一、转化生长因子β_1、Ⅳ型胶原酶与卵巢癌（论文文献综述）
李茗达[1]（2021）在《外泌体对肌腱干细胞生物学功能影响的研究》文中指出研究背景:肌腱损伤是指肌肉或肌腱组织活动过度引起肌腱部位的损伤,治疗后留下的疤痕导致肌腱组织结构变得脆弱容易二次断裂。目前的治疗方法无法完全修复受损的肌腱。存在于肌腱组织部位的肌腱干细胞（tendon stem cells,TSCs）具有免疫原性低、增殖速度快及腱系分化能力强等优势在肌腱组织再生领域具有很强的应用潜力。外泌体作为细胞外微环境的重要组成部分参与体内的各种生理和病理活动,其分子机制尚不清楚。因此,进一步探究外泌体对TSCs的作用及其机制成为目前肌腱损伤修复研究的重要科学问题。研究目的:研究TSCs来源外泌体对TSCs生物学功能的影响,阐明其分子机制,为今后肌腱损伤的治疗提供新的理论依据。研究方法:（1）TSCs的分离及鉴定:从大鼠髌腱组织中分离TSCs;利用流式细胞仪检测干细胞相关细胞表面分子。（2）外泌体的分离及鉴定:通过超速离心法从TSCs细胞培养上清中获取外泌体;利用透射电镜检测TSCs来源外泌体的形态特征;利用马尔文粒度仪检测TSCs来源外泌体的粒径;通过蛋白质印迹法检测外泌体相关特异性蛋白;利用激光共聚焦显微镜检测TSCs对外泌体的摄取情况。（3）TSCs来源外泌体内含物的分析:通过免疫印迹法检测外泌体的蛋白。（4）TSCs来源外泌体对TSCs的细胞增殖及迁移的影响:通过细胞增殖实验与划痕实验检测TSCs来源外泌体对TSCs的细胞增殖及迁移。（5）TSCs来源外泌体对TSCs的细胞增殖及迁移影响的分子机制:通过蛋白印迹法检测与细胞增殖及迁移相关蛋白的表达。研究结果:（1）TSCs表达CD44及CD90,不表达CD11b及CD106。（2）TSCs来源外泌体呈表面凹陷的球状,粒径为44-190 nm,且含有外泌体标志性蛋白Alix与CD63。（3）TSCs来源外泌体含有转化生长因子β（TGFβ）。（4）TSCs来源外泌体促进TSCs的细胞增殖和迁移。（5）TSCs来源外泌体显着提高TSCs的P-ERK1/2、P-Smad2/3和MMP2蛋白的表达,而TGFβ受体抑制剂（ITD 1）显着抑制TSCs来源外泌体诱导的细胞增殖和迁移及上述相关蛋白的表达。结论:TSCs来源外泌体通过TGFβ受体激活MAPK信号通路中的ERK1/2和TGF-β/Smad信号通路中的Smad2/3促进TSCs的细胞增殖和迁移,本研究结果有望为损伤肌腱的修复提供新的理论依据。
江玉[2]（2021）在《肿瘤相关成纤维细胞与卵巢癌细胞顺铂耐药研究》文中进行了进一步梳理第一部分人上皮性卵巢癌相关成纤维细胞分离、纯化和培养目的:通过分离培养和鉴定人上皮性卵巢癌组织内的肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）,为研究CAFs在卵巢癌顺铂耐药中的作用及其可能机制提供实验基础。方法:收取人上皮性卵巢癌42例及正常卵巢上皮组织28例,分离培养原代CAFs和正常卵巢成纤维细胞（NFs）;酶消化时间差法进行CAFs及NFs纯化;倒置相差显微镜下进行细胞形态的观察;间接免疫荧光法鉴定CAFs。结果:来自人上皮性卵巢癌新鲜组织中的CAFs被成功分离获得,CAFs在显微镜下呈长梭形,且阳性表达平滑肌激动蛋白-α（α-SMA）与成纤维细胞活化蛋白（FAP）。结论:成功分离纯化培养原代人上皮性卵巢癌CAFs。第二部分人上皮性卵巢癌相关成纤维细胞与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系目的:研究卵巢癌相关成纤维细胞（CAFs）与卵巢癌细胞顺铂耐受的关系及其作用机制。方法:收集CAFs或NFs细胞培养上清与卵巢癌SKOV3细胞建立间接共培养体系;CCK8、划痕实验、流式细胞仪、ELISA法、实时定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及免疫印迹法分别检测细胞共培养前后细胞增殖活性及顺铂对细胞的毒性、细胞迁移能力、细胞凋亡率、CAFs细胞上清液中OPN浓度、耐药相关基因YAP、CTGF和Cyr61在m RNA及蛋白水平表达。结果:CAFs及NFs分离纯化培养成功率分别为70%和60%;CAFs组的细胞增殖能力、顺铂半数抑制浓度（IC50）、迁移能力均较SKOV3组及NFs组显着增加（P<0.001、P<0.01、P<0.01）;CAFs组顺铂所诱导细胞凋亡率较SKOV3组及NFs组明显降低（P<0.001）;CAFs共培养后增加了癌细胞中耐药相关基因YAP、CTGF及Cyr61在m RNA及蛋白水平的表达量,差异具备统计学意义（P<0.01、P<0.05、P<0.01）;CAFs组细胞上清液中OPN表达水平较SKOV3组及NFs组明显提升,且结果具有统计学意义（P<0.001）。结论:CAFs可加快SKOV3细胞的增殖及迁移,使SKOV3细胞抵抗凋亡,从而降低SKOV3细胞对顺铂敏感性。其作用机制可能与CAFs促进卵巢癌细胞中耐药基因YAP及其下游基因CTGF、Cyr61表达上调有关。
李晓婷[3]（2020）在《PARP抑制剂促进卵巢癌间质成纤维细胞CCL5自分泌活化成纤维细胞的研究》文中提出【目的】通过诱导合成致死,PARP抑制剂可以有效杀死具有同源重组修复缺陷的卵巢癌细胞。在这种情况下,大约有超过50%的卵巢癌病人可能受益于PARP抑制剂。然而,关于PARP抑制剂对肿瘤微环境的作用还鲜有报道。本研究的主要目的是将PARP抑制剂的作用从卵巢癌上皮细胞拓展至间质成纤维细胞,探索其对间质成纤维细胞活化程度的影响及可能的作用机制。【方法】应用CCK8实验检测卵巢癌细胞系以及卵巢癌间质成纤维细胞对PARP抑制剂的敏感性差异。免疫荧光、细胞周期实验验证PARP抑制剂对间质成纤维细胞DNA损伤修复以及细胞周期分布变化等的影响。RNAseq技术、免疫荧光、胶回缩实验、蛋白免疫印迹实验技术验证体外条件下PARP抑制剂对间质成纤维细胞活性的影响。应用蛋白芯片对PARP抑制剂处理后的成纤维细胞的上清进行检测,并应用生物信息学技术分析筛选出的细胞因子与成纤维细胞活化之间的关系。通过酶联免疫吸附实验、蛋白免疫印迹实验验证此细胞因子在PARP抑制剂处理前后肿瘤间质成纤维细胞中的表达变化,并应用人重组细胞因子、中和抗体确定此细胞因子在PARP抑制剂活化间质成纤维细胞过程中的作用。应用生物信息学、蛋白免疫印迹以及胶回缩实验进一步探索PARP抑制剂引起间质成纤维细胞活化因子分泌增加的调控通路。应用小鼠肿瘤模型验证成纤维细胞对PARP抑制剂产生的适应性反应以及抗成纤维细胞活化治疗与PARP抑制剂的联合应用在卵巢癌治疗中的潜在价值,并通过Masson’s染色、天狼猩红染色、免疫组织化学染色技术检测肿瘤组织内间质成分含量及活性变化。【结果】我们的结果表明,与卵巢癌细胞系相比,间质成纤维细胞对PARP抑制剂相对不敏感。PARP抑制剂能够引起成纤维细胞DNA损伤及G2/M期周期阻滞,随着DNA损伤的修复,细胞周期阻滞逐渐恢复。RNAseq分析及体外实验结果表明PARP抑制剂处理后的成纤维细胞表现出更加活化的状态、更加伸展的纺锤体外观以及更强的收缩ECM的能力。PARP抑制剂处理后,成纤维细胞分泌谱发生明显改变;CCL5、MIP-3α、MCP3、CCL11以及ENA-78在两种PARP抑制剂奥拉帕尼和尼拉帕尼处理后的成纤维细胞中都明显增加;其中,CCL5的表达水平与间质活化评分明显相关并参与了PARP抑制剂诱导的成纤维细胞活化。进一步实验表明,PARP抑制剂引起的CCL5分泌增加主要由NF-κB信号通路介导,抑制该通路活化可以抑制成纤维细胞CCL5的分泌也可以减弱成纤维细胞活化程度。动物实验表明,奥拉帕尼能够明显抑制肿瘤生长,但同时间质成分比例以及间质成纤维细胞活化指标α-SMA也明显提高;而CCL5中和抗体或NF-κB抑制剂的应用能够明显逆转PARP抑制剂引起的成纤维细胞活化程度增加并进一步增强PARP抑制剂对小鼠肿瘤生长的抑制作用。【结论】PARP抑制剂能够通过活化NF-κB信号通路促进卵巢癌间质成纤维细胞自分泌CCL5细胞因子,CCL5进而维持并促进了卵巢癌间质成纤维细胞的活化。该研究补充了我们对PARP抑制剂治疗卵巢癌的认知,为探索新的更加合理的PARP抑制剂应用方案提供了理论基础。
李涛[4]（2020）在《间质干细胞亚群及其胞外囊泡对卵巢癌和乳腺癌影响的研究》文中指出目的:本研究尝试将我们新发现的抗肿瘤间质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）亚群及其来源的胞外囊泡（Extracellular vesicles,EVs）应用于女性恶性肿瘤（卵巢癌和乳腺癌）的治疗。深入探讨CD90low MSCs亚群在肿瘤治疗中的作用,并为肿瘤的治疗提供理论依据和治疗靶点。为EVs作为一种新型有效的治疗或药物传递媒介提供依据,同时也为治疗其它类型肿瘤提供新的思路和见解。方法:（1）对不同组织进行酶消化法分离培养获得骨髓来源间质干细胞（Bone marrow-derived MSCs,BM-MSCs）、骨密质来源间质干细胞（Compact bone-derived MSCs,CB-MSCs）和脂肪来源间质干细胞（Adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs）。（2）利用细胞的形态特征、流式细胞术分析细胞表面标志和多向分化能力的检测对MSCs进行鉴定。（3）利用卵巢癌小鼠肿瘤模型评价CB-MSCs、BM-MSCs和CB-MSCs与VIC-008联合的抗肿瘤效果。（4）利用qRT-PCR评价CB-MSCs在3D培养中细胞因子的变化。（5）使用LPS将CD90high ADSCs诱导成CD90low ADSCs,利用小鼠肿瘤模型评价CD90high ADSCs和CD90lowow ADSCs亚群抗肿瘤效果。（6）采用超速离心法分离CD90high ADSCs和CD90low ADSCs来源的EVs(CD90high ADSC-EVs和CD90low ADSC-EVs)。（7）通过TEM和SEM检测EVs的形态特征;Western-blot检测EVs的蛋白标志物;纳米粒子跟踪分析（Nanoparticle tracking analysis,NTA）EVs的浓度和大小分布。（8）平板克隆实验评价CD90high ADSC-EVs和CD90low ADSC-EVs对乳腺癌细胞增殖能力的影响。（9）Transwell和划痕实验评价CD90high ADSC-EVs和CD90low ADSC-EVs对乳腺癌细胞迁移能力的影响。（10）利用乳腺癌小鼠肿瘤模型评价CD90high ADSC-EVs和CD90low ADSC-EVs的抗肿瘤效果。（11）利用脂质体融合法将CD90low ADSC-EVs装载miR-16-5p mimics（EVs-miR-16-5p mimic）。（12）利用流式细胞术检测凋亡和小鼠肿瘤模型评价CD90low ADSC-EV-miR-16-5p在体内外对乳腺癌细胞的影响。结果:（1）培养分离的细胞形态呈现成纤维样;细胞表面标记均符合MSCs的一般特征;且该类细胞能够向成脂、成骨和成软骨分化。我们发现CB-MSCs的CD90表达要低于BM-MSCs且CB-MSCs具有抗卵巢癌的作用。3D培养中CB-MSCs的免疫激活细胞因子IL-12、IL-21、IFN-γ和促炎细胞因子CXCL10基因表达增强,而抗炎细胞因子IL-10和CCL5基因表达下调。联合CB-MSCs和VIC-008治疗可显着降低卵巢癌的生长和延长荷瘤小鼠生存期,且能够使肿瘤微环境中活化的抗肿瘤CD4+、CD8+T细胞增多,而使Treg细胞减少,这提示联合治疗具有协同抗肿瘤作用。（2）我们鉴定了CD90high和CD90low ADSCs亚群,并证明了用LPS刺激CD90high ADSCs可以转化为CD90low ADSCs。CD90low ADSC-EVs对乳腺癌荷瘤小鼠的肿瘤生长有明显抑制作用。抗肿瘤效果的控制与ADSC-EVs介导乳腺癌细胞增殖和迁移减少、凋亡增强有关。CD90low ADSC-EVs装载抑癌miR-16-5p进一步显着增强了抗肿瘤活性。结论:本研究通过分析CD90在CB-MSCs和BM-MSCs中的表达差异,评价MSCs对卵巢癌小鼠模型的抗肿瘤作用。我们的数据显示CB-MSCs与融合蛋白VIC-008联合应用具有协同抗肿瘤作用,并揭示了CB-MSCs单独或联合VIC-008调节免疫功能的机制。另外,我们还评估了一类新ADSCs亚群在乳腺癌模型中的抗肿瘤活性,并证明ADSC-EVs在装载了抗肿瘤miR-16-5p后,可进一步提高抗肿瘤效果。综上所述,本研究首次将我们新筛选的抗肿瘤MSCs及其EVs应用于卵巢癌和乳腺癌的临床前治疗。此外,也为EVs作为一种新型、有效的治疗药物或药物载体提供了证据。
张琦[5]（2020）在《CTHRC1通过JNK1/2信号通路介导IL-1β诱导的成软骨细胞凋亡》文中指出目的本研究一方面从临床收集骨关节炎（OA）患者关节液分析其中CTHRC1和IL-1β的含量,另一方面制备原代大鼠软骨细胞,用IL-1β处理诱发骨关节炎细胞模型,分析CTHRC1在骨关节炎患者软骨细胞凋亡中的分子机制。方法收集安徽医科大学第一附属医院（合肥）2012年6月至2016年4月间行膝关节置换术的OA患者（67.9±7.2岁,男:女,11:39）关节液标本（n=50）。同时采集安徽医科大学第一附属医院30例（62.8±11.2岁,男:女,1:4）无OA或其他关节疾病史的外伤患者关节液标本。采用ELISA试剂盒检测OA和创伤患者关节液中CTHRC1和IL-1β的表达水平。制备原代大鼠膝关节软骨细胞,用IL-1β处理诱发骨关节炎细胞模型,通过Western blot观察CTHRC1和JNK1/2的表达量变化,CCK-8试剂盒分析IL-1β作用后软骨细胞的增殖能力的变化,流式细胞术分析IL-1β作用后软骨细胞的凋亡比例变化,分析CTHRC1、IL-1β和JNK1/2信号通路在骨关节炎中的关系。随后使用表达CTHRC1和CTHRC1-sh RNA的慢病毒感染骨关节炎细胞模型,分析CTHRC1表达水平的变化对骨关节炎中软骨细胞凋亡的影响。结果OA患者关节液中CTHRC1和IL-1β的含量明显高于创伤患者。在OA患者的关节液中,CTHRC1水平比创伤组高,IL-1β水平高于创伤组（P<0.01）。分离获得的原代大鼠软骨细胞形态呈多角形,采用免疫组织化学鉴定显示其中软骨细胞标记物Collagen II和SOX9高表达,确认为软骨细胞。在培养基中加入适量IL-1β,成功建立了骨关节炎细胞模型,Western blot和荧光定量PCR检测显示IL-1β处理后软骨细胞中CTHRC1的表达水平增加,细胞增殖能力下降,且下降程度与IL-1β的含量呈正比。使用携带CTHRC1的慢病毒转染原代大鼠软骨细胞后,荧光定量PCR和Western blot实验的结果显示与对照组相比CTHRC1 mRNA和蛋白的表达水平均显着升高（P<0.01）;Western blot分析显示CTHRC1的过表达能够显着激活JNK1/2通路,JNK1/2的抑制剂SP600125能够抑制这种激活状态。过表达CTHRC1的大鼠软骨细胞中caspase-3的活性均显着上调,凋亡细胞比例也显着升高（P<0.01）,而JNK抑制剂SP600125能够显着降低过表达CTHRC1引起的细胞凋亡比例和caspase-3的活性升高（P<0.01）;此外,Western blot结果提示在大鼠软骨细胞中上调CTHRC1的表达,能够促进MMP-13、Bax、PARP-1和cleaved caspase-3的表达（P<0.01）,但抑制Bcl-2的表达,差异有统计学意义（P<0.01）;JNK抑制剂SP600125处理大鼠软骨细胞后MMP-13、Bax、PARP-1和cleaved caspase-3的表达下降（P<0.01）,Bcl-2的表达增加（P<0.01）。将表达CTHRC1sh RNA的慢病毒感染大鼠成软骨细胞后与未感染组相比CTHRC1的表达水平显着下降,再使用10ng/ml的IL-1β处理6h后p-JNK1/2和JNK1/2的表达水平显着上升（P<0.01）;然而CTHRC1下调后p-JNK1/2和JNK1/2的表达水平显着下降了（P<0.01）;流式细胞分析的结果表明下调CTHRC1凋亡比例显着下降（P<0.01）。通过western blot分析下调CTHRC1以及使用抑制剂SP600125后均能抑制IL-1β引起的软骨细胞凋亡。通过q RT-PCR和western blot分析显示与未转染组相比IL-1β组Bcl-2的表达明显降低（P<0.01）,MMP-13、Bax、PARP-1和cleaved caspase-3的表达显着上升（P<0.01）,但使用慢病毒下调CTHRC1表达或使用JNK抑制剂SP600125处理细胞后Bcl-2的表达显着上升（P<0.01）,MMP-13、Bax、PARP-1和cleaved caspase-3的表达显着下降（P<0.01）。结论本研究的结果显示在IL-1β引起的大鼠骨关节炎细胞模型中抑制CTHRC1的表达能够通过JNK信号通路抑制软骨细胞凋亡;而上调CTHRC1的表达后情况正好相反。这些结果提示CTHRC1通过JNK信号通路参与了软骨细胞凋亡过程,CTHRC1可能作为治疗OA患者软骨再生的新靶点。
韩庆[6]（2019）在《癌相关成纤维细胞及其外泌体在卵巢癌转移中的作用》文中研究表明第一部分癌相关成纤维细胞促进卵巢癌腹水多细胞聚集体的形成及转移目的研究癌相关成纤维细胞（Cancer-associated fibroblasts,CAF）在高级别浆液性卵巢癌（High grade serous ovarian cancer,HGSOC）患者腹水多细胞聚集体（Multicellular aggregates,MCA）形成和转移中的作用。方法1.术中收取15例高级别浆液性卵巢癌患者的腹水,直接镜下观察形态、细胞免疫荧光和石蜡包埋切片后免疫组化分析腹水MCA的细胞成份及细胞表型。检测指标包括:上皮性钙粘附蛋白（E-cadherin,E-cad）、神经性钙粘附蛋白（N-cadherin,N-cad）、波形蛋白（vimentin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、成纤维细胞活化蛋白（Fibroblast activation protein,FAP）、成纤维细胞特异性蛋白1（Fibroblast specific protein 1,FSP-1）、上皮特异性抗原（Moc-31）、核转录因子8（PAX8）、增殖细胞相关核抗原Ki-67、钙结合蛋白（calretinin）、紧密连接蛋白（claudin 4）和雌激素受体（estrogen receptor,ER）;2.原代分离培养来自无转移网膜的成纤维细胞（Normal fibroblasts,NF）及已发生转移的晚期卵巢癌网膜组织中癌相关成纤维细胞CAF。免疫组化和western blot检测CAF的特异性标志物α-SMA;3.流式细胞分选获取卵巢癌腹水中的卵巢癌细胞（上皮细胞粘附分子EpCAM阳性）。肿瘤细胞（原代腹水肿瘤细胞或SKOV3细胞）单独悬浮培养或与CAF悬浮共培养,观察多细胞聚集体MCA形成;4.悬滴法获取仅由肿瘤细胞（Tumor cell,TC）构成的多细胞聚集体MCAsTC和由肿瘤细胞及CAF构成的多细胞聚集体MCAsTC/CAF,比较两者的体外基质胶粘附能力;小鼠腹腔注射比较两者在体内对腹膜的粘附及定植能力;3D共培养模型间皮清除实验比较两者间皮清除能力。结果1.所有15名患者腹水内均见成球生长的MCAs,不同患者之间及个体患者中的MCAs在形状和大小方面表现出较大的异质性。MCAs中的细胞主要是E-cad阳性并且具有极性的上皮表型。E-cadhigh/N-cadnegative细胞的MCAs比E-cadlow/N-cadpositive细胞的MCAs更紧密。此外,通过E-cad,N-cad和vimentin的免疫荧光证实了腹水MCAs的表型异质性。腹水内的MCAs主要由肿瘤细胞构成,Moc-31、PAX8及Ki67呈阳性表达;claudin 4、calretinin及ER呈阴性表达。CAF参与了一部分MCAs的构成,可见α-SMA、FSP-1和FAP呈阳性表达的MCAs。2.原代NF及CAF最初为星状或多突的扁平细胞,胞体大,胞核呈规则的卵圆形,汇合后呈纺锤形,细胞之间鱼贯相连或平行排列,或呈漩涡样排列;免疫组化结果显示成纤维细胞为vimentin阳性,角蛋白8阴性。CAF为α-SMA阳性,NF为α-SMA阴性。Western blot显示前三代CAF中的α-SMA表达阳性。3.CAF促进肿瘤细胞聚集以形成MCA。原代肿瘤细胞和SKOV3细胞单独或与CAF悬浮共培养5天,共培养组MCAs的数量和体积均显着大于单独培养组。4.荧光显微镜下可见悬滴法成功获取MCAsTC和MCAsTC/CAF。与MCAsTC相比,MCAsTC/CAF表现出更强的基质胶粘附能力;小鼠腹腔注射后可见MCAsTC/CAF在肠系膜、壁层腹膜以及大网膜的粘附和种植更多;3D共培养模型间皮清除实验中,MCAsTC/CAF间皮清除能力更强。结论HGSOC患者的腹水中的CAF促进肿瘤细胞聚集并增强MCAs中肿瘤细胞的间皮清除能力和腹腔粘附能力。这表明肿瘤细胞和CAF之间的细胞-细胞间作用是一种重要的卵巢癌转移机制,为基于肿瘤细胞和CAF间相互作用的靶向治疗提供了理论依据。第二部分癌相关成纤维细胞外泌体促进卵巢癌转移目的外泌体（Exosome,Exo）是一种由细胞分泌的,直径在30-150nm的纳米级囊泡结构,其包含多种内容物,如蛋白质（膜受体,受体的配体及细胞因子等）,核酸类物质（如m RNA,mi RNA,lnc RNA,DNA）以及脂质,是细胞间相互交流对话的重要机制之一,能调控受体靶细胞功能。近年来的研究表明,CAF能够通过外泌体与肿瘤细胞对话。而与正常成纤维细胞（Normal fibroblasts,NF）相比,CAF的mi RNA表达谱差异明显。本部分研究目的是探讨CAF来源的外泌体（Cancer-associated fibroblasts derived exosomes,CAF-Exo）对卵巢癌细胞转移能力的影响和机制。方法1.原代培养未发生转移的早期卵巢癌网膜组织（8例）中的NF及已发生转移的晚期卵巢癌网膜组织（10例）中CAF。超速离心法提取CAF-Exo和NF来源的外泌体（Normal fibroblasts derived exosomes,NF-Exo）并鉴定:电镜观察外泌体形态特征;Western blot检测外泌体的标记蛋白;Nano Sight纳米颗粒跟踪分析和DLS（Dynamic Light Scattering）动态光散射检测外泌体的粒径;2.免疫荧光法检测卵巢癌细胞对CAF-Exo和NF-Exo的摄取;3.用CAF-Exo、NF-Exo和CAF去外泌体条件培养基（Exosome-depleted conditioned medium,Exo DP-CM）处理卵巢癌细胞（SKOV3、CAOV3和A2780）72小时,未处理细胞作为对照。癌细胞的迁移及侵袭能力通过划痕实验、Transwell小室迁移及侵袭实验检测;癌细胞的增殖能力利用平板克隆形成实验及Ed U实验检测;流式检测细胞凋亡;Western blot、免疫荧光检测上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）标记物（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）的表达;4.ES2细胞经慢病毒转染荧光素酶后嘌呤霉素筛选获得稳定表达荧光素酶的细胞株ES2-luc,建立裸鼠卵巢癌原位移植瘤模型,腹腔注射CAF-Exo或NF-Exo,PBS为对照,小动物活体成像观察不同处理组裸鼠腹腔转移情况及生存时间;取原发卵巢肿瘤组织行免疫组化检测E-cad、N-cad、Vimentin、Ki67的表达;5.建立ES2-luc裸鼠卵巢癌腹腔注射模型,同时给予腹腔注射CAF-Exo、NF-Exo或PBS,小动物活体成像检测外泌体对卵巢癌腹腔种植的影响,比较不同处理组小鼠的腹水及腹腔转移情况;6.从GEO网站下载2例卵巢NF和3例卵巢癌CAF来源的外泌体mi RNA测序数据集,生物信息学分析其外泌体中的差异性mi RNA。实时荧光定量PCR验证CAF和NF细胞及其外泌体中差异mi RNA的表达。TCGA数据库下载卵巢癌组织样本数据集,分析mi RNA表达水平与患者生存的关系。在mi RNA靶基因预测网站（mi RTar Base、mi RDB、mi RWalk）进行下游靶基因预测,筛选出候选mi RNA进行功能学验证;7.CAFs转染Cy3（红色荧光）标记的mi R-29c mimics和mi R-203 mimics后,与带绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein,GFP）的SKOV3细胞间接共培养。RT-PCR检测转染后CAF及外泌体中两种mi RNA的表达。共培养48h后荧光显微镜观察SKOV3-GFP细胞中的红色荧光以确定mi R-29c和mi R-203是否可以通过CAF-Exo从CAF转移到卵巢癌细胞。RT-PCR检测共培养后SKOV3-GFP细胞两种mi RNA的表达;8.转染mi RNA mimics入卵巢癌细胞（SKOV3和CAOV3）过表达mi RNA-29c和mi R-203,RT-PCR验证过表达。Western blot检测基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）表达;癌细胞的迁移和侵袭能力采用Transwell迁移侵袭实验及划痕实验检测。上皮间质转化EMT的标记物Vimentin、E-cadherin和N-cadherin通过Western blot和免疫荧光法检测。结果1.提取的原代CAF-Exo和NF-Exo在透射电镜下呈类圆形双层立体膜性囊泡。通过电镜、Nano Sight和DLS测定外泌体大小,外泌体直径分布在30-150nm之间,CAF-Exo和NF-Exo峰值分别在109nm和116nm。外泌体高表达阳性标记蛋白CD63,CD9和CD81,不表达阴性标记物calnexin。2.卵巢癌细胞SKOV3,CAOV3和A2780均能摄取CAF-Exo和NF-Exo。3.与NF-Exo和Exo DP-CM相比,CAF-Exo能明显提高癌细胞的迁移及侵袭能力。CAF-Exo处理癌细胞后,E-cad表达减少,N-cad和Vimentin的表达有所增高,能促进EMT。且CAF-Exo能使癌细胞增殖能力增强,并抑制其凋亡。4.裸鼠卵巢癌原位移植瘤模型中,与NF-Exo、Exo DP-CM和PBS组相比,CAF-Exo腹腔注射组卵巢癌转移更快,小鼠生存期缩短,免疫组化显示卵巢原位瘤中Vimentin、N-cad、MMP2和Ki67的表达量增加,而E-cad表达降低。5.裸鼠卵巢癌腹腔注射模型中,CAF-Exo腹腔注射能促进卵巢癌的腹膜腔播散和腹水生成。6.GEO数据分析筛选出CAF-Exo较NF-Exo存在显着性差异表达下调的mi RNA 6个,上调的mi RNA 5个。RT-PCR结果显示,与NF-Exo相比,CAF-Exo中这6个mi RNA均有不同程度下调,其中mi R-29c和mi R-203表达水平与患者总生存时间呈正相关。下游靶基因预测发现,mi R-29c和mi R-203有16个最可能的共同靶基因:ABCE1、BTG2、CAND1、MMP2、VEGFA等。结合本实验室前期测序结果:ES2-luc的网膜高转移亚细胞系ES2-luc-omp3中10种MMP高表达,其中MMP2增加倍数最大,我们筛选出mi R-29c和mi R-203进行后续研究。7.体外间接共培养模型证实Cy3标记的mi R-29c和mi R-203 mimics能通过外泌体从CAF传递到卵巢癌细胞,在卵巢癌细胞中可见红色荧光,且卵巢癌细胞中mi R-29c和mi R-203的表达上调。8.卵巢癌细胞转染mi R-29c mimics后,Western blot结果显示MMP2表达减少,而转染mi R-203 mimics后,MMP2表达没有明显变化。此外,过表达mi R-29c能抑制卵巢癌细胞迁移侵袭以及EMT。结论CAF通过向肿瘤细胞递送低表达mi R-29c的外泌体,可能通过解除肿瘤细胞中MMP2的表达抑制,从而促进卵巢癌转移。mi R-29c抑制MMP2表达的机制以及MMP2在卵巢癌转移中的作用还有待进一步研究和验证。
何砚如[7]（2019）在《DNA甲基化在心脏成纤维细胞分化过程中调控α平滑肌肌动蛋白表达的机制研究》文中认为第一部分梗死后心肌纤维化与DNA甲基化修饰相关目的:构建梗死后心肌纤维化模型,探讨梗死后心肌纤维化与DNA甲基化修饰之间的关系。方法:健康雄性Sprague Dawley大鼠随机分为心梗模型（MI）组及假手术（Sham）组,分别通过左冠状动脉结扎术或假手术构建模型,术后6周通过H&E染色及Masson染色明确纤维化面积大小,通过q PCR、ELISA以及免疫组织荧光等方法检测纤维化相关因子的表达;通过免疫荧光技术,检测纤维化组织中的细胞增殖情况;通过q PCR以及western blot检测纤维化组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）以及三种亚型DNA甲基化转移酶（DNA methyltransferases,DNMTs）基因表达情况;通过DNA甲基转移酶总活性检测试剂盒检测细胞中DNMTs的总活性,初步探讨梗死后心肌纤维化与DNA甲基化修饰之间的关系。结果:与Sham组相比,MI组外周血中I型前胶原羧基端原肽（Procollagen I Cterminal Propeptide,PICP）以及相应左室组织中纤维化相关分子的表达显着上调;H&E染色及Masson染色提示MI组大鼠左室心肌细胞排列紊乱、室壁变薄,且出现显着的胶原沉积;同时,MI组左室组织中DNMTs总活性受到明显抑制,其中DNMT1的表达显着下调。结论:梗死后心肌纤维化与DNA甲基化修饰相关。第二部分DNA甲基化修饰参与心脏成纤维细胞的分化及增殖过程目的:探讨DNA甲基化修饰在转化生长因子β1（Transforming growth factorβ1,TGF-βl）诱导心脏成纤维细胞（Cardiac fibroblasts,CFs）分化增殖并表达α-SMA过程中的调控机制。方法:分离培养原代CFs并进行细胞免疫荧光鉴定,以TGF-βl诱导其分化。构建过表达DNMT1质粒（pc DNA-DNMT1）以及敲低DNMT1的小干扰RNA（si DNMT1）分别干预CFs,通过q PCR以及western blot检测α-SMA以及DNMTs的基因表达情况;通过亚硫酸氢盐基因组测序测定α-SMA基因启动子区相关Cp G位点的DNA甲基化水平;通过CCK-8以及Ed U检测试剂盒检测CFs的增殖能力,初步探讨DNA甲基化修饰在TGF-βl诱导CFs增殖分化过程中的调控机制。结果:（1）与对照组相比,TGF-β1干预后CFs中α-SMA的表达升高,而DNMT1的表达显着下调;（2）在CFs中,DNMT1可调控α-SMA的表达,过表达DNMT1可逆转TGF-β1上调α-SMA的效应,而敲低DNMT1则可使TGF-β1干预后α-SMA的表达水平进一步增加。（3）与对照组（37.5%）相比,TGF-β1干预组（12.5%）α-SMA启动子区Cp G岛甲基化水平明显降低,而过表达DNMT1可逆转TGF-β1干预后带来的α-SMA启动子区Cp G岛甲基化水平降低的效应（33.3%）;（4）TGF-β1通过影响DNMT1介导心脏成纤维细胞增殖过程。结论:TGF-β1通过下调DNMT1介导α-SMA启动子区CpG岛甲基化水平,从而影响α-SMA的表达水平,在CFs增殖分化过程中起到作用。第三部分TGF-β1通过Smad以及MAPK信号通路调控心脏成纤维细胞的增殖与分化目的:研究Smad信号通路及丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路对TGF-β1/DNMT1/α-SMA调控网络的影响,以及在心脏成纤维细胞的增殖与分化中的作用。方法:以TGF-β1干预CFs,western blot检测Smad2/3、JNK、ERK、p38以及其各自磷酸化蛋白的表达水平;TGF-β1联合Smad及MAPK信号通路抑制剂（pSmad2/3抑制剂SB431542、p-JNK抑制剂SP600125、p-ERK抑制剂AZD6244及p-p38抑制剂SB203580）干预CFs,western blot检测DNMT1、α-SMA、Smad2/3、JNK、ERK、p38以及其磷酸化蛋白的表达水平;CCK-8、Ed U细胞增殖检测试剂盒检测以上不同干预下CFs增殖情况。结果:（1）与对照组相比,TGF-β1干预组Smad2/3、JNK、ERK、p38蛋白水平无明显改变,而其各自磷酸化蛋白的表达水平明显增加;（2）与TGF-β1干预组相比,TGF-β1联合p-Smad2/3抑制剂/p-JNK抑制剂/p-ERK抑制剂/p-p38抑制剂组均出现DNMT1表达上调及α-SMA表达下调;（3）与TGF-β1干预组相比,TGF-β1联合p-Smad2/3抑制剂/p-JNK抑制剂/p-ERK抑制剂/p-p38抑制剂组均出现CFs增殖减少。结论:TGF-β1可通过Smad以及MAPK信号通路调控DNMT1/α-SMA的表达水平,参与CFs增殖分化过程。
曹棉富[8]（2019）在《TAM-GBM细胞杂交促胶质母细胞瘤侵袭及机制和多基因风险评分的预后价值》文中提出胶质母细胞瘤（glioblastoma,GBM）是最常见的原发性中枢神经系统恶性肿瘤,预后极差。研究表明,肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophage,TAM）是胶质母细胞瘤微环境中浸润数目最多的免疫细胞,可通过高分泌细胞因子如TGF-β1、PTN等促进胶质母细胞瘤恶性进展。除此之外,TAM还可能与肿瘤细胞发生杂交从而影响肿瘤的多种生物学行为。然而,TAM与胶质母细胞瘤细胞杂交（TAM-GBM细胞杂交）是否存在,以及其在胶质母细胞瘤中的生物学作用及机制尚不清楚。另一方面,胶质母细胞瘤起源于神经胶质细胞或神经胶质前体细胞,其发生发展受多基因的调控。筛选调控胶质母细胞瘤发生发展的关键基因,并建立一个可用于胶质母细胞瘤预后预测的多基因风险评分模型具有十分重要的临床意义。因此,本研究包括以下两部分内容:第一部分肿瘤相关巨噬细胞与胶质母细胞瘤细胞杂交促胶质母细胞瘤侵袭及机制本部分从细胞杂交的角度出发,研究TAM-GBM细胞杂交是否存在,TAM-GBM杂交细胞的转录组特征,以及TAM-GBM细胞杂交对胶质母细胞瘤侵袭的影响及机制。其主要的研究方法、结果及结论如下:1.胶质母细胞瘤中存在TAM-GBM细胞杂交（1）采用流式分析和免疫荧光对胶质母细胞瘤临床样本进行检测,结果显示胶质母细胞瘤临床样本中存在TAM-GBM杂交细胞,比例为1.35%1.96%;杂交细胞同时表达胶质母细胞瘤标记物(GFAP、PDGFRα和IDH1R132H)与巨噬细胞标记物（CD68和CD14）,并且杂交细胞的细胞核数量具有异质性,含13个细胞核不等。（2）采用流式检测、免疫荧光和荧光原位杂交对胶质母细胞瘤原位移植瘤进行分析,结果显示胶质母细胞瘤原位移植瘤中存在TAM-GBM杂交细胞,比例为1.91±0.01%;杂交细胞同时表达胶质母细胞瘤荧光标记RFP与小鼠巨噬细胞标记物CD11b,并且其在性别错配原位移植瘤（雌性来源的胶质母细胞瘤细胞原位注射于雄性C57BL/6小鼠）中的性染色体核型以“XXY”或“XXXY”多倍体为主。（3）采用流式检测、免疫荧光和EdU（5-ethynyl-2′-deoxyuridine）标记细胞核对TAM-GBM共培养体系进行分析,结果显示共培养体系中存在TAM-GBM杂交细胞,杂交效率与两种细胞共培养比例有关,以胶质母细胞瘤细胞比巨噬细胞的比例为1:4达最佳（相应杂交效率为1.20±0.02%）;杂交细胞共表达胶质母细胞瘤荧光标记RFP和巨噬细胞荧光标记GFP;在EdU标记的巨噬细胞-EdU未标记的胶质母细胞瘤细胞共培养体系中,以及在EdU未标记的巨噬细胞-EdU标记的胶质母细胞瘤细胞共培养体系中,均可检测到同时含1个EdU阳性细胞核和1个EdU阴性细胞核的杂交细胞。2.TAM-GBM杂交细胞的转录组特征采用转录组测序、生物信息学技术、实时荧光定量PCR等研究手段对TAM-GBM杂交细胞的转录组特征进行了分析,结果显示TAM-GBM杂交细胞形成了不同于两种亲本细胞的独特的转录组特征,其含有39个相对于两种亲本细胞均显着上调的基因和39个相对于两种亲本细胞均显着下调的基因;GO（Gene Ontology）与KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）通路富集分析显示TAM-GBM杂交细胞在趋化因子介导的信号通路、JAK-STAT信号通路等多条通路上呈显着富集。3.TAM-GBM细胞杂交促进胶质母细胞瘤侵袭我们采用了体外Transwell侵袭实验对TAM-GBM杂交细胞和亲本胶质母细胞瘤细胞的侵袭能力进行了比较,结果显示TAM-GBM杂交细胞具有比亲本胶质母细胞瘤细胞更强的体外侵袭能力;通过对胶质母细胞瘤组织切片进行免疫荧光染色,并对比TAM-GBM杂交细胞在胶质母细胞瘤组织侵袭前沿与肿瘤核心区域的分布情况,我们发现相比于肿瘤核心区域,肿瘤侵袭前沿区域具有更多的TAM-GBM杂交细胞,提示TAM-GBM细胞杂交可促进胶质母细胞瘤侵袭。4.TAM-GBM细胞杂交促胶质母细胞瘤侵袭机制的初步探讨我们对TAM-GBM杂交细胞和亲本胶质母细胞瘤细胞进行了胶质瘤侵袭相关基因的富集分析,结果显示胶质瘤侵袭相关基因在TAM-GBM杂交细胞中呈显着富集（NES=1.65,p<0.001）（NES,normalized enrichment score）。进一步采用了实时荧光定量PCR和流式检测对基因富集分析的结果进行验证,结果显示相比于亲本胶质母细胞瘤细胞,Hgf、Tmsb4x、St3gal1、Mmp13、Adam8和Cxcr4等侵袭相关基因在TAM-GBM杂交细胞中显着高表达,提示胶质瘤侵袭相关基因可能介导了TAM-GBM细胞杂交的促侵袭作用。第二部分多基因风险评分在胶质母细胞瘤中预后价值本部分从胶质母细胞瘤受多基因调控的角度出发,筛选调控胶质母细胞瘤发生发展的关键基因,并建立可用于胶质母细胞瘤预后预测的多基因风险评分模型。其主要的研究方法、结果及结论如下:1.胶质母细胞瘤差异基因的筛选及多基因风险评分模型的建立（1）我们首先分别对TCGA和GEO数据库中的胶质母细胞瘤数据集进行了差异分析,然后再对来自不同数据集的差异分析结果取交集,结果显示相比于正常脑组织,胶质母细胞瘤含有483个差异显着的上调基因和765个差异显着的下调基因。（2）上述差异基因行单因素和多因素COX回归分析,结果显示,OSMR、HOXC10、SCARA3和SLC39A10的表达水平与胶质母细胞瘤患者预后最为相关,其中差异上调基因OSMR、HOXC10和SCARA3与患者预后呈负相关（hazard ratio>1,p<0.05）,差异下调基因SLC39A10与患者预后呈正相关（hazard ratio<1,p<0.05）。（3）Western blot验证了OSMR、HOXC10和SCARA3在胶质母细胞瘤中高表达,而SLC39A10在胶质母细胞瘤中低表达。（4）基于OSMR、HOXC10、SCARA3和SLC39A10的基因表达水平和多因素COX回归系数,我们建立了胶质母细胞瘤的多基因风险评分模型。2.多基因风险评分在胶质母细胞瘤中的预后价值评估（1）我们采用了Kaplan-Meier曲线和log-rank检验分别在TCGA和GEO胶质母细胞瘤数据集中对多基因风险评分的预后价值进行了评估,结果均显示多基因风险评分对患者生存时间有显着影响,风险评分越高,患者预后越差;进一步行单因素和多因素COX回归分析,结果显示多基因风险评分可作为胶质母细胞瘤患者的独立预后指标。（2）多基因风险评分联合胶质母细胞瘤IDH突变状态或表达谱亚型能更加具体、准确地预测不同亚组胶质母细胞瘤患者的预后:风险评分高且为IDH野生型的胶质母细胞瘤患者预后差,风险评分高且为间质型胶质母细胞瘤的患者预后也差。
陈一鸣[9]（2019）在《MT2-MMP在肾透明细胞癌中的表达及其在肿瘤增殖和侵袭中的作用机制研究》文中研究指明肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）是泌尿系统恶性肿瘤中较为常见的恶性肿瘤,其中肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,cc RCC）是肾细胞癌中最常见的肿瘤类型。全球每年约有35000例新发肾细胞癌患者,而每年因肾细胞癌而造成死亡的患者约有14000人。由于早期肾细胞癌缺乏明显的症状和体征,肾细胞癌的诊断现在仍依赖于B超、CT和MRI等影像学资料,因此一部分患者在初诊肾细胞癌时已经存在有远处转移。针对转移性肾细胞癌,化疗及放疗敏感性均较差,而免疫治疗及分子靶向治疗对转移性肾细胞癌的预后有一定的改善作用,但仍然不够理想。基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）是一类锌离子依赖的内肽酶家族,可通过破坏细胞外基质（extracellular matrix,ECM）从而促进恶性肿瘤的侵袭和转移。膜型基质金属蛋白酶-2（membrane type matrix metalloproteinase-2,MT2-MMP）最初是从人肺c DNA库中分离得到,其基因全长3530 bp,编码产生由669个氨基酸组成的蛋白。作为MMPs家族中的一员,其不仅具有对ECM的蛋白水解作用,同时还可参与细胞内外信号调节,激活其它MMPs共同参与细胞周围微环境的重构。研究发现,MT2-MMP在多种恶性肿瘤如胃癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、食管癌及乳腺癌中均呈高表达。但目前关于MT2-MMP在肾透明细胞癌中表达及作用的研究尚十分有限,缺乏对其作用具体机制的深入研究。本研究通过检测肾透明细胞癌组织标本及肾透明细胞癌细胞系中MT2-MMP的表达水平,分析其与肾透明细胞癌肿瘤分级分期及预后的相关性,进一步研究MT2-MMP与肾癌细胞侵袭、转移及细胞增殖之间的关系,并研究其可能相关的信号通路,探讨可能的作用机制,从而为肾透明细胞癌的诊断和治疗提供新的可能的标志物和靶点。第一部分MT2-MMP在肾透明细胞癌组织中的表达及临床意义目的:研究肾透明细胞癌组织中膜型基质金属蛋白酶-2（MT2-MMP）的表达及其与肾透明细胞癌临床特征以及预后的关系。方法:首先通过Meta分析MT2-MMP在恶性肿瘤中表达情况及其与预后的关系。而后通过q RT-PCR检测于我院进行手术的13例肾透明细胞癌患者肿瘤及癌旁组织中MT2-MMP表达情况,而后通过免疫组织化学方法,检测90例肾透明细胞癌组织切片中肾癌组织及癌旁组织中MT2-MMP及CD34的表达。比较肾癌组织与癌旁组织中MT2-MMP的表达差异,并通过χ2检验比较肾癌组织中MT2-MMP表达与肾癌分期、组织分化程度及患者年龄、性别的关系,采用Kaplan-Meier法及Log-rank检验方法检验MT2-MMP表达与患者生存预后的相关性,应用单因素及多因素Cox模型分析不同肿瘤临床指标患者术后的死亡风险程度,Pearson线性相关分析MT2-MMP表达与微血管密度的相关性。结果:Meta分析表明MT2-MMP在多种在肿瘤中均呈高表达,且MT2-MMP表达情况与患者预后呈显着负相关（P<0.05）。MT2-MMP m RNA在肾癌组织中的表达高于癌旁组织,差异具有统计学意义（P<0.05）。免疫组化染色结果显示肾透明细胞癌肿瘤组织及癌旁组织中的MT2-MMP表达H-score分别为217.4±24.8及153.6±30.7,两者差异有统计学意义（P<0.05）。高MT2-MMP表达组与低MT2-MMP表达组患者其肾癌分期及组织分化程度存在差异,差异具有统计学意义（P<0.05）,不同MT2-MMP表达组患者年龄、性别及肿瘤位置无显着差异（P>0.05）。MT2-MMP都对患者术后总生存时间有显着影响,Cox单因素及多因素分析表明MT2-MMP H-score≥216.0是肾癌患者术后死亡的独立危险因素（P<0.05）,同时MT2-MMP表达与肿瘤微血管密度呈显着正相关（r=0.566,P<0.05）。结论:MT2-MMP在肾透明细胞癌的发生发展起到重要的作用,同时其可作为肾透明细胞癌患者预后风险预测指标,肾癌组织中MT2-MMP表达越高则其预后越差。第二部分MT2-MMP对于肾透明细胞癌生物学行为影响的研究目的:检测和比较不同肾癌细胞系中MT2-MMP的表达差异,并研究MT2-MMP对肾癌增殖侵袭的作用。方法:通过Western blot及实时定量逆转录-聚合酶链反应（q RT-PCR）方法检测人肾癌细胞系ACHN、786-O、OS-RC-2及人胚肾细胞系293T中MT2-MMP及MT1-MMP的表达水平并进行比较。构建MT2-MMP基因下调慢病毒载体并转染肾癌细胞系ACHN及786-O,采用细胞侵袭检测、CCK-8细胞增殖检测、流式细胞检测、细胞粘附试验等观察下调MT2-MMP表达水平下肿瘤细胞功能情况。同时将下调MT2-MMP表达的肾癌细胞及对照组细胞注射于裸鼠皮下,通过测量肿瘤大小及免疫组化染色观察下调MT2-MMP表达对肿瘤生长及微血管生成的影响。结果:MT2-MMP在人肾癌细胞系ACHN、786-O及OS-RC-2中的表达均显着高于其在人胚肾细胞系293T中的表达（P<0.05）。MT2-MMP与MT1-MMP在不同肾癌细胞系中表达存在差异但无显着相关性（P>0.05）。MT2-MMP表达下调的人肾癌细胞系ACHN及786-O其细胞侵袭、粘附及增殖能力受到显着地抑制（P<0.05）,动物实验表明下调MT2-MMP表达能显着抑制肿瘤细胞生长及肿瘤微血管生成（P<0.05）。结论:MT2-MMP在不同肾癌细胞系中均呈高表达,且不同肾癌细胞系中表达存在差异,其在肾癌细胞中的表达与MT1-MMP无显着相关性,降低MT2-MMP表达水平可抑制肾癌细胞的增殖及侵袭转移能力。第三部分表达谱基因芯片筛选稳定转染sh MT2-MMP基因的肾癌细胞中肿瘤增殖侵袭相关差异表达基因目的:应用表达谱基因芯片技术筛选稳定转染sh MT2-MMP基因的肾癌细胞系中与肿瘤增殖侵袭相关的差异表达基因。方法:提取稳定转染Lv-sh MT2-MMP基因的肾癌细胞系（ACHN及786-O）及稳定转染Lv-NC的对照组肾癌细胞系（ACHN及786-O）总RNA,通过基因芯片技术筛选差异表达基因,并对筛选出的差异表达基因利用q RT-PCR进行验证。结果:与对照组相比,MT2-MMP表达下调的肾癌细胞系共筛选出3368个共同差异表达基因,其中共同表达上调的基因1851个,共同表达下调的基因1517个,通过基因功能分析显示,这些差异表达基因涉及到细胞增殖、分化、细胞外基质组织、细胞粘附、免疫应答、细胞周期等,并关系到多条肿瘤相关信号通路。在全部差异表达基因中进一步筛选出5条与肿瘤相关的差异明显基因,q RT-PCR验证发现各基因变化趋势与基因芯片一致。结论:MT2-MMP可能可以通过影响多种与肿瘤增殖侵袭相关的基因进而促进肾透明细胞癌的增殖和侵袭。
王宇强[10]（2019）在《透明质酸水凝胶缓释雪旺细胞外泌体修复坐骨神经长节段缺损的实验研究》文中指出目的:（1）体外分离新生SD大鼠雪旺细胞并培养,超速离心法提取雪旺细胞分泌的外泌体并进行特异性蛋白鉴定。透射电镜观察雪旺细胞外泌体的粒径和分布。（2）研究雪旺细胞外泌体对神经元及雪旺细胞的生物学作用。观察和研究透明质酸凝胶缓释外泌体的生物学特征参数。（3）探讨透明质酸水凝胶包裹缓释雪旺细胞外泌体填充PCL神经导管修复大鼠坐骨神经长节段缺损的形态学和功能学效果。方法:（1）采用0.1%Ⅳ型胶原酶消化法提取原代大鼠雪旺细胞,并采用DMEM/F12完全培养基培养和纯化。采用S100和Sox10进行纯度鉴定。采用CCK-8试剂盒对雪旺细胞的增殖状态进行检测。采用超高速离心法提取雪旺细胞分泌的外泌体,利用BCA试剂盒检测外泌体中蛋白的含量。Western blot法对雪旺细胞分泌外泌体表面标志物CD63、TSG101、CD9、Rab5和Na+/K+ATP酶进行鉴定。（2）构建1%浓度的透明质酸水凝胶,并将雪旺细胞外泌体进行包裹。体外放置于PBS中采用BCA试剂盒检测外泌体的缓释曲线。应用雪旺细胞外泌体干预雪旺细胞和神经元,CCK-8试剂盒检测外泌体对雪旺细胞的增殖作用,以及对两种细胞生物活性蛋白分泌的作用。ELISA法检测培养第1、3、5天后,外泌体干预的雪旺细胞表达神经生长因子（NGF）、脑源性神经生长因子（BDNF）、髓鞘零蛋白（P0）、细胞极性蛋白Par-3的水平。同时ELISA法检测外泌体干预后第1、3、5天时神经元中生长相关蛋白43（Growth-associatedprotein-43,GAP-43）、神经丝蛋白-200（Neurofilament-200,NF-200）、βIII–Tubulin的表达水平。（3）静电纺丝制备PCL神经导管,并采用扫描电镜观察导管的大体形态及显微结构,测量纤维丝的直径。采用小量程的力学仪器检测PCL神经导管的的杨氏模量、最大应力、最大载荷、最大断裂张力等力学参数。采用透明质酸水凝胶包裹雪旺细胞外泌体填充PCL神经导管,制备15mm长节段大鼠坐骨神经缺损,并进行端端吻合。采用单纯透明质酸填充PCL导管作为对照组,自体神经移植组也进行对照。在术后4、8、12周时检测大鼠坐骨神经指数、再生神经电生理功能。荧光金逆行示踪检测大鼠神经元胞体的存活情况及神经再生的情况。透射电镜观察三组再生神经的有髓轴突的直径、有髓轴突的数量、再生轴突的面积。NF-200和S100对各组再生神经的免疫荧光染色,观察期神经结构再生情况。HE染色观察三组大鼠腓肠肌肌纤维直径的差异。结果:（1）雪旺细胞在光镜下可以看到呈梭型,体积不大,存在双极,细胞核在中间,比较明显,有折光性。细胞多呈纵行排列的形态。雪旺细胞在接种2小时后,贴壁的比率约为23.5%,6小时时的贴壁比率增加到47.9%,而在12小时的时候有88.9%的细胞贴壁,在16小时以后细胞贴壁的比率均高于99%。在培养3天时,雪旺细胞数量较最初增长了3.9倍,而培养7天时增长了11.4倍。S-100和Sox-10双标荧光染色对雪旺细胞鉴定的纯度为97%。外泌体粒径主要分布在100-160 nm之间,本研究测得的外泌体的平均直径在125 nm。Western blot检测显示外泌体特异性蛋白CD63、TSG101、CD9在本研究所提取的雪旺细胞外泌体中均有表达,而非外泌体表达蛋白Rab5和Na+/K+ATP酶则未见表达。（2）外泌体在透明质酸凝胶中前3天释放比率较大,第一天释放比率为34%,第三天达到41%,随着时间的延长,释放逐渐缓慢。在第4、5、6、8、16、32天时的累积释放比率为43%、47%、51%、53%、75%、90%,而在第64天时候检测得出累积释放率为99%,几乎完全释放。对照组轴突数量为35.4±4.3,而外泌体刺激组为126.3±14.4（P<0.05）。在轴突生长长度方面,外泌体组的平均长度长达（1563.0±132.5）μm,显着高于对照组的（864.3±77.4）μm（P<0.05）。外泌体干预组雪旺细胞在培养后的第3、5、7天时细胞增殖水平均显着高于对照组（P<0.05）。外泌体刺激后的雪旺细胞分泌NGF、BDNF、髓鞘零蛋白（P0）、细胞极性蛋白Par-3的水平在培养后第3天和第5天较第1天时均显着升高,而第5天的表达量也均显着高于第3天的水平（P<0.05）。外泌体刺激后的DRG神经元细胞分泌的标志性蛋白进行检测,结果发现GAP-43、NF-200、βIII–Tubulin的水平在培养后第3天和第5天较第1天时均显着升高,而第5天的表达量也均显着高于第3天的水平（P<0.05）。（3）PCL神经导管的内孔直径为1500μm左右,而管壁的厚度约为500μm,表面纤维丝均匀分布,纤维丝平均直径为4.9μm。PCL神经导管孔隙率为（89.7±2.6）%、最大应力为（7.5±0.6）MPa、杨氏模量为（22.4±2.1）MPa、最大断裂张力为（596.4±33.8）%、最大载荷为（5.6±0.8）N,符合神经再生要求。术后第4、8、12周时PCL/HA-EXO组大鼠的再生神经有髓轴突的直径、有髓轴突的数量、再生轴突的面积显着高于PCL/HA组,而G-ratio值则显着低于PCL/HA组（P<0.05）。而三个时间点中,PCL/HA-EXO的有髓轴突的数量、再生轴突的面积和G-ratio值均与自体神经移植组差异无统计学意义（P>0.05）。术后12周时可见PCL/HA-EXO组大鼠轴突沿着导管顺行生长,有明显的方向性。并且神经轴突及雪旺细胞的表达显着高于PCL/HA组,与自体神经移植组差异不明显。各组大鼠术后随着时间的延长,复合肌动作电位幅度、神经传导速度及潜伏期均有所改善,但PCL/HA-EXO组和自体神经组较PCL/HA组改善更为明显,术后4、8、12周三个时间点均显着高于PCL/HA组（P<0.05）。在术后第8周时,PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的神经传导速度及潜伏期均无显着性差异,而复合肌动作电位仍存在一些差异（P<0.05）。而术后12周时,三个指标则在PCL/HA-EXO组和自体神经移植组中无统计学差异（P>0.05）。PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的SFI指数在术后三个时间点均显着高于PCL/HA组（P<0.05）,并且在术后第8,12周时PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的SFI指数相似,无统计学差异（P>0.05）。术后12周PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的腓肠肌纤维直径分别为（68.4±6.2）μm和（72.3±7.6）μm,显着高于PCL/HA组（P<0.05）,而PCL/HA-EXO组和自体神经移植组则无统计学差异（P>0.05）。结论:（1）本研究成功分离提取了新生SD大鼠雪旺细胞,纯度高,满足后续实验要求。采用超速离心法加超滤法能够成功提取雪旺细胞分泌的外泌体,经鉴定是雪旺细胞分泌的外泌体,纯度较高。（2）透明质酸水凝胶能够有效的包裹和缓释雪旺细胞分泌的外泌体,其缓释曲线与体内雪旺细胞增殖迁移及神经轴突再生的时间相似,能够更好的在体内应用。雪旺细胞分泌的外泌体能够有效的促进雪旺细胞增殖,促进雪旺细胞和神经元特异性蛋白分泌,能够较好的促进神经再生。（3）PCL/HA-EXO神经导管能够有效的促进大鼠长节段神经缺损的运动功能康复及组织学及电生理学明显改善。
二、转化生长因子β_1、Ⅳ型胶原酶与卵巢癌（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、转化生长因子β_1、Ⅳ型胶原酶与卵巢癌（论文提纲范文）
（1）外泌体对肌腱干细胞生物学功能影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 肌腱损伤 |
| 1.1.1 肌腱的结构 |
| 1.1.2 肌腱损伤的发病机理及特点 |
| 1.1.3 肌腱的愈合及修复 |
| 1.2 干细胞治疗肌腱损伤的研究现状 |
| 1.2.1 骨髓间充质干细胞与肌腱损伤 |
| 1.2.2 脂肪间充质干细胞与肌腱损伤 |
| 1.2.3 胚胎干细胞与肌腱损伤 |
| 1.2.4 肌腱干细胞与肌腱损伤 |
| 1.2.5 其他来源干细胞与肌腱损伤 |
| 1.3 干细胞微环境 |
| 1.3.1 外泌体的发现及其成分 |
| 1.3.2 外泌体的形成及分泌 |
| 1.3.3 外泌体的分离方法 |
| 1.3.4 外泌体的主要功能 |
| 1.3.5 外泌体的临床应用 |
| 1.4 转化生长因子β |
| 1.4.1 转化生长因子β家族及其受体 |
| 1.4.2 转化生长因子β信号通路 |
| 1.4.3 转化生长因子β对干细胞的作用 |
| 1.4.4 转化生长因子β与肌腱愈合 |
| 1.5 本课题的立项依据 |
| 1.6 本课题的研究内容 |
| 2 肌腱干细胞的分离、鉴定及培养 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验仪器与试剂 |
| 2.2.1 实验仪器 |
| 2.2.2 实验试剂与耗材 |
| 2.2.3 实验动物 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 肌腱干细胞的分离 |
| 2.3.2 检测干细胞表面标志物 |
| 2.3.3 细胞培养 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 3 肌腱干细胞来源外泌体的分离及鉴定 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验仪器与试剂 |
| 3.2.1 实验仪器 |
| 3.2.2 实验试剂与耗材 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 超速离心法提取外泌体 |
| 3.3.2 检测外泌体的粒径 |
| 3.3.3 检测外泌体的形态 |
| 3.3.4 提取细胞总蛋白 |
| 3.3.5 提取外泌体蛋白 |
| 3.3.6 BCA法检测蛋白质浓度 |
| 3.3.7 免疫印迹法检测外泌体特异性蛋白 |
| 3.3.8 检测肌腱干细胞摄取外泌体的情况 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 4 外泌体对肌腱干细胞的增殖与迁移的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验仪器与试剂 |
| 4.2.1 实验试剂 |
| 4.2.2 实验试剂与耗材 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 检测外泌体对肌腱干细胞增殖能力的影响 |
| 4.3.2 检测外泌体对肌腱干细胞迁移能力的影响 |
| 4.3.3 检测外泌体对ITD1预处理肌腱干细胞增殖能力的影响 |
| 4.3.4 检测外泌体对ITD1预处理肌腱干细胞迁移能力的影响 |
| 4.3.5 数据分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 5 外泌体诱导的肌腱干细胞信号通路 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验仪器与试剂 |
| 5.2.1 实验仪器 |
| 5.2.2 实验试剂与耗材 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 检测外泌体诱导肌腱干细胞蛋白的表达 |
| 5.3.2 灰度分析法定量蛋白质表达 |
| 5.3.3 检测外泌体对PD98059预处理肌腱干细胞迁移能力的影响 |
| 5.3.4 数据分析 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（2）肿瘤相关成纤维细胞与卵巢癌细胞顺铂耐药研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 一、前言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 卵巢癌与癌成纤维细胞的关系及研究进展 |
| 参考文献 |
（3）PARP抑制剂促进卵巢癌间质成纤维细胞CCL5自分泌活化成纤维细胞的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 一、PARP 抑制剂对成纤维细胞 DNA 损伤修复及周期分布的作用 |
| 二、PARP 抑制剂增加间质成纤维细胞的活化程度 |
| 三、PARP 抑制剂处理后的成纤维细胞表现出独特的分泌表型 |
| 四、生物信息学提示 CCL5 与间质成纤维细胞活化有关 |
| 五、实验证明 CCL5 参与 PARP 抑制剂维持的间质成纤维细胞活化 |
| 六、PARP 抑制剂通过 NF-κB 信号通路诱导成纤维细胞中 CCL5 表达 |
| 七、抑制成纤维细胞活化增强了 PARP 抑制剂体内抗肿瘤作用 |
| 八、临床标本中验证 PARP 抑制剂对间质成纤维细胞的活化作用 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 肿瘤相关成纤维细胞在卵巢癌进展及耐药中的作用 |
| 参考文献 |
| 附录1 攻读学位期间发表论文目录 |
| 致谢 |
（4）间质干细胞亚群及其胞外囊泡对卵巢癌和乳腺癌影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词中英文注释表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 间质干细胞 |
| 1.2.1 间质干细胞生物学特性 |
| 1.2.2 间质干细胞分离培养及保存 |
| 1.2.3 间质干细胞与肿瘤 |
| 1.2.4 间质干细胞在肿瘤中的治疗潜力 |
| 1.2.5 MSCs在细胞治疗中的应用挑战 |
| 1.3 胞外囊泡 |
| 1.3.1 胞外囊泡的生物学特性与功能 |
| 1.3.2 胞外囊泡的分离、鉴定及保存 |
| 1.3.3 胞外囊泡与肿瘤 |
| 1.3.4 胞外囊泡作为肿瘤治疗物 |
| 1.3.5 间质干细胞来源胞外囊泡的特性 |
| 1.3.6 间质干细胞来源胞外囊泡与肿瘤 |
| 第二章 研究目的、方法、方案及意义 |
| 2.1 研究目的 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.3 研究模式图 |
| 2.4 实验设计方案 |
| 2.4.1 间质干细胞的分离和鉴定 |
| 2.4.2 CB-MSCs对肿瘤细胞生物学特性的影响 |
| 2.4.3 CD90~(low) ADSCs诱导和鉴定及其对肿瘤细胞的影响 |
| 2.4.4 CD90~(low) ADSC-EVs鉴定及其对肿瘤细胞的影响 |
| 2.5 研究意义 |
| 第三章 BM-MSCS和CB-MSCS的分离培养和鉴定 |
| 3.1 试剂材料与仪器 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 实验试剂和耗材 |
| 3.1.3 本课题中使用的流式抗体 |
| 3.1.4 实验仪器 |
| 3.2 相关溶液的配制 |
| 3.2.1 冻存液的配制(10 mL) |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 BM-MSCs分离培养及传代 |
| 3.3.2 CB-MSCs分离及培养 |
| 3.3.3 细胞的消化传代 |
| 3.3.4 细胞的冻存与复苏 |
| 3.3.5 流式细胞术分析 |
| 3.3.6 间质干细胞多向分化能力鉴定 |
| 3.3.7 统计分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 BM-MSCs和CB-MSCs分离培养 |
| 3.4.2 BM-MSCs和CB-MSCs表面标志鉴定 |
| 3.4.3 CB-MSCs表达更高的SCA-1 和更低的CD90与BM-MSCs相比 |
| 3.4.4 BM-MSCs和CB-MSCs多向分化能力鉴定 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 CB-MSCS在卵巢癌治疗中的作用及机制 |
| 4.1 试剂材料与仪器 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验试剂和耗材 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 相关溶液的配制 |
| 4.2.1 D-Luciferin配制 |
| 4.2.2 完全培养基DMEM或RPMI-1640 配制(500 mL) |
| 4.2.3 肿瘤组织消化液配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 BM-MSCs和CB-MSCs分离及培养 |
| 4.3.2 3D培养CB-MSCs |
| 4.3.3 LPS和VIC-008 对CB-MSCs的刺激 |
| 4.3.4 RNA的提取 |
| 4.3.5 mRNA逆转录 |
| 4.3.6 实时荧光定量PCR |
| 4.3.7 肿瘤细胞培养 |
| 4.3.8 动物模型及处理 |
| 4.3.9 肿瘤生长和小鼠存活曲线 |
| 4.3.10 脾细胞的处理和体外刺激 |
| 4.3.11 ELISA |
| 4.3.12 腹水细胞和肿瘤组织的处理 |
| 4.3.13 统计分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 CB-MSCs抑制卵巢癌生长并延长小鼠生存期 |
| 4.4.2 CD90~(low) CB-MSCs中免疫激活细胞因子基因表达增加,免疫抑制细胞因子基因表达减少 |
| 4.4.3 CD90~(low) CB-MSCs联合VIC-008 进一步提高抗卵巢癌疗效 |
| 4.4.4 CB-MSCs+VIC-008 联合治疗减少了脾脏中的Treg细胞的数量,激活了CD8~+ T细胞 |
| 4.4.5 联合治疗降低了肿瘤环境中Treg细胞的数量,激活了CD8~+ T细胞 |
| 4.5 讨论 |
| 第五章 CD90LOW ADSCS在乳腺癌治疗中的作用研究 |
| 5.1 试剂材料与仪器 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 实验试剂和耗材 |
| 5.1.3 实验仪器 |
| 5.2 相关溶液的配制 |
| 5.2.1 完全培养基DMEM或RPMI-1640 配制(500 mL) |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 ADSCs分离及培养 |
| 5.3.2 流式细胞术分析 |
| 5.3.3 ADSCs多向分化能力鉴定 |
| 5.3.4 细胞系及培养 |
| 5.3.5 肿瘤模型及处理 |
| 5.3.6 统计分析 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 ADSCs分离培养及诱导 |
| 5.4.2 流式细胞术检测分析诱导后ADSCs的表型 |
| 5.4.3 T-SNE分析ADSCs表面分子之间的联系 |
| 5.4.4 ADSCs多向分化能力鉴定 |
| 5.4.5 CD90~(low) ADSCs在体内抑制乳腺癌细胞生长 |
| 5.5 讨论 |
| 第六章 CD90LOW ADSCS-EVS在乳腺癌中的作用研究 |
| 6.1 试剂材料与仪器 |
| 6.1.1 实验动物 |
| 6.1.2 实验试剂和耗材 |
| 6.1.3 实验仪器 |
| 6.2 相关溶液的配制 |
| 6.2.1 Western-blot相关试剂的配制 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 ADSCs分离及培养 |
| 6.3.2 ADSC-EVs分离及鉴定 |
| 6.3.3 透射电镜样本制备 |
| 6.3.4 扫描电镜样本制备 |
| 6.3.5 ADSC-EVs蛋白的提取 |
| 6.3.6 Western-blot |
| 6.3.7 NTA检测 |
| 6.3.8 平板克隆实验 |
| 6.3.9 划痕实验 |
| 6.3.10 Transwell |
| 6.3.11 改造ADSC-EVs及转染 |
| 6.3.12 流式细胞术分析细胞凋亡 |
| 6.3.13 肿瘤模型及处理 |
| 6.3.14 统计分析 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.4.1 ADSCs-EVs分离及鉴定 |
| 6.4.2 NTA检测分析ADSCs-EVs粒径 |
| 6.4.3 CD90~(low) ADSC-EVs在体外抑制乳腺癌细胞增殖 |
| 6.4.4 CD90~(low) ADSC-EVs在体外抑制乳腺癌细胞迁移 |
| 6.4.5 CD90~(low) ADSC-EVs在体内抑制乳腺癌生长 |
| 6.4.6 MiR165p增强CD90~(low) ADSCs-EVs的凋亡能力 |
| 6.4.7 MiR165p增强CD90~(low) ADSCs-EVs在体内的抗乳腺癌作用 |
| 6.5 讨论 |
| 第七章 主要结论与展望 |
| 7.1 主要结论 |
| 7.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及获奖 |
| 一、发表论文情况 |
| 二、获奖情况 |
（5）CTHRC1通过JNK1/2信号通路介导IL-1β诱导的成软骨细胞凋亡（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 综述 CTHRC1在胶原表达及转化生长因子β信号转导中的作用 |
| 参考文献 |
（6）癌相关成纤维细胞及其外泌体在卵巢癌转移中的作用（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 癌相关成纤维细胞促进卵巢癌腹水多细胞聚集体的形成及转移 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 癌相关成纤维细胞外泌体促进卵巢癌转移 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（7）DNA甲基化在心脏成纤维细胞分化过程中调控α平滑肌肌动蛋白表达的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 主要缩略词表(ABBREVIATION) |
| 绪论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 第一部分 梗死后心肌纤维化与DNA甲基化修饰相关 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 DNA甲基化修饰参与心脏成纤维细胞的分化及增殖过程 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 TGF-β_1 通过Smad以及MAPK信号通路调控心脏成纤维细胞的增殖与分化 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）TAM-GBM细胞杂交促胶质母细胞瘤侵袭及机制和多基因风险评分的预后价值（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 第一部分 肿瘤相关巨噬细胞与胶质母细胞瘤细胞杂交促胶质母细胞瘤侵袭及机制 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 TAM-GBM细胞杂交的鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 TAM-GBM杂交细胞的转录组特征 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 TAM-GBM细胞杂交对胶质母细胞瘤侵袭的影响及机制 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第二部分 多基因风险评分在胶质母细胞瘤中的预后价值 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 胶质母细胞瘤多基因风险评分模型的建立 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 多基因风险评分在胶质母细胞瘤中的预后价值评估 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 细胞杂交在肿瘤发生发展中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（9）MT2-MMP在肾透明细胞癌中的表达及其在肿瘤增殖和侵袭中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 :MT2-MMP在肾透明细胞癌组织中的表达及临床意义 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 :MT2-MMP对于肾透明细胞癌生物学行为影响的研究 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 :表达谱基因芯片筛选稳定转染sh MT2-MMP基因的肾癌细胞中肿瘤增殖侵袭相关差异表达基因 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 综述 基质金属蛋白酶与肿瘤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 致谢 |
（10）透明质酸水凝胶缓释雪旺细胞外泌体修复坐骨神经长节段缺损的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、外泌体的分离与鉴定 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 主要材料与试剂 |
| 1.1.2 主要仪器和设备 |
| 1.1.3 主要试剂配置方法 |
| 1.1.4 实验方法 |
| 1.1.5 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 雪旺细胞的形态 |
| 1.2.2 雪旺细胞在体外的贴壁和增殖活性 |
| 1.2.3 雪旺细胞体外培养纯度鉴定 |
| 1.2.4 雪旺细胞分泌的外泌体的形态和粒径鉴定 |
| 1.2.5 雪旺细胞分泌的外泌体表面标志物的鉴定 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、外泌体的体外生物学功能及体外缓释研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要材料与试剂 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 |
| 2.1.3 主要试剂配置方法 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.1.5 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 透明质酸水凝胶包裹雪旺细胞外泌体及体外缓释曲线 |
| 2.2.2 雪旺细胞外泌体促进DRG组织轴突生长 |
| 2.2.3 雪旺细胞外泌体对雪旺细胞增殖的影响 |
| 2.2.4 雪旺细胞外泌体对雪旺细胞生物活性物质表达的影响 |
| 2.2.5 雪旺细胞外泌体对DRG神经元的生物活性物质表达影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、雪旺细胞外泌体促进大鼠长节段坐骨神经缺损修复 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要材料和试剂 |
| 3.1.2 主要仪器和设备 |
| 3.1.3 实验动物及分组 |
| 3.1.4 实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 扫描电镜观察电纺PCL导管大体及微细结构 |
| 3.2.2 静电纺丝PCL神经导管的力学参数和孔隙率 |
| 3.2.3 雪旺细胞外泌体促进神经轴突再生 |
| 3.2.4 NF-200和S100 对各组再生神经的免疫荧光染色 |
| 3.2.5 三组大鼠坐骨神经电生理参数比较 |
| 3.2.6 三组大鼠坐骨神经指数比较 |
| 3.2.7 三组大鼠荧光金逆行示踪 |
| 3.2.8 三组大鼠腓肠肌HE染色分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 外周神经损伤修复的材料与治疗进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、转化生长因子β_1、Ⅳ型胶原酶与卵巢癌（论文参考文献）
- [1]外泌体对肌腱干细胞生物学功能影响的研究[D]. 李茗达. 大连理工大学, 2021(01)
- [2]肿瘤相关成纤维细胞与卵巢癌细胞顺铂耐药研究[D]. 江玉. 安徽医科大学, 2021(01)
- [3]PARP抑制剂促进卵巢癌间质成纤维细胞CCL5自分泌活化成纤维细胞的研究[D]. 李晓婷. 华中科技大学, 2020(01)
- [4]间质干细胞亚群及其胞外囊泡对卵巢癌和乳腺癌影响的研究[D]. 李涛. 江苏大学, 2020(01)
- [5]CTHRC1通过JNK1/2信号通路介导IL-1β诱导的成软骨细胞凋亡[D]. 张琦. 安徽医科大学, 2020(01)
- [6]癌相关成纤维细胞及其外泌体在卵巢癌转移中的作用[D]. 韩庆. 华中科技大学, 2019(01)
- [7]DNA甲基化在心脏成纤维细胞分化过程中调控α平滑肌肌动蛋白表达的机制研究[D]. 何砚如. 东南大学, 2019(05)
- [8]TAM-GBM细胞杂交促胶质母细胞瘤侵袭及机制和多基因风险评分的预后价值[D]. 曹棉富. 中国人民解放军陆军军医大学, 2019
- [9]MT2-MMP在肾透明细胞癌中的表达及其在肿瘤增殖和侵袭中的作用机制研究[D]. 陈一鸣. 苏州大学, 2019(06)
- [10]透明质酸水凝胶缓释雪旺细胞外泌体修复坐骨神经长节段缺损的实验研究[D]. 王宇强. 天津医科大学, 2019(02)
标签：肿瘤论文; 成纤维细胞论文; 转化生长因子-β论文; 肿瘤异质性论文; 胶质母细胞瘤论文;