一、神经生长因子在位听神经核内的定位分布（论文文献综述）
康莉[1]（2020）在《食管鳞癌中AKT和GSK3β驱动SOX2蛋白高表达的分子机制研究》文中提出食管鳞癌是原发于食管上皮组织的恶性肿瘤。长久以来,我国食管癌的发病率和死亡率位列世界首位。改善食管鳞癌发病率高和治愈率低的现状,需要全面而深入地探究食管鳞癌发生发展的调控机制。研究表明,SOX2异常表达促进多种肿瘤发生发展。在食管鳞癌中SOX2呈现蛋白水平的高表达和基因水平的异常扩增,但在SOX2高表达的肿瘤样本中,其基因水平的扩增只占少部分,提示我们导致肿瘤中SOX2高表达的机制仍有待研究。因此,本论文主要致力于探究SOX2的蛋白翻译后修饰对其蛋白稳定性的调控,并为精准靶向SOX2高表达的肿瘤治疗提供有力的理论依据。在食管鳞癌细胞中,我们发现SOX2的高表达广泛地受到蛋白稳定性的调控。我们实验室前期工作发现在胚胎干细胞中AKT激酶对SOX2蛋白稳定性具有重要的促进作用。基于AKT激酶通路在肿瘤细胞中广泛激活,我们在多株食管癌细胞系中研究了AKT是否通过调控SOX2蛋白稳定性促进其在食管癌中的高表达。我们证明了AKT是促进SOX2在食管癌细胞中高表达的重要驱动因子,并阐明了AKT在食管癌细胞中促进SOX2蛋白稳定性的分子机制。我们发现AKT通过磷酸化SOX2的T116抑制SOX2的蛋白酶体降解,进一步研究发现AKT是通过抑制泛素连接酶UBR5介导的蛋白酶体降解来促进SOX2蛋白稳定性,并发现UBR5通过催化SOX2的K115泛素化促进其发生蛋白酶体通路介导的降解。此外,我们发现AKT抑制剂能够显着下调SOX2的蛋白水平,并抑制肿瘤细胞的生长和肿瘤干细胞的形成。综上,我们的研究揭示了AKT通过拮抗UBR5促进SOX2在食管癌高表达的新机制,并为通过靶向AKT治疗SOX2高表达的食管癌提供理论依据。在上述工作的基础上,为了深入探究SOX2高表达的分子机制,我们利用激酶抑制剂库在细胞水平上较系统地筛选调控SOX2蛋白水平的其它信号通路。我们发现GSK3β激酶抑制剂能显着下调食管癌细胞中SOX2水平,并且发现GSK3β激酶抑制剂通过下调SOX2蛋白稳定性下调SOX2蛋白水平。我们鉴定了GSK3β催化SOX2的磷酸化位点,发现GSK3β主要通过催化SOX2的251位丝氨酸的磷酸化来抑制SOX2蛋白酶体的降解。进一步的研究表明GSK3β主要通过抑制泛素连接酶复合体CRL4A与SOX2的相互作用,从而促进SOX2的蛋白稳定性。在生理状态下,此通路发挥着维持SOX2在食管基底层干细胞中高表达的重要作用。在病理样本中,GSK3β呈现异常高表达并与SOX2的蛋白水平存在正相关性。我们还通过小鼠荷瘤实验证明GSK3β的抑制剂能够有效的抑制SOX2高表达的食管鳞癌细胞的生长。综上,我们提出了GSK3β-SOX2通路是促进SOX2在生理和病理条件下高表达的新机制,此机制的阐释将有助于为食管鳞癌的精准治疗提供新的指导方案。
曾友根[2]（2020）在《NSC联合OEC移植对SNHL模型大鼠耳蜗细胞凋亡的研究》文中指出目的:本研究通过观察NSCs和OECs联合移植对SNHL模型大鼠耳蜗细胞神经营养因子,凋亡及抗凋亡蛋白因子表达影响,探讨细胞移植对SNHL损伤耳蜗细胞保护作用的部分机制。方法:（1）细胞培养:选取胎鼠作为移植细胞组织来源,对NSCs和OECs培养、形态观察及鉴定。（2）动物造模:采用庆大霉素对大鼠进行SNHL造模,将筛选出符合要求的大鼠随机分为实验组和对照组,每组10只,实验组予NSCs和OECs联合移植,对照组予输注人工外淋巴液代替细胞移植。（3）细胞移植:将荧光标记的NSCs和OECs通过圆窗植入耳蜗内,术后记录各组大鼠体重变化,检测大鼠ABR听力阈值变化和听觉耳动反射阈值,并采集样本检测。（4）耳蜗切片HE染色。（5）耳蜗免疫荧光染色检测移植后NSCs和OECs荧光标记物。（6）TUNEL法检测凋亡细胞阳性细胞数和MOD值。（7）免疫组织化学法检测神经营养因子及凋亡免疫阳性细胞。（8）Western-blot法检测样本BDNF、NT-3和Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达影响。结果:（1）细胞培养鉴定结果:NSCs染色鉴定标记物呈nestin阳性,OECs染色鉴定标记物呈p75NTR阳性,培养获得了纯度较高的细胞。（2）听觉耳动反射检测结果:实验组大鼠耳廓反射阈值改善,耳廓抖动变化增强,对照组改变不明显。（3）ABR阈值变化结果:与对照组比较,实验组在1周后ABR阈值变化不明显（P>0.05）,在2周后实验组ABR阈值变化升高（P<0.05）。（4）耳蜗免疫荧光染色结果:实验组移植后NSCs标记分化的细胞部分能表达神经元细胞标志物Nestin,OECs标记分化的细胞分能表部达OECs标志物p75NTR,对照组耳蜗未发现荧光标记的细胞。（5）HE染色结果:对照组见内、外毛细胞变性坏死,SGCs部分坏死,核萎缩,损伤明显,细胞空泡样变性,密度降低,排列疏松混乱不齐,实验组整体病理损伤减低。（6）TUNEL阳性细胞数检测结果:与对照组比较,实验组TUNEL阳性细胞数明显减少（P<0.05）,细胞凋亡指数占比减少,MOD值减少（P<0.05）。（7）免疫组化检测结果:与对照组比较,实验组BDNF和NT-3阳性细胞数及IOD值明显增多（P<0.05）,同时抗凋亡因子Bcl-2阳性细胞数及IOD值升高,促凋亡因子Bax、Caspase-3阳性细胞数及IOD值减少（P<0.05）。（8）Western-blot检测结果:与对照组比较,实验组耳蜗组织样本中BDNF、NT-3,Bcl-2蛋白表达水平升高,Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论:（1）NSC联合OEC移植对SNHL大鼠耳蜗具有保护作用,能减轻耳蜗细胞的损伤。（2）NSC联合OEC移植可能通过调节神经营养因子的表达水平而参与了耳蜗细胞的保护过程。（3）NSC联合OEC移植可能通过上调抗凋亡蛋白Bcl-2,下调凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达路径而参与了对SNHL耳蜗细胞凋亡的保护机制。
黄玉宇[3]（2020）在《CND患儿CI术前评估及载药电极对听力的保护》文中研究说明目的:应用电诱发听觉脑干反应（EABR）、功能性磁共振（f MRI）、CT及MRI评价耳蜗神经发育不良（CND）患儿人工耳蜗植入（CI）术前耳蜗神经功能、听觉通路和听皮层功能。其次,利用CI豚鼠模型,研究乙交酯丙交酯共聚物（PLGA）涂层载药电极对CI术后听力的保护作用。方法:第一部分选取6例双侧极重度感音神经性聋患儿,其中4例CT显示双侧内听道狭窄,1例单侧内听道狭窄,1例内听道无狭窄;3例内听道斜矢状位MRI重建双侧仅见面神经和前庭神经。6例患儿影像学诊断为CND。其中3例行f MRI,3例行EABR检查。全部患儿接受单侧CI,术后听力及言语康复随访至少1年。第二部分利用PLGA载药耳蜗电极分别搭载地塞米松（DXM）、阿糖胞苷（Ara-C）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）,采用耳蜗开窗路径植入豚鼠,在术后第0天、第7天、第14天、第28天及第90天记录豚鼠CI术后4、8、16、24及32KHz的ABR阈值变化。结果:第一部分3例CND接受f MRI检查的患儿,其中1例左耳给声后,f MRI影像示右侧听皮层被激活,右耳给声,左侧听皮层未见激活;1例左耳、右耳及双耳2000Hz给声,双侧颞横回均激活;另1例双侧均无激活。另外3例患儿接受EABR检测,其中2例引出V波。6例患儿于CI术后1、6、12个月接受听力学及言语评估,其中4例患儿术后6个月内听力改善,声场听阈为（48.15±6.60）d BHL,有意义听觉整合量表和CAP评分改善,3例患儿SIR评分改善有限。1例患儿的听力提高,但因年龄偏大,言语康复不佳。第二部分与阳性对照组相比,DXM/PLGA、Ara-C/PLGA载药电极组ABR阈值显着降低（p<0.001）,NAD+/PLGA组未见明显差异。结论:术前综合应用影像学、电生理评估CND患儿,可更准确地评估其听觉通路的完整性、了解耳蜗神经功能,对于手术预后有重要的参考意义。CND患儿CI术后的听觉言语康复差异较大。PLGA载药电极可在豚鼠人工耳蜗模型中稳定释放药物,其中地塞米松与阿糖胞苷对术后听力损失具有保护作用。
魏薇[4]（2020）在《Fgf22基因在小鼠听觉传导通路中的作用及机制研究》文中研究表明目的:目前听力损失是影响全球人类健康的重要原因之一,据2013年世界卫生组织（The Word Health,WHO）数据调查结果显示,目前全世界听力障碍患者大约有36,000万,约占总人口的5.3%,其中15岁以下听障患儿约有3,200万。根据病因可以将听力损失分为先天性和后天性两种,其中先天性听力损失主要包括遗传性聋,而后天性听力损失主要包括噪声诱导的听力损失、耳毒性药物诱导的听力损失以及老年性聋等。因此,尽早完善与听力损失相关的基因突变谱,并通过基因筛查与诊断提早进行患病风险的评估和预防,将对最终降低我国人口听力损失发病率、提高人口质量具有重大意义。不论是先天性还是后天性,导致最终听力损失的原因都是阻断了声音在听觉传导通路的正常传递。听觉传导通路主要分为外周听觉传导通路和中枢传导通路,其中外周听觉系统传导通路为:外界声音从外耳道通过鼓膜,将声音传递至中耳,再通过听小骨振动将声音信号放大并传递至卵圆窗,并通过淋巴液的振动传递刺激耳蜗Corti器。中枢神经系统正常传导通路为:耳蜗Corti器中的外毛细胞接受到刺激之后将声音信号放大,刺激内毛细胞将声音信号通过突触进行编码,然后沿着耳蜗核-下丘-内侧膝状体-大脑听皮层传递,最终完成了声音信号在中枢听觉传导通路中的完整传递。近年来,介于外周和中枢听觉传导通路中间的耳蜗带状突触逐渐成为耳神经外科学基础研究领域的热点,与中枢神经系统内的突触有所不同,耳蜗内毛细胞带状突触是将声音信号向中枢传递过程中的第一个突触结构,并且因为其空间分布呈带状故称之为“带状突触”（Ribbon Synapses）。声音信号从外周听觉系统向中枢听觉系统的传导依赖于耳蜗带状突触内神经递质快速、精确、及时地释放,这也决定了声音信号传递的质和量。此外,在声音信号在听觉系统传递的过程中,耳蜗内毛细胞负责将声波的机械信号转换为电信号,然后再通过耳蜗带状突触传递到中枢听觉神经元。因此,在这个过程中,任何可能导致带状突触结构和功能改变的危险因素如噪声、耳毒性药物、老化等,都会对声音的编码产生重要的影响。目前,隐匿性听力损失已经成为一种被广为认可的以耳蜗带状突触损伤为主要病理机制的临床常见疾病。患者的临床表现主要为听阈无明显变化,在嘈杂环境中却表现出言语识别率显着降低。为了深入探索其发病机制,有学者通过给予实验动物中度程度噪声暴露,可导致暂时性阈移（Temporary Threshold Shift,TTS）、耳蜗带状突触不可逆性损伤以及ABR的I波幅值不可逆性下降的特征,与临床表现相一致,认为其可作为噪声诱导的隐匿性听力损失（Noise-induced Hidden Hearing Loss,NIHHL）动物模型。对于其发病机制,目前被广为认同的观点是中等程度噪声暴露仅损伤高阈值、低自发放电率的听神经纤维,而基本不损伤低阈值、高自发放电率的听神经纤维,而高阈值、低自发放电率的听神经纤维的功能主要是调节嘈杂环境中的言语识别率,而未受损伤的低阈值、高自发放电率的听神经可以继续维持正常听阈。因此,在隐匿性听力损失发病过程中,中等强度噪声可直接损伤内毛细胞与高阈值、低自发放电率听神经纤维之间的耳蜗带状突触,进而导致高阈值、低自发放电率听神经与内毛细胞失去连接,丧失其功能,从而导致患有隐匿性听力损失患者表现出在嘈杂环境中言语识别率降低,但是不影响阈值变化的临床特征。尽管如此,目前隐匿性听力损失的分子机制尚未明确。成纤维细胞生长因子22（Fibroblast growth factor 22,Fgf22）基因在2001年被首次克隆。既往研究发现,Fgf22基因与哺乳动物胚胎期大脑发育、中枢神经系统兴奋性突触的形成、维持与调控等都有着密切的联系。最近研究显示Fgf22基因可通过维持耳蜗带状突触数量而拮抗庆大霉素耳毒性导致的听力损失,推测Fgf22可能与听觉系统耳蜗带状突触密切相关。因此,本研究旨在探讨Fgf22基因在听觉传导通路中的作用,并明确Fgf22基因是否与隐匿性听力损失密切相关,以及分子机制的深入探索。此外,转录组学RNA-seq技术近年来在基础研究领域十分兴起,主要原因是其可以在特定的发育阶段或生理条件下通过获取完整的转录因子及数量的变化差异,从而揭示细胞和组织内的分子组成,进而有助于理解发育和疾病的意义,即可以直接从分子水平阐述疾病的分子机制。其中长链非编码RNA（Long non-coding RNA,lncRNA）被应用得尤为广泛,它是一类大于200个核苷酸的非蛋白编码RNA,可以通过调控转录等蛋白编码过程,从而在多种疾病中发挥重要的作用。因此,本研究将采用RNA-seq技术深入探讨本研究中所涉及到的分子机制研究。方法:1.在正常成年小鼠中,通过免疫荧光染色明确Fgf22基因在听觉传导通路中的时空表达特征;在P0、P7、P14、P28四个时间点,通过耳蜗基底膜铺片免疫荧光染色的方法明确Fgf22基因在听觉传导通路中的时空表达特征;2.通过CRISPR/Cas9技术构建Fgf22基因敲除小鼠后,首先通过PCR扩增产物进行基因测序以鉴定小鼠的基因型,从而明确Fgf22基因敲除成功,然后观察与评估不同基因型小鼠的繁殖能力、体重变化等生长发育特征;3.通过听觉脑干反应（Auditory Brain Response,ABR）明确Fgf22基因敲除小鼠模型在不同频率上的听力学表型;4.分别对Fgf22基因敲除小鼠与野生型小鼠给予100分贝（Decibel,dB）声压级（Sound Pressure Level,SPL）的中等强度白噪声暴露2小时,观察噪声暴露后各组小鼠的听力学表型差异,以及通过免疫荧光染色观察耳蜗带状突触数量的变化差异;5.构建中等强度噪声暴露导致的隐匿性听力损失小鼠动物模型,设置一次暴露（The First Time of Noise Exposure,NE-1st）组,即 NIHHL 模型,二次暴露（The Second Time of Noise Exposure,NE-2nd）组,即噪声性听力损失（Noise-induced hearing loss,NIHL）模型、空白对照组,对 NE-1st 组合 NE-2nd 组分别给予100dB SPL白噪声暴露2小时暴露1次和暴露2次,并在噪声暴露后第1天、第7天、第14天对其进行ABR阈值变化检测、ABRI波幅值变化检测以及通过免疫荧光染色观察耳蜗带状突触数量变化情况;6.在噪声暴露后第14天,取材小鼠耳蜗组织进行RNA-seq分析以及IncRNA-mRNA共表达可视化分析明确隐匿性听力损失的主要调控通路并预测靶基因,然后通过qRT-PCR进一步验证,最后推断Fgf22基因缺陷在噪声诱导的隐匿性听力损失中可能的作用机制;结果:1.Fgf22基因在小鼠外周听觉传导通路中的时空表达特征（1）时间表达特征:Fgf22基因首先在P0时仅在内毛细胞中表达、P7时逐渐出现在外毛细胞中,在P14时在螺旋神经节细胞中也表达,P28的时候表达水平较之前显着增加;（2）空间表达特征:在成年期的小鼠耳蜗中,发现Fgf22基因在内毛细胞、外毛细胞以及螺旋神经节细胞中均存在表达,与时间表达特征相一致;2.通过CRISPR/Cas9技术成功构建Fgf22基因敲除小鼠（1）测序结果显示Fgf22基因敲除成功;（2）与野生型小鼠相比,基因敲除小鼠听力无显着差异;但是在100dB SPL中等程度白噪声暴露2小时作用下,发现Fgf22基因敲除小鼠与野生型小鼠相比,表现出耳蜗带状突触数量减少、ABRI波幅值下降的特点,差异具有统计学意义;3.成功构建NIHHL动物模型（1）正常C57BL/6J 6周龄成年小鼠在100dB白噪声暴露2小时后,两周后可发现该小鼠表现出暂时性阈移、ABRI波幅值下降、耳蜗带状突触数量显着减少,差异具有统计学意义,可作为NIHHL动物模型;（2）正常C57BL/6J成年小鼠在接受两次100dB白噪声暴露后,两周后发现该小鼠听力检测结果表现出永久性阈移,ABRI波幅值显着下降、耳蜗带状突触数量显着减少,差异具有统计学意义,可作为NIHL动物模型;4.通过RNA-seq明确NIHHL可能的调控通路以及可能的靶基因（1）通过RNA-seq和lncRNA-mRNA可视化共表达分析发现mRNA GNAS和其上游lncRNA Sept7在NE-l st组中表达显着升高,差异具有统计学意义;（2）Adrenergic Signaling通路经过KEGG通路分析发现其p-value值最小,即最有可能成为调控NIHHL疾病发生与发展的信号通路;结论:1.本研究首次发现Fgf22基因在小鼠耳蜗发育过程中,首先在内毛细胞中表达、逐渐出现在外毛细胞中,最后在P28时在螺旋神经节细胞中也存在表达。在成年小鼠耳蜗中,我们发现Fgf22基因在内毛细胞、外毛细胞以及螺旋神经节细胞中均存在表达,与发育表达结果相一致;2.通过CRISPR/Cas9技术成功构建Fgf22基因敲除小鼠,并发现正常情况下与野生型小鼠相比,听力无显着差异,但是在100dB SPL白噪声暴露2小时作用下,Fgf22基因敲除小鼠与野生型小鼠相比,表现出耳蜗带状突触数量显着减少、ABRI波幅值明显下降的特征;3.正常C57BL/6J成年小鼠在接受一次100dB中等强度白噪声暴露2小时后观察两周,小鼠可表现出暂时性阈移、ABRI波幅值下降、以及耳蜗带状突触数量显着减少,因此可作为隐匿性听力损失动物模型;4.通过RNA-seq和lncRNA-mRNA共表达分析得出结论Fgf22基因很有可能通过Adrenergic Signaling通路调控lncRNA Sept7和mRNA GNAS的表达进而调控隐匿性听力损失的发生与发展。
桂飞[5]（2019）在《Neuritin对长爪沙鼠耳蜗螺旋神经节损伤的保护作用》文中研究指明目的:耳蜗螺旋神经节（spiral ganglion neurons,SGNs）能够将毛细胞接收到的声音信号传递至听觉中枢并产生听力,其数量和功能对于维持正常听功能具有重要意义。受限于有限的再生能力,SGNs损伤后很难自发再生并恢复原有功能,各种神经营养因子在此过程中发挥重要作用。神经突起生长因子Neuritin是一种与神经可塑性密切相关的神经营养因子,本课题组前期研究发现其在促进毛细胞转分化再生方面具有重要作用,并可保护神经纤维免于毛细胞缺失所致的继发性损伤,说明其在维持SGNs存活及功能方面具有潜在重要作用。基于上述研究基础,本研究旨在利用长爪沙鼠筛选并建立耳蜗螺旋神经节特异性损伤所致的感音神经性耳聋模型,探究其在保护受损耳蜗SGNs,修复受损听神经功能中的作用,为SGNs缺失导致的感音神经性耳聋的防治提供新的研究策略和科学依据。方法:1、取不同发育时期的耳蜗组织,用qPCR和WB方法,从分子水平检测Neuritin的表达变化;冰冻切片后,用免疫荧光法,检测Neuritin的表达定位,明确Neuritin在长爪沙鼠耳蜗发育各阶段的表达变化。2、选择3种耳毒性药物（卡那霉素和呋塞米联用、新霉素、哇巴因）造模,通过ABR检测和组织形态学分析,筛选并鉴定出长爪沙鼠耳蜗SGNs特异性损伤的耳聋模型,并探究耳聋发生发展过程中Neuritin的表达变化,明确其表达与该耳聋模型的相关性。3、组织水平,建立乳鼠Corti组织的体外培养体系,使用哇巴因损伤SGNs的同时加入不同浓度的Neuritin蛋白,探究其对受损耳蜗SGNs的保护作用。动物水平,利用方法2中确定的损伤模型,经圆窗滴注不同剂量的Neuritin蛋白,通过ABR检测和组织水平分析,综合评价Neuritin对受损听功能的修复效果。结果:1、检测发现,Neuritin在长爪沙鼠耳蜗不同发育阶段均有表达,胚胎期第20天（E20）表达量较低,出生后1-56天（P1-56）表达持续升高;其表达主要分布于SGNs和Corti器区域。2、不同药物建模结果显示,仅低浓度哇巴因（1mM）可引起耳蜗SGNs特异性缺失,且伴听力阈值显着上升,最终选定此条件进行损伤模型的建立;进一步研究发现,损伤后耳蜗中Neuritin表达下调,表明Neuritin的表达与该模型具有相关性,且呈负相关。3、体外研究显示,Neuritin（16μg/mL）组和Neuritin（32μg/mL）组每100μm2 SGNs的数量分别为13.2±1.2和16±2.6,显着高于损伤组的7.3±2.2;每100μm神经纤维的数量分别为8.2±1.1和11.6±1.5,也显着高于损伤组的4.6±1.1,且排列更为整齐;各组毛细胞均不受影响。动物水平结果显示,在哇巴因损伤的同时经圆窗滴注Neuritin蛋白可促进部分听功能的恢复,表现为Neuritin（16μg）组高频区16kHz和32kHz听力阈值分别为32.5±8.9dB,61.3±3.5 dB,显着低于损伤组的48.3±16.0 dB,85±5.5 dB;Neuritin（32μg）组高频区8kHz、16kHz和32kHz听力阈值分别为25±10.7 dB,31.3±9.9 dB,55±5.3dB,均显着低于损伤组。组织形态学检测显示,Neuritin处理组中耳蜗中底回螺旋神经节细胞及神经纤维的数量较损伤组显着增多,与功能检测的结果一致。结论:1、Neuritin在长爪沙鼠耳蜗发育过程中均有表达,尤其在幼年至成年阶段,且主要表达在耳蜗SGNs及Corti区域;2、低浓度哇巴因（1mM）诱导的长爪沙鼠耳蜗SGNs特异性缺失模型,为本研究选定的最佳动物模型,在该模型中Neuritin的表达与SGNs的损伤呈负相关关系;3、体外和体内研究表明,Neuritin剂量依赖性地维持了受损长爪沙鼠耳蜗螺旋神经节细胞及神经纤维的数量及排列,有效促进了高频损伤区域的听功能恢复。
刘鹏飞[6]（2018）在《面-舌下神经端侧吻合修复周围性面瘫的应用基础研究》文中研究表明目的从解剖和组织学角度研究大鼠颅外段面神经、舌下神经,为面-舌下神经吻合（FHA）大鼠实验模型的建立提供参考依据;对FHA端端吻合（ETE）和端侧吻合（ETS）后神经形态和功能的恢复进行动态评估,并探索ETS再生纤维的来源;通过建立四种临床常用FHA术式的大鼠模型,系统研究供体神经不同处理方式对受体面神经再生及供体神经肌肉系统的影响。材料和方法（1）显微镜下解剖大鼠颅外段面神经、舌下神经,测量相关解剖学参数,并行神经组织形态学观察。（2）大鼠随机分为未损伤组,ETE组和ETS组（未行外膜或束膜开窗）。根据观察期限不同,各实验组分为两个亚组。术后4月和8月,分别对触须运动功能、神经电生理特点和神经组织形态等进行观察分析,并用荧光示踪剂注入神经干进行逆行双标示踪,动态定量分析荧光标记神经元。（3）大鼠随机分为ETE组,供体神经纵向劈开端端吻合组（ETE-Hemi）、供体神经外束膜开窗组（ETS-PW）和30-40%部分纤维切断术（ETE-PN）。术后8月,对各组行触须运动功能评估、电生理检查、神经及舌肌组织学观察。舌肌组织学观察指标包括肌纤维横截面积、截面积胶原比及肌纤维表型等。结果（1）大鼠面神经干颅外段长度（5.94±0.15mm）显着大于面神经干分叉前-舌下神经最短距离（5.20±0.20mm）,可实现FHA无张力端侧缝合;舌下神经截面积、有髓纤维数量均小于面神经。（2）ETE神经再生效果明显优于ETS,但后者对供体神经功能影响轻微。ETS术后面神经核内未见标记神经元,舌下神经核内仅散在分布双标神经元。经受体面神经逆行标记舌下运动神经元中双标神经元所占比例由术后4月的19.8%降至术后8月的6.0%。（3）各实验组均获得不同程度的面神经形态及功能恢复,但未取得完全恢复。各组供、受体神经轴突直径和髓鞘厚度等无显着差异。ETE神经再生效果明显优于EEN-Hemi和ETS-PW,但与ETSPN组比较无统计学差异。ETE和ETE-Hemi对供体神经肌肉系统的损害程度要显着大于ETS-PW和ETS-PN。结论（1）大鼠面-舌下神经吻合模型存在供、受体神经直径匹配不佳的缺陷,但可较易实现无张力端侧缝合,不失为研究FHA端侧吻合较理想的动物模型。（2）侧芽再生与断端再生同时参与ETS的轴突再生,断端再生是再生纤维的主要来源;尽管ETS运动神经再生效果未达到ETE水平,但前者几乎实现供体神经功能的完整保留。（3）ETS术中切断部分供体神经（30-40%）在最大程度促进受体神经再支配的同时可最大限度地减少对供体神经肌肉系统的损害;舌下神经纵向劈开（ETE-Hemi）对供体舌下神经肌肉系统的结构和功能有显着影响。
黄雪琴[7]（2017）在《糖尿病大鼠螺旋神经节细胞和蜗核神经元自噬与凋亡的时序性变化与机制探讨》文中研究说明目的和意义糖尿病对听觉系统可造成不同程度的损害,目前发生机制尚不明确。研究发现,自噬和凋亡与糖尿病及其并发症,如糖尿病肾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变等有关并起重要作用,然而在糖尿病听力损害的研究鲜见报道。我们推断自噬在糖尿病听力损害中也同样发挥作用。本实验建立糖尿病大鼠模型,研究糖尿病对听觉系统的时序性病理改变,探讨自噬和凋亡是否参与高血糖对螺旋神经节细胞和蜗核神经元的毒性过程及相关信号通路,为研究糖尿病听力损害的发病机制提供实验依据。方法制备糖尿病模型,在糖尿病第4、8、12周末,检测大鼠畸变产物耳声发射（distortion product otoacoustic emision,DPOAE）和听性脑干反应（auditory brainstem response,ABR）。观察各组糖尿病大鼠螺旋神经节细胞（spiral ganglion cells,SGCs）的形态学变化,进行SGCs计数。透射电镜观察蜗神经、坐骨神经、SGCs和蜗核神经元的超微结构。采用免疫组化法检测蜗核胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的表达,免疫组化和免疫印迹法检测SGCs和蜗核神经元LC3、Beclin-1、Bcl-2、bax和Cleaved Caspase-3蛋白的表达,并进行相关性分析。结果1.成功制备糖尿病大鼠模型,造模成功率72.50%,死亡率23.57%。2.听功能检测结果:DM12W组大鼠DPOAE各频率幅值均出现明显下降。DM8W、DM12W组ABR的反应阈均升高,DM12W组各波潜伏期及波间期延长。3.光镜下见对照组与DM4W组SGCs与蜗核神经元大体形态正常;DM8W、DM12W组SGCs与蜗核神经元细胞密度降低,SGCs计数明显减少（P<0.05）。4.超微结构改变:蜗神经在DM8W、DM12W组有髓神经纤维减少,髓鞘萎缩、板层分离、断裂;轴索萎缩,胞浆内可见自噬溶酶体。坐骨神经在DM4W组可见部分髓鞘分离;DM8W、DM12W组髓鞘断裂、分离多见,出现脱髓鞘,轴索萎缩、破裂。DM4W组SGCs内线粒体出现少部分肿胀,DM8W、DM12W组线粒体肿胀、空泡化,自噬体及溶酶体增多,髓鞘板层分离。蜗核神经元在DM4W组出现髓鞘板层松弛或断裂,DM8W、DM12W组自噬体和溶酶体逐渐增多,髓鞘变形、板层分离、断裂。5.SGCs自噬和凋亡蛋白的表达:免疫组化检测发现Beclin-1、LC3、Bax与Cleaved Caspase-3在糖尿病组阳性表达多见,对照组少见,Bcl-2则相反。Western blotting检测:各糖尿病组SGCs Beclin-1的表达均显着上调（P<0.05）。DM8W 和 DM12W 组 Cleaved-LC3、Bax 与 Cleaved Caspase-3 的表达明显高于对照组（P<0.05）。Bcl-2的表达在DM8W组和DM12W组显着下降。6.蜗核神经元蛋白的表达:免疫组化检测发现糖尿病组GFAP阳性表达的星形胶质细胞增多。Beclin-1、LC3、Bax与Cleaved Caspase-3在各糖尿病组阳性表达多见,对照组少见,Bcl-2则相反。Western blotting检测Beclin-1、Bax在各糖尿病组表达升高,Cleaved-LC3蛋白在DM8W和DM12W组的表达明显升高。DM4W 组和 DM8W 组 Cleaved Caspase-3 表达上调。Bcl-2 在 DM8W 组和DM12W组表达降低。结论1.持续性高血糖对SGCs、蜗神经和蜗核神经元造成慢性损害。2.高血糖可促进耳蜗核的星形胶质细胞增生活化。3.自噬和凋亡参与了高血糖对SGCs和蜗核神经元的神经毒性过程。4.SGCs和蜗核的自噬和凋亡水平随糖尿病病程延长而增强。5.自噬可能通过Bcl-2/Beclin-1通路参与高血糖对SGCs和蜗核的毒性过程。
陈洪赛[8]（2017）在《侧颅底良性肿瘤临床生物学行为的分子机制探讨及药物治疗研究》文中进行了进一步梳理【目的】1.听神经瘤是耳神经外科最为常见的侧颅底良性肿瘤,本课题拟从肿瘤临床生物学行为和分子生物学机制两个角度出发,全面探讨听神经瘤NF2基因的不同突变状态对肿瘤发展趋势的影响。通过基因层面、m RNA水平及蛋白水平全方位分析,探讨NF2致病基因突变失活所引起的一系列失调信号变化;通过体外细胞实验和体内动物实验,探讨靶向阻断或逆转这些失调信号对听神经瘤细胞生长特性的影响及并深入探讨具体机制。2.同时,我们还对侧颅底肿瘤的另一多见类型（副神经节瘤）的临床行为、遗传学机制以及表观遗传学机制进行关联性研究,以上研究可能为临床上侧颅底良性肿瘤的两种常见类型的治疗开辟新的途径。【方法】1.收集282例散发性听神经瘤的临床资料,按照诊断年龄分为31例青少年组听神经瘤（小于30岁）、181例成年组听神经瘤（30-60岁）和53例老年组听神经瘤（大于60岁）,对肿瘤临床特性（包括性别、侧别、发病年龄、症状持续时间、肿瘤大小及肿瘤性质）进行对比分析。利用巢式PCR扩增目的基因后直接测序结合多重连接依赖探针扩增技术（MLPA）的方法,对患者血液和肿瘤组织的NF2基因全编码序列（包括侧翼序列）的点突变和基因拷贝状态进行检测。利用Western-Blot技术和Realtime-PCR技术对不同NF2基因状态听神经瘤组织进行基因层面和蛋白表达水平的关联性分析。2.培养正常人类神经鞘膜细胞（HSC）和原代听神经瘤细胞,通过慢病毒转染技术沉默NF2基因产物merlin表达以分别模拟听神经瘤发生和发展。通过Western Blot技术和免疫荧光技术分析上述瘤变模型的关键蛋白p53-MDM2、cyclin D1表达水平及细胞亚定位变化,并在肿瘤组织中做进一步验证。3.通过分别沉默和过表达HSC细胞NF2基因和p53基因,结合Western Blot技术、Realtime-PCR和荧光酶素技术,全面探讨merlin与p53-MDM2相互作用的具体机制。4.体外培养大鼠神经鞘膜瘤细胞株（RT4）,通过体外应用p53激活剂Nutlin-3,探讨MDM2抑制对merlin-p53信号表达及亚细胞定位的影响;通过培养不听神经瘤原代细胞,探讨不同NF2基因状态的肿瘤细胞对Nutlin-3的敏感性差异及潜在机制;对比分析单用Nutlin-3和联合应用Nutlin-3/MG-132对听神经瘤细胞株RT4细胞和听神经瘤细胞生长活性以及关键蛋白表达的影响,并通过建立RT4细胞裸鼠模型进一步明确体外细胞实验结果。5.收集37例副神经瘤患者的临床资料,利用巢式PCR扩增目的基因后直接测序的方法,对所有患者血液和肿瘤组织的SDHx基因全编码序列点突变进行检测。临床资料和突变数据两方面结合,评估SDHx突变对肿瘤临床行为的影响;利用Methylation-specific PCR（MSP）技术对不同生物学行为肿瘤一系列抑瘤基因（p16,HIC1,Dc R1,Dc R2,DR4,DR5,CASP8,HSP47,MGMT,RASSF1A）的Cp G岛的甲基化修饰状态进行分析。【结果】1.对38例年轻人听神经瘤及53例老听神经瘤患者的肿瘤生长速度的主要衡量指标（肿瘤大小和症状持续时间）与发病年龄具有密切相关性。年轻人听神经瘤（24.1±4.9 years,n=38）相对于老年人听神经瘤（64.7±3.9 years,n=53）发病年龄更早（22.4 years vs.60.3 years;p=0.001）、诊断时肿瘤更大（mean 34.3 mm vs.23.6 mm;p=0.001）以及症状持续时间更短（1.6 years vs.4.4 years;p=0.026）。2.年人听神经瘤的NF2基因点突变检测进行检测发现,54（59.3%）患者存在NF2基因的体细胞突变,且两年龄组患者的突变发生率相近。结合基因拷贝状态检测,在年轻人肿瘤中,NF2基因存在两次打击（点突变+LOH）的比例为75.0%（21/28）,远高于老年人肿瘤的41.3%（12/29,p=0.012）。3.分别对15例不同基因状态听神经瘤组织进行merlin蛋白表达分析发现,NF2基因两次打击肿瘤的merlin蛋白表达完全缺失,而只存在单次打击（仅有点突变）的肿瘤存在残存merlin蛋白表达。4.慢病毒转染沉默神经鞘膜细胞系HSC细胞和原代听神经瘤细胞merlin表达后,细胞生长增殖更为活跃,周期蛋白cyclin D1表达升高,p53蛋白水平下降,伴随MDM2蛋白水平异常升高。在听神经瘤组织中merlin与p53存在“共表达”现象,merlin相对与正常神经表达下降,p53同样存在普遍缺失,而cyclin D1高表达,MDM2异常表达,此结果与上述HSC细胞merlin沉默表达后的相关信号变化相呼应。5.通过神经鞘膜细胞系HSC和正常神经（正常对照）、肿瘤组织和原代肿瘤细胞merlin、p53、MDM2以及cyclin D1关键蛋白的亚细胞定位分析发现,正常神经鞘膜细胞merlin蛋白表达位置与肿瘤细胞的位置一致（细胞质膜）,p53蛋白在神经鞘膜细胞中表达于细胞核中,而肿瘤组织p53蛋白蛋白弥散于细胞质中,MDM2蛋白在正常鞘膜细胞和肿瘤细胞的表达位置较为一致（细胞核）。细胞周期蛋白cyclin D1在正常神经中表达于细胞核中,而在肿瘤组织中表达于细胞质中。6.神经鞘膜细胞系HSC的NF2基因和P53基因沉默实验和过表达实验表明,merlin和p53蛋白两者之间存在相互正调节,相对于两者明显的蛋白水平变化,其m RNA表达水平变化无明显差异。通过荧光素酶实验分析,P53基因过表达后NF2基因的m RNA表达水平同样无明显变化。7.p53激活剂nutlin-3对听神经瘤细胞株（RT4）和听神经瘤原代细胞生长活性的抑制作用随药物浓度增大而不断加强。Nutlin-3抑制细胞作用可能通过p53和merlin蛋白水平上调,以及cyclin D1水平的下降,但p53和merlin蛋白m RNA表达水平无明显变化。通过细胞亚定位分析发现,Nutlin-3介导能p53和merlin蛋白在肿瘤细胞中由细胞质穿梭至细胞核中。8.p53激活剂Nutlin-3对不同NF2基因状态的听神经瘤原代培养细胞对生长抑制效果存在明显的差异性。Merlin蛋白完全缺失的听神经瘤细胞对Nutlin-3的敏感性较Merlin蛋白仍有表达的肿瘤细胞更差,蛋白分析发现前者在相同药物作用条件下p53蛋白升高的敏感性更差。9.通过在神经鞘膜瘤细胞株RT4细胞联合应用Nutlin-3/MG-132的方法,能获得相对于单用Nutlin-3更好的抑瘤效应,更高的p53蛋白信号升高水平。在Merlin蛋白完全缺失的原代听神经瘤细胞中,Nutlin-3/MG-132联合应用能获得良好的效果,具体机制表现为药物联用能明显上调merlin-p53共表达信号的蛋白水平。在RT4细胞动物模型的药物治疗中,Nutlin-3/MG-132联合能明显抑制肿瘤的生长。10.在37例副神经瘤的遗传学研究中,10例患者肿瘤组织中存在SDHx基因的点突变,这些点突变同样能在相应血液组织中验证。通过临床资料对比发现存在SDHx基因的肿瘤具有发病年龄更早（36.2±6.5 vs 47.0±8.1 years,P<0.01）、肿瘤大小更大（41.0±9.7 vs 36.9±9.3 mm,P=0.244）及更多发（80%vs3.7%,P<0.01）的特点。在10例SDHx突变的肿瘤和10例无突变肿瘤组织MSP分析发现,6个基因包括HIC1（45%）,Dc R1（35%）,Dc R2（50%）,DR4（75%）,DR5（50%）和CASPS8（55%）Cp G岛在副神经节瘤存在高频率异常甲基化;SDHx突变组肿瘤异常甲基化的抑瘤基因的数量明显高于SDHx非突变组（MI值,0.45±0.12 vs 0.24±0.13,P=0.001）,其中4个基因在两组中存在甲基化频率差异性（HIC1,60 vs 30%,P=0.185;Dc R1,60 vs 10%,P=0.029;Dc R2,70 vs 30%,P=0.089;CASPS8,80 vs 30%,P=0.035）。【结论】1.听神经瘤的发生与NF2基因突变密切相关,不同散发性听神经瘤的临床生物学行为存在较大的差异性,生长较快的肿瘤NF2基因双等位基因完全突变失活（点突变+LOH或2次点突变）发生的频率更高,提示merlin蛋白完全缺失的听神经瘤相对于merlin蛋白残存的听神经瘤生长更具侵略性,从而我们在基因/蛋白层面和听神经瘤临床行为之间建立了关联性。2.在听神经瘤细胞中merlin与p53蛋白存在“共表达”现象,听神经瘤发生过程中merlin蛋白表达水平缺失或下降导致的MDM2异常表达（核内积聚）、p53蛋白下调（胞质弥散、稳定性下降）,继而导致的merlin水平进一步下降所形成正反馈失调信号环路,能介导细胞周期进展（cyclin D1升高,迁移至胞质）,可能解释听神经瘤发病机制。3.通过药物在听神经瘤细胞株和原代肿瘤细胞中靶向激活p53信号阻断这种失调信号环路,并在蛋白水平上恢复merlin蛋白水平,实现merlin-P53抑瘤信号在蛋白水平上的共表达,最终达到有效控制听神经瘤生长的目的。然而不同NF2基因状态的听神经瘤细胞对P53激活剂Nutlin-3的敏感性存在较大的差异性,通过药物联合应用特异性蛋白酶抑制剂MG-132能缩小这种差异性,可能适合绝大多数听神经瘤的治疗。4.副神经节瘤SDHx基因的生殖细胞突变能作为肿瘤生长速度和恶性行为的遗传学标志,通过风险人群（如具有该疾病家族史）的血液基因检测,可能预测肿瘤生长趋势和临床行为的“良恶性”。此外,SDHx基因突变肿瘤存在一系列抑瘤基因的高频率异常甲基化。甲基化修饰不同于SDHx基因突变,前者具有药物干预逆转的可能性,进一步研究可能明确关键的干预靶点,从而为副神经瘤的药物治疗提供可能性。
赵堃[9]（2013）在《单侧耳蜗切除小鼠蜗神经核中MMP-9，MMP-2表达的研究》文中进行了进一步梳理动物在生命中会接触到很多对于生存至关重要的信息,任何环境的改变,包括光亮、声音、气味、温度都将对动物的神经系统产生刺激。而动物的神经系统有根据环境变化改变其组织结构和功能活性的能力。由于听觉刺激程度的可控性及蜗神经的活动水平易于调控,所以听觉中枢是一个研究神经系统可塑性的绝佳模型。神经的可塑性研究特别是听觉中枢的可塑性研究一直是神经生物学领域及耳科学领域的研究热点之一。听觉剥夺将导致听觉各级中枢在形态及功能上发生相应的改变。研究这些改变,有助于我们深化对于听觉中枢功能及其在耳聋的发生和发展中所起作用的认识。相关资料表明,细胞外基质的重塑对于神经网络的改建起着至关重要的作用。所以,在本实验中,我们建立了一个小鼠的单侧听觉剥夺动物模型,并对术后不同时间点蜗神经核中金属基质蛋白酶2及金属基质蛋白酶9的表达变化经行研究,以期进一步了解后天性聋对听觉中枢的结构和功能所产生的影响。目的：利用耳蜗切除术建立小鼠听觉剥夺动物模型,研究一侧完全性听觉剥夺后小鼠蜗神经核中MMP-9, MMP-2表达的变化。材料和方法：听觉剥夺后蜗神经核的可塑性研究,选取健康成年BALB/c小鼠35只,出生两月,体重20-23g,雌雄不拘,耳廓反射正常。随机平均分为7组,其中6组行耳后入路单侧耳蜗切除术,术后分别饲养1天、3天、7天、15天、30天、60天,另外一组作为对照不进行任何处理。采用蜗神经核薄层切片行HE染色观察蜗神经核形态学改变,并行MMP-9、MMP-2免疫组化染色,观察一侧听觉剥夺后不同存活时间的小鼠蜗神经核中MMP-2表达的变化。结果：耳蜗切除术后健侧蜗神经核术后不同时间点未观察到MMP-9、MMP-2的表达出现明显改变。术侧蜗神经核中MMP-9在术后1至7天的时间内出现了跨细胞的重新分布；MMP-2则在术后3至60天的时间内出现了跨细胞的重新分布。结论：听觉剥夺将导致成年小鼠术侧蜗神经核中MMP-9和MMP-2会随着听神经纤维的变性退化以及新突触的形成而重新分布,提示耳蜗切除将造成术侧蜗神经核内细胞外基质的重塑。MMP-9和MMP-2重新分布时程的差异预示他们在细胞外基质重塑过程中分工的不同。
殷泽登[10]（2010）在《硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠耳蜗细胞变性及蜗神经背核神经元和突触可塑性的时序性和机制研究》文中提出第一部分硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠听神经和螺旋神经节细胞变性的时序性及机制研究目的：建立硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠模型。探讨硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞和听神经施万细胞变性的时序性及机制。比较急慢性致聋模型的差异。方法：耳廓反射正常,听力正常的成年白色红目豚鼠为研究对象,大腿内侧皮下每天注射硫酸卡那霉素500mg／kg,连续注射7天。注药后第1天、7天、14天、28天、56天、70天和140天定量分析耳蜗毛细胞、螺旋神经节细胞、听神经施万细胞和耳蜗内前庭神经节段听神经横切面积变化情况。结果：1、听功能：正常成年豚鼠的ABR阈值为35.83±5.97dBSPL,注药后1、7、14、28、56、70和140天的ABR阈值分别为48.13±3.45、83.44±7.47、105.00±8.37、104.38±5.44、108.75±7.64、104.38±9.17和107.19±12.24 dBSPL（各实验组与对照组比较,P<0.001）。2、耳蜗中轴内外毛细胞计数：与正常对照组比较,注药后1、7、14、28、56、70和140天耳蜗中轴7个部位外毛细胞残留率分别为98.56±1.26%、27.56±2.94%、20.81±2.76%、19.19±3.15%、19.25±2.24%、19.56±3.35%和18.60±2.73%（除1天组外,其余实验组与正常对照组比较,P<0.001）,底回外毛细胞残留率分别为98.48±1.28%、24.99±2.52%、16.60±3.07%、11.94±1.34%、10.96±2.44%、11.05±2.32%和11.20±1.23%（除1天组外,其余实验组与正常对照组比较,P<0.001）；耳蜗中轴7个部位内毛细胞残留率分别为99.00±0.97%、97.63±1.20%、67.56±4.60%、59.19±5.05%、56.81±3.97%、56.87±3.69%和57.20±3.45%（除1天和7天组外,其余实验组与正常对照组比较,P<0.001）,底回内毛细胞残留率分别为98.82±1.08%、96.92±1.03%、57.92±4.05%、38.21±3.45%、37.77±3.13%、36.34±3.19%和37.08±3.14%（除1天和7天组外,其余实验组与正常对照组比较,P<0.001）。3、螺旋神经节细胞计数：正常组及注药后1、7、14、28、56、70和140天耳蜗7个部位螺旋神经节细胞数量分别为4105.17±82.96、4008.00±94.19、3130.69±127.67、2858.38±153.48、2633.00±151.95、2618.06±129.76、2624.38±142.59和2625.63±137.69（除1天组外,其余实验组与正常对照组比较,P<0.001）；正常组及注药后1、7、14、28、56、70和140天耳蜗底回螺旋神经节细胞数量分别为2091.00±86.62、2073.13±95.40、1576.94±96.77、1194.00±97.81、859.31±64.92、849.94±64.37、852.50±52.08和840.19±53.55（除1天组外,其余实验组与正常对照组比较,P<0.001）。4、听神经横切面施万细胞计数：正常组及注药后1、7、14、28、56、70和140天前庭神经节段听神经横切面施万细胞数量分别为6167.17±80.81、6082.88±121.00、3946.00±128.67、3004.31±167.45、2742.44±90.61、2747.63±98.69、2730.38±78.08和2782.69±78.70（除1天组外,其余实验组与正常对照组比较,P<0.001）。5、前庭神经节段听神经横切面面积测量：正常组及注药后1、7、14、28、56、70和140天前庭神经节段听神经横切面面积分别为0.15±0.020、0.17±0.004、0.12±0.007、0.13±0.007、0.13±0.007、0.11±0.012、0.12±0.008和0.13±0.013mm2（各实验组与正常对照组比较,P<0.001）。结论：1、硫酸卡那霉素对听功能、耳蜗毛细胞、螺旋神经节细胞、听神经施万细胞的影响是逐渐累积的。2、螺旋神经节细胞和施万细胞的早期变性可能是硫酸卡那霉素直接毒性作用所致,螺旋神经节细胞后期的变性可能与毛细胞和施万细胞的丢失、硫酸卡那霉素的累积效应等多重因素有关。3、硫酸卡那霉素急慢性致聋模型细胞变性时序性有差异。第二部分硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠蜗神经背核神经元和突触可塑性的时序性及机制研究目的：探讨硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠蜗神经背核（DCN）梭形细胞和听神经-梭形细胞（AN／FC）突触可塑性变化的时序性和机制。方法：耳廓反射正常,听力正常的成年白色红目豚鼠为研究对象,大腿内侧皮下每天注射硫酸卡那霉素500mg／kg,连续注射7天。注药后第1天、7天、14天、28天、56天、70天和140天研究成年豚鼠DCN梭形细胞和听神经-梭形细胞突触超微结构变化；同时应用实时荧光定量PCR技术定量分析DCN局部胰岛素样生长因子1（IGF-1）mRNA表达变化情况。结果：1、听功能：正常成年豚鼠的ABR阈值为36.00±4.76dBSPL,注药后1、7、14、28、56、70和140天的ABR阈值分别为46.46±3.45、80.63±5.95、103.95±6.59、106.25±5.16、108.33±8.81、106.67±9.17和106.88±7.91dBSPL（各实验组与正常对照组比较,P<0.001）。、2、IGF-1 mRNA扩增倍数：正常组及注药后1、7、14、28、56、70和140天DCN局部IGF-1 mRNA扩增倍数分别为1、0.88±0.17、1.53±0.21、2.07±0.17、1.51±0.23、1.92±0.14、1.87±0.15和0.97±0.11（除第140天组外,其余实验组与正常对照组比较,P<0.001）。3、DCN梭形细胞和AN／FC突触超微结构：从注药后第7天到56天梭形细胞的线粒体和内质网的肿胀逐渐加重、溶酶体逐渐增多、核膜皱缩；AN／FC突触线粒体肿胀也逐渐加重,神经元和突触线粒体有空泡形成；注药后70天和140天神经元和突触超微结构逐渐恢复正常。4、AN／FC突触突触后密度（PSD）厚度测量：正常组及注药后1、7、14、28、56、70和140天PSD厚度分别为47.91±4.56、72.54±1.98、67.56±1.58、66.49±2.24、47.78±2.16、47.80±3.35、49.42±1.60、47.32±4.45和49.48±2.47 nm（与正常对照组比较,1、7和14天组,P<0.001；28、56、70和140天组,P>0.05）。结论：1、硫酸卡那霉素可能对DCN梭形细胞和突触有直接毒性作用,对梭形细胞和AN／FC突触的超微结构的影响是逐渐累积的。2、对硫酸卡那霉素导致的直接损伤和进行性不完全去传入,DCN的神经元和突触具有可塑性,神经元和突触的超微结构可以恢复正常。3、DCN局部的IGF-1可能通过抑制神经元凋亡和促进突触的重排参与了神经元和突触重塑过程。第三部分兴奋性和抑制性递质受体在硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠蜗神经背核突触重塑中作用研究目的：探讨兴奋性和抑制性递质受体在硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠蜗神经背核突触重塑中的作用。方法：耳廓反射正常,听力正常的成年白色红目豚鼠为研究对象,大腿内侧皮下每天注射硫酸卡那霉素500mg／kg,连续注射7天。注药后第1天、7天、14天、28天、56天、70天和140天,采用免疫组化技术研究成年豚鼠蜗神经背核突触素表达变化的情况,同时应用实时荧光定量PCR技术定量分析蜗神经背核N-甲基-D-天冬氨酸型受体1（NR1）和γ-氨基丁酸型受体A型α1亚单位（GABRA1）mRNA表达变化情况。结果：1、蜗神经背核突触素的表达有两种形式。一种斑点状均匀分布在神经纤维网上,另一种分布在细胞体周围。在蜗神经背核,第二种形式的分布较常见。2、除70天和140天组外,其余实验组的突触输入数量均有不同程度的增加（与对照组比较,P<0.05）。突触素平均灰度（突触素表达量）,1天、7天、28天、56天实验组表达增加（与对照组比较,P<0.001）。突触素免疫染色面积（突触末端占据的面积）,只有7天14天组有显着的下降（与对照组比较,P≤0.01）。3、正常组及注药后1、7、14、28、56、70和140天蜗神经背核内NR1 mRNA扩增倍数分别为1、1.58±0.18、2.20±0.33、3.67±0.34、2.04±0.30、1.34±0.36、1.28±0.21和1.29±0.17。与对照组比较,第1、7、14和28天,NR1 mRNA表达上调（P<0.001）。4、正常组及注药后1、7、14、28、56、70和140天蜗神经背核内GABRA1 mRNA扩增倍数分别为1、0.77±0.08、0.45±0.09、0.34±0.07、0.32±0.07、0.90±0.11、0.94±0.12和0.92±0.11,与对照组比较,第1、7、14和28天,GABRA1 mRNA表达下调（P<0.001）。结论：1、硫酸卡那霉素对蜗神经背核内突触数量以及兴奋性和抑制性递质受体的分布的影响是逐渐累积的。2、硫酸卡那霉素慢性致聋后,蜗神经背核内兴奋性和抑制性递质受体出现重排。3、在硫酸卡那霉素所致进行性不完全去传入和神经元损伤后,兴奋性谷氨酸能突触通路的活性增强,抑制性GABA能突触通路活性减弱。4、兴奋性和抑制性递质受体重排可能在硫酸卡那霉素慢性致聋后突触重塑中发挥了重要作用。
二、神经生长因子在位听神经核内的定位分布（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、神经生长因子在位听神经核内的定位分布（论文提纲范文）
（1）食管鳞癌中AKT和GSK3β驱动SOX2蛋白高表达的分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 转录因子SOX2的研究进展 |
| 1.1.1 SOX家族成员简介 |
| 1.1.2 SOX2功能的研究进展 |
| 1.1.2.1 SOX2在胚胎发育中的作用 |
| 1.1.2.2 SOX2在成体干细胞中的作用 |
| 1.1.2.3 SOX2与肿瘤的发生发展 |
| 1.1.3 SOX2蛋白的翻译后修饰 |
| 第二节 食管癌的研究进展 |
| 1.2.1 食管组织结构 |
| 1.2.2 食管癌的分型 |
| 1.2.3 SOX2在食管鳞癌中的作用 |
| 第三节 磷酸化修饰与肿瘤的研究进展 |
| 1.3.1 磷酸化修饰简介 |
| 1.3.2 磷酸激酶在肿瘤治疗中的作用 |
| 1.3.3 磷酸激酶AKT的研究进展 |
| 1.3.3.1 磷酸激酶AKT简介 |
| 1.3.3.2 AKT与肿瘤的发生发展 |
| 1.3.4 磷酸激酶GSK3β的研究进展 |
| 1.3.4.1 磷酸激酶GSK3β简介 |
| 1.3.4.2 GSK3β与肿瘤的发生发展 |
| 第四节 课题研究的意义 |
| 第二章 实验材料与方法 |
| 第一节 实验材料 |
| 2.1.1 实验器材 |
| 2.1.2 实验试剂与耗材 |
| 2.1.3 试剂配方 |
| 2.1.4 表达质粒 |
| 2.1.5 引物序列 |
| 2.1.6 抗体信息 |
| 2.1.7 抑制剂信息 |
| 2.1.8 细胞系 |
| 2.1.9 小鼠类型 |
| 第二节 实验方法 |
| 2.2.1 RNA抽取和c DNA获取 |
| 2.2.2 分子克隆 |
| 2.2.3 细胞培养 |
| 2.2.4 细胞转染 |
| 2.2.5 稳定表达细胞系的建立 |
| 2.2.6 细胞增殖检测 |
| 2.2.7 免疫共沉淀 |
| 2.2.8 Western blot |
| 2.2.9 免疫染色 |
| 2.2.10 组织HE染色 |
| 2.2.11 免疫组化染色 |
| 2.2.12 体外纯化蛋白 |
| 2.2.13 peptide-pulldown |
| 2.2.14 体外磷酸化反应 |
| 2.2.15 小鼠异种移植模型 |
| 2.2.16 提取基因组DNA |
| 第三章 AKT驱动食管鳞癌中SOX2 蛋白高表达并促进肿瘤干细胞形成的分子机制研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 食管鳞癌中SOX2 的蛋白水平不完全依赖SOX2 的基因扩增 |
| 3.2.2 食管鳞癌中AKT正控SOX2 的蛋白水平 |
| 3.2.3 食管鳞癌中SET7对SOX2 蛋白没有显着调控 |
| 3.2.4 AKT促进SOX2 的蛋白稳定性 |
| 3.2.5 食管鳞癌中SOX2对AKT不存在反馈调节机制 |
| 3.2.6 AKT通过磷酸化SOX2-T116 促进SOX2 蛋白稳定性 |
| 3.2.7 筛选介导AKT促进SOX2 稳定的泛素连接酶 |
| 3.2.8 UBR5 促进SOX2 的泛素化降解 |
| 3.2.9 AKT通过抑制UBR5与SOX2 的互作促进SOX2 的稳定性 |
| 3.2.10 UBR5 催化SOX2的K115 的泛素化 |
| 3.2.11 UBR5 通过调控SOX2 影响细胞增殖和肿瘤干细胞形成 |
| 3.2.12 AKT抑制剂显着遏制肿瘤干细胞的形成能力 |
| 3.2.13 AKT通过调控SOX2 蛋白影响肿瘤干细胞的形成 |
| 3.3 总结与讨论 |
| 3.3.1 AKT-SOX2 调控通路的广谱性 |
| 3.3.2 多种泛素连接酶调控SOX2的蛋白稳定性 |
| 3.3.3 AKT抑制剂对食管鳞癌发生发展的影响 |
| 第四章 GSK3β促进食管基底层干细胞和食管癌中SOX2 蛋白稳定性的分子机制研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 筛选调控SOX2蛋白的磷酸激酶 |
| 4.2.2 抑制GSK3β的活性促进SOX2 的泛素化降解 |
| 4.2.3 GSK3β促进SOX2 蛋白稳定性 |
| 4.2.4 GSK3β对 SOX2 的调控依赖于其激酶活性 |
| 4.2.5 GSK3β对 SOX2 的调控不依赖于AKT |
| 4.2.6 质谱检测GSK3β磷酸化SOX2 的位点 |
| 4.2.7 GSK3β磷酸化SOX2的S251 位点 |
| 4.2.8 GSK3β通过磷酸化SOX2-S251 促进其稳定性 |
| 4.2.9 筛选介导GSK3β促进SOX2 稳定的泛素连接酶 |
| 4.2.10 食管鳞癌中CRL4A复合体调控SOX2 蛋白稳定性 |
| 4.2.11 抑制GSK3β活性促进CUL4A与 SOX2 的相互作用 |
| 4.2.12 激活态的GSK3β和 SOX2 在食管基底层存在共定位 |
| 4.2.13 小鼠食管基底层存在Gsk3β对 Sox2 的调控作用 |
| 4.2.14 食管鳞癌中GSK3β和 SOX2 蛋白异常高表达并呈正相关 |
| 4.2.15 食管鳞癌中GSK3β转录水平异常激活 |
| 4.2.16 GSK3β通过调控SOX2 影响细胞增殖 |
| 4.2.17 GSK3β抑制剂影响小鼠荷瘤生长 |
| 4.3 总结与讨论 |
| 4.3.1 CRL4A复合体介导GSK3β调控SOX2 蛋白稳定性的机制探究 |
| 4.3.2 GSK3β-SOX2 通路的异常对食管鳞癌发生发展的影响 |
| 4.3.3 AKT-GSK3β通路对SOX2 蛋白稳定性的影响 |
| 4.3.4 GSK3β抑制剂对食管鳞癌的作用 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 科研成果 |
（2）NSC联合OEC移植对SNHL模型大鼠耳蜗细胞凋亡的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要操作仪器 |
| 2.1.4 主要溶剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 组织来源、细胞提取和培养 |
| 2.2.2 NSCs的传代培养 |
| 2.2.3 OECs培养 |
| 2.2.4 NSCs的鉴定及细胞纯度的计算 |
| 2.2.5 OECs的鉴定及细胞纯度的计算 |
| 2.2.6 细胞活力测定 |
| 2.2.7 细胞冻存 |
| 2.2.8 细胞复苏 |
| 2.3 动物实验及样本检测 |
| 2.3.1 实验动物 |
| 2.3.2 主要试剂 |
| 2.3.3 主要仪器 |
| 2.3.4 主要试剂配制 |
| 2.3.5 庆大霉素耳毒性大鼠模型的建立方法 |
| 2.3.6 实验动物分组及给药 |
| 2.3.7 ABR检测大鼠听力阈值 |
| 2.3.8 听觉耳动反射检测 |
| 2.3.9 制作切片 |
| 2.3.10 切片染色 |
| 2.3.11 耳蜗免疫荧光染色 |
| 2.3.12 TUNEL法(原位切口末端标记法)检测凋亡细胞 |
| 2.3.13 免疫组织化学法检测神经营养因子及凋亡免疫阳性细胞 |
| 2.3.14 Western-blot法检测样本BDNF、NT-3和Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达 |
| 2.4 统计方法 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 细胞的形态观察及鉴定 |
| 3.1.1 NSCs的培养观察及鉴定 |
| 3.1.2 OECs的培养观察和鉴定 |
| 3.2 各组大鼠体重变化结果 |
| 3.3 大鼠听觉耳动反射检测阈值结果 |
| 3.4 各组大鼠ABR阈值变化结果 |
| 3.5 HE染色结果 |
| 3.6 耳蜗免疫荧光染色观察结果 |
| 3.6.1 耳蜗荧光标记NSC结果 |
| 3.6.2 荧光标记OEC观察结果 |
| 3.7 TUNEL法检测凋亡细胞结果 |
| 3.7.1 各组TUNEL阳性细胞数比较 |
| 3.7.2 各组MOD值比较 |
| 3.8 免疫组化检测结果 |
| 3.9 Western-blot检测各组蛋白表达水平结果 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 实验性感音神经性耳聋动物模型的制备与机制探究 |
| 4.2 神经营养因子减轻SNHL内耳神经损伤后相关机制 |
| 4.2.1 BDNF对 SGNs的保护作用机制探究 |
| 4.2.2 NT-3对SGNs的保护作用机制探究 |
| 4.3 细胞移植抑制耳蜗损伤细胞凋亡机制探索 |
| 4.3.1 Caspase结构、功能与促耳蜗细胞凋亡机制探究 |
| 4.3.2 Bcl-2 结构、功能和抗耳蜗细胞凋亡机制探析 |
| 4.3.3 细胞联合移植激活Bcl-2,抑制Caspase、Bax表达路径保护损伤耳蜗细胞探究 |
| 4.4 细胞联合移植上调神经营养因子,抑制细胞凋亡 |
| 4.5 神经性耳聋常见病因概述 |
| 4.6 神经性耳聋治疗方法概述 |
| 4.7 关于NSC和 OEC的取材、培养与鉴定探究 |
| 4.7.1 NSC的组织取材和分离 |
| 4.7.2 NSC的培养和鉴定方法选择 |
| 4.7.3 OECs的组织取材和分离 |
| 4.7.4 OECs的培养与鉴定选择 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（3）CND患儿CI术前评估及载药电极对听力的保护（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 绪论 |
| 第一部分:耳蜗神经发育不良患儿人工耳蜗植入术前影像和电生理评估 |
| 1.研究背景 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 临床资料收集 |
| 2.2 检测方法 |
| 2.3 术后听力学及言语评估 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 第二部分:PLGA载药电极在豚鼠耳蜗植入模型中对术后听力的保护作用 |
| 1.研究背景 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 动物实验分组 |
| 2.2 制备载药模拟电极 |
| 2.3 构建豚鼠耳蜗植入模型 |
| 2.4 .影像学检查 |
| 2.5 ABR检测 |
| 2.6 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 豚鼠耳蜗模拟电极植入 |
| 3.2 .豚鼠术后影像学检查 |
| 3.3 地塞米松载药电极可减轻CI术后听力损失 |
| 3.4 阿糖胞苷及NAD+对CI术后听力损失的影响 |
| 4.讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学术论文和科研成果目录 |
（4）Fgf22基因在小鼠听觉传导通路中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 :Fgf22基因在小鼠听觉传导通路中的时空表达特征及构建基因敲除小鼠模型 |
| 1前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要工具、试剂和仪器 |
| 2.2.1 主要工具 |
| 2.2.2 主要试剂 |
| 2.2.3 主要仪器 |
| 2.2.4 主要实验耗材 |
| 2.3 溶液和药物配制 |
| 2.3.1 麻醉剂 |
| 2.3.2 实验药物 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 小鼠耳蜗基底膜组织取材 |
| 2.4.2 耳蜗基底膜铺片染色 |
| 2.4.3 耳蜗组织冰冻切片染色 |
| 2.4.4 耳蜗带状突触标记、观察和计数 |
| 2.4.5 听性脑干反应测试 |
| 2.4.6 噪声暴露 |
| 2.4.7 CRISPR/Cas9 基因敲除小鼠模型构建 |
| 2.4.8 Fgf22基因敲除小鼠基因型鉴定 |
| 2.4.9 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 Fgf22基因在小鼠听觉传导通路中的定位 |
| 3.2 Fgf22基因在小鼠耳蜗发育过程中的表达特征 |
| 3.3 新生小鼠基因型鉴定 |
| 3.4 Fgf22基因敲除小鼠表型分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :构建噪声诱导的隐匿性听力损失模型 |
| 1前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要试剂和仪器 |
| 2.3 溶液和药物配制 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 ABR阈值检测 |
| 2.4.2 ABRI波幅值检测 |
| 2.4.3 耳蜗带状突触铺片染色及计数 |
| 2.4.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 噪声诱导的隐匿性听力损失模型构建 |
| 3.2 ABR听力检测结果 |
| 3.3 耳蜗带状突触计数情况 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 :通过RNA-seq技术探索分子机制 |
| 1前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要软件及数据库 |
| 2.1.1 主要软件 |
| 2.1.2 主要数据库 |
| 2.2 主要仪器及试剂 |
| 2.2.1 主要仪器 |
| 2.2.2 主要试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 RNA-seq分析流程图 |
| 2.3.2 RNA-seq分析步骤及方法 |
| 2.3.3 q RT-PCR验证步骤 |
| 3 结果 |
| 3.1 数据质量评估及质量控制 |
| 3.2 差异表达的lnc RNA及 m RNA |
| 3.3 GO分析 |
| 3.4 KEGG分析 |
| 3.5 m RNA-lnc RNA 共表达可视化分析 |
| 3.6 q RT-PCR验证结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本论文创新性自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）Neuritin对长爪沙鼠耳蜗螺旋神经节损伤的保护作用（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 研究的目的及意义 |
| 1.2 国内外研究的现状 |
| 1.3 研究的主要内容 |
| 1.4 技术路线 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要试剂耗材 |
| 2.3 主要仪器设备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 引物的设计 |
| 2.4.2 耳蜗样本的制备 |
| 2.4.3 蛋白质免疫印迹(Western Blot) |
| 2.4.4 荧光定量PCR检测 |
| 2.4.5 耳蜗冰冻切片的制备 |
| 2.4.6 Neuritin在不同发育阶段长爪沙鼠耳蜗中表达免疫组织化学染色检测 |
| 2.4.7 听性脑干反应(ABR)检测 |
| 2.4.8 感音神经性耳聋的建立 |
| 2.4.9 给予外源性Neuritin干预处理方法 |
| 2.4.10 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 重组人神经突起神经生长因子在不同发育阶段长爪沙鼠耳蜗中的表达 |
| 3.1.1 Neuritin在长爪沙鼠耳蜗不同发育阶段中的表达 |
| 3.1.2 Neuritin在成年长爪沙鼠耳蜗中免疫荧光染色定位 |
| 3.2 神经性耳聋动物模型的建立及重组人神经突起生长因子在耳聋发展过程中的表达变化 |
| 3.2.1 长爪沙鼠的正常听功能检测 |
| 3.2.2 卡那霉素和呋塞米联用全身给药造模后鉴定结果 |
| 3.2.3 新霉素经圆窗局部给药造模后鉴定结果 |
| 3.2.4 哇巴因经圆窗局部给药造模后鉴定结果 |
| 3.2.5 哇巴因损伤后长爪沙鼠耳蜗Neurtin的表达变化 |
| 3.3 重组人Neuritin对长爪沙鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤保护作用的研究 |
| 3.3.1 重组人Neuritin对受损耳蜗螺旋神经节细胞的保护作用(体外) |
| 3.3.2 重组人Neuritin对受损耳蜗螺旋神经节细胞的保护作用(体内) |
| 4 讨论 |
| 4.1 神经营养因子的表达变化 |
| 4.2 特异性SGNs受损的神经性耳聋模型的建立及鉴定 |
| 4.3 Neuritin与哇巴因引起神经性耳聋的相关性 |
| 4.4 重组人Neuritin蛋白量效关系的确立 |
| 4.5 神经营养因子对耳蜗螺旋神经节的保护作用 |
| 4.6 重组人Neuritin对听功能保护作用的探讨 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
（6）面-舌下神经端侧吻合修复周围性面瘫的应用基础研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 绪论 |
| 第一部分 大鼠颅外段面神经、舌下神经的解剖及组织学研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 大鼠面-舌下神经直接端侧吻合神经再生效果的动态定量评估 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分 面-舌下神经直接吻合中供体神经不同处理方式对受体神经再生及供体神经肌肉系统的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 全文总结 |
| 课题研究不足之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间发表学术论文目录及参与学术活动 |
（7）糖尿病大鼠螺旋神经节细胞和蜗核神经元自噬与凋亡的时序性变化与机制探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一章 糖尿病大鼠听力学改变与外周听觉神经的病理学观察 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 糖尿病大鼠螺旋神经节细胞自噬与凋亡的时序性变化及机制探讨 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 糖尿病大鼠耳蜗核星形胶质细胞、自噬与凋亡的时序性改变及机制探讨 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 缩略词中英文对照表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）侧颅底良性肿瘤临床生物学行为的分子机制探讨及药物治疗研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 NF2 基因状态、merlin蛋白表达及肿瘤临床行为关联性研究 |
| 1.1 绪言 |
| 1.2 对象与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 Merlin蛋白表达与神经鞘膜瘤细胞生长活性的关联性分析 |
| 2.1 绪言 |
| 2.2 对象与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 听神经瘤细胞merlin-p53 协同信号的表达与亚细胞定位 |
| 3.1 绪言 |
| 3.2 对象与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 Merlin与p53-MDM2通路在神经鞘膜细胞中的 相互作用关系和具体机制研究 |
| 4.1 绪言 |
| 4.2 对象与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第五章 靶向调控p53-MDM2通路对听神经瘤细胞生长特性的影响及机制研究 |
| 5.1 绪言 |
| 5.2 对象与方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第六章 Nutlin-3与MG-132联合治疗对神经鞘膜瘤细胞体外和体内生长活性的影响 |
| 6.1 绪言 |
| 6.2 对象与方法 |
| 6.3 结果 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第七章 头颈部副神经节瘤遗传/表观遗传学变化对肿瘤临床生物学行为的影响 |
| 7.1 绪言 |
| 7.2 对象与方法 |
| 7.3 结果 |
| 7.4 讨论 |
| 7.5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在研期间发表文章目录 |
（9）单侧耳蜗切除小鼠蜗神经核中MMP-9，MMP-2表达的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词中英文对照 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简历及研究生期间发表的论文 |
| 致谢 |
（10）硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠耳蜗细胞变性及蜗神经背核神经元和突触可塑性的时序性和机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 正文 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠听神经和螺旋神经节细胞变性的时序性及机制研究 |
| 1 绪言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠蜗神经背核神经元和突触可塑性的时序性及机制研究 |
| 1 绪言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 兴奋性和抑制性递质受体在硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠蜗神经背侧核突触重塑中的作用研究 |
| 1 绪言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 |
| 攻读学位期间发表论文、获奖、着书和课题申报目录 |
| 已发表SCI文章首页(1) |
| 已发表SCI文章首页(2) |
| 致谢 |
四、神经生长因子在位听神经核内的定位分布（论文参考文献）
- [1]食管鳞癌中AKT和GSK3β驱动SOX2蛋白高表达的分子机制研究[D]. 康莉. 华东师范大学, 2020(02)
- [2]NSC联合OEC移植对SNHL模型大鼠耳蜗细胞凋亡的研究[D]. 曾友根. 南昌大学, 2020(08)
- [3]CND患儿CI术前评估及载药电极对听力的保护[D]. 黄玉宇. 上海交通大学, 2020(01)
- [4]Fgf22基因在小鼠听觉传导通路中的作用及机制研究[D]. 魏薇. 中国医科大学, 2020(01)
- [5]Neuritin对长爪沙鼠耳蜗螺旋神经节损伤的保护作用[D]. 桂飞. 杭州师范大学, 2019(01)
- [6]面-舌下神经端侧吻合修复周围性面瘫的应用基础研究[D]. 刘鹏飞. 上海交通大学, 2018(05)
- [7]糖尿病大鼠螺旋神经节细胞和蜗核神经元自噬与凋亡的时序性变化与机制探讨[D]. 黄雪琴. 南方医科大学, 2017(11)
- [8]侧颅底良性肿瘤临床生物学行为的分子机制探讨及药物治疗研究[D]. 陈洪赛. 上海交通大学, 2017
- [9]单侧耳蜗切除小鼠蜗神经核中MMP-9，MMP-2表达的研究[D]. 赵堃. 郑州大学, 2013(04)
- [10]硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠耳蜗细胞变性及蜗神经背核神经元和突触可塑性的时序性和机制研究[D]. 殷泽登. 华中科技大学, 2010(12)