一、肾上腺髓质素与骨代谢研究进展(论文文献综述)
黄美能[1](2021)在《降钙素促CREB磷酸化诱导人牙周膜干细胞成骨分化的作用机制研究》文中研究说明研究背景口腔临床流调显示我国成年人牙齿丧失的主要原因之一是牙周病,牙周炎促使牙槽骨高度的丧失,进而导致牙体组织的脱落。然而目前牙周治疗的手段较为局限,因此探索牙周炎治疗的新方法是非常有意义。牙周炎不仅导致牙周软组织炎症进而引发疼痛,同时打破口腔内环境的稳定,使牙周组织失去生理性的动态平衡。牙周炎的治疗目的在控制炎症的同时,也要对丧失的牙周组织进行有效的恢复和重建。因此目前研究的热点不仅要从形态上恢复正常的牙周组织,并且在功能上尽量修复到天然健康牙的水平。这一目标依托当前快速发展的干细胞及组织工程技术是很可能实现的。由此可见,探索牙周骨性组织的具体修复机制,无论在临床或是科研意义上都将变得十分迫切。同时开展针对性的生物学研究,也将会为牙周炎的治疗方面提供非常重要的理论依据。牙周膜干细胞(PDLSCs)是具有向多种组织细胞类型分化的干细胞,常存在于人类的牙周膜中。最初PDLSCs是由用酶消化法所得,Seo等[1]发现从人恒牙周组织中分离出的这种细胞,具有向多种牙周组织分化的潜能。此外有研究结果表明诱导PDLSCs可观察到OCN、BSP等表达[2],而这些是细胞成骨分化的标记蛋白;同时,将结合在支架上的PDLSCs种植于动物模型体内,发现细胞逐渐从形态上和功能上都有向成骨方向分化的趋势,表明PDLSCs有向成骨细胞分化的潜力。由此可见,在探索牙周炎愈后恢复方面,可以考虑以PDLSCs为细胞学基础,研究促进牙周组织再生的具体作用与信号通路。目前的研究结果显示,在牙周组织的微环境中PDLSCs成骨分化受到多种细胞因子的调控[3]。而其中降钙素(calcitonin,CT)就引起了注意。CT多用来研究人体骨骼组织中的骨代谢以及血钙浓度的调节。CT最早由Copper等[4]发现并对其进行了报道。随着多年来研究的深入,CT多种生理功能逐渐被人们所熟知。但大多关注于其在破骨细胞功能的抑制上面,而较少关注其对成骨细胞的促进作用。同时CT可以在多种组织细胞中发挥不同的生理功能,故其在临床上的应用也变得越来越广泛。CT是降钙素家族的一员,同属其中的还有人们较熟悉的降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)。他们在细胞内发生效应的信号通路都是相似的,也可结合同一类受体而发挥作用。在骨代谢的动态维持和血钙浓度调节方面都有着非常重要的作用。Tian等[10]体外实验研究发现CGRP可通过c AMP途径促进转录因子CREB的磷酸化,进而调控成骨分化。最新有研究表明CT及其家族成员通过促进CREB磷酸化途径诱导骨折愈合后干细胞的成骨分化。Wei等[21]研究表明CT在牙周炎的再生修复中发挥重要作用,同时CT可促进PDLFs的基质合成及其成骨作用。但迄今为止,关于CT在与PDLSCs成骨分化方面的作用机制研究基本没有,而对于CT诱导PDLSCs在牙槽骨修复再生以及牙周炎治疗方面或许有巨大的研究前景。本研究便是将探讨CT通过促进CREB磷酸化诱导PDLSCs成骨分化的作用及分子机制。研究目的1、探讨降钙素与CREB在PDLSC成骨分化中的作用;2、探讨在PDLSC成骨分化中降钙素与CREB表达及磷酸化的作用关系与机制;3、探讨CREB调控OPN表达促进PDLSC成骨分化的作用机制。研究方法1、传代培养人牙周膜细胞,将细胞进行磁珠分选后,通过免疫荧光染色与流式细胞仪分析鉴定人牙周膜干细胞。2、构建Ad.CT,PDLSCs感染重组腺病毒,Western blot测定骨桥蛋白OPN表达水平,茜素红染色后观察细胞钙沉积情况,探讨CT的表达在PDLSC成骨分化中的作用。3、构建Ad.CREB,PDLSCs感染重组腺病毒,Western blot测定骨桥蛋白OPN表达水平,茜素红染色后观察细胞钙沉积情况,探讨CREB的表达在PDLSC成骨分化中的作用。4、构建Ad.CREB/OPNsi RNA,重组腺病毒共感染PDLSCs,Western blot测定骨桥蛋白OPN表达水平,茜素红染色后观察细胞钙沉积情况,探索CT是否经由CREB的通路调控PDLSCs钙化。5、构建Ad.CT,PDLSCs感染重组腺病毒,Western blot测定各设定时间点CREB和磷酸化CREB蛋白表达水平,探讨在PDLSC成骨分化中CT调控CREB表达及磷酸化的作用关系与时间周期关系。6、构建Ad.CT,PDLSCs感染重组腺病毒,染色体免疫共沉淀(Ch IP)检测CREB对OPN启动子的结合,测序验证CREB结合的OPN启动子区域的DNA序列,双荧光素酶报告实验检测CREB对OPN的转录调控作用,探索PDLSC成骨分化过程中CREB调控OPN表达的具体分子作用机制。结果1、传代培养细胞,分选顺利获得抗体阳性的细胞。流式测定结果为STRO1+比例为16.7%,CD146+比例为21.0%。免疫荧光染色显示波形丝蛋白染色呈阳性,角蛋白染色呈阴性。2、腺病毒介导的转基因在PDLSCs中过表达CT后,在不同时间天数使用茜素红染色,对比观察细胞钙沉积情况。结果显示7天及14天时,与空病毒感染组相比过表达CT组茜素红染色显着加深。通过Western blot检测细胞成骨分化标志物OPN表达情况,结果显示过表达CT组的OPN表达水平在7天及14天时显着高于空病毒感染组。上述结果提示CT处理PDLSCs后7天表现的成骨分化趋势,14天时成骨分化明显。3、通过腺病毒介导的转基因在PDLSCs中过表达CREB后,通过茜素红染色后观察不同天数时的细胞钙沉积变化情况,通过Western blot检测CREB/p CREB/OPN表达水平。Western blot结果显示,PDLSCs感染Ad.CREB后,CREB表达在1、3、7、14天均维持在高水平,且均显着高于空病毒感染组,同时各时间点的CREB表达水平没有显着差异。p CREB表达水平也均较空病毒感染组显着提高,但注意到p CREB的表达高峰出现在第3天。茜素红染色结果显示7天及14天时,与空病毒感染组相比过表达CREB组钙化显着。OPN的Western blot结果同样显示7天及14天时,过表达CREB组中OPN的蛋白表达水平显着高于空病毒感染组。4、为了探索CT是否经由CREB调控PDLSCs钙化,在CT诱导同时加CREB抑制剂Compound 3i(666-15),Western blot结果显示加入CREB抑制剂Compound3i(666-15)后,对CREB表达无显着影响,但是显着抑制了p CREB的形成。结果显示在第7天及第14天时,与CT干预组相比,CT/CREB抑制组的茜素红染色结果显示其钙沉积情况显着较少。Western blot测定细胞成骨标记物OPN表达情况,结果显示在第7天及第14天时CT干预组的OPN蛋白水平显着高于CT/CREB抑制组。上述结果提示CT可以促进PDLSCs的成骨分化,但可被CREB抑制剂阻断。5、在PDLSCs中过表达CT后,用Western blot测定不同天数时的CREB表达水平,及其磷酸化表达水平。结果显示,在第3天时实验组CREB表达水平较空病毒感染组显着提高,且高表达水平延续至14天;但对于p CREB来说,在1天及3天时CT实验组中p CREB表达水平显着高于空病毒感染组,而7天及14天时的表达水平与空病毒感染组无明显差异。p CREB表达水平在3天到达高峰,随后下降至一个稳定的较高水平。6、染色质免疫共沉淀提示CREB结合人OPN基因AP-1启动子区-1403CRE位点以及-1870和-76AP-1位点。荧光素酶结果显示CREB可促进OPN基因AP-1启动子功能,并通过-1870和-76AP-1发挥促进OPN基因AP-1启动子的功能。结论1、PDLSCs中过表达CT后OPN的蛋白表达水平在7天及14天时明显升高,表明CT具有在人PDLSCs成骨分化中发挥作用。2、PDLSCs中过表达CREB后OPN的蛋白表达水平在7天及14天时显着提高,提示CREB在人PDLSCs成骨分化中发挥作用。3、CT通过CREB作用于PDLSCs,CT可以促进其成骨作用,但可以被CREB抑制剂阻断。4、PDLSCs中过表达CT后CREB表达水平在3天时显着提高且高表达水平延续至14天,但p CREB表达水平在3天时到达高峰,随后下降至一个稳定的较高水平。提示CT对CREB表达及磷酸化有促进作用,并且CREB表达量与其磷酸化水平呈现出不同的时间点变化。5、CREB结合人OPN基因AP-1启动子区-1403CRE位点以及-1870和-76AP-1位点,并通过-1870和-76AP-1发挥促进OPN基因AP-1启动子功能。
陈秀芝[2](2020)在《孕期血清肾上腺髓质素水平与妊娠期糖尿病风险的关联性研究》文中研究表明目的:分析不同孕期孕妇血清肾上腺髓质素(Adrenomedullin,ADM)水平与妊娠期糖尿病(Gestational diabetes mellitus,GDM)风险的关系,为临床预防和治疗GDM提供新的思路。方法:采用巢式病例对照研究设计,在同济-中心医院母婴健康队列的基础上,按照1:1严格匹配确定本研究的GDM组及对照组,匹配变量为孕妇的年龄、孕前身体质量指数(Body mass index,BMI)、采血孕周及产次。采用全自动电化学发光测定空腹血清胰岛素水平(FINS,Fasting insulin),双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测稳定的ADM降解肽-肾上腺髓质素前体中段肽(Mid-regional proadrenomedullin,MR-proADM)水平,酶法测定孕妇空腹血清葡萄糖(Fasting bloodglucose,FBG)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)水平。运用Pearson及Spearman相关分析ADM及基线指标的相关性,采用条件Logistic回归模型分析ADM与GDM之间的关联。结果:本研究根据纳入排除标准,最终纳入116名孕妇(其中GDM组:孕早期22人、孕中期36人,共58名孕妇;对照组同上)。研究结果表明,随着孕期的进展,血清MR-proADM水平逐渐升高,孕中期血清MR-proADM水平显着高于孕早期(P<0.001),孕早期GDM组MR-proADM水平显着高于对照组(P=0.033),孕中期则无显着性差异。孕期血清MR-proADM水平与空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数、TG及收缩压呈显着正相关。在条件Logistic回归模型分析中,在调整孕妇的采血孕周、家族糖尿病史、文化水平、孕妇二手烟、饮酒习惯、FBG及空腹胰岛素水平后,血清MR-proADM水平每增加1个标准差(Standard Deviation,SD),GDM发生风险增加97.4%(OR:1.974,95%CI:1.141,3.416)。对于孕早期,调整相关因素后发现MR-proADM每增加1个SD,发生GDM的OR值及95%CI为3.487(1.032,11.782)(P<0.05),而在孕中期GDM发生风险的OR值及95%CI为1.465(0.700,3.150)(P>0.05)。结论:随着孕期的进展,血清MR-proADM水平逐渐升高,孕中期血清MRproADM水平显着高于孕早期。孕期血清ADM水平与GDM发病风险呈显着正相关,并且孕早期而不是孕中期血清ADM水平升高可能会增加孕妇发生GDM的风险。
惠颖[3](2020)在《血清PⅢNP及MR-proADM在心力衰竭中的临床意义》文中进行了进一步梳理目的:本研究通过检测心力衰竭患者血清中Ⅲ型前胶原氨基端肽(N-terminal peptide of typeⅢprocollagen,PⅢNP)及肾上腺髓质素前体中段肽(Mid-regional pro-adrenomedullin,MR-pro ADM)浓度的变化,并与对照组进行比较,探索二者与心功能指标的相关性,以及二者在心力衰竭的病情评估中的临床意义。材料与方法:选取自2018年10月至2019年8月在大连医科大学附属第二医院心力衰竭病房住院的患者共86例,其中符合纳入标准及排除标准的心衰患者作为心衰组,共55例,对照组患者31例。采集所有患者的一般资料以及心功能指标结果:入院次日清晨,采取所有入选患者空腹时肘静脉血8-10ml,送于大连医科大学附属第二医院检验科检测肝生化、肾功能等一般资料以及N端B型利钠肽原(N-terminal pro-B-type natriuretic peptide,NT-proBNP)的浓度,所有入选患者均行心脏彩色多普勒超声检查,由大连医科大学附属第二医院超声科医师准确测量所有患者的左心室舒张末期内径(Left ventricular end-diastolic diameter,LVEDD)以及左心室射血分数(Left ventricular ejection fraction,LVEF)。检测所有患者的血清PⅢNP及血清MR-pro ADM的浓度:血清PⅢNP的浓度由大连医科大学附属第二医院检验科通过化学免疫发光法检测。血清MR-pro ADM的浓度于大连医科大学附属第二医院科研中心采用酶联免疫吸附测定法(ELISA法)测定。观察对照组及心衰组患者血清PⅢNP与MR-pro ADM水平的变化,并采用SPSS 19.0统计软件包对其进行统计学分析,探究二者与NT-proBNP、LVEDD、LVEF的相关性及二者之间的相关性,初步探索二者在心力衰竭的病情评估中的临床意义。结果:1.测定对照组患者的血清PⅢNP浓度为22.52±10.01ng/ml,而心衰组患者的血清PⅢNP浓度为43.88±23.59ng/ml,差异有统计学意义(p<0.001)。将心衰组患者的血清PⅢNP浓度与心功能指标进行相关性分析发现,心衰组患者血清PⅢNP水平与NT-proBNP水平呈正相关关系(r=0.274,p=0.043),与LVEDD水平呈正相关关系(r=0.289,p=0.032),与LVEF水平呈负相关关系(r=-0.372,p=0.005)。2.测定对照组患者的血清MR-pro ADM浓度为272.81±143.81pmol/L,而心衰组患者的血清MR-pro ADM浓度为494.56±717.25pmol/L,差异有统计学意义(p=0.030)。将心衰组患者的血清MR-pro ADM浓度与心功能指标进行相关性分析发现,心衰组患者血清MR-pro ADM水平与NT-proBNP水平呈正相关关系(r=0.314,p=0.020),与LVEDD水平呈正相关关系(r=0.268,p=0.048),与LVEF水平呈负相关关系(r=-0.282,p=0.037)。3.将心衰组患者的血清PⅢNP水平与MR-pro ADM水平进行相关性分析发现,二者呈正相关关系(r=0.280,p=0.038)。结论:1.心衰组患者血清PⅢNP浓度明显升高,且心力衰竭患者病情越重,血清PⅢNP浓度越高,提示心肌纤维化的程度随着心衰病情的进展而加剧,推测血清PⅢNP的水平在心衰病情评估方面可能有一定价值。2.心衰组患者血清MR-pro ADM浓度明显升高,且随着心衰患者病情严重程度的增加而升高,提示MR-pro ADM的水平可能能反映疾病的严重程度,对心衰患者的病情评估可能有一定的帮助。3.心衰组患者血清PⅢNP浓度与MR-pro ADM浓度呈正相关关系,推测MR-pro ADM可能能在一定程度上反映心衰患者心肌纤维化的程度。4.心衰组患者血清PⅢNP浓度与MR-pro ADM浓度均与NT-proBNP水平呈正相关关系,且二者也呈正相关关系,推测联合测量三者可能为心力衰竭的病情评估提供一定的价值。
王思[4](2020)在《乳腺癌ER、PR、HER-2的表达及血清肿瘤标志物与骨转移的相关性研究》文中提出目的探讨雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人类表皮生长因子受体2(HER-2)的表达情况及血清肿瘤标志物与骨转移的相关性研究。方法收集2019年2月-2020年1月,在我院经全身骨显像检查和MRI检查确诊的乳腺癌骨转移患者80例及未骨转移患者150例。并对患者手术切除的病灶进行ER、PR、HER-2免疫组化检测及血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)和糖类抗原153(CA153)测定。比较和分析骨转移组及未转移组患者的免疫组化表达情况、基因分型、肿瘤标志物等的差异,分析免疫组化表达程度、肿瘤标志物水平与骨转移程度的相关性,T和N分期与骨转移的比较。结果1.不同基因亚型乳腺癌患者骨转移与未骨转移比较,差异具有显着性(x2=21.304,P<0.05)。2.在ER、HER-2不同程度表达组,骨转移与未转移组比较,差异具有显着性(x2值分别为9.415,3.848,P值分别为0.024,0.003)。3.乳腺癌患者ER表达程度与骨转移程度呈显着正相关,HER-2表达程度与骨转移程度呈显着正相关(r值分别为0.505、0.545,P值均为0.000)。4.乳腺癌患者骨转移组肿瘤标志物CEA、CA125和CA153水平与骨转移程度呈显着正相关,CEA、CA125和CA153水平越高骨转移程度越严重,(r值分别为0.754、0.794、0.646,P值分别为0.003、0.032、0.000)。5.乳腺癌患者T分期中骨转移与未骨转移比较差异有显着性(x2=9.355,P<0.05)。6.乳腺癌患者N分期中骨转移与未骨转移比较差异有显着性(x2=21.304,P<0.05)。结论乳腺癌患者的骨转移与基因分型、ER和HER-2的表达、肿瘤标志物及T和N分期相关。乳腺癌患者随着ER和HER-2表达增强,骨转移越严重。乳腺癌患者骨转移越严重,血清肿瘤标志物CEA、CA125和CA153水平越高。T和N分期越高,骨转移率越高。
陈志维[5](2019)在《加味当归补血片防治绝经后骨质疏松症的网络药理学及实验研究》文中研究指明目的:加味当归补血片是依据“精源于脾,血生于气,阴阳互根”的中医理论,由黄芪、当归以及淫羊藿三味中药按5:1:5的质量比例制成,具有补肾助阳,益气生血的功效,可用于妇女绝经后肾阳虚证所引起的骨质疏松症(Postmenopausal osteoporosis,PMOP)。骨质疏松症是绝经后妇女常见的症状,是一种易诱发骨折风险的全身性疾病。现代医学研究认为,绝经后骨质疏松症的产生是由于体内雌激素分泌水平下降,骨生成与骨吸收平衡受到破快,骨密度降低而产生的。为预防绝经后骨质疏松引起的骨折的发生,现代医学常使用激素替代疗法,即在妇女围绝经期时开始补充雌激素,以预防骨质疏松。在发生骨质疏松后,患者需长期服用调节骨代谢与形成的药物,虽具有一定的疗效,但效果并不满意。中医认为,骨质疏松可属于“骨痿”的范畴,与肾密切相关。《素问·上古天真论》中提到肾为先天之本,女性进入“七七之年”后,肾气渐衰,天癸耗竭,阴阳失衡,从而累及各脏腑,产生不同的症状,绝经后骨质疏松症是其中的表现之一。中医治疗疾病的特点是整体论治,对绝经后期骨质疏松症而言,常以补先天之肾入手,兼调后天脾胃气血,使阴阳平衡、脏腑协调。前期通过体外细胞实验发现,加味当归补血方可以促进MG-63骨细胞的增殖、分化,另一方面可增加受雌激素影响的基因在MCF-7细胞的表达水平,说明加味当归补血片可以直接影响成骨过程,也可以起到雌激素样作用间接促进骨生成,从而对绝经后骨质疏松症具有潜在的预防和治疗作用,但具体的作用机理及实际效果有待进一步明确。另一方面,近年来关于含淫羊藿制剂造成肝损伤的不良反应偶有报道,作为防治绝经后骨质疏松症的用药,加味当归补血片的用药周期漫长,而淫羊藿又是加味当归补血片的重要组成部分,因此其长期安全性需接受更多的考察。本研究采用网络药理学结合动物实验的方法,先预测加味当归补血片抗骨质疏松的相关作用机制及可能潜在的毒性作用,然后通过动物实验的方法,对其抗骨质疏松的作用及长期安全性进行评价,为加味当归补血片的新药开发、临床应用以及深入研究提供基础。方法:1 加味当归补血片的网络药理学研究通过检索TCMSP数据库及相关文献,筛选出黄芪、当归、淫羊藿三味中药的化学成分。设定口服生物利用度≥30%、类药性≥0.18以及人体肠道细胞通透性≥-0.4作为药代动力学筛选指标,筛选出加味当归补血片中的入血成分作为活性成分,并从TCMSP数据库中查找活性成分的预测作用靶点(Putative target,PT)。通过OMIM、PharmGKB、DurgBank、TTD、CTD数据库查找与骨质疏松症相关的靶点(Anti-osteoporosis target,AT),将加味 当归补血片活性成分靶点与骨质疏松症靶点进行交集,得到加味当归血片直接作用于骨质疏松症的靶点(Putative anti-osteoporosis target,PAT)。另将所有活性成分的作用靶点与骨质疏松靶点进行并集,利用STRING数据库进行蛋白-蛋白相互作用关系(Protein-protein interaction,PPI)分析,构建靶点蛋白间的相互关系,筛选关联度大于2倍平均关联度的关键靶点(Keytarget,KT)作为间接作用于骨质疏松症的靶点。将PAT和KT进行并集,得到加味当归血片防治骨质疏松症的核心靶点(Core target,CT)。利用DAVID数据库对CT进行基因本体(Gene Ontology,GO)富集分析及通路(Pathway)富集分析,综合解读加味当归补血片的分子作用机制、生物通路以及潜在药理活性。2 加味当归补血片的计算毒理学研究通过计算机毒理学预测软件eMolTox对加味当归补血片活性成分的潜在毒性进行预测分析,找出加味当归补血片的潜在毒性富集器官及系统。通过计算机药物代谢动力学软件admetSAR分析加味当归补血片活性成分与细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450)、P糖蛋白(P-glycolprotein,P-gp)以及肾有机阳离子转运体(Renal organic cation transporter,ROCT)的相互作用,结合eMolTox预测分析加味当归血片中可能具有肝毒性及肾毒性的成分。3 加味当归补血片对自然衰老雌鼠骨骼的影响研究以11月龄自然衰老雌鼠作为实验对象,设定衰老模型组(蒸馏水);加味当归补血片受试药组(高剂量0.22g生药/mL、中剂量O.11g生药/mL、低剂量0.055g生药/mL);西药阳性药组(结合雌激素片10.42μg/mL)以及中药阳性药组(右归丸0.45g/mL)。每组8只,按照1mL/100g体重灌胃给药,每天1次,连续给药4个月,末次给药后动物禁食12h。测定大鼠全身、腰椎、双侧股骨颈以及双侧股骨的骨密度(Bonemineral density,BMD);骨小梁面积、骨小梁面积率以及骨小梁数。结果进行统计学处理后比较各组间差异。4 加味当归补血片对自然衰老雌鼠的长期安全性评价研究以11月龄自然衰老雌鼠作为实验对象,设定衰老模型组(蒸馏水);加味当归补血片受试药组(高剂量0.88g生药/mL、中剂量0.44g生药/mL、低剂量0.11g生药/mL,分别为临床剂量的80、40、10倍)。每组30只,按照1mL/100g体重灌胃给药,每天1次,连续给药6个月,6个月后停药,停药后给予等量蒸馏水继续观察1个月。每天观察大鼠的外观体征、行为活动、每日摄食量、饮水和二便情况,每周测摄食量,饮水量1次;给药前和给药后每周测体重1次;分别于给药3个月,6个月及停药1个月后,禁食14小时,腹主动脉取血,测定血液学、血液生化指标及性激素六项水平;给药期间及结束时各组取10只大鼠放血处死,对其进行剖检,肉眼观察各主要脏器大小、颜色、硬度、表面光滑情况及胸、腹腔有无积液。测心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑、子宫、卵巢湿重,求出脏器系数。结果进行统计学处理后比较各组间差异。结果:1 加味当归补血片的网络药理学研究结果结果显示,加味当归补血片中含有33个入血活性成分,共关联235个PT。通过OMIM、PharmGKB、DurgBank、TTD、CTD 数据库查找与得到 AT 共 132 个,与 PT交集后得到12个PAT。通过PPI分析,得到48个KT。将KT与PAT并集得到53个CT,当中包括雌激素受体、雄激素受体、前列腺素G/H合成酶2、血管内皮生长因子A等。对53个CT进行GO及Pathway富集分析,发现加味当归补血片的基因生物过程主要集中在刺激RNA聚合酶II启动子转录、DNA转录的正向调控等。通过Pathway富集分析发现,加味当归补血片可通过直接及间接通路影响骨代谢,从而起到防治绝经期骨质疏松的作用。另外富集程度较高的还有TNF信号通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、雌激素信号通路、FoxO信号通路、HIF-1信号通路、甲状腺信号通路等,这些通路与体内激素水平变化、心脑血管疾病、绝经后多发肿瘤疾病都有密切的联系,为加味当归补血片在绝经后各种疾病中的应用提供了理论基础及研究方向。2 加味当归补血片的计算毒理学研究结果结果显示,加味当归补血片预测得到的主要毒性器官/系统为肝脏及内分泌系统,提示其肝毒性风险及对内分泌的影响较大。加味当归补血片活性成分对CYP450的抑制泛杂性以及对P-gp抑制的计算机预测结果提示,淫羊藿中的淫羊藿苷元(lcarintin)以及8-异戊二烯-黄酮(8-prenyl-flavone)是具有高风险肝毒性的成分。对活性成分的ROCT抑制预测分析结果表明,加味当归血片中活性成分对ROCT无抑制作用,提示其肾毒性风险较低。3 加味当归补血片对自然衰老雌鼠骨骼的作用影响结果结果显示,西药阳性组、中药阳性组全身、腰椎、双侧股骨颈及双侧股骨BMD均高于衰老模型组,其中西药阳性组、中药阳性组全身骨密度与模型组比较,有显着性差异(P<0.05),说明雌性自然衰老大鼠骨质疏松模型造模成功。加味当归补血片高、中、低剂量组全身、腰椎、左侧股骨颈及双侧股骨BMD均高于衰老模型组,其中的中、低剂量组全身BMD,低剂量组腰椎BMD,高剂量组右股骨BMD与模型组比较,有显着差异(P<0.05)。另一方面,西药阳性组、中药阳性组及各给药组的骨小梁面积、骨小梁面积率及骨小梁数均高于衰老模型组,部分组别与空白组比较有极显着差异(P<0.01)或显着差异(P<0.05)。以上结果表明,加味当归补血片可提高自然衰老雌鼠的BMD,缓解自然衰老雌鼠骨小梁的结构退化,提示加味当归补血片有一定的抗骨质疏松作用。4 加味当归补血片对自然衰老雌鼠的长期安全性评价结果结果显示,包括空白组在内各组动物一般状态良好,外观体征、行为活动、进食量、饮水、体重增长等均无异常变化;加味当归补血片三个剂量组及对照组血液学检查、血液生化学检查均在正常范围,部分指标如尿酸、血糖、甘油三酯给药组与空白组比较有下降趋势;各组主要脏器组织病理学检查未见明显异常。上述指标停药1月后也未见改变。对激素六项水平的检查发现,与空白组相比,各给药组在给药3个月、6个月及停药1个月后的雌二醇(Estradiol,E2)、孕酮(Progesterone,P)、睾酮(Testosterone,T)水平升高,卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)、促黄体生成素(Luteinizinghormone,LH)和泌乳素(Prolactin,PRL)水平降低。结果表示,加味当归补血片低、中、高三个剂量给药6个月后对自然衰老雌鼠的基本状态无明显影响,恢复期观察1月后也未见延迟性毒性反应。对激素水平影响的结果提示,加味当归补血片具有一定的雌激素样作用,提示加味当归补血片临床应用剂量的安全性较高,对调节自然绝经后内分泌水平紊乱具有一定的作用,在治疗绝经前后诸证具有一定的临床应用价值。结论:对加味当归补血片的网络药理学研究结果发现,加味当归补血片能通过多个作用靶点,多种生物通路影响骨生成,为加味当归补血片应用于绝经后骨质疏松症提供了解释。研究同时也发现,加味当归补血片在提高免疫力,肿瘤疾病,心脑血管疾病等方面有潜在的应用前景。通过计算机毒理研究发现,加味当归血片对肝脏及内分泌系统具有潜在毒性或重要影响,其中预测肝毒性高风险成分来源于淫羊藿,与文献报道相符。通过长期安全性评价研究发现,加味当归补血片的临床应用剂量对肝功能、肾功能没有影响,提示其临床应用剂量安全性较高。此外观察也发现加味当归补血片能调节体内E2、P、T、LH、FSH以及PRL的水平,提示加味当归补血片是通过调节体内激素水平、促进骨生成而起到防治绝经后骨质疏松的作用,可作为防治绝经后骨质疏松症的药物进行开发。
张慧宇[6](2016)在《CGRP在骨修复与炎症性骨疾病中的生物学作用及机制的研究》文中研究表明骨具有修复再生的独特能力,这归于一系列控制骨愈合的细胞和分子参与了这个复杂的过程并调控骨骼的生长和发育。骨修复中的一个重要组成部分就是骨细胞的行为。骨这种本身存在的紧密耦合对骨骼系统的正常功能及维持至关重要。骨骼系统的主要功能包括:1.提供对器官组织的支持2.调节造血系统。骨的改建与重构过程主要由两个主要类型的细胞即成骨细胞所带来的骨形成和破骨细胞造成的骨降解而完成的。这个过程正是由这些细胞的发展和激活所紧密调节的;当然,也是由一个复杂的信号网络通路所参与介导的。目前,已经被证明ERK通路、OPG/RANKL通路、BMP-2/Smads通路和Wnt信号等多个信号转导途径在整个成骨细胞分化增殖过程中都起着重要的作用。但由于这个过程本身较为复杂,所以具体的调控机制还不是十分明确。近年来在骨代谢方面,尤其是神经分泌的神经递质信号对成骨细胞的影响成为了研究热点,这为我们研究骨的生长发育、修复、以及相关疾病的治疗带来了新的方向。CGRP受体属于G蛋白偶联家族成员,是由七个跨膜结构域蛋白即降钙素受体样受体(CRLR)和辅助蛋白,受体活性修饰蛋白(RAMP1)。此外,CGRP受体组分蛋白(RCP)作为胞浆蛋白,似乎是有效的信号转导所需要的信号。而CGRP正是能激活这种受体相关的异三聚体的蛋白。进一步的证据表明CGRP在骨中起着重要作用能影响成、破骨细胞的功能。体内试验发现,在转基因小鼠成骨细胞过表达CGRP能够使骨密度增加。此外,在各种成骨细胞系及正常人成骨细胞样细胞上均发现CT和CGRP及其受体的mRNA的表达。CGRP还能促进成骨细胞增殖以及胰岛素生长因子(IGF)的表达。研究发现,CGRP能通过其受体受体刺激c-AMP活性和磷脂酶分别刺激活化蛋白激酶A(PKA),并增加细胞内游离钙的水平以及蛋白激酶C(PKC)激活。我们此次研究首先关注了CGRP受体所介导的诱导成骨分化的功能,明确CGRP在促进骨修复中的涉及的相关机制,同时也初步探索了在炎症性骨疾病中CGRP潜在的保护作用,以期为CGRP的在骨创伤愈合中的临床应用奠定基础。在研究CGRP受体所介导的诱导成骨分化的功能的试验中,我们首先利用慢病毒载体的构建,稳定敲除了cgrp受体ramp1的表达,荧光定量pcr,wb,以及免疫荧光检测敲除ramp1后对cgrp受体表达的影响。我们又通过细胞增殖测定,骨分化标志基因的表达的检测和茜素红染色等方法,检测了敲除ramp1后对cgrp诱导成骨细胞活性和分化的影响。结果表明,在成骨细胞中敲除ramp1会导致crlr表达和在细胞膜分布的抑制。此外,ramp1的稳定敲除会抑制cgrp诱导的细胞增殖和碱性磷酸酶活性,会减少runx2和i型胶原的mrna的表达以及矿化沉积。我们还发现,敲除ramp1会抑制cgrp刺激的成骨细胞c-amp的水平。此外,在本次实验中,我们还首次探讨了cgrp对于lps诱导成骨细胞凋亡的影响。同时,我们也在动物实验中对此进行了验证,并探讨cgrp在lps诱导的大鼠实验性牙周炎模型牙周组织中的作用及相关机制。方法:实验一(1).用不同浓度的cgrp处理mg63细胞1,4,7天后,采用cck-8法检测cgrp对成骨细胞增殖活性的影响。检测发现,与对照组相比,cgrp能够显着增加成骨细胞的增殖活性,且最佳浓度在10-8m。此外,alp活性也被检测。不同剂量的cgrp处理mg63细胞在成骨诱导培养基诱导1,4,7天,茜素红进行矿化结节的染色。(2).稳定转染慢病毒以敲除ramp1的表达,转染后的细胞(con-shrna,shramp1)的细胞用荧光定量pcr、westernblot及免疫荧光染色检测ramp1其他cgrp受体的蛋白和基因水平表达变化和膜分布的变化。(3).cck-8法检测con-shrna组,shramp1处理组的细胞增殖活性。接下来,成骨细胞的分化也同样用alp检测。qpcr检测成骨细胞的分化标志物runx2和collageni表达。(4).转染后,细胞内camp水平的变化被检测。cck8检测加入camp/pka信号的激动剂forskolin后的con-shrna组、shramp1处理的细胞的增殖活性。此外,还检测了alp活性以及runx2和collagenimrna水平,最后进行了各组的茜素红染色。实验二(5).我们首先检测了用不同浓度(0-1000ng/ml)lps作用于mc3t3-e1细胞48h的细胞活性。同时,也检测了cgrp的处理对mc3t3-e1细胞活性的影响。(6).用或无100nmcgrp预处理mc3t3-e1细胞30min,再用lps处理48h,流式细胞仪分析检测了CGRP对LPS诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的影响。与此同时,我们还用Western blot检测了CGRP对LPS刺激的Caspase-3剪切蛋白表达的影响。(7).Western blot检测了CGRP对LPS刺激的ERK信号活化的影响(8).Micro-CT扫描检测牙周炎模型骨破坏程度,BVF值进行定量分析骨吸收程度。HE染色检测炎性细胞浸润;免疫组化染色检测牙周组织细胞凋亡及caspase 3剪切和ERK的表达。总结:(1).CGRP促进成骨细胞的细胞活性和成骨分化能力。(2).RAMP1的表达可以抑制CRLR的表达。(3).敲除RAMP1抑制CGRP诱导的成骨细胞的活性和成骨分化能力。(4).敲除RAMP1抑制CGRP调节的分化是通过cAMP/PKA信号途径。(5).CGRP显着刺激增加成骨细胞的活力以剂量依赖的方式,具有最佳在10 nM。CGRP可以缓解LPS对细胞活力的抑制且浓度为100nM,而不是10nM。(6).CGRP抑制LPS诱导的成骨细胞的凋亡。(7).CGRP抑制LPS诱导的成骨细胞p-ERK表达。(8).CGRP抑制LPS诱导的细胞凋亡和牙周炎模型中的骨破坏。
李晓通[7](2015)在《胰淀素受体在胰岛β细胞表达及作用的研究》文中研究说明目的:胰淀素(amylin),又称胰岛淀粉样多肽(islet amyloid polypeptide,IAPP),是胰岛功能重要的调节激素之一,但其对胰岛β细胞的作用靶点和作用机制不完全清楚。现已鉴定出三种高亲和性胰淀素受体,由降钙素受体(calcitonin receptor,CTR)和三种受体活性修饰蛋白(receptor activity modifying protein,RAMP)组成,胰淀素受体的发现为胰淀素作用机制的探索提供了新方向。本研究主要目的是鉴定三种胰淀素受体成分CTR和RAMP蛋白在大鼠胰岛β细胞中的表达及共定位情况,寻找β细胞中存在的胰淀素受体类型,探讨其在人胰淀素抑制β细胞胰岛素分泌中的作用,是否参与人胰淀素对β细胞的细胞毒作用及可能机制,为寻找胰淀素功能紊乱导致胰岛功能减退及糖尿病发生的机制提供新思路。方法:采用逆转录聚合酶链反应、免疫印记检测胰淀素受体成分CTR及RAMP1,RAMP2,RAMP3的m RNA和蛋白在大鼠胰岛β细胞系INS-1中的表达,免疫荧光染色方法分别检测CTR与三种RAMP在INS-1细胞膜表面共定位及CTR、三种RAMP蛋白在正常大鼠胰岛组织中β细胞中的定位。采用酶免法及实时定量RT-PCR法检测胰淀素、胰淀素受体拮抗剂AC253对INS-1细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌及胰岛素m RNA转录情况的影响,并在激光共聚焦显微镜下动态观察葡萄糖刺激、磺脲类药物刺激及KCl刺激下细胞内Ca2+浓度变化。Th T结合实验及电镜观察以上过程中胰淀素溶液中淀粉样纤维形成情况,MTT法检测细胞存活率的变化,同时化学光法检测细胞内Caspase 3活性变化。胰淀素、胰淀素受体拮抗剂AC253单独或联合长时间作用于INS-1细胞,MTT法检测细胞存活率变化,Western blot检测活化形式Caspaes 3生成及发光法检测细胞内Caspase 3活性变化,Th T结合实验检测AC253对溶液中胰淀素淀粉样纤维形成的影响,从而观察胰淀素受体在细胞毒中发挥的作用。实时定量逆转录聚合酶链反应检测胰淀素及胰淀素受体拮抗剂孵育对RAMP m RNA转录的影响,并免疫印记及免疫荧光法检测胰淀素孵育对RAMP1蛋白表达及细胞表面分布的影响。进一步用RAMP1抗体阻断其作用,MTT法检测对人胰淀素细胞毒作用的影响,寻找可能发挥重要作用的受体活性修饰蛋白。结果:(1)转录聚合酶链反应、免疫印迹均证实胰淀素受体成分CTR及RAMP1,RAMP2,RAMP3在大鼠胰岛β细胞系中的表达,免疫荧光染色发现CTR与三种RAMP均有在细胞膜表面共定位,并发现CTR、三种RAMP蛋白均在正常大鼠胰岛组织中β细胞中表达。(2)高浓度胰淀素(10μmol/l)短时间孵育INS-1细胞,高糖刺激下胰岛素分泌由(2.08±0.35)ng/ml下降至(0.73±0.24)ng/ml(P<0.01),m RNA转录下降至0.39±0.09(P<0.01),加用AC253胰岛素分泌升至(1.41±0.32)ng/ml,m RNA转录为0.62±0.08,与单用胰淀素组差异有统计学意义(P<0.05)。单用胰淀素组,高糖刺激后细胞内Ca2+总体变化水平和峰值为650.155±4.818和1.154±0.011,加用AC253后,两者分别升至769.795±4.956和1.589±0.013(均P<0.01),AC253减弱了高糖刺激下胰淀素对Ca2+升高的抑制作用。同样AC253也缓解磺脲药物及KCl刺激下胰淀素对Ca2+升高的抑制。检测溶液中淀粉样纤维形成,20分钟内无明显淀粉样纤维形成,2小时有少量淀粉样纤维形成,但胰淀素(10μmol/l)孵育细胞2小时细胞存活率无明显下降,凋亡相关酶Capsase 3活性无明显升高。(3)胰淀素短时间孵育未改变RAMP m RNA表达。胰淀素孵育24小时使INS-1细胞RAMP2和RAMP3的m RNA分别下降了23%(P<0.05)和34%(P<0.05),而RAMP1的m RNA轻度升高了25%(P<0.05),并且RAMP1在细胞表面分布增加。AC253未影响三种RAMP的表达,也未干扰胰淀素对RAMP的作用。细胞毒性实验中,人胰淀素孵育24小时组细胞存活率为(69.69±12.63)%,较对照组明显下降(P<0.01),胰淀素受体拮抗剂AC253与人胰淀素同时作用24小时组细胞存活率为(93.89±15.94)%,较胰淀素单独孵育24小时组明显升高(P<0.01)。但对胰淀素作用48小时诱导的细胞死亡未有明显缓解。同样人胰淀素孵育24小时后活化形式Capsase 3生成增加且Caspase 3活性明显增加,加入胰淀素受体拮抗剂AC253抑制胰淀素对Capsase 3的激活,但它并未影响溶液中淀粉样纤维的形成。RAMP1抗体在1:500和1:1000稀释度下与人胰淀素同时孵育24小时组的细胞存活率分别为(94.49±12.16)%和(95.76±10.68)%,较胰淀素单独作用组也有明显升高(P<0.01),也可抑制人胰淀素的毒性作用,而同型Ig G对人胰淀素作用无影响。结论:本研究证实了三种胰淀素受体均在大鼠胰岛β细胞中表达,并发现胰淀素受体参与胰淀素抑制胰岛β细胞胰岛素分泌、合成及对细胞内Ca2+浓度调控作用中,胰淀素受体尤其是RAMP1蛋白参与人胰淀素对β细胞的毒性作用。
贾森[8](2015)在《调控微环境改善大鼠骨髓间充质干细胞骨再生效能的实验研究》文中认为骨髓间充质干细胞是骨缺损修复的前提条件,如何提高骨髓间充质干细胞在骨缺损区域再生中发挥的作用,是研究缺损修复的核心问题。我们设计实验,利用骨组织工程支架材料搭载小干扰RNA及局部应用神经肽等多种方法调控细胞微环境,进而提高大鼠骨髓间充质干细胞的迁移,分化和增殖能力。实验一壳聚糖搭载两种小干扰RNA对大鼠骨髓间充质干细胞成骨成血管分化的作用目的:将两种分别促进成骨和成血管的si RNA同时搭载到壳聚糖凝胶中,制成新的骨组织工程支架材料,研究此种新型支架材料对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的作用。方法:制备壳聚糖凝胶,用脂质体2000搭载si Ckip-1和si Flt-1、单独搭载si Ckip-1、单独搭载si Flt-1,搭载si NC导入壳聚糖凝胶中,将大鼠骨髓间充质干细胞接种至之前4组搭载si RNA的支架材料及不搭载任何si RNA的壳聚糖凝胶中,观察这五组支架材料对骨髓间充质干细胞增殖和分化的作用。结果:RT-q PCR分析显示si Ckip-1+si Flt-1组中ALP、OCN以及VEGF的表达显着高于其余四组,有统计学差异(P<0.05),免疫荧光染色的结果显示,si Ckip-1+si Flt-1组的osteocalcin和von Willebrand factor高表达,显着高于其余4组,有统计学差异(P<0.05)。结论:si Ckip-1和si Flt-1同时载入壳聚糖会发生协同作用,显着增强骨髓间充质干细胞成骨成血管能力。实验二体内植入搭载两种小干扰RNA的壳聚糖对大鼠颅骨缺损修复的作用目的:将实验一中的已经证实可以在体外促进骨髓间充质干细胞成骨成血管的支架材料植入大鼠体内,研究其对颅骨缺损修复的作用。方法:将实验一中制备的5组支架材料分别植入15只大鼠的颅骨缺损区域,三个月后处死大鼠,Micro-CT三维重建骨缺损区域,分析新生骨组织的骨密度和骨体积分数。Van Gieson染色观察骨组织变化。结果:si Ckip-1+si Flt-1组与其余4组相比,显着提高缺损区骨的再生(P<0.05)。结论:壳聚糖搭载si Ckip-1和si Flt-1所构建的骨组织工程支架材料能够促进大鼠骨缺损的再生修复。实验三CGRP对大鼠间充质干细胞迁移,增殖和成骨分化的影响目的:SDF-1在细胞迁移的过程中发挥重要作用,因而我们研究CGRP对体外培养的骨髓间充质干细胞分泌SDF-1的作用,以及CGRP对骨髓间充质干细胞迁移,增殖和成骨分化的影响。方法:将大鼠骨髓间充质干细胞分别接种在CGRP浓度为10-7M的培养基、CGRP8-37浓度为10-7M的培养基以及普通培养基中,ELISA检测三组BMSCs中SDF-1的分泌和表达,Transwell实验检测三组BMSCs的迁移能力,Brd U免疫荧光实验检测三组BMSCs的增殖能力,RT-q PCR检测三组BMSCs的成骨相关基因的表达。结果:每组各个时间点BMSCs都有SDF-1m RNA的分泌和表达,而在第3、5天时,三组之间两两都有统计学差异(P<0.05),Transwell实验结果显示三组均有穿膜BMSCs,CGRP组的穿膜细胞显着多于对照组,对照组显着多于CGRP8-37组,两两之间均有统计学差异(P<0.05),Brd U染色显示CGRP组中处于DNA合成期的细胞显着多于对照组,而对照组的阳性细胞亦显着多于CGRP8-37组,且两两之间均有统计学差异(P<0.05)。三组BMSCs每个时间点均有ALPm RNA和Runx2表达,在14天时达到峰值CGRP组显着高于其余两组,对照组显着高于CGRP8-37,两两之间均有统计学差异(P<0.05)。结论:体外实验中,CGRP对大鼠骨髓间充质干细胞的迁移,增殖和成骨分化有促进作用。实验四局部注射降钙素基因相关肽CGRP对SD大鼠下颌骨单侧牵张成骨效果的影响目的:利用局部注射CGRP的方式研究CGRP对于大鼠牵张成骨效果的影响。方法:30只大鼠全麻下右侧下颌骨植入牵张器并截断下颌骨,随机分为三组,在牵张期10天中,分别局部注射0.2ml 10-7M浓度CGRP、CGRP8-37及生理盐水。固定2周后处死动物,Micro-CT分析新生骨密度及骨体积分数,HE染色观察组织形态学。结果:Micro-CT分析结果显示三组牵张区均有不同程度的新骨形成,三维重建后分析BMD以及BV/TV,CGRP组明显高于其它两组,且两两间均有统计学差异(P<0.05)。HE染色显示三组动物牵张区均有新骨形成,而CGRP组骨小梁显着多于其余两组,且两两间均有统计学差异(P<0.05)。结论:局部注射外源性CGRP可以促进牵张区骨再生。实验五局部注射CGRP对下颌骨牵张中间充质干细胞动员的作用目的:通过检测牵张时局部间充质干细胞和外周血中间充质干细胞的数量,以及SDF-1的表达,来研究局部应用CGRP对于间充质干细胞动员的作用。方法:手术同实验四,在牵张器植入5、6、11、15、22、29天,流式细胞法检测外周血CD29阳性细胞数量,ELISA检测外周血SDF-1含量,q RT-RCR检测牵张区SDF-1m RNA的表达。并在处死动物后,免疫组化检测新生骨区Nestin表达。结果:CGRP组牵张区Nestin阳性细胞显着多于其余两组,SDF-1m RNA表达亦显着高于其余两组,两两之间有统计学差异(P<0.05)。术后5、6、11、15、22、29天六个时间点采得的外周血均有CD29阳性细胞,均有SDF-1的表达,且在达到峰值时,CGRP组显着高于其余两组,两两之间有统计学差异(P<0.05)。结论:牵张区局部注射CGRP可以促进局部及全身间充质干细胞向牵张区动员。
滕卫平,母义明,施秉银,陈璐璐,单忠艳,洪天配,许樟荣,李彩萍[9](2011)在《第六届国际华夏内分泌大会纪要》文中指出国际华夏内分泌大会至今已在北京、中国香港、上海和中国台北分别举办了五届。时光飞逝,这次我们又相聚上海,2010年12月10日~12日,第六届国际华夏内分泌大会在上海成功举办,短短3天内,两岸三地近2000名内分泌学者共同见证了大会的隆重召开,共同庆祝中华医学会内分泌学分会的30周年华诞。学会30年庆典篇满怀着对中国内分泌学界创始者和诸位先辈的缅怀之情,肩并肩走过象征学会发展历程的"历史墙",恍然间我们仿佛穿
吴梦[10](2011)在《CGRP作用下的MG63蛋白质差异表达的实验研究》文中进行了进一步梳理降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)是一种感觉神经肽,在骨组织中的分布广泛,主要分布于骨代谢活跃的部位,直接或间接地调节成骨细胞和破骨细胞分化及活性。目前的研究表明CGRP在骨折愈合中发挥重要作用。有关CGRP在成骨细胞正常代谢中的具体机制国内外的研究较多,但对细胞蛋白表达的研究较少。本研究寻找与CGRP相互作用、且在成骨愈合过程中起重要作用的蛋白,并且通过免疫荧光等技术确定它们在信号通路中的上下游关系,从而探讨CGRP在骨创伤愈合过程中的可能作用机制。目的:探讨CGRP作用下成骨样细胞MG-63内蛋白质表达谱的变化。方法:传代培养MG-63成骨样细胞,随机分为CGRP组和对照组。通过MTT比色法检测细胞生长曲线并进行统计分析。提取各组MG-63内蛋白质,经双向电泳分离、考马斯亮蓝染色后扫描分析蛋白质表达变化,选取6个差异显着的蛋白点进行胶内酶切、肽质量指纹图谱分析和IPI数据库检索。并对检索出的差异蛋白HRNR Hornerin通过western blot及免疫荧光方法进行验证。结果:1、MTT比色法检测表明,CGRP实验组和对照组细胞生长曲线有显着性差异。2、双向电泳可分离(967±17)个蛋白质,点匹配率为(85.1±1.4)% ,成骨样细胞6种蛋白点出现明显差异表达,与对照组比较,CGRP组6种蛋白质表达下调。3、质谱分析鉴定出核糖体结合蛋白p180(p180/ribosome receptor)及钙结合蛋白HRNR Hornerin等5种蛋白质,前者与核糖体定位和合成的新蛋白转位有关,而后者可影响细胞内钙浓度的。4、通过对HRNR Hornerin的western blot及免疫荧光分析,发现HRNR Hornerin在CGRP实验组中表达显着下降。结论:1、CGRP作用于成骨样细胞(MG-63)后,显着促进MG-63生长,实验组与对照组MTT细胞生长曲线差异显着。2、通过双向电泳,发现CGRP可诱导成骨样细胞(MG-63)6个蛋白点发生表达的差异性明显,说明CGRP可能通过调节蛋白质含量或传导通路的途径发挥细胞调节作用。3、质谱分析技术鉴定出的差异显着的蛋白质可能在CGRP作用下成骨样细胞(MG-63)中发挥着直接或间接的作用。CGRP可能通过这几种蛋白参与第二信使及细胞因子的调节并发挥功能。4、采用western blot及免疫荧光染色方法分析,MG-63培养液加入CGRP作用24h后,细胞质中HRNR Honerin表达降低,证实了质谱分析结果。分析钙离子结合蛋白HRNR Honerin在CGRP作用于成骨样细胞MG-63中发挥着重要作用。CGRP可能通过调节钙离子浓度这一途径促进成骨样细胞MG-63的生长,从而最终在骨折愈合中发挥作用。
二、肾上腺髓质素与骨代谢研究进展(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肾上腺髓质素与骨代谢研究进展(论文提纲范文)
(1)降钙素促CREB磷酸化诱导人牙周膜干细胞成骨分化的作用机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
缩略词表 |
前言 |
第一部分:降钙素与CREB在 PDLSC成骨分化中的作用研究 |
引言 |
一、材料 |
二、方法 |
三、结果 |
四、讨论 |
第二部分:降钙素上调CREB表达并促CREB磷酸化的作用研究 |
引言 |
一、材料 |
二、方法 |
三、结果 |
四、讨论 |
第三部分:CREB通过转录上调OPN表达促进PDLSC成骨分化的作用机制研究 |
引言 |
一、材料与试剂 |
二、方法 |
三、结果 |
四、讨论 |
全文总结 |
参考文献 |
综述 降钙素基因相关肽对骨稳态、骨再生以及牙周组织影响的研究进展 |
一、降钙素基因相关肽在骨组织中生理和病理作用的基础 |
二、降钙素基因相关肽的空间分布 |
三、降钙素基因相关肽促进成骨 |
四、降钙素基因相关肽抑制破骨细胞形成 |
五、CGRP和 CT等降钙素家族在牙周组织中的研究 |
六、结论 |
参考文献 |
在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 |
致谢 |
(2)孕期血清肾上腺髓质素水平与妊娠期糖尿病风险的关联性研究(论文提纲范文)
全文缩写词 |
摘要 |
Abstract |
前言 |
1 研究对象与方法 |
1.1 研究对象 |
1.2 资料收集和样本采集 |
1.3 仪器及试剂 |
1.4 实验室检测 |
1.5 统计分析 |
1.6 质量控制 |
2 结果 |
2.1 研究对象的基本特征 |
2.2 血清MR-proADM、血糖、胰岛素以及血脂水平 |
2.3 血清MR-proADM与基线血糖、胰岛素、血脂及血压的相关性 |
2.4 孕期血清MR-proADM和GDM风险的关联 |
2.5 孕早期血清MR-proADM和GDM风险的关联 |
2.6 孕中期血清MR-proADM和GDM风险的关联 |
3 讨论 |
4 结论 |
参考文献 |
综述 肾上腺髓质素与正常妊娠及妊娠并发症的研究进展 |
参考文献 |
致谢 |
(3)血清PⅢNP及MR-proADM在心力衰竭中的临床意义(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
(一)前言 |
(二)材料与方法 |
(三)结果 |
(四)讨论 |
(五)结论 |
(六)参考文献 |
综述 心力衰竭生物标志物的研究进展 |
参考文献 |
致谢 |
(4)乳腺癌ER、PR、HER-2的表达及血清肿瘤标志物与骨转移的相关性研究(论文提纲范文)
中文论着摘要 |
英文论着摘要 |
英文缩略表 |
前言 |
实验材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
创新性的自我评价 |
参考文献 |
附录 |
一、文献综述 乳腺癌骨转移机制及治疗研究进展 |
参考文献 |
二、在学期间科研成绩 |
三、致谢 |
四、个人简介 |
(5)加味当归补血片防治绝经后骨质疏松症的网络药理学及实验研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
引言 |
第一章 文献研究 |
第一节 加味补血片及其组方药物的化学成分及药理作用研究进展 |
1 黄芪的化学成分及药理作用研究进展 |
2 当归的化学成分及药理作用研究进展 |
3 淫羊藿的化学成分及药理作用研究进展 |
4 当归补血汤及加味当归补血片的相关研究 |
第二节 绝经后骨质疏松症的研究及治疗现状 |
1 绝经后骨质疏松症概述 |
2 现代医学对绝经后骨质疏松症的发病机理研究及主要治疗药物 |
3 中医学对绝经后骨质疏松症病因病机的认识及主要治法 |
第三节 网络药理学的研究概况及在中医药中的应用 |
1 网络药理学的起源及定义 |
2 网络药理学在中医药中的应用及意义 |
3 中药网络药理学的常用数据库及工具 |
第二章 网络药理学研究 |
第一节 加味当归补血片防治骨质疏松症的网络药理学研究 |
1 研究目的 |
2 材料和方法 |
3 实验结果及分析 |
4 讨论与小结 |
第二节 加味当归补血片的计算毒理学研究 |
1 研究目的 |
2 材料和方法 |
3 实验结果 |
4 讨论及小结 |
第三章 实验研究 |
第一节 加味当归补血片对自然衰老雌鼠的骨骼影响 |
1 研究目的 |
2 材料和方法 |
3 实验结果 |
4 讨论及小结 |
第二节 加味当归补血片对自然衰老雌鼠的长期安全性评价 |
1 研究目的 |
2 材料和方法 |
3 实验结果 |
4 讨论及小结 |
结语 |
第一节 研究思路、结果与讨论 |
1 整体研究思路 |
2 结果与讨论 |
第二节 研究创新性、不足与展望 |
1 研究的创新性 |
2 不足与展望 |
参考文献 |
附录 |
附录1 中英文缩写对照表 |
附录2 加味当归补血片活性成分作用靶点 |
附录3 防治骨质疏松症生物作用靶点 |
附录4 加味当归补血片长期安全性评价病理学检查报告 |
附录5 统计学审核证明 |
研究生在学期间发表论文情况、参与课题与获奖情况 |
致谢 |
(6)CGRP在骨修复与炎症性骨疾病中的生物学作用及机制的研究(论文提纲范文)
缩略语表 |
Abstract |
摘要 |
第一章 前言 |
第二章 CGRP受体RAMP1调节CGRP作用下成骨细胞的增殖和分化 |
2.1 引言 |
2.2 材料与方法 |
2.3 结果 |
2.4 讨论 |
2.5 小结 |
第三章 CGRP在LPS诱导的成骨细胞凋亡及牙周炎模型中作用的研究 |
3.1 引言 |
3.2 材料与方法 |
3.3 结果 |
3.4 讨论 |
3.5 小结 |
全文总结 |
参考文献 |
文献综述一 骨丧失机制及研究现状 |
参考文献 |
文献综述二 破骨细胞和成骨细胞在骨重建中的作用 |
参考文献 |
攻读博士期间发表的文章 |
附件 |
致谢 |
(7)胰淀素受体在胰岛β细胞表达及作用的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
缩略语/符号说明 |
前言 |
研究现状、成果 |
研究目的、方法 |
一、胰淀素受体在大鼠胰岛β细胞中的表达 |
1.1 对象和方法 |
1.1.1 实验对象 |
1.1.2 实验试剂 |
1.1.3 实验仪器 |
1.1.4 实验方法 |
1.2 结果 |
1.2.1 RT-PCR法检测胰淀素受体成分mRNA在大鼠胰岛β细胞系中的表达 |
1.2.2 Western blot法检测胰淀素受体成分蛋白在大鼠胰岛β细胞系中的表达 |
1.2.3 免疫荧光双重染色检测胰淀素受体2个组分CTR与RAMP在大鼠胰岛β细胞系中的共定位 |
1.2.4 免疫荧光双重染色检测胰淀素受体成分在正常大鼠胰岛组织中β细胞中的表达 |
1.3 讨论 |
1.4 小结 |
二、胰淀素受体在胰淀素抑制胰岛β细胞功能中的作用 |
2.1 对象和方法 |
2.1.1 实验对象 |
2.1.2 实验试剂及耗材 |
2.1.3 实验仪器 |
2.1.4 实验方法 |
2.2 结果 |
2.2.1 胰淀素受体拮抗剂AC253对胰淀素抑制高糖刺激胰岛素分泌的影响 |
2.2.2 胰淀素受体拮抗剂AC253对胰淀素抑制高糖刺激胰岛素mRNA转录的影响 |
2.2.3 胰淀素受体拮抗剂AC253对胰淀素抑制刺激状态下INS-1细胞内Ca~(2+)升高作用的影响 |
2.2.4 溶液中淀粉样纤维形成 |
2.2.5 10μmol/l人胰淀素短时间孵育对INS-1细胞存活影响 |
2.3 讨论 |
2.4 小结 |
三、胰淀素受体参与人胰淀素细胞毒作用的研究 |
3.1 对象和方法 |
3.1.1 实验对象 |
3.1.2 实验试剂及耗材 |
3.1.3 实验仪器 |
3.1.4 实验方法 |
3.2 结果 |
3.2.1 胰淀素受体拮抗剂对人胰淀素长时间作用后细胞毒作用的影响 |
3.2.2 胰淀素受体拮抗剂对人胰淀素淀粉样纤维形成的影响 |
3.2.3 人胰淀素及AC253 孵育对RAMP mRNA表达的影响 |
3.2.4 人胰淀素长时间孵育对RAMP1蛋白表达的影响 |
3.2.5 RAMP1在人胰淀素细胞毒性中的作用 |
3.3 讨论 |
3.4 小结 |
全文结论 |
论文创新点 |
参考文献 |
发表论文和参加科研情况说明 |
综述 胰淀素受体研究进展 |
综述参考文献 |
致谢 |
(8)调控微环境改善大鼠骨髓间充质干细胞骨再生效能的实验研究(论文提纲范文)
缩略语表 |
中文摘要 |
英文摘要 |
前言 |
文献回顾 |
实验一 壳聚糖搭载两种小干扰RNA对大鼠骨髓间充质干细胞成骨成血管分化的作用 |
1 材料 |
1.1 实验动物 |
1.2 实验试剂 |
1.3 实验器材 |
2 方法 |
2.1 壳聚糖凝胶制备 |
2.2 搭载siRNA支架材料制备 |
2.3 搭载siRNA的支架材料降解曲线 |
2.4 细胞培养鉴定 |
2.5 细胞附着和增殖 |
2.6 siRNA和细胞的共区域化 |
2.7 RT-qPCR分析检测靶基因及成骨成血管基因表达 |
2.8 免疫荧光检测成骨成血管相关蛋白表达 |
2.9 细胞外基质矿化 |
2.10 数据分析 |
3 结果 |
3.1 搭载siRNA后壳聚糖凝胶的表征 |
3.2 细胞表型鉴定结果 |
3.3 细胞附着和增殖 |
3.4 si RNA 和细胞的共区域化 |
3.5 RT-qPCR分析检测结果 |
3.6 细胞外基质矿化与免疫荧光分析 |
4 讨论 |
实验二 体内植入搭载两种小干扰RNA的壳聚糖对大鼠颅骨缺损修复的作用 |
1 材料 |
1.1 实验动物 |
1.2 实验试剂 |
1.3 实验器材 |
2 方法 |
2.1 支架材料植入大鼠颅骨缺损区域 |
2.2 Micro-CT检测成骨效果 |
2.3 Van Gieson染色 |
2.4 数据分析 |
3 结果 |
3.1 颅骨缺损再生效果 |
4 讨论 |
实验三CGRP对大鼠间充质干细胞迁移,增殖和成骨分化的影响 |
1 材料 |
1.1 实验动物 |
1.2 实验试剂 |
1.3 实验器材 |
2 方法 |
2.1 细胞分离培养鉴定 |
2.2 CGRP对BMSCs中SDF-1 的分泌和表达的影响 |
2.3 Transwell检测CGRP对BMSCs迁移能力的促进作用 |
2.4 BrdU检测CGRP对BMSCs增殖能力的促进作用 |
2.5 CGRP对BMSCs成骨分化的作用 |
2.6 数据分析 |
3 结果 |
3.1 CGRP对大鼠BMSCs分泌SDF-1 和SDF-1mRNA表达的影响 |
3.2 CGRP对大鼠BMSCs迁移能力的影响 |
3.3 CGRP对大鼠BMSCs增殖能力的影响 |
3.4 CGRP对BMSCs成骨分化的作用 |
4 讨论 |
实验四 局部注射降钙素基因相关肽CGRP对SD大鼠下颌骨单侧牵张成骨效果的影响 |
1 材料 |
1.1 实验动物 |
1.2 实验试剂 |
1.3 手术器械 |
1.4 主要材料及仪器 |
2 方法 |
2.1 牵张器植入术 |
2.2 动物分组及标本获得 |
2.3 Micro-CT分析 |
2.4 组织形态学观察及定量分析 |
2.5 数据分析 |
3 结果 |
3.1 大体标本观察 |
3.2 Micro-CT分析 |
3.3 骨组织学观察 |
4 讨论 |
实验五 局部应用CGRP对下颌骨牵张中间充质干细胞动员的作用 |
1 材料 |
1.1 实验动物 |
1.2 实验试剂 |
1.3 手术器械 |
1.4 主要材料及仪器 |
2 方法 |
2.1 手术步骤 |
2.2 免疫组织化学检测Nestin表达 |
2.3 外周血CD29阳性细胞计数 |
2.4 外周血中SDF-1 含量检测 |
2.5 qRT-RCR检测牵张区SDF-1mRNA的表达 |
2.6 数据分析 |
3 结果 |
3.1 免疫组织化学法检测Nestin的表达 |
3.2 外周血CD29阳性细胞数量 |
3.3 外周血中的SDF-1 的表达 |
3.4 牵张区骨组织SDF-1mRNA表达 |
4 讨论 |
小结 |
参考文献 |
个人简历和研究成果 |
致谢 |
(10)CGRP作用下的MG63蛋白质差异表达的实验研究(论文提纲范文)
英文缩写一览表 |
英文摘要 |
中文摘要 |
前言 |
第一部分 CGRP 作用下的成骨样细胞蛋白质差异表达 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
第二部分 HRNR Hornerin 在CGRP 作用下成骨样细胞中的表达 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
全文总结 |
致谢 |
参考文献 |
文献综述 降钙素家族中的肽和受体在骨代谢调节中的角色 |
参考文献 |
在读期间发表论文 |
四、肾上腺髓质素与骨代谢研究进展(论文参考文献)
- [1]降钙素促CREB磷酸化诱导人牙周膜干细胞成骨分化的作用机制研究[D]. 黄美能. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(09)
- [2]孕期血清肾上腺髓质素水平与妊娠期糖尿病风险的关联性研究[D]. 陈秀芝. 华中科技大学, 2020(01)
- [3]血清PⅢNP及MR-proADM在心力衰竭中的临床意义[D]. 惠颖. 大连医科大学, 2020(03)
- [4]乳腺癌ER、PR、HER-2的表达及血清肿瘤标志物与骨转移的相关性研究[D]. 王思. 锦州医科大学, 2020(05)
- [5]加味当归补血片防治绝经后骨质疏松症的网络药理学及实验研究[D]. 陈志维. 广州中医药大学, 2019(03)
- [6]CGRP在骨修复与炎症性骨疾病中的生物学作用及机制的研究[D]. 张慧宇. 第三军医大学, 2016(02)
- [7]胰淀素受体在胰岛β细胞表达及作用的研究[D]. 李晓通. 天津医科大学, 2015(05)
- [8]调控微环境改善大鼠骨髓间充质干细胞骨再生效能的实验研究[D]. 贾森. 第四军医大学, 2015(08)
- [9]第六届国际华夏内分泌大会纪要[J]. 滕卫平,母义明,施秉银,陈璐璐,单忠艳,洪天配,许樟荣,李彩萍. 中华内分泌代谢杂志, 2011(06)
- [10]CGRP作用下的MG63蛋白质差异表达的实验研究[D]. 吴梦. 第三军医大学, 2011(12)