的胃癌患者的病历资料和ABCG2基因阳性的临床病理特征的区别与联系。通过Gene Pharma公司包装的慢病毒载体转染HER2基因阳性的胃癌细胞株NCI-N87和MKN-7,构建过表达组和干扰组以及相对应的空载对照组的稳定转染的胃癌细胞株（LV5NC,LV5-homo,LV3NC,LV3-609,LV3-1158,LV3-1988）;采用RT-PCR、Western blot和免疫荧光实验检测ABCG2基因在稳定转染的胃癌NCI-N87细胞和MKN-7细胞株中的转染效率和相应蛋白的表达情况;通过创伤愈合实验观察ABCG2基因对胃癌NCI-N87细胞和MKN-7细胞迁移能力的影响;通过台盼蓝（Trypan Blue）染色实验检测调控ABCG2基因后胃癌NCI-N87细胞和MKN-7细胞的死亡情况;Western blot实验检测胃癌NCI-N87细胞和MKN-7细胞中HER2-PI3K/Akt-ABCG2信号通路中关键蛋白的表达情况及PI3K/Akt信号通路中关键蛋白的磷酸化水平,并分析其可能存在的分子机制。结果免疫组织化学染色（IHC）结果显示在HER2基因阳性的84例临床胃癌组织标本中,ABCG2基因阳性60例（71.4%）,阴性24例（28.6%）,HER2基因与ABCG2基因双阳性与胃癌的分化程度和后期治疗有密切关系;RT-PCR及Western blot结果表明与细胞组和空载对照组相比,ABCG2过表达组（LV5-homo组）较正常细胞组（Cell组）和过表空载对照组（LV5NC组）有效增加了胃癌NCI-N87和MKN-7细胞系中ABCG2基因的m RNA水平及相应蛋白表达（P<0.01）,ABCG2干扰组（LV3-1988组）较正常细胞组（Cell组）和干扰空载对照组（LV3NC组）有效降低了胃癌NCI-N87和MKN-7细胞系中ABCG2基因的m RNA水平及相应蛋白表达（P<0.01）,而空载对照组对于ABCG2基因m RNA水平较正常细胞组（Cell组）无明显差别,但空载对照组较正常细胞组ABCG2蛋白表达虽略有差异,但差异无统计学意义（P>0.05）。Western blot结果表明调控ABCG2基因后,ABCG2过表达组（LV5-homo组）对PI3K/Akt信号通路中的PI3K和HER2基因的表达较正常细胞组（Cell组）和过表空载对照组（LV5NC组）有促进作用,并且也增加了PI3K/Akt信号通路中的磷酸化Akt基因的表达;ABCG2干扰组（LV3-1988组）则表现出抑制状态,同时对磷酸化的Akt也表现为抑制状态。细胞划痕实验结果表明,调控ABCG2基因后,ABCG2过表达组（LV5-homo组）较正常细胞组（Cell组）和过表空载对照组（LV5NC组）有促进胃癌NCI-N87细胞和MKN-7细胞的迁移作用,而ABCG2干扰组（LV3-1988组）较正常细胞组（Cell组）和干扰空载对照组（LV3NC组）对NCI-N87细胞和MKN-7细胞的迁移有抑制作用（P<0.05）。台盼蓝染色实验结果显示在NCI-N87细胞和MKN-7细胞中,与正常细胞组（Cell）和过表空载对照组（LV5NC组）,以及正常细胞组（Cell组）和干扰空载对照组（LV3NC组）比较,过表达组（LV5-homo组）和干扰组（LV3-1988组）细胞死亡数均增加,但干扰组（LV3-1988组）细胞死亡增多最明显,差异有统计学意义（P<0.05）。根据我们的实验数据表明,ABCG2过表达组（LV5-homo组）和干扰组（LV3-1988组）相较正常细胞组和空载对照组有明显差异。结论ABCG2基因广泛表达于HER2基因阳性的胃癌细胞中,与胃癌的转移、分化程度及TNM分期密切相关;ABCG2基因经HER2-PI3K/Akt信号通路调节,促进胃癌细胞的迁移,调节胃癌细胞的凋亡,影响细胞的活力和通路中关键蛋白的表达,这可能涉及与胃癌细胞多药耐药的机制有关。
余世龙[8]（2020）在《锌指蛋白300（ZNF300）参与非小细胞肺癌获得性多药耐药和恶性进展的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理背景肺癌目前仍然是位居全球肿瘤发病率和死亡率首位的恶性肿瘤。组织类型上肺癌分为非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌（SCLC）,其中,NSCLC占肺癌总类型的80-85%,肺腺癌是NSCLC的主要病理类型。近年来尽管以EGFR-TKIs为代表的靶向治疗和以PD-1/PD-L1抑制剂为代表的免疫治疗将具有相应驱动基因的晚期NSCLC患者生存期提高到了25-30月,远远超越了传统化疗的8-10月,但因获益人群的局限性,以铂类抗癌药物为主的联合化疗仍然是大部分NSCLC患者首选的一线治疗方案,特别是不适合分子靶向治疗或免疫治疗的NSCLC患者、分子靶向治疗或免疫治疗失败的NSCLC患者以及术后需要辅助化疗的I-IIIa期NSCLC患者。顺铂（DDP）是铂类药物中最常用的化疗药物。顺铂对早期肺癌的抑制作用显着,但在短期缓解之后,几乎对顺铂治疗有效的患者都会相继出现多药耐药、复发和进一步转移等恶性进展,导致化疗失败,成为提高临床肺癌治疗效果的一大瓶颈。三十多年来,研究者对肺癌的顺铂耐药进行了大量研究并获得了重要成果,但顺铂诱导的肿瘤耐药表现出极其复杂的多因素性,其中一个严峻的现实是,针对目前已知的顺铂耐药机制研发的小分子药物并没有达到预期的临床抑癌效果。因此,进一步深入挖掘顺铂诱发的肺癌耐药机制是当前亟待解决的重要课题。为了进一步探讨NSCLC获得性耐药机制,本研究在前期成功建立人NSCLC耐药细胞A549/DDP的基础上开展相关研究,具体研究内容如下:1)NSCLC获得性多药耐药细胞A549/DDP鉴定;2)耐药相关基因的筛选和鉴定;3)ZNF300与NSCLC恶性进展;4)ZNF300促进NSCLC耐药和恶性进展的分子机制;5)淫羊藿苷和全反式维甲酸增强顺铂对肿瘤耐药细胞杀伤作用的机制。本研究将为寻找肿瘤耐药新靶点,逆转NSCLC耐药提供理论和实验依据。方法1)DDP处理A549和A549/DDP细胞后,采用JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位（MMP）,ATP试剂盒测定细胞内ATP含量以及DCFH-DA探针标记法检测细胞内氧自由基（ROS）,以比较DDP对两种细胞线粒体功能的影响,并用流式细胞术检测DDP诱导的细胞凋亡。采用CCK8药敏实验检测五种化疗药物对两组细胞的IC50值,鉴定NSCLC耐药细胞的多药耐药性。2)以差异倍数|FC|≥3为标准筛选基因表达谱芯片（A549/DDP vs.A549）中差异表达基因,并把该数据和DNA甲基化芯片数据进行整合,筛选候选基因,尔后采用RT-PCR验证潜在侯选基因表达情况。RT-PCR和WB进一步验证候选基因在五种肺癌细胞株及其耐药株中的表达水平。BSP法检测三株NSCLC细胞及其耐药株中ZNF300启动子甲基化水平,WB检测5-Azacitidine和Belinostat处理后各细胞中ZNF300水平。3)重组慢病毒过表达或沉默相应细胞中靶基因表达后,CCK-8试剂检测五种化疗药物对各种细胞IC50。流式细胞术检测不同浓度DDP诱导下各组细胞的凋亡情况。建立免疫缺陷鼠移植瘤模型,体内验证靶基因对NSCLC肿瘤细胞耐药性的影响。4)Transwell小室实验检测各组细胞侵袭能力,划痕愈合试验检测各组细胞迁移能力,失巢凋亡实验评估各组细胞集落形成能力和抗失巢凋亡能力,Ed U染色检测各组细胞增殖率,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期,鬼笔环肽染色激光共聚焦观察细胞骨架形态。从Oncomine、Betastasis和Biogps等生物信息数据平台下载靶基因表达数据,分析靶基因与NSCLC临床特征之间的相关性。免疫组化法检测靶基因在肺癌标本中的表达水平,并分析其临床特点相关性。5)GO、KEGG和GSEA确定表达谱芯片中与耐药细胞表型改变相关的信号通路（A549-ZNF300 vs.A549-ZNF300-NC）,WB验证相关通路核心蛋白表达。使用通路抑制剂和激动剂体外验证靶基因调控NSCLC耐药和恶性进展的分子机制。6)ICA、ATRA和DDP处理时,高内涵系统动态观察共培养细胞。WB检测药物处理后各组细胞的CD235a和CD61表达水平,SA-β-GAL染色检测药物处理后各组细胞衰老情况。RT-PCR检测DDP对衰老基因和SASP相关基因表达影响。结果1)DDP处理后,A549/DDP细胞MMP改变、ROS水平显着低于A549细胞（p<0.05）,而ATP含量显着高于A549细胞（p<0.05）。DDP诱导A549/DDP细胞的凋亡显着低于A549细胞（p<0.05）。顺铂、吉西他滨、紫杉醇、多西他赛、培美曲塞对A549/DDP细胞的IC50显着高于A549细胞（p<0.05）。2)A549/DDP和A549细胞的表达谱芯片数据和甲基化数据整合后,初步筛选出140个候选基因,其中包括77个启动子低甲基化上调表达基因和63个启动子高甲基化下调表达基因。RT-PCR结果显示,15个启动子低甲基化基因的表达上调,25个启动子高甲基化基因的表达下调。候选基因ZNF300在A549/DDP、H520/DDP和H1650/DDP细胞中的水平显着高于相应亲代细胞。5-Azacitidine处理后ZNF300在上述三种耐药细胞的亲代细胞中表达显着性升高。3)成功建立ZNF300过表达细胞（A549-ZNF300）和低表达细胞（A549/DDP-sh ZNF300）。五种化疗药物对ZNF300高表达细胞的IC50显着高于ZNF300低表达细胞（p<0.05）。顺铂诱导ZNF300高表达细胞的凋亡显着性低于ZNF300低表达细胞（p<0.01）。DDP处理后,ZNF300低表达细胞形成的皮下移植瘤比ZNF300高表达细胞的重量和体积显着缩小,证明ZNF300促进NSCLC肿瘤细胞耐药形成。4)体外实验表明,耐药细胞的侵袭、迁移、集落形成和抗失巢凋亡能力均显着强于药敏细胞（p<0.05）,耐药细胞的细胞增殖率显着低于药敏细胞（p<0.05）。相比药敏细胞,耐药细胞出现细胞周期阻滞（p<0.05）,且具有更明显的细胞伪足。生物学信息分析结果表明,ZNF300与NSCLC恶性进展有关。免疫组化结果提示,ZNF300高表达与NSCLC患者病理分级、临床分期、术前淋巴结转移、区域性转移和复发呈正相关,与患者OS呈负相关。5)与A549-ZNF300-NC细胞相比,A549-ZNF300细胞中大部分与生长分化因子和MAPK/ERK通路相关的基因（CD61,CD235a,p-ERK1/2,p-p38 MAPK）表达下调,而大部分与细胞周期和癌症干性相关的基因（PCNA,p15,Nanog,Oct-4）表达上调。AZD6244处理ZNF300低表达细胞后,p-ERK1/2、p-p38 MAPK和CD61下降,而p15和Nanog增加,细胞迁移、侵袭、抗凋亡和顺铂耐受性显着增强,细胞增殖减弱。而Hesperetin对ZNF300高表达细胞的作用相反。6)与药敏细胞相比,ICA和ATRA能上调耐药细胞中CD235a和CD61水平。细胞共培养发现,耐药细胞对顺铂联合ATRA或ICA的反应比药敏细胞更明显。ICA和ATRA作用下,耐药细胞被药敏细胞吞噬的比例显着高于药敏细胞被耐药细胞吞噬的比例。DDP、ICA和ATRA药物处理后,耐药细胞中SA-β-GAL阳染率明显高于药敏细胞,并且,耐药细胞中衰老相关基因和SASP相关基因的表达显着性高于药敏细胞。结论1)ZNF300是NSCLC耐药相关基因。2)ZNF300可促进肿瘤细胞恶性生长,其高表达预示NSCLC患者预后不良。3)ZNF300通过抑制MAPK/ERK信号通路调控耐药细胞缓慢周期表型和细胞分化。4)ZNF300通过抑制WEE1/MYT1和调控MYC/AURKA/BORA/PLK1信号轴激活CDK1从而调节耐药细胞的细胞周期。5)ICA和ATRA通过诱导细胞分化提高DDP对耐药细胞抑癌作用。
陈刚[9]（2020）在《MicroRNA-155介导Rictor/Fos基因促进胃癌细胞对顺铂耐药的机制研究》文中研究说明目的:胃癌是影响人们健康的重大疾病,我国是胃癌高发地区之一。胃癌的综合治疗已取得很大进步,但化疗多药耐药严重降低了化疗效果,因此需要寻找多药耐药的原因并研究其发生机制,并寻找有针对性的逆转耐药性或延缓其发生的方法。MicroRNA是一类非编码RNA,在肿瘤发生、进展、侵袭、转移过程中发挥重要作用。MicroRNA-155在胃癌等多种肿瘤中均有异常表达,其主要功能是对下游靶基因进行转录后调控,在免疫、炎症、肿瘤的发生进展和化疗耐药等病理过程中起作用。本研究通过建立对顺铂耐药的胃癌细胞株,将microRNA-155敲除和过表达并检测其靶基因表达水平的变化来探索microRNA-155在胃癌细胞对顺铂耐药过程中的作用及其机制。方法:（1）收集胃癌患者的癌组织和对应癌旁组织,用实时荧光定量PCR（q RT-PCR）法检测microRNA-155的表达水平,用生物信息学方法筛选出microRNA-155的靶基因Rictor和Fos,用western blot实验、免疫组化实验检测靶基因和自噬相关蛋白（Beclin1、LC3II）、凋亡相关蛋白（Caspase3、Caspase9）的表达水平,探索microRNA-155对其靶基因的表达水平以及自噬和凋亡的影响。（2）运用顺铂大剂量冲击法建立耐药胃癌细胞株,通过慢病毒转染法对耐药细胞株进行microRNA-155、Rictor和Fos敲除和过表达,建立相应的过表达和敲除细胞株,用CCK8法对新建立的细胞株进行耐药性验证。用CCK8法、Transwell侵袭实验、高内涵细胞成像分析实验、克隆形成实验等方法观察细胞生物学行为的改变。以野生型胃癌细胞、耐药胃癌细胞、microRNA-155过表达的野生型胃癌细胞、microRNA-155敲除的耐药胃癌细胞、Rictor/Fos过表达的耐药胃癌细胞、Rictor/Fos敲除的野生型胃癌细胞为实验对象,用western blot实验检测Rictor、Fos、Beclin1、LC3II、Caspase3和Caspase9的表达水平,用透射电镜、高内涵细胞成像分析实验、流式细胞仪检测细胞内自噬、凋亡水平。（3）用皮下注射成瘤法建立NOD-SCID小鼠移植瘤模型,观察成瘤率、瘤体生长速度、化疗效果等,用免疫组化方法检测小鼠瘤体内Rictor、Fos、Beclin1、LC3II、Caspase3和Caspase9的表达水平。结果:（1）生信分析结果表明microRNA-155有多个靶基因,按照Target score评分结合研究目的以及最新文献报道筛选出Rictor和Fos作为研究对象。在早期胃癌中microRNA-155低表达,Rictor和Fos高表达,Beclin1、LC3II低表达,Caspase3、Caspase9高表达;在进展期胃癌中microRNA-155高表达,Rictor、Fos低表达,Beclin1、LC3II高表达,Caspase3、Caspase9低表达。（2）用顺铂大剂量冲击法建立对顺铂耐药的胃癌细胞株,耐药胃癌细胞株发生明显的形态改变。耐药胃癌细胞中microRNA-155高表达,Rictor、Fos低表达,Beclin1、LC3II高表达,Caspase3、Caspase9低表达,细胞内自噬小体增多,细胞凋亡减少。耐药胃癌细胞增殖减慢,细胞周期被阻滞在G1期,侵袭能力增强,细胞骨架发生改变。将Rictor过表达时自噬水平降低,将Rictor敲除后在药物干预条件下自噬水平增高。将Fos过表达时在药物干预作用下凋亡水平升高,将Fos敲除时凋亡减少。（3）耐药胃癌细胞在NOD-SCID小鼠皮下注射成瘤率低,瘤体生长缓慢,对顺铂敏感性降低。瘤体组织内各基因表达水平的变化趋势同细胞实验结果一致。结论:MicroRNA-155在进展期胃癌和耐药胃癌细胞中高表达并抑制Rictor和Fos的表达,Rictor和Fos是其靶基因。其中Rictor参与对细胞内自噬的调控,Fos参与对凋亡的调控。MicroRNA-155可能通过抑制Rictor和Fos的表达来诱导自噬并抑制凋亡,参与胃癌细胞对顺铂耐药性的产生。
邓凤莲[10]（2019）在《苦参素通过下调ABCG2表达影响阿霉素抗人肝癌耐药裸鼠移植瘤的作用》文中提出目的:探讨苦参素能否通过调控三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ATP-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2）表达影响阿霉素抗人肝癌耐药裸鼠移植瘤的作用。方法:裸鼠腋下接种人肝癌细胞HepG2/阿霉素耐药细胞（HepG2/ADM）,构建移植瘤模型。将20只雌性裸鼠随机分成对照组、阿霉素组、苦参素组、联合组（阿霉素联合苦参素）。干预14d后,取出瘤体,HE染色法观察移植瘤组织细胞的形态,RT-qPCR检测ABCG2的mRNA水平,免疫组化及ELISA法检测ABCG2蛋白水平,并对组间数据进行对比。结果:（1）我们观察发现药物干预以后对照组裸鼠刚开始精神状态及生活习性无明显改变,到后期随瘤体增大而表现为精神及睡眠不佳,进食减少;阿霉素组裸鼠表现为精神差、活动量下降、进食及大小便减少,而苦参组及联合组裸鼠一般情况良好,精神状态、睡眠、饮食及大小便均未见明显改变。（2）HE染色法结果显示:与对照组相比,阿霉素组抗移植瘤坏死作用不明显,其他两组有促移植瘤坏死作用;与单独苦参素组相比,联合组促移植瘤坏死效果更好。（3）RT-qPCR检测结果显示:与对照组相比,阿霉素组ABCG2 mRNA表达上升,苦参素组和联合组ABCG2 mRNA表达下降（P<0.05）。（4）免疫组化结果显示ABCG2阳性染色呈棕色,大多分布在胞浆内,部分在胞膜;与对照组相比,阿霉素组ABCG2蛋白表达较高,苦参素组和联合组中ABCG2蛋白水平明显下降（P<0.05）。（5）ELISA结果显示:与对照组相比,阿霉素组ABCG2蛋白表达上调,苦参素组和联合组中ABCG2蛋白表达均降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1、苦参素可减轻阿霉素的药物不良反应,改善实验裸鼠生存质量;2、苦参素可提高阿霉素抗人肝癌耐药裸鼠移植瘤的抑瘤作用及促进肝癌对阿霉素的敏感性,其机制可能与下调ABCG2 mRNA与蛋白表达有关。
二、多药耐药相关基因在胃癌的表达（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、多药耐药相关基因在胃癌的表达（论文提纲范文）
（1）EZH2表达调控对胃癌生长及化疗敏感性的影响（论文提纲范文）
| 英文略缩词 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 EZH2 基因在胃癌组织和胃癌细胞的表达 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 慢病毒介导沉默EZH2 基因稳转细胞株的构建和鉴定 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 EZH2 基因沉默对胃癌生长和化疗敏感性的影响 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第四部份EZH2 基因对人胃癌细胞生长及耐药性的相关机制探讨 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文总结 |
| 问题和展望 |
| 参考文献 |
| 综述 EZH2基因与胃癌相关性研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）长链非编码RNA参与骨肉瘤和胃癌增殖、迁移与耐药的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分:长链非编码RNALBX2-AS1 通过LBX2-AS1/miR-5010-5p/WNT7B轴促进骨肉瘤细胞的增殖和迁移 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 实验耗材 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 LBX2-AS1 沉默 |
| 2.2.3 CCK-8 细胞活力检测 |
| 2.2.4 细胞迁移侵袭能力检测 |
| 2.2.5 生物信息学预测靶基因 |
| 2.2.6 荧光素酶报告检测 |
| 2.2.7 miRNA转染 |
| 2.2.8 实时定量PCR检测LBX2-AS1 的表达水平 |
| 2.2.9 蛋白免疫印迹分析 |
| 2.2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 LBX2-AS1 在骨肉瘤细胞中高表达 |
| 3.2 LBX2-AS1 促进骨肉瘤细胞的增殖 |
| 3.2.1 构建LBX2-AS1低表达的骨肉瘤细胞株 |
| 3.2.2 沉默LBX2-AS1 抑制了骨肉瘤细胞的增殖 |
| 3.3 沉默LBX2-AS1 的表达抑制骨肉瘤细胞的迁移 |
| 3.4 LBX2-AS1 通过miR-5010-5p调控WNT7B的表达 |
| 3.4.1 预测LBX2-AS1 可能通过结合miR-5010-5p进而调控下游基因WNT7B |
| 3.4.2 miR-5010-5p可以与LBX2-AS1和WNT7B结合 |
| 3.4.3 LBX2-AS1 调控miR-5010-5p和 WNT7B的表达 |
| 3.4.4 miR-5010-5p调控下游WNT7B的表达 |
| 3.5 抑制miR-5010-5p表达可以恢复沉默LBX2-AS1 对骨肉瘤细胞的增殖、迁移的影响 |
| 3.5.1 LBX2-AS1 低表达细胞系中抑制miR-5010-5p表达可以恢复WNT7B的表达 |
| 3.5.2 抑制miR-5010-5p的表达可以恢复沉默LBX2-AS1 所抑制的骨肉瘤细胞的增殖 |
| 3.5.3 抑制miR-5010-5p的表达可以恢复沉默LBX2-AS1 所抑制的骨肉瘤细胞的迁移 |
| 4 讨论 |
| 5 研究结论 |
| 第二部分:TUG1 在胃癌中作用的生物信息学分析及实验验证 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 实验耗材 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 生物信息学分析方法 |
| 2.2.2 湿实验实验方法 |
| 2.2.3 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 生物信息学分析结果 |
| 3.1.1 患者的基线特征 |
| 3.1.2 胃腺癌中TUG1 高表达 |
| 3.1.3 TUG1 表达与临床特征的相关性 |
| 3.1.4 TUG1 的高表达提示预后不良 |
| 3.1.5 TUG1 在胃腺癌中的诊断价值 |
| 3.1.6 GO和 KEGG富集分析TUG1 的共表达基因 |
| 3.1.7 GSEA识别与TUG1 相关的生物学过程和信号通路 |
| 3.2 湿实验结果 |
| 3.2.1 TUG1 在胃癌患者表达水平高,与淋巴结转移及Ki-67密切相关 |
| 3.2.2 TUG1 高表达患者生存分析 |
| 3.2.3 TUG1 高表达可能与耐药相关 |
| 3.2.4 TUG1 促进胃癌细胞的耐药 |
| 3.2.5 TUG1 促进胃癌细胞迁移和侵袭 |
| 4 讨论 |
| 5 研究结论 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的研究成果 |
| 综述 非编码RNA在骨肉瘤发病、诊断和预后中的作用 |
| 参考文献 |
（3）GCS参与调控维拉帕米逆转胃癌化疗多药耐药的作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 中文论文 |
| 英文缩略词表（Abbreviation) |
| 前言 |
| 第一部分 胃癌细胞hMDR1/P-gp表达水平与维拉帕米逆转化疗耐药能力相关性研究 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 引物 |
| 2.1.3 主要仪器与耗材 |
| 2.1.4 主要试剂耗材与药物 |
| 2.1.4.1 试剂耗材 |
| 2.1.4.2 药物 |
| 2.1.5 主要试剂配制方法 |
| 2.2. 方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 检测方法 |
| 2.2.2.1 RNA提取与RT-PCR |
| 2.2.2.2 实时荧光定量PCR |
| 2.2.2.3 CCK-8法检测胃癌细胞VER逆转抗癌药物耐药能力效率指数(IC_(50)值) |
| 2.2.2.4 Western印迹分析 |
| 3. 统计学分析 |
| 4. 结果 |
| 4.1 维拉帕米对3种胃癌细胞系(SGC-7901、BGC-823和AGS)3种化疗药物(5-Fu、ADM、DDP)逆转耐药能力判定 |
| 4.2 胃癌细胞株中hMDR1/P-gp基因对相对表达水平 |
| 4.3 hMDR1/P-gp表达水平与维拉帕米逆转胃癌细胞化疗耐药能力相关性 |
| 5. 讨论 |
| 6. 结论 |
| 第二部分 构建胃癌耐药细胞株并验证其耐药效率 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 主要仪器与耗材 |
| 2.1.3 主要试剂耗材与药物 |
| 2.1.3.1 试剂耗材 |
| 2.1.3.2 药物 |
| 2.2. 方法 |
| 2.2.1 建立胃癌5-Fu耐药细胞株SGC-7901/5-Fu |
| 2.2.2 耐药细胞株SGC-7901/5-Fu稳定性测定 |
| 2.2.3 细胞培养 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR |
| 2.2.5 CCK-8法检测胃癌细胞VER逆转抗癌药物耐药能力效率指数(IC_(50)值) |
| 2.2.6 Western印迹分析 |
| 3. 统计学分析 |
| 4. 结果 |
| 4.1 胃癌耐药细胞株SGC-7901/5-Fu稳定性检测药物 |
| 4.2 胃癌耐药细胞株SGC-7901/ADM耐药性检测 |
| 4.3 胃癌耐药细胞株对3种抗癌药物(5-Fu、ADM、DDP)药物敏感性检测 |
| 4.4 胃癌耐药细胞株hMDR1/P-gp的相对表达水平 |
| 4.5 维拉帕米对胃癌耐药细胞株对3种抗癌药物(5-Fu、ADM、DDP)逆转耐药能力判定 |
| 5. 讨论 |
| 6. 结论 |
| 第三部分 介导维拉帕米逆转胃癌细胞化疗耐药能力差异基因的筛选、确证及机制研究 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 引物 |
| 2.1.3 主要仪器与耗材 |
| 2.1.4 主要试剂耗材与药物 |
| 2.1.4.1 试剂耗材 |
| 2.1.4.2 药物 |
| 2.1.4.3 主要抗体 |
| 2.1.4.4 菌株与质粒 |
| 2.2. 方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 质粒抽提 |
| 2.2.3 质粒DNA转染 |
| 2.2.4 siRNA转染 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR |
| 2.2.6 Western印迹分析 |
| 2.2.7 Annexin V-FTC/PI双染细胞凋亡检测 |
| 2.2.8 介导维拉帕米逆转胃癌细胞化疗耐药能力差异基因的筛选 |
| 3. 统计学分析 |
| 4. 结果 |
| 4.1 胃癌耐药差异基因的筛选 |
| 4.2 实时荧光定量PCR法检测候选基因在胃癌细胞中的表达 |
| 4.3 Western blot法检测候选蛋白在胃癌细胞中的表达 |
| 4.4 胃癌SGC-7901细胞和SGC-7901/5-Fu细胞GCS基因表达沉默和过表达验证 |
| 4.5 改变GCS基因表达水平,VER逆转ADM化疗耐药能力变化 |
| 4.6 改变GCS基因表达水平,对VER干预后的胃癌细胞凋亡水平影响 |
| 4.7 改变GCS基因表达水平,凋亡信号通路蛋白Bcl-2变化 |
| 4.8 改变GCS基因表达水平,凋亡信号通路蛋白ERK变化 |
| 5. 讨论 |
| 6. 结论 |
| 第四部分 临床研究P-gp、GCS蛋白在胃癌病例组织样本中的表达 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料和方法 |
| 2.1 胃癌组织标本 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 临床资料分类 |
| 2.3.1 纳入标准 |
| 2.3.2 排除标准 |
| 2.3.3 剔除标准 |
| 2.4 VER联合TACE治疗方式 |
| 2.5 疗效评价 |
| 2.5.1 肿瘤病灶的变化 |
| 2.5.2 临床收益判断 |
| 2.6 免疫组化 |
| 3. 统计学分析 |
| 4. 结果 |
| 4.1 肿瘤原发病灶治疗疗效评价 |
| 4.2 生存期评价 |
| 4.3 免疫组化法检测P-gp蛋白在胃癌临床标本中的表达情况 |
| 4.4 免疫组化法检测GCS蛋白在胃癌临床标本中的表达情况 |
| 5. 讨论 |
| 6. 结论 |
| 讨论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 图表索引 |
| 综述 肿瘤多药耐药机制的研究现状及进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表(含待发表)学术论文 |
| 附英文论文 |
| ABSTRACT |
| Abbreviation List (Abbreviation) |
| PREFACE |
| Chapter 1. The correlation between the expression level of P-gp and the reversal ofVER's resistance to chemotherapy in gastric carcinoma cells |
| 1.Introduction |
| 2. Materials and Methods |
| 2.1 material |
| 2.1.1 cell line |
| 2.1.2 primer |
| 2.1.3 Main instruments and consumables |
| 2.1.4 Main reagents, consumables and drugs |
| 2.1.4.1 Reagent consumables |
| 2.1.4.2 Medicine |
| 2.1.5 Preparation method of main reagents |
| 2.2. Method |
| 2.2.1 Cell culture |
| 2.2.2 Test Method |
| 2.2.2.1 RNA extraction and RT-PCR |
| 2.2.2.2 Real time fluorescent quantitative PCR |
| 2.2.2.3 CCK-8 method was used to detect the efficiency index (IC50 value) of VER reversing chemotherapy drug resistance of gastric cancer cells |
| 2.2.2.4 Western blot analysis |
| 3. Statistical analysis |
| 4. Results |
| 4.1 The ability of verapamil to reverse drug resistance of SGC-7901, BGC-823 and AGS cells to 5-FU, ADM and DDP |
| 4.2 Relative expression level of hMDR1/P-gp gene in gastric cancer cell lines |
| 4.3 Relationship between hMDR1/P-gp expression and VER+ADM resistance(Relative IC_(50)) |
| 5. Discuss |
| 6. Conclusion |
| Chapter2 Construct gastric cancer drug-resistant cell line and verify its drug-resistant efficiency |
| 1.Introduction |
| 2. Materials and Methods |
| 2.1 Material |
| 2.1.1 cell line |
| 2.1.2 Main instruments and consumables |
| 2.1.3 Main reagents, consumables and drugs |
| 2.1.3.1 Reagent consumables |
| 2.1.3.2 Medicine |
| 2.2. Method |
| 2.2.1 Establishment of gastric cancer 5-Fu resistant cell line SGC-7901/5-Fu |
| 2.2.2 Stability of drug resistant cell line SGC-7901/5-Fu |
| 2.2.3 Cell culture |
| 2.2.4 Real time fluorescent quantitative PCR |
| 2.2.5 CCK-8 method was used to detect the efficiency index (IC_(50) value) of verapamil reversing chemotherapy drug resistance |
| 2.2.6 Western blot |
| 3. Statistical analysis |
| 4. Results |
| 4.1 Stability of drug resistant gastric cancer cell line SGC-7901/5-Fu |
| 4.2 Detection of drug resistance in gastric cancer cell line SGC-7901/ADM |
| 4.3 Detection of drug sensitivity of gastric cancer cell lines to three chemotherapeutic drugs (5-FIJ, ADM, DDP) |
| 4.4 Relative expression level of drug resistant gastric cancer cell line hMDR1/P-gp |
| 4.5 The ability of verapamil to reverse drug resistance of gastric cancer cell lines SGC-7901/5-Fu and SGC-7901/ADM to three chemotherapeutic drugs (5-FU,ADM and DDP) |
| 5. Discuss |
| 6. Conclusion |
| Chapter3 Screening,confirmation and mechanism study of differential genes mediated by VER in the reversal of chemotherapy resistance of gastric carcinoma cells |
| 1 .Introduction |
| 2. Materials and Methods |
| 2.1 Material |
| 2.1.1 Cell line |
| 2.1.2 Primer |
| 2.1.3 Main instruments and consumables |
| 2.1.4 Main reagents, consumables and drugs |
| 2.1.4.1 Reagent consumables |
| 2.1.4.2 Medicine |
| 2.1.4.3 Major antibodies |
| 2.1.4.4 Strains and plasmids |
| 2.2 Method |
| 2.2.1 Cell culture |
| 2.2.2 Plasmid Extraction |
| 2.2.3 plasmid DNA transfection |
| 2.2.4 siRNA transfection |
| 2.2.5 qRT-PCR |
| 2.2.6 Western blot |
| 2.2.7 Detection of apoptosis by annexin V-FITC / PI double staining |
| 2.2.8 Screening of differentially expressed genes mediated by verapamil in reversing cell chemo resistance gastric cancer |
| 3. Statistical analysis |
| 4. Results |
| 4.1 Screening of drug resistance genes in gastric cancer |
| 4.2 Detection of candidate gene expression in GC ceils by qRT-PCR |
| 4.3 Western blot was used to detect the expression of candidate proteins in gastric cancer cells |
| 4.4 Verification of GCS gene silencing and overexpression in SGC-7901 cells and SGC-7901/5-Fu cells |
| 4.5 Change the expression level of GCS gene and the change in the ability of VER to reverse ADM chemotherapy resistance |
| 4.6 Changing the expression level of GCS gene affected the apoptosis level of gastric cancer cells after VER intervention |
| 4.7 Change the expression of GCS gene and Bcl-2 |
| 4.8 Change the expression of GCS gene and pERK |
| 5. Discuss |
| 6. Conclusion |
| Chapter4 Clinical study on the expression of P-gp and GCS in tissue samples of gastric cancer cases |
| 1. Introduction |
| 2. Materials and Methods |
| 2.1 Tissue samples of gastric cancer |
| 2.2 Main reagents |
| 2.3 classification of clinical data |
| 2.3.1 Inclusion criteria |
| 2.3.2 Exclusion criteria |
| 2.3.3 Exclusion criteria |
| 2.4 VER Combined TACE treatment |
| 2.5 Efficacy evaluation |
| 2.5.1 Changes of tumor focus |
| 2.5.2 Clinical benefit judgment |
| 2.5.2.1 Survival evaluation |
| 2.6 Immunohistochemical |
| 3. Statistical analysis |
| 4. Results |
| 4.1 Evaluation of therapeutic effect of primary tumor |
| 4.2 The PFS and OS |
| 4.3 The expression of P-gp protein in clinical specimens of gastric cancer was detected by immunohistochemistry |
| 4.4 The expression of GCs protein in clinical specimens of gastric cancer was detected by immunohistochemistry |
| 5. Discussion |
| 6. Conclusion |
| Discussion and Outlook |
| Reference |
| Attached The Chart Index |
| REVIEW Research status and progress of multi drug resistance mechanism incancer |
| Reference |
| Acknowledgement |
| Academic papers published (including to be published)during academic degree |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（4）基于AMPK为靶点的美洲大蠊多肽PAE2逆转肝癌多药耐药作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞侵袭转移及自噬影响体外研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 细胞株及实验动物 |
| 1.2 实验药品、样品来源及其制备 |
| 1.3 试剂和溶液 |
| 1.4 主要仪器与设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 肿瘤细胞培养 |
| 2.2 试验试剂配制 |
| 2.3 试验分组 |
| 2.4 AMPK生物信息学分析 |
| 2.5 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞中AMPK的影响 |
| 2.6 AMPK激活剂AICAR作用时间及浓度测定 |
| 2.7 划痕试验检测美洲大蠊多肽PAE_2对细胞侵袭转移的影响7 |
| 2.8 RT-qPCR法检测美洲大蠊多肽PAE_2对侵袭转移相关mRNA的影响 |
| 2.8.1 美洲大蠊多肽PAE_2对侵袭转移相关mRNA的影响 |
| 2.8.2 侵袭转移相关因子引物验证 |
| 2.9 激光共聚焦显微镜观察美洲大蠊多肽PAE_2对细胞中LC3蛋白的影响9 |
| 2.10 免疫细胞化学法检测美洲大蠊多肽PAE_2对细胞中P62蛋白的影响10 |
| 2.11 美洲大蠊多肽PAE_2对自噬相关mRNA的影响 |
| 2.11.1 美洲大蠊多肽PAE_2对自噬相关mRNA的影响 |
| 2.11.2 自噬相关因子引物验证 |
| 2.12 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 肝癌细胞中AMPK的表达 |
| 3.2 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞内AMPK含量的影响 |
| 3.3 AMPK激活剂AICAR作用时间及作用浓度测定 |
| 3.4 划痕试验检测美洲大蠊多肽PAE_2对细胞划痕愈合率的影响 |
| 3.5 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞侵袭转移相关因子的影响 |
| 3.5.1 RT-PCR检测美洲大蠊多肽PAE_2对细胞侵袭转移相关因子的影响 |
| 3.5.2 RT-PCR检测侵袭转移相关因子引物特异性验证 |
| 3.6 .激光共聚焦观察美洲大蠊多肽PAE_2对细胞自噬的影响(LC3 蛋白的形成).. |
| 3.7 免疫细胞化学法化观察美洲大蠊多肽PAE_2对细胞自噬的影响(P62 蛋白) |
| 3.8 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞自噬相关因子mRNA表达的影响 |
| 3.8.1 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞自噬相关因子mRNA表达的影响 |
| 3.8.2 自噬相关因子mRNA引物验证 |
| 第二章 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤侵袭转移及自噬影响体内研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品、实验试剂 |
| 1.3 主要仪器与设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 肿瘤细胞培养 |
| 2.2 试验试剂配制 |
| 2.3 试验分组 |
| 2.4 Balb/c-nude裸鼠皮下移植瘤模型建立 |
| 2.5 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠的影响 |
| 2.6 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠生化指标的影响 |
| 2.7 HE染色法检测美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸鼠肿瘤组织、肝脏组织病理影响 |
| 2.8 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸裸鼠侵袭转移相关因子mRNA的影响 |
| 2.8.1 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸裸鼠侵袭转移相关因子mRNA的影响 |
| 2.8.2 移植瘤裸裸鼠肿瘤组织中侵袭转移相关因子引物验证 |
| 2.9 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸裸鼠侵袭自噬 |
| 2.9.1 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸裸鼠自噬相关因子mRNA的影响 |
| 2.9.2 移植瘤裸裸鼠肿瘤组织侵袭转移相关因子引物验证 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 裸鼠一般状态观察 |
| 3.2 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸鼠相关脏器的影响 |
| 3.3 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸鼠血清生化指标的影响 |
| 3.4 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸鼠肿瘤及肝脏组织病理学的影响 |
| 3.5 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤侵袭转移相关因子mRNA的影响 |
| 3.5.1 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤侵袭转移相关因子mRNA的影响 |
| 3.5.2 侵袭转移相关因子引物验证 |
| 3.6 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤自噬相关因子mRNA的影响 |
| 3.6.1 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤自噬相关因子mRNA的影响 |
| 3.6.2 裸鼠皮下移植瘤自噬相关因子验证 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 7 致谢 |
| 8 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
| 9 附录 |
（5）KCNMA1的上调促进维拉帕米逆转食管鳞状细胞癌对顺铂的化学耐药（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表（Abbreviation) |
| 前言 |
| 第一章 KCNMA1的表达在逆转ESCC耐药中的作用 |
| 1.引言 |
| 2.材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 3.统计学分析 |
| 4.结果 |
| 4.1 VER逆转ESCC细胞对顺铂的化学耐药性 |
| 4.2 高通量转录组测序筛选ESCC细胞中差异表达的基因 |
| 4.3 实时定置PCR法检测候选基因在食管鳞状癌细胞中的表达 |
| 4.4 WB检测ESCC细胞中KCNMA1的蛋白表达 |
| 4.5 KCNMA1影响VER逆转ESCC细胞对顺铂的化学耐药性 |
| 4.6 KCNMA1增强VER对ESCC细胞的抗增殖和促凋亡作用 |
| 5.讨论 |
| 6.结论 |
| 第二章 介导维拉帕米KCNMA1的表达与逆转顺铂耐药移植瘤裸鼠作用研究 |
| 1.引言 |
| 2.材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 3.统计学分析 |
| 4.结果 |
| 4.1.建立过表达和沉默KCNMA1 KYSE150细胞模型 |
| 4.2 移植瘤BALB/C-nu裸鼠一般情况观察 |
| 4.3 移植瘤裸鼠肿瘤体积和顺铂对肿瘤抑制率的影响 |
| 4.4 移植瘤裸鼠各组中KCNMA1的表达 |
| 5.讨论 |
| 6.结论 |
| 第三章 临床研究KCNMA1基因在食管鳞状细胞癌患者组织样本中的表达 |
| 1.引言 |
| 2.材料和方法 |
| 2.1 临床样本和试剂 |
| 2.2 临床资料、分组 |
| 2.3 VER联合化疗靶动脉灌注治疗方式及疗效评价标准 |
| 2.4 免疫组化方法及结果分析 |
| 3.统计学分析 |
| 4.结果 |
| 4.1 两组食管鳞状细胞癌患者治疗前后典型病例展示 |
| 4.2 免疫组织化学法检测患者组织样本中KCNMA1的蛋白表达 |
| 5.讨论 |
| 6.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 肿瘤MDR的发病机制以及MDR抑制剂或调节剂药物研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表(含待发表)学术论文 |
| 附英文论文1 (已发表) |
| 附英文论文2 (未发表) |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（6）MACC1、MRP、LRP与肺腺癌顺铂耐药的相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述:MACC1、MRP、LRP的相关研究 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）与胃癌组织中HER2表达的相关性及机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表(Abbreviation) |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验相关仪器 |
| 2.2 临床资料 |
| 2.3 免疫组织化学(IHC) |
| 2.4 细胞培养 |
| 2.5 细胞转染 |
| 2.6 蛋白质印迹实验(Western blot)检测稳定转染细胞株中蛋白的表达水平 |
| 2.7 实时定量PCR检测稳定转染细胞株中ABCG2 基因的表达 |
| 2.8 创伤愈合实验检测细胞迁移能力 |
| 2.9 台盼蓝(Trypan Blue)染色实验检测细胞存活率 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 ABCG2 基因的表达与HER2 基因阳性的胃癌临床病理特征的关系 |
| 3.2 免疫组化(IHC)检测HER2 基因阳性的胃癌组织中ABCG2 蛋白的表达 |
| 3.3 细胞转染效率 |
| 3.4 实时定量PCR检测稳定转染细胞株中ABCG2 基因的表达 |
| 3.5 Western blot检测稳定转染细胞株中ABCG2 蛋白的表达 |
| 3.6 调控ABCG2 基因对胃癌NCI-N87 细胞和MKN-7 细胞中HER2-PI3K-AKt信号通路的影响 |
| 3.7 调控ABCG2 基因对细胞迁移能力的影响 |
| 3.8 台盼蓝(Trypan Blue)染色检测调控ABCG2 基因后胃癌NCI-N87 细胞和MKN-7 细胞死亡情况 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本课题的进一步设想 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 ABCG2基因的研究现状 |
| 参考文献 |
（8）锌指蛋白300（ZNF300）参与非小细胞肺癌获得性多药耐药和恶性进展的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 NSCLC获得性多药耐药细胞A549/DDP鉴定 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 NSCLC耐药相关基因的筛选及鉴定 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料和方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 ZNF300与NSCLC恶性进展 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料和方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 ZNF300促进NSCLC耐药和恶性进展的分子机制 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料和方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 淫羊藿苷和全反式维甲酸增强顺铂对NSCLC肿瘤耐药细胞杀伤作用的机制探讨 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 实验材料和方法 |
| 6.3 实验结果 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 肿瘤化疗耐药机制的研究现况 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 锌指蛋白家族的结构与功能以及ZNF300的研究现况 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的成果 |
| 致谢 |
（9）MicroRNA-155介导Rictor/Fos基因促进胃癌细胞对顺铂耐药的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 前言 |
| 第一章 胃癌组织中microRNA-155 表达水平及意义 |
| 1.1 研究内容 |
| 1.1.1 研究目的 |
| 1.1.2 材料方法 |
| 1.2 统计分析 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 MicroRNA-155 生信分析结果 |
| 1.3.2 临床样本及相关病例信息 |
| 1.3.3 qRT-PCR检测microRNA-155 等基因表达水平 |
| 1.3.4 Western blot和免疫组化实验检测蛋白表达水平 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二章 MicroRNA-155 对胃癌细胞顺铂耐药性的影响及其机制 |
| 引言 |
| 2.1 研究内容 |
| 2.1.1 研究目的 |
| 2.1.2 材料方法 |
| 2.2 统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 用大剂量冲击法成功诱导胃癌细胞耐药 |
| 2.3.2 耐药细胞的形态发生变化 |
| 2.3.3 将病毒原液按照1:5稀释后转染细胞效果稳定 |
| 2.3.4 各株细胞IC50和耐药指数 |
| 2.3.5 耐药细胞中耐药相关蛋白表达水平增高 |
| 2.3.6 耐药细胞增殖减慢 |
| 2.3.7 耐药胃癌细胞相同条件下形成细胞克隆的数目少 |
| 2.3.8 耐药胃癌细胞侵袭能力增强 |
| 2.3.9 耐药胃癌细胞的细胞周期被阻滞在G1期 |
| 2.3.10 耐药胃癌细胞的细胞骨架发生显着改变 |
| 2.3.11 细胞内自噬检测结果 |
| 2.3.12 细胞凋亡检测结果 |
| 2.3.13 Rictor、Fos敲除或过表达对自噬和凋亡的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三章 动物实验 |
| 引言 |
| 3.1 研究内容 |
| 3.1.1 研究目的 |
| 3.1.2 材料方法 |
| 3.2 统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 NOD-SCID小鼠成瘤实验 |
| 3.3.2 成瘤率和瘤体生长曲线 |
| 3.3.3 免疫组化实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 Effects of MicroRNA-155 and Autophagy on Gastric Cancer |
| References |
| 在学期间研究成果 |
| 致谢 |
| 附录 |
（10）苦参素通过下调ABCG2表达影响阿霉素抗人肝癌耐药裸鼠移植瘤的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 成瘤情况及裸鼠一般情况 |
| 2.2 HE染色结果对比 |
| 2.3 RT-qPCR法检测ABCG2的mRNA的表达 |
| 2.4 免疫组化结果比较 |
| 2.5 ELISA 检测结果 |
| 3 讨论 |
| 4 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 乳腺癌耐药蛋白在消化道肿瘤中的作用研究 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
四、多药耐药相关基因在胃癌的表达（论文参考文献）
- [1]EZH2表达调控对胃癌生长及化疗敏感性的影响[D]. 杨宝玉. 福建医科大学, 2021(02)
- [2]长链非编码RNA参与骨肉瘤和胃癌增殖、迁移与耐药的机制研究[D]. 刘媛. 南昌大学, 2021(01)
- [3]GCS参与调控维拉帕米逆转胃癌化疗多药耐药的作用研究[D]. 王旭. 山东大学, 2021(10)
- [4]基于AMPK为靶点的美洲大蠊多肽PAE2逆转肝癌多药耐药作用及机制研究[D]. 李彩琳. 大理大学, 2021(09)
- [5]KCNMA1的上调促进维拉帕米逆转食管鳞状细胞癌对顺铂的化学耐药[D]. 葛宁. 山东大学, 2021(11)
- [6]MACC1、MRP、LRP与肺腺癌顺铂耐药的相关性研究[D]. 蔡晓燕. 新乡医学院, 2021(01)
- [7]三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）与胃癌组织中HER2表达的相关性及机制研究[D]. 于超. 安徽医科大学, 2021(01)
- [8]锌指蛋白300（ZNF300）参与非小细胞肺癌获得性多药耐药和恶性进展的作用及机制研究[D]. 余世龙. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020(07)
- [9]MicroRNA-155介导Rictor/Fos基因促进胃癌细胞对顺铂耐药的机制研究[D]. 陈刚. 兰州大学, 2020(04)
- [10]苦参素通过下调ABCG2表达影响阿霉素抗人肝癌耐药裸鼠移植瘤的作用[D]. 邓凤莲. 右江民族医学院, 2019(01)