一、感染患者外周血及骨髓涂片细胞形态观察（论文文献综述）
张岚,朱建锋,陈朴,郭玮,王蓓丽[1]（2022）在《高嗜酸性粒细胞综合征的临床及实验室特征研究》文中研究表明目的探讨高嗜酸性粒细胞综合征（HES）各亚型的临床及实验室特点,尤其是骨髓及外周血涂片中嗜酸性粒细胞的形态学特征。方法回顾性分析该院2017-2020年63例HES患者的临床和实验室资料,复检外周血和骨髓涂片中嗜酸性粒细胞的形态学特征。结果 63例HES患者中有反应性HES患者54例,特发性HES患者9例。反应性HES患者的病因众多,主要为肿瘤（嗜酸性粒细胞为非克隆性）、血管炎、感染性疾病及药物等。两组HES患者的临床表现均以皮疹皮炎最为常见,脾肿大及骨髓纤维化发生率接近（P>0.05）。特发性HES患者的外周血嗜酸性粒细胞比例高于反应性HES患者（P<0.05）。33%的特发性HES患者外周血可出现幼稚嗜酸性粒细胞,而反应性HES患者未见（P<0.05）。骨髓涂片中特发性HES患者的嗜酸性粒细胞更易出现形态异常,其中特发性HES患者嗜酸性粒细胞胞质颗粒稀疏、胞质嗜碱性颗粒及核分叶过多这3种异常形态的发生率高于反应性HES患者（P<0.05）。结论特发性和反应性HES的临床及实验室特征相互重叠,但通过骨髓涂片中嗜酸性粒细胞的异常形态学特征,能够为两种亚型鉴别诊断提供一定帮助。
朱晓华,王建成,程彦,窦立萍[2]（2021）在《外周血涂片骨髓细胞形态及骨髓活检联合检测对骨髓增生异常综合征的诊断价值》文中认为目的:探究外周血涂片、骨髓细胞形态及骨髓活检联合检测对骨髓增生异常综合征（MDS）的诊断价值,旨在为MDS早期诊治提供参考。方法:病例源于2016年1月至2020年1月本院收治的108例疑似MDS患者,患者均接受外周血涂片、骨髓细胞形态及骨髓活检检测,以随访资料结果为金标准,评估外周血涂片、骨髓细胞形态、骨髓活检及三者联合检测诊断MDS及其分型的价值。结果:外周血涂片、骨髓细胞形态及骨髓活检三者联合检测诊断MDS的效能（Kappa值）较三者单项检测的高,外周血涂片、骨髓细胞形态、骨髓活检及三者联合检测诊断MDS的灵敏度较三者单项检测的明显高（P<0.05）,以随访结果为金标准,外周血涂片、骨髓细胞形态及骨髓活检联合检测诊断MDS分型的准确率为84.62%（66/78）。结论:外周血涂片、骨髓细胞形态及骨髓活检联合检测可有效提高MDS诊断的灵敏度和准确度,且三者联合检测对MDS分型诊断的准确率高,有望为MDS治疗方案选择和预后评估提供参考。
南苗苗[3]（2021）在《慢性淋巴细胞白血病小鼠模型的制备及生姜挥发油抑癌作用的初步探究》文中进行了进一步梳理慢性淋巴细胞白血病（CLL）是CD5+的B淋巴细胞在各免疫器官中进行恶性克隆增殖的一种血液系统疾病。到目前为止,该病仍然是一种无法彻底根治的疑难病症。生姜挥发油是一种能够通过蒸馏得到的、具有挥发性的油状液体。研究报道,生姜挥发油具有镇痛、抗菌、抗肿瘤等作用。为了探索生姜挥发油对CLL的作用,以ICR品系、WT小鼠为实验对象,首先通过给小鼠注射免疫抑制剂环磷酰胺（CTX）,制备免疫抑制小鼠模型,在此模型的基础上制备CLL小鼠模型。其次,利用含生姜挥发油的培养基培养CLL细胞系MEC-1,旨在细胞水平上测试生姜挥发油对CLL的作用。最后将生姜挥发油通过灌胃的方式饲喂于CLL小鼠,进一步试验生姜挥发油对CLL小鼠个体的影响。本研究旨在探究生姜挥发油是否能够抑制CLL疾病进展,分别在细胞水平及个体水平对生姜挥发油的功能进行了初步的验证。1.免疫抑制小鼠模型制备本研究分别以40mg/kg注射10天,100mg/kg注射3天、5天,150mg/kg注射4天,以及200mg/kg注射24h的方式将CTX注射到WT小鼠腹腔中,检测小鼠体重及免疫细胞数量,结合脾脏,胸腺,骨髓HE染色结果,确定CTX注射最佳剂量为150mg/kg注射4天。2.慢性淋巴细胞白血病小鼠模型制备在免疫抑制小鼠模型基础上,通过灌胃的方式连续3天给小鼠服用7,12-二甲基苯并蒽（7,12-dimethylbenzoanthracene,7,12-DMBA）,以及将1×107个MEC-1细胞分别通过腹腔及尾静脉注射到小鼠体内。实验期间每十天记录小鼠体重,外周血白细胞及B淋巴细胞数量,最终处死小鼠。实验结果显示,随着实验时间延长,利用两种方法制备的小鼠模型小鼠体重均减轻;肝脏及脾脏均肿大;外周血白细胞及B淋巴细胞数量均不同程度增多;小鼠外周血中检测到CD19+CD5+B淋巴细胞;小鼠骨髓细胞出现增殖;经q RT-PCR及Western blot检测,确定小鼠骨髓细胞Bcl-2表达量增加,Caspase3,Bax表达量减少。利用组织免疫荧光染色及流式细胞术,检测到MEC-1细胞浸润小鼠血液,肝脏,脾脏,胸腺,肺,淋巴,及骨髓中。因此,本研究说明,制备的小鼠模型均能表现CLL基本特征。对比两种建模方法,化学物质诱导法制备的CLL小鼠模型效果更好。3.生姜挥发油抑癌作用的初步探究利用0.0125%、0.025%、0.01%、0.05%、0.1%的生姜挥发油分别培养MEC-1细胞24h、48h、72h、96h。通过CCK8检测发现,细胞的增殖活性在24h后开始下降,并且MEC-1细胞在0.025%的生姜挥发油下的增殖活性最低;通过Annexin V-FITC/PI检测能够看到,利用0.025%的生姜挥发油培养MEC-1细胞48h、72h、96h,细胞凋亡率显着增加,分别为23.655±0.465%（P<0.001）,30.620±0.510%（P<0.001）,32.815±0.335%（P<0.001）;q RT-PCR及Western blot结果显示,0.025%的生姜挥发油培养细胞48h后,细胞Bcl-2表达量显着减少,Caspase3,Bax表达量显着增加。说明生姜挥发油能够有效抑制MEC-1细胞增殖,促进其凋亡。将生姜挥发油以50mg/kg/只通过灌胃的方式饲喂于CLL小鼠。经生姜挥发油治疗30天,小鼠外周血白细胞数量减少,但是与未治疗组小鼠相比,差异性不显着;q RT-PCR及Western blot结果显示,治疗组小鼠骨髓细胞Bcl-2表达量减少,Caspase3,Bax表达量增加,但是与未治疗组小鼠相比,差异性同样不显着。说明在个体水平上生姜挥发油并没有明显减缓小鼠CLL症状。本研究确定CTX注射剂量为150mg/kg注射4天能够显着降低小鼠免疫系统功能;给小鼠服用7,12-DMBA及移植MEC-1细胞均能使小鼠表现CLL特征。本研究还确定生姜挥发油能够显着抑制MEC-1细胞增殖,促进细胞凋亡;但是给CLL小鼠服用生姜挥发油,并没有显着减缓小鼠CLL症状。上述研究结果表明:生姜挥发油有一定的抑癌作用,具有潜在药用价值。
艾珂欣[4]（2021）在《骨髓增生异常综合征合并大颗粒淋巴细胞白血病患者临床与实验室特征及全外显子测序研究》文中认为研究背景与目的:骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes,MDS）是一组起源于造血干/组细胞的异质性恶性克隆性疾病,且高风险向急性髓系白血病（AML）转化。MDS患者的髓系细胞发育异常,主要表现为无效造血及难治性血细胞减少。大颗粒淋巴细胞白血病（Large granular lymphocyte leukemia,LGLL）是一种少见的克隆性淋巴细胞增殖性疾病,2016年WHO将其归类于成熟T细胞和自然杀伤细胞肿瘤。MDS合并LGLL发病率低,近20年来,仅31例患者被报道患有MDS并发LGLL（MDS-LGLL）。与MDS患者相比,MDS-LGLL患者血红蛋白水平更低,红系发育不良更为常见。目前,MDS-LGLL患者的基因突变数据非常有限,机制尚不明确。本研究中,我们不仅描述了 10例MDS-LGLL病例的临床及实验室特征,而且通过全外显子测序技术（Whole-exome sequencing,WES）对MDS-LGLL患者的突变基因进行了更深入和全面的分析。研究目的:提高对MDS-LGLL病例临床、实验室特征的认识,通过全外显子测序技术分析MDS-LGLL病例的基因突变特征。方法:1.描述10例MDS-LGLL患者的临床指标及实验室检查结果;2.描述10例MDS-LGLL患者的病理特征及免疫、分子表型;3.通过二代测序技术对10例MDS-LGLL患者DNA进行检测,报告了与血液系统疾病发生密切相关的114个基因的突变情况;4.对单例MDS-LGLL患者分别在早期诊断为MDS时期及确诊为MDS-LGLL时期的两份骨髓样本进行全外显子测序,分别对突变基因及进行Gene ontology（GO）富集分析、蛋白相互作用网络分析及差异基因富集分析;5.分别对三例MDS-LGLL患者的骨髓样本进行全外显子测序,对三例患者的共有突变基因进行GO分析、KEGG分析和蛋白质相互作用网络分析,筛选出特征突变及对突变基因进行功能预测。结果:1.描述了 1 0例MDS-LGLL患者的临床及实验室特征;2.10例MDS-LGLL患者的二代测序显示:在与血液系统疾病发生密切相关的114个基因中,共发现了 37个基因的突变。其中,组蛋白修饰基因ASXL1（3/10,30%）和粘连蛋白复合物基因STAG2（3/10,30%）突变率最高;3.单例MDS-LGLL不同时期样本全外显子测序对比显示:MDS进展到MDS-LGLL的过程中,H3K4单甲基化通路富集明显增加、ZAP-70易位通路富集明显减少。4.对三例MDS-LGLL全外显子测序数据分析发现:MF组突变基因富集最明显的通路主要集中于ATP结合、DNA结合转录因子活性通路,为RNA聚合酶2特异性、组蛋白结合、组蛋白去甲基化酶结合、H3K4组蛋白甲基转移酶活性等通路;BP组突变基因富集最明显的通路是主要集中于RNA聚合酶2负性转录调控通路、DNA模板转录调节、细胞分化调控、组蛋白H3K4单甲基化、二甲基化、T细胞分化正向调节等通路;在CC组,突变集中富集最明显的通路在细胞核、细胞质膜、线粒体、转录调节复合物、组蛋白甲基转移酶复合物等。KEGG富集分析显示突变基因富集最多的通路是:代谢相关通路、肿瘤相关通路、PI3K-AKT通路、MAPK通路、Th17、Th1、Th2细胞分化、PD-L1表达和PD-1检查点通路等。5.用三个在线蛋白质功能预测网站Provean,Sift,Polyphen-2对筛选出的50个突变频率最高的共有突变进行突变功能预测,发现CCL3L1c.272T>C位点和RGPD5c.3131C>G位点基因突变在三个网站均显示为有害突变。通过Sanger测序验证,10例MDS-LGLL患者CCL3L1 c.272T>C位点和RGPD5 c.3131C>G位点的突变率分别为 50%、70%。结论:MDS和LGLL可以共同发生,但发病率较低且机制尚未明确。MDS-LGLL患者中,最多见的MDS亚型为MDS-MLD,所有MDS-LGLL患者均发生了贫血和红系发育不良。组蛋白修饰基因ASXL1（3/10,30%）和粘连蛋白复合物基因STAG2（3/10,30%）是114个基因中突变率最高的基因。MDS进展到MDS-LGLL的过程中,H3K4单甲基化相关基因富集增加,但ZAP-70易位相关基因富集减少。CCL3L1c.272T>C位点和RGPD5c.3131C>G位点突变均为有害突变,在10例MDS-LGLL患者的突变率为50%、70%。
李美蓉[5]（2020）在《减毒沙门氏菌VNP20009对急性白血病的治疗作用及机制研究》文中研究指明急性白血病发病迅猛、耐药、易复发、复发后更难治、死亡率高,是白血病死亡最常见的疾病类型。随着近几十年药物研发和风险分类管理的不断改善,儿童急性白血病治疗得到了巨大进步,然而成年尤其是老年急性白血病患者的预后仍然较差,许多患者复发后治疗失败,最终死亡。目前,急性白血病的治疗仍以化疗为主。化疗失败或疾病复发时,才考虑进行骨髓移植或造血干细胞移植。然而,化疗副作用强,耐药易复发,经常导致治疗失败和死亡。骨髓或造血干细胞移植也存在供体难寻、手术费用高昂及手术过程痛苦难耐等问题,且仍存在一定复发风险。因此寻找副作用小、疗效可靠且经济的治疗新药具有重大意义。多例急性白血病患者发生严重细菌感染后获得自发缓解的临床报道,结合目前关注度非常高的肿瘤细菌疗法,提示细菌疗法可能是治疗急性白血病的一个新方向。在多种用于肿瘤治疗研究的细菌中,沙门氏菌因其具有良好的肿瘤靶向性和抗肿瘤效果,被广泛应用于各种实体肿瘤治疗。但是沙门氏菌对血液肿瘤的治疗未见报道。经基因工程改造的减毒沙门氏菌VNP20009产生的内毒素毒力减少了5万倍,且其耐受性和安全性已在一期临床试验中得到证实,是研究细菌治疗急性白血病的理想菌株。本课题首次分别以小鼠急性淋巴细胞白血病细胞（Acute lymphoblastic leukemia,ALL）L1210、人源急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）细胞HL-60皮下移植瘤模型,和人源AML融合蛋白MLL-AF9驱动的系统性AML小鼠模型,评估了VNP20009对急性白血病的治疗效果,并探究了其可能的作用机制,主要研究内容如下:1.体外细菌-细胞共培养实验结果表明,减毒沙门氏菌VNP20009呈剂量效应和时间效应抑制多种急性白血病细胞增殖,并诱导其凋亡。2.裸鼠皮下移植瘤模型治疗实验结果表明,VNP20009能抑制急性白血病皮下移植瘤的生长。肿瘤组织苏木素&伊红染色和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（Terminal deoxynucleotidyl transferase（Td T）d UTP Nick-End Labeling,TUNEL）免疫荧光结果表明VNP20009能显着诱导肿瘤细胞凋亡,导致肿瘤中心区域细胞核破碎、DNA降解、胞膜解体,肿瘤组织大面积坏死。Western Blot检测肿瘤组织蛋白表明,VNP20009能显着上调促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase-3及Cleaved-PARP的表达,诱导急性白血病细胞凋亡。3.MLL-AF9驱动的AML模型小鼠治疗实验结果表明,VNP20009显着抑制小鼠体内AML细胞的增殖;降低AML小鼠外周血白细胞计数及其五分类数值,使其恢复至近正常生理水平;延长了AML小鼠的生存期。4.血清细胞因子与趋化因子检测及流式细胞术检测结果表明,VNP20009一方面能上调抗肿瘤因子γ-干扰素（Interferon-γ,IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白血病抑制因子（Leukemia inhibitory factor,LIF）的产生,并降低粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF）水平来抑制、杀伤肿瘤细胞;另一方面,显着上调分泌趋化因子C-X-C基序配体-10（C-X-C motif ligand-10,CXCL-10）和CC趋化因子配体-2（C-C motif ligand-2,CCL-2）,招募并激活自然杀伤细胞和以CD4+为主的T淋巴细胞的增殖,杀伤、抑制白血病细胞增殖。VNP20009还能进一步刺激T淋巴细胞向CD4+IFN-γ+和CD8+IFN-γ+效应T淋巴细胞极化,释放IFN-γ,进一步维持、增强机体抗肿瘤免疫力抑制白血病细胞增殖。结论:减毒沙门氏菌VNP20009能显着抑制白血病细胞的增殖,并促进其凋亡,起到治疗和延缓白血病的作用。一方面VNP20009进入机体后,能够诱导多种细胞因子和趋化因子的分泌和多种免疫细胞的增殖,增强机体抗肿瘤免疫力,抑制和杀伤白血病细胞,延长AML小鼠生存期。另一方面移植瘤组织中线粒体促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase-3和Cleaved-PARP的表达增加,提示VNP20009感染后可能通过线粒体凋亡途径诱导急性白血病细胞凋亡。该研究为急性白血病的治疗提供一种新的策略和理论基础。
曹韪凡[6]（2020）在《靶向CD19抗原的新型嵌合抗原受体NK细胞的优化构建和功能研究》文中研究说明近年来,嵌合抗原受体（Chimeric antigen receptor,CAR）修饰的T细胞为代表的靶向免疫细胞治疗方案受到广泛关注。该技术通过在T细胞中转染并表达人工CAR,促使T细胞可以特异性靶向结合肿瘤表面抗原。同时,利用人工CAR胞内段结构域提供T细胞活化信号,使其成为具有精准靶向性、并持续维持杀伤活性的新一代细胞治疗技术,在多种肿瘤治疗领域特别是血液系统肿瘤的治疗中表现出良好的治疗效果。目前,大多数关于CAR的研究主要集中在T细胞,然而伴随而来的细胞因子风暴、脱靶效应等副作用已成为限制CAR-T细胞临床应用的重要因素。针对这些副作用或缺陷,促使我们将注意力转移到以自然杀伤（natural killer,NK）细胞与因子诱导杀伤细胞为代表的非特异性免疫细胞的人工CAR的改造研究中。NK细胞属于先天固有免疫系统中的重要组成部分,是机体天然免疫屏障中的主要承担者。NK细胞在肿瘤的免疫治疗中具有特殊优势。首先,NK细胞不受主要组织相容性复合体识别限制,并且无需抗原提呈细胞就可以激活自身免疫应答反应;其次,NK细胞在过继性细胞回输疗法中,体内存活周期短,不会诱发抗移植物宿主反应,相较于T细胞,NK细胞诱发因子风暴反应可控。然而人体肿瘤细胞可以通过多种免疫逃逸机制逃避NK细胞非特异杀伤作用,使得NK细胞在肿瘤免疫治疗中的作用受到了制约。基于以上因素和前期我们在CAR-CIK细胞研究工作中的基础与策略,本次在NK细胞中引入CAR的修饰改造,引导NK细胞对血液肿瘤细胞靶向杀伤,同时利用CAR胞内段细胞活化信号结构域的表达来增强免疫细胞自身的活性。以B淋巴细胞白血病的特异性靶标CD19为靶点,针对不同来源的NK细胞生物学特点,开展了人工CAR胞内段和跨膜区的改造工作。在胞内段优化过程中,将具有NK细胞活化功能的含有IL-15分子、4-1BB细胞共刺激信号分子、CD3 ζ链胞内区分子、CD8引导链和Kozak序列等胞内段活化结构域相关分子序列进行串联整合,融入到CAR结构中,制备特性化针对NK细胞的人工CAR重组质粒,然后通过病毒载体,在体外进行转导,成功构建出带有靶向识别杀伤功能的人工CAR修饰的NK细胞。同时,优化了 NK细胞体外培养与活化体系,为后续大剂量的细胞制备,开展体外、体内试验以及未来临床试验和应用奠定了基础。在此基础上,为了进一步检验人工CAR修饰细胞的靶向杀伤能力,采用乳酸脱氢酶法、杀伤因子检测和流式细胞检测等多种方法,对构建的CAR-CIK、CAR-NK-92、CAR-NK细胞杀伤效果进行了验证与分析评估。利用药效学,研究分析了我们构建的人工CAR修饰细胞在小鼠急性B淋巴细胞白血病模型中的靶向杀伤作用以及安全性。结果表明,构建的人工CAR修饰细胞具有明显的靶向杀伤能力和可靠的生物安全性。此外,利用单细胞转录组测序技术和基因表达水平以及生物信息学分析,研究脐血NK细胞分别在人工CAR载体转导前后以及增殖过程中基因的表达谱变化。结果显示,以CX3CR1为代表的功能成熟的NK细胞基因高表达,而且具有独特的转录特性,探讨了 NK细胞的发育生物学的分子机制,并针对CD19-CAR-NK细胞技术的临床应用研究进行了再设计与评估。本项研究的创新点在于尝试突破人工CAR细胞方法改造非特异性细胞的技术瓶颈,构建出一套创新优化的CAR-NK制备体系,为拓展人工CAR细胞治疗方案提供技术支撑;改造了 CAR胞内段细胞活化信号分子,以及验证了 CD19-CAR-NK细胞的成药性、有效性以及安全性;这将有利于CAR相关技术在免疫治疗过程中发挥更重要的作用,并为进一步的临床应用研究提供新方法和新思路。主要结果:1.构建了基于CAR-T技术的靶向CD19的CAR-CIK细胞、CAR-NK-92细胞制备体系。2.构建了基于脐血来源的NK细胞靶向CD19的新型CAR-NK细胞技术体系。3.体外实验验证了 CD19-CAR-NK具有显着的靶向细胞杀伤功能,并呈现剂量依赖性特点,特异性杀伤效果明显。4.探索了 CAR-NK细胞最佳NK细胞转导方法,可使用慢病毒载体或逆转录病毒载体对NK细胞进行转导。通过优化的培养体系培养的NK细胞可以获得更好的转导效率。5.利用单细胞测序技术,探讨了脐血NK细胞分别在CAR转导前后以及增殖过程中基因表达谱变化,以CX3CR1为代表的功能成熟NK细胞基因高表达转录特性。6.B淋巴细胞白血病小鼠模型研究结果表明,CD19-CAR-NK细胞在回输后第7天抑瘤率为61%,远高于对照组抑瘤率12%。未产生相关毒性以及致瘤致畸等不良情况,验证了 CD19-CAR-NK细胞具有良好的生物安全性及有效性。
刘慧慧[7]（2020）在《EPAS1对慢性高原病骨髓有核红细胞增殖调控的分子机制研究》文中研究说明慢性高原病（CMS）是高原地区人群对高原低氧环境逐渐丧失习服而发生的临床综合征,主要特征是红细胞增多症（EE）和低氧血症,但CMS的发病机制尚未阐明。早期关于EE的研究主要围绕低氧时持续高表达的循环EPO,刺激造血活动。但越来越多的学者发现部分CMS患者外周血EPO表达水平与同海拔高度健康人相似。目前对于这种EPO浓度降到接近正常水平后,CMS患者红细胞仍持续生成的现象尚无确切的解释。低氧诱导因子（HIF）是机体低氧反应的中枢。HIFs-α在低氧时稳定性增强,通过调控下游靶基因表达参与机体低氧反应。HIF-1α、内皮PAS结构域包含蛋白-1（Endothelial PAS domain-containing protein 1,EPAS1,也被称为HIF-2α）有相互重叠的靶基因,根据细胞类型和氧浓度不同也可独立发挥作用。骨髓是成年人血细胞生成的最主要场所。低氧环境刺激是CMS发病的始动因素,但骨髓低氧反应可能是导致红细胞生成过多的根本原因。课题组前期研究表明,CMS患者骨髓单个核细胞中CD34+造血干细胞比例无明显变化,而CD71+有核红细胞比例明显升高。那么,HIF-1α、EPAS1在CMS患者骨髓有核红细胞中的表达变化及其作用机制目前还不清楚。第一部分慢性高原病患者骨髓有核红细胞HIF-1α及EPAS1的表达变化目的:评估CMS患者骨髓有核红细胞HIF-1α及EPAS1的表达情况,探讨低氧诱导因子在CMS红细胞过度积累中的作用及意义。方法:收集CMS患者及同海拔高度的陈旧性骨折取内固定患者的骨髓,采用密度梯度离心法、免疫磁珠分选术、RT-q PCR、免疫印迹等方法,研究CMS患者骨髓有核细胞中HIF-1α、EPAS1的表达情况。结果:共收集CMS患者骨髓标本21例,对照组骨髓标本14例。骨髓细胞涂片显示CMS患者骨髓中粒红比明显减低,中晚幼红比例明显增高,差异均有统计学意义（P<0.05）。两组患者骨髓CD71+有核红细胞中HIF-1α表达水平均无差异（P>0.05）。CMS患者骨髓CD71+有核红细胞中EPAS1m RNA及蛋白表达水平均增加,差异均有统计学意义（P<0.05）。相关性分析结果表明,EPAS1 m RNA表达水平与红细胞计数呈显着正相关（r=0.703,P<0.001）,与血氧饱和度呈负相关（r=-0.793,P<0.001）,与血红蛋白呈正相关（r=0.826,P<0.001）。结论:EPAS1可能影响骨髓有核红细胞增殖过程,进而导致CMS红细胞过度积累。第二部分慢性低氧条件下EPAS1对K562细胞增殖、周期及红系分化抗原表达的影响目的:评估EPAS1参与调控慢性低氧条件下K562细胞增殖、周期及红系分化抗原表达的变化。方法:通过包装过表达和干扰EPAS1基因慢病毒,转染K562细胞后,采用MTS、流式细胞术等方法检测EPAS1慢性低氧下对K562细胞增殖、细胞周期的影响。并在Hemin诱导分化后采用流式细胞术检测慢性低氧下EPAS1对K562细胞红系分化抗原表达的影响。结果:1.Lv-EPAS1组EPAS1 m RNA及蛋白水平均高表达（P<0.05）;sh-EPAS1组（sh-EPAS1-1、sh-EPAS1-2、sh-EPAS1-3）EPAS1m RNA水平及蛋白水平均低表达,以sh-EPAS1-1的表达水平最低（P<0.05）。2.EPAS1基因过表达后,K562细胞的增殖活力及S期Brd U阳性细胞数均增加（P<0.05）;S期细胞比例增加,G1期细胞比例降低（P<0.05）;CD235a+、CD71+CD235a+细胞比例均下降（P<0.05）。3.EPAS1基因干扰后,K562细胞的活力及S期Brd U阳性细胞数均降低（P<0.05）,S期细胞比例减少,G1期细胞比例增加（P<0.05）;CD235a+、CD71+CD235a+细胞比例均增加（P<0.05）。结论:慢性低氧下EPAS1对CD71阶段的有核红细胞增殖有促进作用。第三部分慢性低氧条件下EPAS1调控红系增殖分化下游基因通路研究目的:通过Illumina测序平台,进行转录组测序,探讨慢性低氧条件下EPAS1在有核红细胞分化发育过程中的分子机制。方法:收集低氧诱导分化72h的EPAS1基因过表达组（Lv-EPAS1,HE）、干扰组（sh-EPAS1,HEi）及对照组（Lv-NC,HC1;sh-NC,HC2）,构建NEB文库,Illumina测序平台进行转录组水平测序,研究EPAS1在有核红细胞分化过程中的作用机制。结果:1.通过差异基因韦恩图分析,筛选出86个受EPAS1调控的具有相同趋势的差异基因,参与了EPAS1红系调控机制。2.通过GO功能富集分析,前15位差异基因主要参与了细胞增殖、分化及血红蛋白合成过程。3.通过KEGG通路富集分析,位于前20位的一些差异基因注释到红系增殖分化相关通路,如PI3K-Akt、Rap1通路。4.结合GO、KEGG富集,我们筛选出了4个红系相关候选基因:FLT1、SOCS1、STAT3、EPB42。结论:EPAS1可能通过调控红系相关基因FLT1/SOCS1/STAT3/EPB42,参与有核红细胞增殖、分化发育的过程。
赵飞[8]（2020）在《外周血淋巴细胞的形态及亚群特点与非霍奇金淋巴瘤诊断的相关性研究》文中进行了进一步梳理目的:探讨外周血异型淋巴细胞的形态和比例特点及TB淋巴细胞亚群测定与成人非霍奇金淋巴瘤（NHL）之间的关系。方法:选取河北北方学院附属第一医院2017年9月-2018年9月收治的32例初诊的成人非霍奇金淋巴瘤患者资料（所有非霍奇金淋巴瘤患者均经过淋巴结病理确诊）,其中男21例,女11例;年龄28～87岁,平均（60.59±11.98）。同期选择77例成人淋巴结炎患者的资料,其中男33例,女40例;年龄18～63岁,平均（44.43±11.40）;小儿EB病毒25例资料,其中男14例,女11例,年龄2个月～16岁,平均（5.12±5.01）。小儿其他病原体感染者36例资料,其中男21例,女15例,年龄2个月～14岁,平均（3.94±3.86）;40例体检结果为正常健康者资料作为阴性对照组,其中男22例,女18例,年龄9～52岁,平均（33.42±16.92）。各组间性别、年龄均无显着差异。所有入选者均签署医院科研伦理知情同意书。分别对其EDTA-K2抗凝的外周血液标本开展外周血白细胞分类计数和TB淋巴细胞亚群检测,比较各组TB淋巴细胞亚群检测的水平,并分析之间的关系;观察成人淋巴瘤患者年龄分布的特点与外周血异型淋巴细胞分布的情况,分析两者之间的相关性。结果:1、成人NHL组外周血CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD19+B、NK细胞比例、异型淋巴细胞比例以及CD4+/CD8+比值分别为59.12±27.40%、24.25±11.90%、34.93±17.01%、20.84±19.30%、11.90±10.98%、21.59±11.37%、0.79±0.43。成人NHL组外周血CD3+T、CD4+T、NK细胞比例、CD4+/CD8+均低于淋巴结炎组和健康对照组（p<0.05）,CD8+T细胞和异型淋巴细胞比例高于淋巴结炎组和健康对照组（p<0.05）;CD19+B细胞比例与淋巴结炎组及健康对照组比较差异无统计学意义（p>0.05）;2、小儿EB病毒组外周血CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD19+B、NK细胞比例、异型淋巴细胞比例以及CD4+/CD8+比值分别为72.44±10.27%、27.80±7.71%、38.48±14.16%、14.40±6.14%、13.76±4.70%、8.76±7.21%、0.85±0.40%。小儿EB病毒组与其他病原体组和健康对照组比较CD3+T细胞、CD8+T细胞比例增多,CD4+T细胞比例和CD4+/CD8+比例降低,差异均有统计学意义（p<0.05）;异型淋巴细胞比例高于其他病原体组和健康对照组,差异有统计学意义（p<0.05）;CD19+B细胞和NK细胞比例与其他病原体组和健康对照组比较差异无统计学意义（p>0.05）;3、成人非霍奇金淋巴瘤患者的年龄与其外周血异型淋巴细胞百分比呈正相关（r=0.478,p<0.05）;4、成人NHL组外周血涂片分类中以Ⅱ型异型淋巴细胞（不规则型）多见,处在婴幼儿阶段的EB病毒感染者以Ⅲ型（幼稚型）多见;5、各实验组之间EB病毒相关抗体检测结果除小儿EB病毒感染组中的EB病毒衣壳抗原抗体Ig M（VCA-Ig M）与其他组比较差异具有统计学意义（p<0.05）之外,EB病毒衣壳抗原抗体Ig G（VCA-Ig G）、早期抗原抗体（EA-Ig G）、核心抗原（EBNA）均未见明显差异（p>0.05）。结论:1、成人非霍奇金淋巴瘤患者的细胞免疫功能低下;2、成人非霍奇金淋巴瘤患者的年龄与其外周血异型淋巴细胞百分比呈正相关;3、外周血异型淋巴细胞比例增高者或者反复的EB病毒感染者有潜在的发展为恶性非霍奇金淋巴瘤的可能,应该动态监测淋巴细胞亚群的变化或者是完善影像学检查如B超等减少漏诊和误诊。
苏鑫[9]（2020）在《浙贝黄芩汤对淋巴细胞白血病小鼠骨髓微环境炎性因子的影响》文中指出目的:白血病宿主骨髓微环境有利于白血病细胞增殖而不利于正常造血,其炎性转变是重要原因,部分白血病宿主骨髓炎性因子及野生型p53诱导的磷酸酶1（Wip1）基因明显升高,既往研究证实浙贝黄芩汤通过降低Wip1抑制白血病细胞增殖并改善炎性反应,提示骨髓炎性微环境参与浙贝黄芩汤抑制肿瘤增殖的过程。本课题以B细胞淋巴瘤患者为回顾性临床研究对象,初步探讨血清炎性因子IL-6与淋巴瘤疗效的相关性;另以L1210淋巴细胞白血病小鼠模型为研究对象,通过细胞生物学及分子生物学等技术,进一步证实白血病状态下骨髓炎性因子的表达明显升高,以浙贝黄芩汤为干预措施,观察小鼠白血病负荷、骨髓及血清炎性因子IL-6、TNF-α、Wip1mRNA的表达变化,阐释浙贝黄芩汤促进炎性因子的消除以改善骨髓炎性微环境的作用。通过明确浙贝黄芩汤对白血病骨髓炎性微环境的影响,尝试寻求中医药治疗白血病与淋巴瘤的新靶点。方法:1.回顾性临床研究:初步探讨血清炎性因子IL-6与淋巴瘤疗效的相关性,探索浙贝黄芩汤治疗的优势人群。选取2013年1月至2018年12月在北京中医药大学东直门医院血液肿瘤科住院的非霍奇金淋巴瘤患者为研究对象,纳入标准:①确诊为非霍奇金淋巴瘤B细胞来源;②治疗方案:口服浙贝黄芩汤联合2周期标准化疗;③治疗前及2周期化疗后均检测血清IL-6;④检测血清IL-6前一周内未合并感染性疾病;⑤治疗2周期后有疗效评价。分析血清炎性因子IL-6的变化趋势是否可以预测淋巴瘤疗效。2.造模:应用BALB/c小鼠制备L1210白血病模型。5-6周龄雄性BALB/c小鼠,经尾静脉接种对数生长期L1210细胞1×107个/只。接种前及接种第10天经尾静脉取外周血进行全血细胞分析、血涂片白细胞分类,鉴定小鼠急性淋巴细胞白血病模型。3.分组给药:以L1210白血病模型鼠为研究对象,浙贝黄芩汤为干预措施。造模成功后将动物模型随机分组,每组6只:模型组、中药组、正常组。中药组予浙贝黄芩汤灌胃（依据小鼠折算系数8.65倍,折算后浙贝黄芩汤浓度为13.30ml/kg）,正常组与模型组予等体积蒸馏水灌胃,每次0.20ml,1天1次,连续15天。4.观察指标:观察白血病小鼠生存状态、存活时间,分组给药前、给药第8天采集尾静脉取血检测血常规,第15天或濒死前处死动物,眼眶取血,检测血常规,制备外周血涂片,ELISA方法检测骨髓及血清炎性因子IL-6、TNF-α,RT-qPCR检测骨髓及外周血Wip1mRNA,肝脾肾组织病理切片HE染色观察组织的结构和细胞形态,探讨浙贝黄芩汤对白血病小鼠炎性因子及组织病理改变的影响。结果:1.浙贝黄芩汤联合化疗2周期后淋巴瘤患者血清IL-6升高,疾病进展组血清IL-6较治疗前明显升高具有统计学意义（P<0.05）,血清炎性因子IL-6过高可能提示淋巴瘤不良转归,可进行大样本研究进一步证实。①共纳入符合要求的B细胞来源非霍奇金淋巴瘤患者14例,中位年龄65岁。侵袭性淋巴瘤9例,非侵袭性淋巴瘤5例。②血清IL-6表达水平与性别、中位年龄、侵袭性、Ann-Arbor分期、IPI评分无关。③治疗后血清IL-6明显升高:治疗前血清IL-6浓度为（8.50±6.90）pg/mL,治疗后为（24.66±27.28）pg/mL,治疗后较治疗前明显升高（P<0.05）。④按临床疗效分组比较IL-6变化趋势。治疗获益组包括缓解者4例、稳定者3例;疾病进展组7例。获益组、进展组治疗前血清IL-6浓度分别为（7.58±4.06）pg/L、（9.41±8.79）pg/L,基线水平一致;治疗后获益组、进展组血清 IL-6 浓度为（25.54±31.38）pg/L、（26.77±22.24）pg/L。两组间血清IL-6浓度变化无明显差异,但进展组治疗后血清IL-6浓度较治疗前明显升高（P<0.05）。治疗获益组中,缓解者、稳定者治疗前血清IL-6浓度分别为（8.10±3.19）pg/mL、（6.89±4.91）pg/mL,治疗后为（14.39± 15.36）pg/mL、（33.41±42.16）pg/mL。两者血清IL-6浓度变化无明显差异。疾病进展组血清IL-6较治疗前明显升高,可能提示淋巴瘤不良转归,有待于进行大样本研究进一步证实。2.成功建立L1210白血病小鼠模型。18只SPF级雄性BALB/c小鼠,随机分为3组,每组6只,分别为模型组、中药组、正常组。模型组和中药组小鼠经尾静脉接种对数生长期L1210细胞1×107个/只,正常组小鼠经尾静脉注射等体积的生理盐水。造模后第10天,尾静脉取血制备血涂片,模型组和中药组小鼠外周血涂片均可见原始及幼稚淋巴细胞,外周血白血病细胞比例模型组小鼠为（10.67±1.57）%,中药组为（10.83±1.91）%,两组无明显差异（P>0.05）。正常组外周血无异常淋巴细胞。3.浙贝黄芩汤明显改善L1210白血病小鼠生存状态,降低白血病负荷,明显减少肿瘤浸润,有助于防治肿瘤性贫血。①生存状态:造模后小鼠均萎靡不振、喜静恶动,竖毛无光、体重下降,逐渐出现脊背弓起、步态不稳,模型组个别小鼠腹部及尾部出现硬结,二便失禁。中药组与模型组相比,接受浙贝黄芩汤干预的中药组小鼠在进食量、精神、活动方面有所改善,出现死亡时间晚于模型组。②体重变化:各组小鼠的体重随时间变化而逐渐增长,中药组体重增长幅度优于模型组,分组第15天,模型组、中药组、正常组体重分别为（23.42± 1.21）g、（23.95± 1.07）g、（25.72±0.84）g。③全血细胞分析:模型组、中药组、正常组白细胞计数分别为（9.36±1.75）×109/L、（9.11±0.70）× 109/L、（6.92±0.91）×109/L,淋巴细胞计数分别为（6.38±0.78）×109/L、（5.77±1.49）× 109/L、（2.55±1.33）×109/L,模型组与中药组白细胞及淋巴细胞计数均较正常组明显升高（P<0.05）;中药组白细胞及淋巴细胞计数虽低于模型组,但差异无统计学意义。模型组、中药组、正常组血红蛋白值分别为（140.25±31.20）g/L、（163.25±14.10）g/L、（162.83±4.91）g/L。与正常组相比,中药组血红蛋白无下降,但模型组下降20g/L。④外周血白血病细胞比例:模型组小鼠外周血白血病细胞比例为（18.50±2.29）%,中药组小鼠为（15.83±0.69）%,中药组外周血白血病细胞比例低于模型组（P<0.01）。⑤脾脏、肝脏病理:模型组、中药组、正常组脾脏重量分别为（0.12±0.01）g、（0.09±0.01）g、（0.09±0.02）g,模型组及中药组小鼠脾脏都有不同程度的肿胀,均可见到肿瘤浸润坏死灶。中药组脾脏重量明显低于模型组（P<0.05）,且脾脏肿胀程度轻,肿瘤浸润灶少,坏死灶也少于模型组。各组肝脏重量无显着差异,模型组及中药组肝脏组织结构均有破坏,模型组肝脏表面可见多个灰白色浸润灶、坏死灶,中药组肝脏表面粗糙、肿瘤浸润灶数量及面积均少于模型组。结果显示浙贝黄芩汤可以减轻白血病负荷,减少肿瘤浸润,有助于防治肿瘤性贫血。4.L1210白血病小鼠骨髓微环境IL-6、TNF-α、Wip1mRNA的表达明显升高,浙贝黄芩汤可明显降低骨髓及血清IL-6、TNF-α,但未降低骨髓Wip1mRNA的表达。①血清IL-6、TNF-α表达量:模型组、中药组、正常组小鼠血清IL-6表达量分别为（45.47±12.88）ng/L、（23.91±7.44）ng/L、（26.73±2.15）ng/L;血清TNF-α表达量分别为（65.79± 19.77）ng/L、（36.65±15.88）ng/L、（38.68±8.79）ng/L。中药组血清 IL-6、TNF-α表达均明显低于模型组（P<0.05）,与正常组基本持平。②骨髓IL-6、TNF-α表达量:骨髓IL-6表达量,模型组、中药组、正常组分别为（56.33±20.73）ng/L、（21.34±5.08）ng/L、（27.40±3.59）ng/L;骨髓 TNF-α 表达量分别为（40.66±14.47）ng/L、（24.17±2.94）ng/L、（18.49±2.97）ng/L。中药组骨髓 IL-6、TNF-α 表达均明显低于模型组（P<0.01）。③探索炎性因子与Wip1mRNA表达水平的相关性:模型组、中药组、正常组的骨髓Wip1mRNA相对表达量分别为（5.88±6.32）、（3.96±1.95）、（1.00±0.56）。模型组与中药组骨髓Wip1mRNA表达量均高于正常组（P<0.05）,但中药组与模型组骨髓Wip1mRNA表达量之间无明显差异（P>0.05）,骨髓Wip1与炎性因子的表达量未显示出相关性。结论:淋巴细胞白血病状态下小鼠骨髓炎性因子的表达明显升高,浙贝黄芩汤可以改善淋巴细胞白血病小鼠的骨髓炎性微环境以减轻肿瘤负荷。
刘运华[10]（2020）在《滋肾益髓生血方对AA小鼠骨髓保护作用及T-bet/GATA-3影响的实验研究》文中研究指明再生障碍性贫血（AplasticAnemia,AA）是由遗传、物理、化学、生物以及各种不明原因引起的骨髓衰竭性疾病,AA患者红细胞、白细胞与血小板减少,可出现严重的贫血、出血和感染。AA的发生与免疫功能异常有密切关系,T淋巴细胞依据膜表面分子抗原的不同,分为主要介导细胞毒性免疫的CD8+T和调节免疫的CD4+T细胞两个亚群,CD4/CD8比例失衡与AA骨髓造血组织的免疫破坏密切相关。原始的CD4+T细胞又称为Th0细胞,Th1与Th2分别是由Th0通过STAT1和STAT6途径分化而来的,树突状细胞细胞分泌的IL-12等可以促进Th1细胞活化,并分泌介导第Ⅳ型免疫反应的Ⅰ型细胞因子,主要包括IFN-γ、IL-2、TNF-α等;激活的Th2细胞主要分泌Ⅱ型细胞因子,主要包括IL-10、IL-5、IL-4、和IL-13等,获得性AA的免疫发病机制与Th1细胞的极化和Th1/Th2失衡有关。GATA-3是可调控CD4+T细胞向Th2细胞分化的转录因子,它能特异性启动Th2细胞因子的表达;特异转录因子T-bet能够启动Th0细胞向Th1细胞极化过程,还能通过IFN-γ等诱导T细胞以及NK细胞启动T-bet转录因子的表达,阻断Th2细胞的极化。目前,临床主要采用免疫抑制剂环磷酰胺等来治疗,但存在副作用大等不利影响,而临床运用中医药往往能取得很好的疗效。滋肾益髓生血方是依据中医“肾藏精,精充髓,髓生血”理论组方的中药复方,我们前期动物实验发现滋肾益髓生血法对苯与环磷酰胺诱导的AA大鼠的骨髓衰竭的改善情况较温肾益髓法和补肾益髓生血法更好。因此,本研究采用60Co-γ辐射联合免疫细胞注射构建AA小鼠模型,通过瑞士-吉姆萨染色、流式细胞术检测、HE染色、酶联免疫检测、免疫组织化学、Western Blot和RT-PCR方法,研究滋肾益髓生血方对AA小鼠转录因子T-bet与GATA-3的影响,为中医“肾藏精,精生髓”的理论提供实验依据。目的:采用60Co-γ辐射联合免疫细胞注射构建AA小鼠模型,以康力龙作为对照药物,探讨滋肾益髓生血方对AA小鼠的药效学作用,流式细胞术检测AA小鼠T淋巴细胞CD3、CD4、CD8以及CD4/CD8的变化,瑞士-吉姆萨染色观察AA小鼠骨髓细胞形态变化,酶联免疫法研究AA小鼠血清中IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-5、IL-13、IL-4、IL-10等7种细胞因子的变化;免疫组织化学研究AA小鼠脾脏组织T-bet和GATA-3蛋白表达情况;Western Blot和RT-PCR检测AA小鼠骨髓T-bet与GATA-3蛋白及mRNA的表达。方法:1.药效学实验:55只清洁级雄性近交系BALB/c小鼠,随机分成正常组10只,剩余45只用60Co-γ照射5.5 Gy造模,辐射结束后,迅速经尾静脉完成DBA/2小鼠的活体免疫细胞混悬液注射,注射量为每只1×106个免疫细胞,诱导小鼠AA模型;存活的小鼠分为模型组、康力龙组与滋肾益髓生血组,每天给药并观察各组小鼠一般状态,每周称量记录体质量变化;在灌胃给药4周结束时,摘眼球取抗凝血,检测各组小鼠外周血中HGB、RBC、WBC、PLT变化,取小鼠股骨制备骨髓悬液,用血球计数板在倒置显微镜下观察计数小鼠骨髓有核细胞数;制备血涂片,用瑞士-吉姆萨染色法观察AA小鼠血细胞变化;制作骨髓涂片,用瑞士-吉姆萨染色观察AA小鼠骨髓细胞形态变化;制作AA小鼠脾脏组织切片,采用HE染色法观察其病理形态变化。2.流式细胞术:检测AA小鼠外周免疫细胞CD3、CD4、CD8以及CD4/CD8的变化。3.酶联免疫:检测 AA 小鼠血清中 IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-5、IL-13、IL-4、IL-10 细胞因子的变化。4.免疫组织化学:检测AA小鼠脾脏组织中T-bet、GATA-3蛋白的表达量变化。5.Western Blot:检测AA小鼠骨髓组织中T-bet、GATA-3蛋白的表达量变化。6.RT-PCR:检测AA小鼠骨髓组织中T-betmRNA、GATA-3mRNA的表达量变化。结果:1.滋肾益髓生血方对60Co-γ联合免疫诱导AA小鼠药效学影响1.1 一般状态:滋肾益髓生血方等治疗组均能明显改善AA小鼠的一般状态,提高活动度和饮食量,维持AA小鼠的体质量。1.2体质量:与正常组小鼠相比,模型组AA小鼠体质量较低（P<0.01）;而滋肾益髓生血方组小鼠体质量数值均明显高于模型组（P<0.01）。1.3外周血:与正常组小鼠相比,模型组AA小鼠WBC、HGB的数值显着降低（P<0.01）;RBC数量呈降低（P<0.05）,PLT变化无统计学意义（P>0.05）;与模型组比较,滋肾益髓生血方组的HGB数值均显着升高（P<0.01）,康力龙组的WBC和RBC均显着增加（P<0.01,P<0.05）。1.4血涂片:与正常组小鼠相比,模型组AA小鼠血细胞数量偏少,异常形态的红细胞较多,滋肾益髓生血方组有一定的改善。1.5骨髓涂片:模型组AA小鼠骨髄出现较多大脂肪滴与纤维等非造血组织,骨髓各系幼稚细胞数量降低;滋肾益髓生血方组的AA小鼠骨髓中的非造血细胞明显减少,骨髓衰退情况明显好转。1.6 骨髓有核细胞数:与正常组相比,模型组AA小鼠骨髓有核细胞数明显降低,康力龙与滋肾益髓生血方组的小鼠骨髓有核细胞数有升高（P<0.01,P<0.05）。1.7 脾脏HE染色:模型组AA小鼠脾组织淋巴小结形态不规则,红髓和白髓边界分辨不清,白髓边界呈现不规则形,脾血窦和脾索较难辨别清楚;各治疗组小鼠脾脏淋巴结趋于正常形态,红髓白髓边界趋于清晰,血窦和脾索较明显,红白髓明显比模型组更加规则。2.滋肾益髓生血方对60Co-γ联合免疫诱导AA小鼠免疫功能的影响2.1 血清因子:模型组AA小鼠IFN-γ,TNF-α、IL-2、IL-5、IL-13水平均显着升高,IL-4、IL-10均显着降低（P<0.01）。与模型组相比,除康力龙组的IL-5外,康力龙组、滋肾益髓生血组的IFN-y、TNF-α、IL-2、IL-5、IL-13水平均降低（P<0.01,P<0.05）;而IL-4、IL-10水平均有所升高（P<0.01,P<0.05）。2.2 流式细胞术:模型组AA小鼠CD8、CD3、CD4三种免疫细胞的数量均处于低水平（P<0.01）,CD4/CD8比值降低（P<0.01）;与模型组AA小鼠比较,各治疗组的CD4、CD8均有所升高（P<0.01,P<0.05）,滋肾益髓生血组CD3明显升高（P<0.05）。3.滋肾益髓生血方对60Co-γ联合免疫诱导AA小鼠脾脏组织中T-bet、GATA-3蛋白的影响免疫组化结果显示:与正常组小鼠GATA-3蛋白表达量比较,模型组AA小鼠脾组织中GATA-3蛋白表达降低（P<0.01）,与模型组比较,各治疗组小鼠脾组织的GATA-3蛋白表达增多（P<0.01）;康力龙组与滋肾益髓生血组GATA-3蛋白表达无差异（P>0.05）。与正常组小鼠相比,模型组AA小鼠脾组织细胞胞浆中T-bet蛋白表达呈强阳性（P<0.01）,与模型组比较,各治疗组的T-bet蛋白表达明显减少（P<0.01）;康力龙组与滋肾益髓生血组T-bet蛋白表达无差异（P>0.05）。4.滋肾益髓生血方对60Co-γ联合免疫诱导AA小鼠骨髓T-bet、GATA-3蛋白与mRNA的影响4.1 Western Blot检测结果示:模型组AA小鼠骨髓组织中的GATA-3蛋白表达量低于正常组（P<0.01）,滋肾益髓生血组与康力龙组小鼠骨髓GATA-3表达量变化无统计学意义（P>0.05）。模型组AA小鼠骨髓的T-bet表达量高于正常组（P<0.05）,康力龙组和滋肾益髓生血组AA小鼠骨髓中的T-bet表达量低于模型组（P<0.01,P<0.05）。4.2 RT-PCR检测结果示:模型组与各治疗组AA小鼠骨髓的T-bet mRNA表达量高于正常组（P<0.01）,各治疗组AA小鼠骨髓中的T-betmRNA表达量均低于模型组（P<0.01）,与康力龙组相比,滋肾益髓生血组AA小鼠骨髓T-betmRNA表达量均下降（P<0.01）;模型组AA小鼠骨髓的GATA-3 mRNA表达量明显低于正常组（P<0.01）,与模型组相比,康力龙组与滋肾益髓生血组GATA-3 mRNA表达量上升（P<0.01）。结论:1.滋肾益髓生血方能够缓解AA小鼠的一般状态,提高小鼠的体质量,能够升高AA小鼠外周血中RBC、WBC、HGB的数量,增加骨髓有核细胞数,可以减轻AA小鼠脾脏病理损害,降低免疫损伤,保护骨髓造血功能。2.滋肾益髓生血方可以升高AA小鼠外周血中CD3、CD4细胞数量,升高CD4/CD8比例,降低AA小鼠外周血清中IFN-y、IL-2、TNF-α、IL-5、IL-13等细胞因子,升高IL-4、IL-10等细胞因子,从而降低免疫异常活化造成的免疫损伤,维持AA小鼠免疫平衡稳态。3.滋肾益髓生血方可以有效的抑制AA小鼠脾脏和骨髓组织中的T-bet蛋白与mRNA的表达,增加GATA-3蛋白与mRNA的表达;滋肾益髓生血方可能通过调节T-bet/GATA-3相关信号通路,调节机体免疫平衡,延缓AA小鼠骨髓衰竭的进程。
二、感染患者外周血及骨髓涂片细胞形态观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、感染患者外周血及骨髓涂片细胞形态观察（论文提纲范文）
（1）高嗜酸性粒细胞综合征的临床及实验室特征研究（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 临床特征和实验室各项指标检查 |
| 1.2.2 外周血及骨髓细胞形态学检查 |
| 1.2.3 骨髓纤维化程度 |
| 1.2.4 细胞遗传学、荧光原位杂交和分子检测 |
| 1.3 统计学处理 |
| 2 结 果 |
| 2.1 基因核型结果分析 |
| 2.2 病因分析 |
| 2.3 临床症状分析 |
| 2.4 HES患者的一般资料分析 |
| 2.5 HES患者外周血及骨髓涂片嗜酸性粒细胞的形态学分析 |
| 3 讨 论 |
（2）外周血涂片骨髓细胞形态及骨髓活检联合检测对骨髓增生异常综合征的诊断价值（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料: |
| 1.2 方法: |
| 1.3 分析指标: |
| 1.4 统计学处理: |
| 2 结果 |
| 2.1 外周血涂片、骨髓细胞形态、骨髓活检及三者联合检测对MDS的诊断结果分析: |
| 2.2 外周血涂片、骨髓细胞形态、骨髓活检及三者联合检测诊断MDS的相关参数分析: |
| 2.3 三项联合检测诊断MDS分型的结果分析: |
| 3 讨论 |
（3）慢性淋巴细胞白血病小鼠模型的制备及生姜挥发油抑癌作用的初步探究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 白血病概述 |
| 1.1 慢性淋巴细胞白血病(CLL) |
| 1.2 慢性髓细胞白血病(CML) |
| 1.3 急性淋巴细胞白血病(ALL) |
| 1.4 急性髓细胞白血病(AML) |
| 2.白血病小鼠模型的制备 |
| 2.1 自发模型 |
| 2.2 诱发模型 |
| 2.2.1 化学致癌剂诱发 |
| 2.2.2 病毒诱发 |
| 2.2.3 放射辐射诱发 |
| 2.3 移植模型 |
| 2.3.1 同源移植 |
| 2.3.2 异种移植 |
| 2.4 遗传修饰模型 |
| 2.4.1 转基因模型 |
| 2.4.2 基因敲除模型 |
| 3.中药挥发油的功能 |
| 3.1 中药挥发油抑制白血病细胞增殖 |
| 3.2 中药挥发油诱导白血病细胞凋亡 |
| 3.3 中药挥发油诱导白血病细胞分化 |
| 3.4 中药挥发油抗肿瘤机制 |
| 4.展望 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 慢性淋巴细胞白血病小鼠模型的制备 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验仪器 |
| 2.2 实验试剂及耗材 |
| 2.3 实验小鼠 |
| 2.4 实验细胞 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 模型小鼠的制备 |
| 3.1.1 免疫抑制小鼠模型的制备 |
| 3.1.2 CLL小鼠模型的制备-化学物质诱导法 |
| 3.1.3 CLL小鼠模型的制备-细胞移植法 |
| 3.2 检测方法 |
| 3.2.1 小鼠血液中白细胞数量检测 |
| 3.2.1.1 白细胞计数 |
| 3.2.1.2 吉姆萨染色 |
| 3.2.1.3 流式细胞术 |
| 3.2.2 小鼠各组织病变检测 |
| 3.2.2.1 组织石蜡切片的制备 |
| 3.2.2.2 骨髓石蜡切片的制备 |
| 3.2.2.3 HE染色 |
| 3.2.2.4 组织免疫荧光染色 |
| 3.2.3 小鼠骨髓细胞凋亡相关因子的鉴定 |
| 3.2.3.1 总RNA的提取 |
| 3.2.3.2 去基因组及RNA反转录 |
| 3.2.3.3 qRT-PCR |
| 3.2.3.4 Western blot检测 |
| 3.2.4 数据统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 模型小鼠的制备 |
| 4.1.1 免疫抑制小鼠模型的制备 |
| 4.1.1.1 小鼠体重分析 |
| 4.1.1.2 小鼠免疫器官重量分析 |
| 4.1.1.3 外周血免疫细胞数量变化分析 |
| 4.1.1.4 流式细胞术检测外周血免疫细胞种类变化 |
| 4.1.1.5 HE染色观察免疫器官中免疫细胞数量变化 |
| 4.1.1.6 免疫抑制小鼠模型的制备 |
| 4.1.2 CLL小鼠模型的制备-化学物质诱导法 |
| 4.1.2.1 小鼠体重分析 |
| 4.1.2.2 外周血白细胞数量变化分析 |
| 4.1.2.3 流式细胞术检测外周血CD19~+CD5~+B淋巴细胞 |
| 4.1.2.4 小鼠骨髓细胞凋亡相关因子的鉴定 |
| 4.1.3 CLL小鼠模型的制备-细胞移植法 |
| 4.1.3.1 小鼠体重分析 |
| 4.1.3.2 外周血白细胞数量变化分析 |
| 4.1.3.3 流式细胞术检测外周血CD19~+CD5~+B淋巴细胞 |
| 4.1.3.4 小鼠各组织MEC-1 细胞浸润情况鉴定 |
| 4.1.3.5 小鼠骨髓细胞凋亡相关因子的鉴定 |
| 4.1.4 化学物质诱导法及细胞移植法的对比 |
| 5 讨论 |
| 6 本章小结 |
| 第二章 生姜挥发油抑癌作用的初步探究 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验仪器 |
| 2.2 实验试剂及耗材 |
| 2.3 实验细胞 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 生姜挥发油对CLL细胞的作用 |
| 3.1.1 细胞增殖检测 |
| 3.1.1.1 MEC-1 细胞接种密度及CCK8 检测时间确定 |
| 3.1.1.2 MEC-1 细胞增殖活性检测 |
| 3.1.2 细胞凋亡检测 |
| 3.1.3 细胞凋亡相关因子的鉴定 |
| 3.1.3.1 qRT-PCR |
| 3.1.3.2 Western blot检测 |
| 3.2 生姜挥发油对CLL小鼠的作用 |
| 3.2.1 小鼠外周血白细胞数量检测 |
| 3.2.2 小鼠骨髓细胞凋亡相关因子鉴定 |
| 3.2.2.1 qRT-PCR |
| 3.2.2.2 Western Blot检测 |
| 3.3 数据统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 生姜挥发油对CLL细胞的作用 |
| 4.1.1 细胞增殖检测 |
| 4.1.1.1 MEC-1 细胞接种密度及CCK8 检测时间确定 |
| 4.1.1.2 MEC-1 细胞增殖活性检测 |
| 4.1.2 MEC-1 细胞形态 |
| 4.1.3 MEC-1 细胞凋亡检测 |
| 4.1.4 MEC-1 细胞凋亡相关因子鉴定 |
| 4.2 生姜挥发油对CLL小鼠的作用 |
| 4.2.1 外周血白细胞数量变化分析 |
| 4.2.2 小鼠骨髓细胞凋亡相关因子的鉴定 |
| 5 讨论 |
| 6 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（4）骨髓增生异常综合征合并大颗粒淋巴细胞白血病患者临床与实验室特征及全外显子测序研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 骨髓增生异常综合征合并大颗粒淋巴细胞白血病临床及实验室特征 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 主要材料、试剂与仪器 |
| 2.2 研究对象 |
| 2.3 实验步骤及方法 |
| 2.4 MDS-LGLL诊断标准 |
| 3. 结果 |
| 3.1 骨髓增生异常综合征合并大颗粒淋巴细胞白血病患者临床特征和实验室检查 |
| 3.2 骨髓增生异常综合征合并大颗粒淋巴细胞白血病患者病理和免疫表型特征 |
| 3.3 二代测序 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 6.不处 |
| 第二章 骨髓增生异常综合征合并大颗粒淋巴细胞白血病全外显子测序分析及基因突变筛选 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 主要材料、试剂与仪器 |
| 2.2 研究对象 |
| 2.3 实验步骤及方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 单例患者不同时期全外显子测序结果分析 |
| 3.2 三例MDS-LGLL患者全外显子测序结果分析 |
| 3.3 突变基因筛选 |
| 3.4 突变基因功能预测 |
| 3.5 Sanger测序验证 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 6. 不足之处 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略对照表 |
| 致谢 |
（5）减毒沙门氏菌VNP20009对急性白血病的治疗作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 白血病概述 |
| 1.1.1 白血病的定义及常见症状 |
| 1.1.2 白血病的发现及分类 |
| 1.1.3 白血病发病机制研究进展 |
| 1.1.4 白血病流行病学 |
| 1.1.5 白血病的治疗 |
| 1.2 白血病自发性缓解与细菌感染 |
| 1.3 细菌抗肿瘤研究 |
| 1.3.1 细菌抗肿瘤研究历程 |
| 1.3.2 细菌抗肿瘤的优势 |
| 1.3.3 细菌抗肿瘤的应用前景 |
| 1.4 沙门氏菌抗肿瘤研究 |
| 1.4.1 沙门氏菌有效靶向肿瘤 |
| 1.4.2 沙门氏菌介导肿瘤细胞自我死亡 |
| 1.4.3 沙门氏菌减少肿瘤转移 |
| 1.4.4 沙门氏菌诱发宿主抗肿瘤免疫反应 |
| 1.4.5 沙门氏菌增强肿瘤化疗敏感性 |
| 1.4.6 沙门氏菌联合治疗进一步促进了肿瘤的消退 |
| 1.4.7 沙门氏菌的遗传学改造 |
| 1.4.8 沙门氏菌可作为递呈肿瘤治疗分子载体 |
| 1.5 减毒沙门氏菌VNP20009的研究 |
| 1.5.1 减毒沙门氏菌VNP20009的构建及遗传特点 |
| 1.5.2 减毒沙门氏菌VNP20009的生物分布特性 |
| 1.5.3 减毒沙门氏菌VNP20009的毒理学评价 |
| 1.5.4 减毒沙门氏菌VNP20009的抗肿瘤研究 |
| 1.6 课题研究思路、目的、意义及内容 |
| 1.6.1 研究思路 |
| 1.6.2 研究目的和意义 |
| 1.6.3 研究内容 |
| 第二章 VNP20009对急性淋巴细胞白血病细胞的体内外生长抑制作用及机制研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 菌株及细胞株 |
| 2.2.2 实验动物及饲养 |
| 2.2.3 试剂与耗材 |
| 2.2.4 主要试剂的配制 |
| 2.2.5 仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 沙门氏菌VNP20009的制备 |
| 2.3.2 细胞培养 |
| 2.3.3 细菌-细胞体外共培养实验 |
| 2.3.4 Annexin V-PE/7-ADD双染流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 2.3.5 L1210皮下瘤模型建立 |
| 2.3.6 动物分组与给药治疗 |
| 2.3.7 石蜡切片的制备 |
| 2.3.8 石蜡切片苏木素&伊红(H&E)染色分析 |
| 2.3.9 石蜡切片缺口末端标记(TUNEL)免疫荧光分析 |
| 2.3.10 总蛋白的提取 |
| 2.3.11 蛋白浓度测定 |
| 2.3.12 Western Blot检测目标蛋白 |
| 2.3.13 统计学分析 |
| 2.4 研究结果 |
| 2.4.1 VNP20009 体外抑制L1210/Jurkat细胞增殖 |
| 2.4.2 VNP20009 体外诱导L1210/Jurkat细胞凋亡 |
| 2.4.3 VNP20009治疗L1210细胞荷瘤小鼠体重和活动未见异常 |
| 2.4.4 VNP20009抑制L1210皮下移植瘤生长 |
| 2.4.5 VNP20009引起L1210皮下移植瘤组织坏死 |
| 2.4.6 VNP20009诱导L1210皮下移植瘤细胞凋亡 |
| 2.4.7 VNP20009治疗L1210皮下移植瘤凋亡蛋白表达量升高 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 第三章 VNP20009对急性髓系白血病细胞的体内外生长抑制作用及机制研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 菌株及细胞株 |
| 3.2.2 实验动物 |
| 3.2.3 主要试剂与耗材 |
| 3.2.4 主要试剂的配制 |
| 3.2.5 主要仪器设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 沙门氏菌VNP20009的制备 |
| 3.3.2 细胞培养 |
| 3.3.3 细菌-细胞体外共培养实验 |
| 3.3.4 Annexin V-PE/7-ADD双染流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 3.3.5 HL-60皮下瘤模型建立 |
| 3.3.6 动物分组与给药治疗 |
| 3.3.7 石蜡切片的制备 |
| 3.3.8 石蜡切片苏木素&伊红(H&E)染色分析 |
| 3.3.9 石蜡切片缺口末端标记(TUNEL)免疫荧光分析 |
| 3.3.10 总蛋白的提取 |
| 3.3.11 蛋白浓度测定 |
| 3.3.12 Western Blot检测目标蛋白 |
| 3.3.13 统计学分析 |
| 3.4 研究结果 |
| 3.4.1 VNP20009体外抑制HL-60细胞增殖 |
| 3.4.2 VNP20009体外诱导HL-60细胞凋亡 |
| 3.4.3 VNP20009治疗HL-60细胞荷瘤小鼠体重和活动情况无异常 |
| 3.4.4 VNP20009抑制HL-60皮下移植瘤生长 |
| 3.4.5 VNP20009引起HL-60皮下移植瘤组织坏死 |
| 3.4.6 VNP20009诱导HL-60皮下移植瘤细胞凋亡 |
| 3.4.7 VNP20009治疗HL-60皮下移植瘤组织凋亡蛋白表达量增加 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 VNP20009 对系统性MLL-AF9 驱动型AML小鼠的治疗作用及免疫激活研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 菌株及细胞 |
| 4.2.2 实验动物 |
| 4.2.3 主要试剂与耗材 |
| 4.2.4 主要试剂的配制 |
| 4.2.5 主要仪器设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 沙门氏菌VNP20009的制备 |
| 4.3.2 沙门氏菌VNP20009的组织分布 |
| 4.3.3 MLL-AF9 驱动型AML白血病细胞的复苏 |
| 4.3.4 MLL-AF9 驱动型AML白血病细胞小鼠尾静脉注射造模 |
| 4.3.5 抗凝全血样本的采集 |
| 4.3.6 血清样本的采集 |
| 4.3.7 MLL-AF9 驱动型AML小鼠外周血中白血病细胞(GFP+)检测 |
| 4.3.8 血涂片瑞氏-吉姆萨染色 |
| 4.3.9 小鼠外周血细胞分类计数 |
| 4.3.10 原代脾脏单细胞悬液的制备 |
| 4.3.11 原代骨髓单细胞悬液的制备 |
| 4.3.12 原代白血病细胞红细胞裂解处理 |
| 4.3.13 原代白血病细胞的冻存 |
| 4.3.14 MLL-AF9 驱动型AML小鼠分组与给药治疗 |
| 4.3.15 细胞因子与趋化因子的测定 |
| 4.3.16 流式细胞术检测细胞表面分子 |
| 4.3.17 流式细胞术检测胞内细胞因子的表达 |
| 4.3.18 统计学分析 |
| 4.4 研究结果 |
| 4.4.1 VNP20009小鼠组织分布情况 |
| 4.4.2 MLL-AF9 驱动型AML小鼠模型的构建 |
| 4.4.3 VNP20009 治疗MLL-AF9 驱动型AML小鼠体重未见明显异常 |
| 4.4.4 VNP20009 抑制MLL-AF9 驱动型AML小鼠外周血中白血病细胞的增殖 |
| 4.4.5 VNP20009 抑制MLL-AF9 驱动型AML小鼠脾脏中白血病细胞的增殖 |
| 4.4.6 VNP20009 影响MLL-AF9 驱动型AML小鼠外周血细胞的分布 |
| 4.4.7 NP20009对MLL-AF9驱动型AML主要器官重量的影响 |
| 4.4.8 VNVNP20009 延长MLL-AF9驱动型 AML小鼠生存期 |
| 4.4.9 VNP20009调节MLL-AF9驱动型 AML小鼠血清细胞因子&趋化因子的分泌 |
| 4.4.10 VNP20009调节MLL-AF9驱动型 AML小鼠血清细胞因子&趋化因子的分泌 |
| 4.4.11 VNP20009 激活 MLL-AF9驱动型 AML 小鼠外周血中T淋巴细胞的增殖 |
| 4.4.12 VNP20009 促进 MLL-AF9 驱动型 AML 小鼠脾脏中 IFN-γ+效应T淋巴细胞的极化 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 结论 |
| 创新之处 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（6）靶向CD19抗原的新型嵌合抗原受体NK细胞的优化构建和功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 CAR-T的抗肿瘤研究和构建策略 |
| 1.2 人工CAR的结构 |
| 1.2.1 胞外抗原结合区 |
| 1.2.2 胞内细胞信号传导区与跨膜链接区 |
| 1.2.3 CAR-T的抗肿瘤机制及进展 |
| 1.3 CAR-T技术研究和临床应用的瓶颈 |
| 1.3.1 细胞因子风暴 |
| 1.3.2 脱靶效应 |
| 1.3.3 实体瘤应用瓶颈 |
| 1.3.4 转染载体的缺陷 |
| 1.3.5 移植物抗宿主反应与免疫细胞活性维持 |
| 1.3.6 免疫抑制作用 |
| 1.3.7 CAR-T细胞来源的限制 |
| 1.4 NK细胞为代表的非特异性免疫细胞研究 |
| 1.4.1 NK细胞的生物学特性研究 |
| 1.4.2 NK细胞对肿瘤的杀伤机理 |
| 1.5 NK细胞在治疗中的研究进展 |
| 1.5.1 针对血液肿瘤的NK细胞过继性免疫治疗研究 |
| 1.5.2 针对实体瘤的NK细胞相关免疫研究 |
| 1.6 人工CAR修饰的NK细胞构建与研究进展 |
| 1.6.1 CAR-NK分子靶点 |
| 1.6.2 CAR改造NK细胞的临床应用 |
| 1.7 CAR-NK相关的细胞因子介导的内源性NK细胞活化 |
| 1.8 非特异性免疫细胞的选择 |
| 1.8.1 CIK细胞的生物学特性和抗瘤特点研究 |
| 1.8.2 NK细胞来源与筛选 |
| 1.9 特异性分子靶点的研究与选择 |
| 1.10 本研究的目的和意义 |
| 2 CIK细胞人工CAR改造研究 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.1.1 实验细胞株与质粒 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 |
| 2.1.3 主要实验试剂及耗材 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 外周血单个核细胞的分离和培养 |
| 2.2.2 CAR-T细胞与CAR-CIK细胞的体外制备和体外扩增培养 |
| 2.2.3 CAR表达载体的构建及转化 |
| 2.2.4 病毒转导与检测 |
| 2.2.5 CAR-T细胞体外扩增 |
| 2.2.6 CAR-CIK细胞体外扩增 |
| 2.2.7 细胞计数及细胞形态增殖情况观察 |
| 2.2.8 CAR-CIK和CAR-T细胞免疫表型的检测 |
| 2.2.9 CAR-CIK和CAR-T细胞体外抗肿瘤活性的研究 |
| 2.2.10 统计学方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 CAR-T细胞和CAR-CIK细胞体外制备和扩大培养 |
| 2.3.2 设计并构建Psb1576-CD19-CAR重组载体 |
| 2.3.3 扩增CD19片段重组质粒构建和慢病毒的制备 |
| 2.3.4 CD19抗原过表达靶细胞稳定株构建 |
| 2.3.5 CD19-CAR在T细胞中的转导效率和免疫表型 |
| 2.3.6 CD19-CAR在CIK细胞中的转导效率和免疫表型 |
| 2.3.7 杀伤后细胞因子释放能力检测 |
| 2.3.8 CIK和CAR-T细胞体外靶向细胞杀伤能力分析比较 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 NK细胞系的人工CAR改造研究 |
| 3.1 实验细胞株与材料试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 目的片段的PCR扩增和胶回收 |
| 3.2.3 表达GFP、IL-15和4-1BB基因的重组载体的构建及转化 |
| 3.2.4 病毒转导 |
| 3.2.5 流式细胞技术检测CAR阳性细胞比例以及表型分析 |
| 3.2.6 乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CAR-NK-92细胞杀伤活性 |
| 3.2.7 细胞因子释放能力检测 |
| 3.2.8 统计学分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 CAR-NK-92重组质粒的设计 |
| 3.3.2 CAR-NK-92重组质粒的载体构建 |
| 3.3.3 CAR-NK-92重组质粒的筛选验证与载体包装和滴度测定 |
| 3.3.4 CAR-NK-92细胞的构建与免疫表型检测 |
| 3.3.5 不同浓度条件培养基对NK细胞扩增倍数的影响 |
| 3.3.6 不同浓度的条件培养基对NK细胞扩增以及活化表型的影响 |
| 3.3.7 CD19-CAR-NK-92细胞体外靶向识别杀伤能力检测 |
| 3.3.8 杀伤后细胞因子释放能力检测 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 脐血来源的NK细胞人工CAR改造研究 |
| 4.1 实验用细胞材料及试剂配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 脐血单个核细胞分离方法 |
| 4.2.2 脐血NK细胞分离方法 |
| 4.2.3 脐血NK细胞体外扩增培养 |
| 4.2.4 CAR表达载体的改造 |
| 4.2.5 针对NK细胞改良的CD19-CAR载体转导 |
| 4.2.6 CAR-NK细胞体外优化培养 |
| 4.2.7 脐血CAR-NK细胞免疫表型及重要功能性分子表达检测 |
| 4.2.8 脐血CAR-NK细胞对靶细胞的细胞毒作用检测 |
| 4.2.9 细胞因子释放能力检测 |
| 4.2.10 体内动物实验 |
| 4.2.11 过氧化物酶染色法 |
| 4.2.12 细胞总RNA提取与qRT-PCR检测基因表达水平 |
| 4.2.13 免疫印迹实验 |
| 4.2.14 细胞单基因测序与生信分析 |
| 4.2.15 临床研究试验前期方案设计 |
| 4.2.16 统计学数据处理分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 CAR-NK重组质粒的构建 |
| 4.3.2 脐血来源的NK细胞筛选与扩增培养 |
| 4.3.3 重组CD19-CAR载体的转导及转导效率检测 |
| 4.3.4 CD19-CAR-NK细胞分子表达 |
| 4.3.5 NK细胞对靶细胞杀伤作用的测定 |
| 4.3.6 杀伤后细胞因子释放能力检测 |
| 4.3.7 CD19-CAR-NK细胞的动物体内药效检测 |
| 4.3.8 CD19-CAR-NK细胞的动物体内安全性检测 |
| 4.3.9 CD19-CAR-NK细胞的动物模型中药代动力学 |
| 4.3.10 CD19-CAR-NK细胞的高通量测序分析 |
| 4.3.11 CD19-CAR-NK细胞的基因功能分类分析 |
| 4.3.12 CD19-CAR-NK细胞的细胞生物学调控 |
| 4.3.13 临床试验样本病理学分析 |
| 4.3.14 CD19-CAR-NK细胞临床预实验研究 |
| 4.3.15 CD19-CAR-NK细胞临床研究前患者样本分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 讨论 |
| 5.1 非特异性免疫细胞人工CAR的构建及细胞生物学研究 |
| 5.2 体外非特异性细胞扩增活化体系的优化 |
| 5.3 非特异性免疫细胞的选择与理论依据 |
| 5.3.1 CIK细胞方案 |
| 5.3.2 NK-92细胞方案 |
| 5.3.3 脐血NK细胞方案 |
| 5.4 CAR-NK的体内药效和基因表达谱分析 |
| 5.5 超越CAR-T的新型CAR-NK的优势与发展 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
| 博士学位论文修改情况确认表 |
（7）EPAS1对慢性高原病骨髓有核红细胞增殖调控的分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要符号对照表 |
| 前言 |
| 第一章 慢性高原病患者骨髓有核红细胞HIF-1α及EPAS1的表达变化 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 研究对象 |
| 1.2.1 纳入标准 |
| 1.2.2 技术路线 |
| 1.3 材料与方法 |
| 1.3.1 主要仪器设备 |
| 1.3.2 主要试剂 |
| 1.3.3 主要试剂配制 |
| 1.3.4 研究标本采集与处理 |
| 1.3.5 qRT-PCR检测骨髓CD71+有核红细胞HIF-1α、EPAS1 mRNA表达 |
| 1.3.6 Westernblotting检测骨髓CD71+有核红细胞HIF-1α、EPAS1蛋白水平表达 |
| 1.3.7 统计分析 |
| 1.4 结果 |
| 1.4.1 研究对象一般临床资料 |
| 1.4.2 骨髓细胞形态学观察 |
| 1.4.3 骨髓CD71+有核红细胞HIF-1α、EPAS1 mRNA表达水平 |
| 1.4.4 骨髓CD71+有核红细胞HIF-1α、EPAS1蛋白表达水平 |
| 1.4.5 相关性分析 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 小结 |
| 第二章 慢性低氧条件下EPAS1对K562细胞增殖、周期及分化抗原表达的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验对象 |
| 2.2.2 主要仪器设备 |
| 2.2.3 主要试剂 |
| 2.2.4 主要试剂配制 |
| 2.2.5 实验方法 |
| 2.2.6 统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 EPAS1过表达/干扰慢病毒克隆 |
| 2.3.2 EPAS1过表达/干扰慢病毒包装与滴度检测 |
| 2.3.3 EPAS1过表达/干扰慢病毒感染K562细胞系的构建及验证 |
| 2.3.4 EPAS1过表达/干扰后影响K562细胞增殖 |
| 2.3.5 EPAS1过表达/干扰后影响K562细胞周期 |
| 2.3.6 EPAS1过表达/干扰后影响K562细胞表面分化抗原的表达 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 慢性低氧条件下EPAS1调控红系增殖分化下游基因通路研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 基因表达定量分析 |
| 3.3.2 基因差异性分析 |
| 3.3.3 差异基因富集分析 |
| 3.3.4 筛选红系候选基因 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 论文创新点 |
| 本研究的不足 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
（8）外周血淋巴细胞的形态及亚群特点与非霍奇金淋巴瘤诊断的相关性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 非霍奇金淋巴瘤临床诊疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）浙贝黄芩汤对淋巴细胞白血病小鼠骨髓微环境炎性因子的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 综述一 中药调控肿瘤微环境中炎性反应的研究进展 |
| 1 肿瘤微环境的概念 |
| 2 炎性因子在肿瘤发生发展中的作用 |
| 3 中药对肿瘤微环境中炎性组分的调控作用 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 Wip1与肿瘤炎性反应 |
| 1 Wip1的生理功能 |
| 2 Wip1在肿瘤中的表达差异 |
| 3 Wip1与免疫及炎性反应 |
| 4 Wip1在肿瘤炎性反应中的作用 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 实验一 血清炎性因子IL-6与淋巴瘤疗效的相关性初探 |
| 1 研究资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 浙贝黄芩汤对L1210白血病小鼠骨髓微环境炎性因子的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（10）滋肾益髓生血方对AA小鼠骨髓保护作用及T-bet/GATA-3影响的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分: 文献综述 |
| 综述一 再生障碍性贫血免疫机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 再生障碍性贫血Th1/Th2细胞亚群失衡与转录因子T-bet和GATA-3的调控作用 |
| 参考文献 |
| 第二部分: 实验研究 |
| 实验一 滋肾益髓生血方对~(60)Co-γ联合免疫诱导AA小鼠的药效学研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 实验二 滋肾益髓生血方对~(60)Co-γ联合免疫诱导AA小鼠免疫功能的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 实验三 滋肾益髓生血方对~(60)Co-γ联合免疫诱导AA小鼠脾组织T-bet、GATA-3蛋白表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 实验四 滋肾益髓生血方对~(60)Co-γ联合免疫诱导AA小鼠骨髓组织T-bet、GATA-3蛋白及mRNA的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附图 |
四、感染患者外周血及骨髓涂片细胞形态观察（论文参考文献）
- [1]高嗜酸性粒细胞综合征的临床及实验室特征研究[J]. 张岚,朱建锋,陈朴,郭玮,王蓓丽. 国际检验医学杂志, 2022(03)
- [2]外周血涂片骨髓细胞形态及骨髓活检联合检测对骨髓增生异常综合征的诊断价值[J]. 朱晓华,王建成,程彦,窦立萍. 河北医学, 2021(06)
- [3]慢性淋巴细胞白血病小鼠模型的制备及生姜挥发油抑癌作用的初步探究[D]. 南苗苗. 内蒙古大学, 2021(12)
- [4]骨髓增生异常综合征合并大颗粒淋巴细胞白血病患者临床与实验室特征及全外显子测序研究[D]. 艾珂欣. 南方医科大学, 2021(02)
- [5]减毒沙门氏菌VNP20009对急性白血病的治疗作用及机制研究[D]. 李美蓉. 华南理工大学, 2020
- [6]靶向CD19抗原的新型嵌合抗原受体NK细胞的优化构建和功能研究[D]. 曹韪凡. 东北林业大学, 2020
- [7]EPAS1对慢性高原病骨髓有核红细胞增殖调控的分子机制研究[D]. 刘慧慧. 青海大学, 2020(01)
- [8]外周血淋巴细胞的形态及亚群特点与非霍奇金淋巴瘤诊断的相关性研究[D]. 赵飞. 河北北方学院, 2020(06)
- [9]浙贝黄芩汤对淋巴细胞白血病小鼠骨髓微环境炎性因子的影响[D]. 苏鑫. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]滋肾益髓生血方对AA小鼠骨髓保护作用及T-bet/GATA-3影响的实验研究[D]. 刘运华. 北京中医药大学, 2020(04)
标签：急性髓性白血病论文; 急性淋巴细胞性白血病论文; 骨髓细胞论文; 骨髓增生性疾病论文; 慢性粒细胞白血病论文;