一、萌动激活赤灵芝孢子对肝脏的保护作用研究(摘要)（论文文献综述）
吕晗莹[1]（2021）在《肠道菌群分析在幼龄动物药物安全性评价中的应用研究》文中研究说明肠道菌群已被认为是机体的一大重要的“功能器官”,参与机体的生长发育和体内药物的代谢过程,肠道菌群的构成与药物代谢对机体的影响密切相关。幼龄动物作为儿科药物非临床安全性评价的载体,由于其肠道菌群仍处于形成与发育阶段,与药物毒性有着密切联系,因而肠道菌群的组成在药物安全性评价中尤为重要。但目前对于幼龄动物肠道菌群的研究较少,同时也没有过多研究将肠道菌群作为一项药物安全性评价指标。目的:1.本研究拟通过对健康幼龄动物（大鼠、猴）不同年龄阶段的粪便进行肠道菌群分析,探究正常幼龄动物与成年动物肠道菌群的变化规律;2.以去壁灵芝孢子粉为例,考察给药后幼龄动物肠道菌群变化特征及其与免疫、行为学等相关幼龄动物毒理学指标的关系。方法:1.幼龄及成年动物正常肠道菌群比较分析:采集不同年龄阶段的SD大鼠（出生后45天（Postnatal Day,PND45）、PND65、PND92,雌雄各半,n分别为5、10和6）、食蟹猴（1-1.5岁、3-4岁,均雄性,n=8）的粪便,进行16S rRNA检测,对检测结果进行分析,分析不同年龄阶段（从幼龄到成年）的优势菌和肠道菌群动态规律。2.去壁灵芝孢子粉幼龄大鼠6周重复给药毒性试验及肠道菌群分析:1)PND21幼龄SD大鼠128只,雌雄各半,采用体重均衡随机分组法分为4组,即溶媒对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组32只,于PND24开始分别按10m L/kg给药体积经口灌胃给予纯水、去壁灵芝孢子粉0.8 g/kg、1.8 g/kg和4.0 g/kg,每天给药1次,连续给药6周,停药后恢复观察4周。停药和恢复期结束检查时,通过检测各项常规幼龄动物毒理学指标考察去壁灵芝孢子粉对幼龄大鼠生长发育及其毒性的影响。并采集幼龄大鼠停药和恢复期结束检查时粪便,进行肠道菌群16S rRNA检测分析,寻找不同时期的差异菌,并与常规免疫毒性、行为学相关毒理学指标进行相关性分析。2)另取PND21幼龄SD大鼠60只,雌雄各半,采用体重均衡随机分组法分为3组,即溶媒对照组、低剂量组和高剂量组,每组20只,按照上述试验相同方案（仅溶媒对照、低剂量和高剂量组）进行给药,并进行T细胞依赖性抗体反应（T-cell dependent antibody response,TDAR）试验,即于去壁灵芝孢子粉给药4周、停药恢复2周时（5只/性别/时间点）,各组幼龄大鼠分别尾静脉注射钥孔戚血蓝素（keyhole limpet hemocyanin,KLH）1ml/只,各时间点分别于KLH注射后1周、2周检测血清中KLH-Ig M、KLH-Ig G抗体滴度;并采集对应时期的粪便经肠道菌群分析,分析给药后TDAR指标与肠道菌群之间的关系。结果:1.幼龄及成年健康动物肠道菌群比较分析:（1）SD大鼠:基于16S rRNA测序,在正常大鼠（从幼龄到青少年到成年）肠菌的PCA、PCo A分析中发现,随着大鼠日龄的增加,肠道菌群结构发生明显变化,并逐渐趋于稳定。PND45幼龄大鼠优势菌分别为厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌纲（Bacteroidia）、杆菌纲（Bacilli）、拟杆菌目（Bacteroidales）、Muribaculaceae科、乳酸杆菌科（Lactobacillaceae）、norank＿f＿Muribaculaceae属和乳杆菌属（Lactobacillus）,PND65和PND92大鼠优势菌相似,两者共同优势菌为厚壁菌门、拟杆菌纲、拟杆菌目、Muribaculaceae科、norank＿f＿Muribaculaceae属。（2）食蟹猴:基于16S rRNA测序,1-1.5岁幼龄猴与3-4岁成年猴肠道菌群的PCA和PCo A分析中发现,两组间肠菌构成相似,且其在门、纲、目、科、属水平上的优势菌均相同,分别为厚壁菌门（Firmicute）、拟杆菌纲（Bacteroidia）、拟杆菌目（Bacteroidales）、普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）、普氏菌属（Prevotella）,提示1-1.5岁幼龄猴的肠道菌群丰度分布及多样性已接近成年水平。2.去壁灵芝孢子粉幼龄大鼠6周重复给药毒性试验及肠道菌群分析:（1）去壁灵芝孢子粉给药6周后,幼龄大鼠免疫指标（CD3+CD4+%、TDAR试验—KLH-Ig G抗体滴度）和行为学指标（Morris水迷宫—目标象限内时间百分比）明显升高,提示去壁灵芝孢子粉对免疫功能有增强调节作用,并可能提高幼龄大鼠的学习记忆能力。（2）基于16S rRNA测序分析发现,停药检查时期雄性幼龄大鼠肠道菌群多样性发生显着性改变,而在恢复期多样性无显着性变化,经PCA和PCo A分析发现两个时期雌雄幼龄大鼠肠菌组成相似。两个时期雌雄幼龄大鼠的差异菌各不相同。将差异菌与常规免疫（外周血淋巴细胞分型）和行为学指标进行相关性分析发现,停药检查时,雌雄幼龄大鼠差异菌与免疫和行为学指标之间无显着相关性,恢复期结束时,丁酸单胞菌属（Butyricimonas）、消化球菌属（Peptococcus）、和Marinifilaceae科相对丰度的降低以及普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）相对丰度的增加可能分别与雄性幼龄大鼠免疫和行为学指标变化有关;伯克氏菌目（Burkholderiales）、Parasutterella属、和Intestinimonas属相对丰度的增加以及Frisingicoccus属相对丰度的降低可能与给予去壁灵芝孢子粉后雌性幼龄大鼠免疫指标的变化有关;普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）、Bacteroides＿pectinophilus＿group属、Oscillospirales目和Allobaculum属相对丰度的增加可能与给予去壁灵芝孢子粉后雌性幼龄大鼠学习记忆指标提高有关。其中Allobaculum属在给药后出现,考虑可能是提高学习记忆能力的关键菌。（3）TDAR试验中,将幼龄大鼠组间差异菌与KLH抗体滴度进行相关性分析进一步验证了肠道菌群与幼龄动物机体免疫之间的关系,发现停药检查时期Dubosiella属、杆菌纲（Bacilli）、梭菌科（Clostridiaceae）、梭菌目（Clostridiales）、Faecalibaculum属、UCG＿005属、Candidatus＿Stoquefichus属、弯曲菌属（Turicibacter）、Clostridium＿sensu＿stricto＿1属、Enterorhabdus属、双歧杆菌科（Bifidobacteriaceae）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）、双歧杆菌目（Bifidobacteriales）和放线菌纲（Actinobacteria）相对丰度的降低以及Eubacterium＿ventriosum＿group属、Frisingicoccus属和丁球菌科（Butyricicoccaceae）相对丰度的增加可能与给予去壁灵芝孢子粉后雄性幼龄大鼠TDAR增强有关,其中梭菌目、双歧杆菌科/属可能为主要相关菌。结论:1.本研究对于不同年龄阶段（从幼龄到成年）SD大鼠及食蟹猴肠道菌群的构成和动态规律分析结果表明,PND45幼龄大鼠的优势菌与PND65青少年大鼠和PND92成年大鼠优势菌不同,后两者优势菌相似;1-1.5岁幼龄猴与3-4岁成年猴的肠道菌群优势菌及多样性相似。2.去壁灵芝孢子粉给药6周后对于幼龄大鼠免疫力和学习记忆能力有所增强,并且肠道菌群构成发生了明显变化;部分差异菌丰度的改变与上述幼龄毒理学指标密切相关,提示肠道菌群与幼龄动物免疫和学习记忆能力有关,为肠道菌群作为一种新的儿科药物非临床安全性评价指标提供一定的科学参考。
刘新超[2]（2020）在《长根菇菌糠多糖对CCl4诱导的慢性肝损伤的修复作用》文中研究说明食用菌菌糠富含多糖等生物活性物质,合理有效利用菌糠既可以解决资源浪费、环境污染问题,又可以延长食用菌产业链。本课题优化了长根菇菌糠多糖（Oudemansiella radicata residue polysaccharides,RPS）的提取条件,分析了RPS的单糖组成、键型以及对CCl4诱导的慢性肝损伤（Chronic liver injury,CLI）小鼠的体内抗氧化、抗炎症、抗纤维化和抗细胞凋亡等修复作用。主要研究结果如下:（1）RPS的提取优化。Plackett-Burman（PB）和响应面（Response surface methodology,RSM）试验确定了RPS的最佳提取条件为加水倍数40、提取次数2.08、醇沉时间24h,在此条件下,预测理论得率为3.41%。为方便操作,调整提取工艺条件为加水倍数40、提取次数2、醇沉时间24h,在此条件下,预测理论得率为3.40%,实际验证得率为3.38%。经除蛋白、脱色素、透析和冷冻干燥等步骤得到纯化后RPS。（2）RPS的结构分析。高效液相色谱（High performance liquid chromatography,HPLC）结果表明,半乳糖、木糖和阿拉伯糖是RPS中的主要单糖,摩尔比为2.25:2.72:2.34。红外光谱（Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR）分析,RPS具有多糖的特征吸收峰,是含有β-型糖苷键的吡喃糖。（3）RPS对CCl4诱导的慢性肝损伤的修复作用。（1）RPS干预后,高剂量RPS（400mg/kg）能显着提高小鼠肝脏中抗氧化酶超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）活性;降低细胞色素P450 2E1（Cytochrome P4502E1,CYP2E1）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）和脂质过氧化物（Lipid peroxidation,LPO）水平,有效抑制肝脏中脂质过氧化作用。（2）肝脏中促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）和白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）水平显着下降。（3）免疫印迹结果表明,RPS通过降低NF-κB通路中促炎因子p-p65（Phosphorylated p65,磷酸化p65）的表达水平和增加炎症抑制因子I-κBα（Inhibitor of nuclear factor kappa-Bα,核因子κB抑制蛋白α）的表达水平来减轻炎症反应。（4）RPS能通过降低促纤维化细胞因子TGF-β1（Transforming growth factor-β1,转化生长因子-β1）的水平来缓解肝纤维化。（5）定量实时聚合酶链反应（Quantitative real-time PCR,qRT-PCR）结果表明RPS可通过下调Bax的相对mRNA表达量并上调Bcl-2（B-cell lymphoma-2,B淋巴细胞瘤-2）的相对mRNA表达量来实现抗细胞凋亡作用。（6）小鼠肝脏组织病理学观察包括苏木精-伊红（Hematoxylin and eosin,H&E）染色、马松染色和细胞凋亡荧光染色分别说明RPS可以改善小鼠的炎症、纤维化和细胞凋亡的程度。上述结果表明RPS具有体内抗氧化、抗炎症、抗纤维化和抗细胞凋亡活性,能一定程度上对CCl4诱导的慢性肝损伤起到修复作用,为天然保肝护肝药物开发提供新的参考。
王方[3]（2020）在《灵芝孢子粉破壁前后质量评价及药效学研究》文中研究说明目的:从性状、鉴别、常规质量检查、重金属含量、主要成分含量等方面系统地对破壁前后灵芝孢子粉质量进行评价,建立灵芝孢子粉破壁前后指纹图谱,探究二者在抗氧化和调节肠道菌群方面药效作用差异,以期为指导灵芝孢子粉的规范化生产和临床应用提供理论依据。方法:参照《中国药典》（2015年版）中“灵芝”项下各标准,对破壁前后灵芝孢子粉外观性状、显微观察、薄层鉴别、水分、总灰分、浸出物含量进行检查与测定,观察不同温度、湿度、不同厂家生产薄层板对薄层色谱的影响;利用原子分光光度法对重金属含量进行测定;利用紫外-分光光度法对多糖、总三萜含量进行测定;通过HPLC法建立破壁前后灵芝孢子粉指纹图谱;建立小鼠游泳力竭模型,通过检测小鼠血清及肝脏指标和病理切片结果,对比灵芝孢子粉破壁前后抗氧化能力的差异;建立小鼠急性肝损伤动物模型,检测肝功、抗炎指标和病理切片,收集小鼠粪便通过16S rDNA测序,探究灵芝孢子粉破壁前后对肠道菌群变化的影响。结果:1.未破壁与破壁灵芝孢子粉分别显浅棕色与深褐色,显微镜下未破壁孢子粉呈完整卵形,破壁孢子粉呈不规则碎片状;未破壁与破壁灵芝孢子粉与对照品在同一位置显相同颜色荧光斑点,温度、湿度及不同厂家薄层板对薄层色谱无影响;10批破壁与未破壁孢子粉水分平均含量分别为8.16%、10.77%;总灰分平均含量分别为0.87%、0.64%;酸不溶性灰分平均含量分别为0.31%、0.16%;破壁孢子粉重金属Cu、Hg、As、Pd、Cd平均含量分别为16.17、0.023、0.79、2.42、0.34 ppm,未破壁灵芝孢子粉平均含量为13.17、0.018、0.64、2.93、0.44 ppm;浸出物破壁与未破壁孢子粉平均含量分别为5.86%、7.48%;蒽酮硫酸法测得破壁与未破壁孢子粉多糖平均含量分别为1.664%、0.979%;苯酚-硫酸法分别为1.586%、1.001%;总三萜平均含量分别为4.169%、2.292%。2.10批未破壁与破壁灵芝孢子粉共识别出9个共有峰,10批破壁孢子粉样品相似度较好,在96.9%100.0%之间,10批未破壁孢子粉中W4、W5相似度较低,可能原因是产地及培养时所采用的培养基不同。3.抗氧化药理实验结果显示破壁与未破壁灵芝孢子粉均能不同程度提高力竭小鼠体内抗氧化酶活性,抑制丙二醛、一氧化碳的生成;对力竭所致肝细胞损伤出现的水肿、气球样变性有改善作用。4.肠道菌群实验中,破壁灵芝孢子粉对减少小鼠血清中转氨酶含量、抑制炎症因子的释放有显着作用;未破壁组能降低谷草转氨酶含量,但效果不显着;破壁组肝细胞空泡变性数量少于未破壁组;治疗后破壁组拟杆菌、厚壁菌、放线菌等有益菌多样性高于未破壁组,致病菌如变形菌、念珠菌多样性低于未破壁组。结论:破壁后灵芝孢子粉主要药效成分多糖与总三萜含量均高于未破壁灵芝孢子粉,因此初步认为破壁的灵芝孢子粉质量优于未破壁的灵芝孢子粉;抗氧化能力对比实验说明二者抗氧化的同时,能够对肝脏起到保护作用,破壁组抗氧化酶活性指标高于未破壁组,且损伤面小于未破壁组,说明破壁效果优于未破壁;肠道菌群实验结果可以看出,灵芝孢子粉降低肝细胞中炎症因子含量、调节肠道内群落分布与组成,破壁孢子粉较未破壁孢子粉优势菌群数量增多,致病菌数量减少,说明破壁灵芝孢子粉调节肠道菌群及保护机体能力优于未破壁灵芝孢子粉。
王兰芳[4]（2019）在《芝芪康艾颗粒的制剂工艺、质量标准、初步安全性和药效研究》文中提出“芝芪康艾颗粒”（芝康颗粒）系金元医家李东垣《脾胃论》中所载“补中益气汤”基础上筛选组合而成的有效经验方,由黄芪、灵芝、黄芩等八味中药组成,作为艾滋病（Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS）治疗的辅助用药,具有一定疗效。该研究对芝康颗粒的制剂工艺、质量标准、初步安全性与药效学进行了探讨,以期为生产与临床用药提供理论依据。方法:（1）芝康颗粒的制剂工艺研究:采用单因素和正交试验设计方法,确定最佳水提和制备工艺。（2）芝康颗粒的质量标准研究:用薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）对有效成分进行定性定量研究,确立质量标准。（3）芝康颗粒的急性毒性试验研究:将清洁级昆明小鼠40只分为对照组、给药组,给药组以最大药物浓度1 g/mL,最大给药体积0.4 mL/10g,24 h内灌胃给药（i.g.）2次。对照组给予等体积纯化水,连续i.g.14 d,观察小鼠活动状态,测定小鼠饮食饮水量、体重、脏器指数,制作苏木素-伊红染色（HE染色）组织切片,并计算一日内最大耐受量。（4）芝康颗粒的药效学试验研究:将174只清洁级昆明小鼠分为正常组、模型组、贞芪扶正颗粒组和芝康颗粒低、中、高剂量组,每组29只。以80 mg/kg腹腔注射（i.p.）环磷酰胺（CTX）建立免疫抑制小鼠模型,连续3 d,以一周一次进行加强,连续i.g.14 d,检测小鼠脏器指数、吞噬细胞吞噬能力、血常规、T淋巴细胞亚群比例以及血清细胞因子白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）水平,制作HE组织切片。结果:（1）（1）水提工艺:除灵芝外的全处方药材以10、8、8倍水提取3次,提取时间分别为60 min、60 min、30 min;灵芝药材以12、9、9倍加水量提取3次,每次40 min,浓缩,制备浸膏粉。（2）制剂工艺:以干浸膏粉:可溶性淀粉1:1.5混合加70%乙醇润湿制软材,45℃干燥。（2）可检出黄芪、黄芩、灵芝的特征斑点,阴性对照无干扰;黄芩苷在0.2122.120μg（r=0.9993）范围内线性关系良好,平均回收率为98.40%。（3）与对照组相比,除给药组肝脏HE切片下出现肝细胞轻微变性外,其他器官均无变化;小鼠一日内最大耐受量为临床成人用药的217.2倍。（4）与对照组相比,模型组小鼠胸腺指数降低（p﹤0.01）,碳廓清指数K与吞噬指数α降低,胸腺和脾脏显微结构萎缩、紊乱,外周血白细胞、淋巴细胞、红细胞数目以及血红蛋白含量降低（p﹤0.05;p﹤0.01;p﹤0.01;p﹤0.01）;外周血CD8+%以及血清中IL-6、TNF-α、IFN-γ含量下降（p﹤0.01）,CD4+/CD8+比值升高（p﹤0.01）,表明造模成功。与模型组相比,芝康颗粒中剂量组外周血白细胞、淋巴细胞数目升高（p﹤0.05）;芝康颗粒高剂量组小鼠的胸腺指数恢复正常,胸腺与脾脏组织结构逐渐恢复,廓清指数K与吞噬指数α升高（p﹤0.01）;芝康颗粒中、高剂量组CD8+%、IL-6、IFN-γ升高（p﹤0.01;p﹤0.01;p﹤0.05）,CD4+/CD8+比值降低（p﹤0.01）;芝康颗粒高剂量组血清中IL-6、TNF-α、IFN-γ含量升高（p﹤0.01）。结论:得到了经优化的制剂工艺;建立的质控标准,稳定,便于操作;本制剂的毒性较小,安全、可靠;该制剂能提高免疫抑制小鼠的非特异与特异性免疫,增强机体免疫功能。
张昕[5]（2019）在《真菌免疫调节蛋白超表达载体的构建及金针菇遗传转化》文中研究指明真菌免疫调节蛋白（FIPs）是一种提取于高等真菌的小分子蛋白质,其具有与免疫球蛋白重链区相似的结构且生物学活性与植物凝集素相似。已发现的多种真菌免疫调节蛋白均具有凝集血细胞、抗肿瘤、抗过敏、促淋巴细胞增殖等生物学活性,使其具有良好的临床应用前景。目前FIP的功能研究主要集中在对人体和动物的生物学作用,而其对真菌本身的生物学功能尚不清楚。本研究以金针菇为研究对象,构建FIP-fve和LZ-8超表达载体,通过农杆菌介导法转入金针菇,得到阳性转化子;将FIP-fve基因超表达、FIP-fve基因沉默和野生型金针菇进行栽培,对比和分析表型变化,提取蛋白并进行蛋白质检测分析,为研究FIP-fve对金针菇本体的生物学功能奠定基础。首先,本论文克隆了FIP-fve基因和LZ-8基因,并构建相应的表达载体,其中构建了两种FIP-fve超表达载体,一种是pCAMBIA1301-FIP-fve,是在pCAMBIA1301载体的35S启动子后连入目的基因FIP-fve,另一种是pCAMBIA1301-GPD-FIP-fve,是将金针菇内源启动子GPD基因同FIP-fve基因插入pCAMBIA1301多克隆位点,随后构建LZ-8基因超表达载体pCAMBIA1303-GPD-LZ-8,同样将GPD启动子基因和LZ-8基因插入多克隆位点。其次,选用农杆菌介导转化的方法,建立并完善超表达载体的金针菇遗传转化体系,侵染材料为1 cm2的金针菇菌丝块,侵染条件为农杆菌菌液浓度OD600为0.5,农杆菌菌液中加入AS至终浓度为200μmol·L-1,侵染时间为30 min。25℃下,在含有200μmol·L-1AS的共培养基中培养3天,用含有9μg·mL-11 Hyg的YPG培养基进行筛选,最终获得了FIP-fve超表达的金针菇转化子,其中,pCAMBIA1301-FIP-fve转金针菇的农杆菌转化效率为17.5%,pCAMBIA1301-GPD-FIP-fve转金针菇的转化效率为22.5%,而pCAMBIA1303-GPD-LZ-8转金针菇的转化效率为10%。最后,将筛选出的FIP-fve基因超表达的金针菇进行菌丝培养,同FIP-fve基因沉默金针菇和野生型金针菇共同进行实验室内栽培,至子实体成熟,观察金针菇表型变化,并提取蛋白进行蛋白质检测分析。野生型金针菇中菇原基数为46,pCAMBIA1301-GPD-FIP-fve转金针菇的三株FIP-fve超表达金针菇的菇原基数分别为69,55和71;pCAMBIA1301-FIP-fve转金针菇的三株FIP-fve超表达金针菇的菇原基数分别为92,116和51。采用Bradford法测试金针菇子实体总蛋白含量,结果表明FIP-fve基因超表达的金针菇蛋白浓度与野生型金针菇蛋白浓度相近,而FIP-fve基因沉默的金针菇总蛋白浓度相对较低。另外,通过SDS-PAGE分析目的蛋白质FIP-fve的含量,结果表明野生型金针菇中FIP-fve的含量为0.73 mg·g-1,pCAMBIA1301-GPD-FIP-fve转金针菇的三株FIP-fve超表达金针菇的FIP-fve含量分别为0.75 mg·g-1,0.76 mg·g-1和0.75 mg·g-1;pCAMBIA1301-FIP-fve转金针菇的三株FIP-fve超表达金针菇的FIP-fve含量分别为0.80 mg·g-1,0.71 mg·g-1和0.76 mg·g-1;FIP-fve基因沉默的金针菇中FIP-fve含量为0.71 mg·g-1和0.69 mg·g-1,进一步进行Western Blot检测,结果表明,FIP-fve超表达的金针菇中FIP-fve表达量升高,FIP-fve基因沉默的金针菇中FIP-fve表达量下降。
贾硕[6]（2019）在《黑灵芝甾醇组分制备、抑菌活性及其体外抗氧化活性研究》文中提出灵芝是中国传统医学中重要中药材之一,具有多种药理学作用。迄今为止,国内外对于灵芝的功效成分和保健作用已进行大量的研究。课题组前期研究发现甾醇类化合物是灵芝子实体,孢子中含量较高的生物活性物质,并对机体能起到多种调节作用,然而黑灵芝甾醇类化合物活性的文献报道相对较少。本论文对黑灵芝甾醇提取,分离纯化,抗菌活性,体外抗氧化活性进行了研究。主要结果如下:1.以麦角甾醇和游离甾醇的提取率为指标进行单因素实验,根据乙醇比例、时间和温度进行响应面设计,确定单次浸提游离甾醇得率最高的工艺条件为:乙醇比例100%,水浴温度76.3°C,时间4 h,理论最大得率6253μg/g,对试验进行验证得黑灵芝游离甾醇得率6092μg/g。2.本文研究了麦角甾醇,麦角甾醇酯与黑灵芝甾醇组分的抗菌活性差异,在对细菌的抑制试验中,黑灵芝甾醇组分的抗菌能力强度总体高于麦角甾醇和麦角甾醇酯标准品,但三种受试样品对两种青霉均未表现出抑制作用。此外,对黑灵芝氯仿萃取物中甾醇单体化合物的分离纯化,分别以Daigesol,μBondapark,Kromasil色谱柱进行分离纯化得到单体化合物7,22-麦角二烯酮。3.通过DPPH,MCC,ABTS研究了黑灵芝甾醇组分的抗氧化实验。在体外抗氧化实验中,黑灵芝甾醇组分表现出一定的抗氧化活性,在多个试验中自由基最高清除率为25.86±1.14%。4.而在研究对过氧化氢诱导的Caco-2氧化损伤模型的保护作用的实验中,黑灵芝甾醇组分及麦角甾醇的添加清除细胞内的自由基产生,促进SOD,GSH-Px的分泌,抑制MDA的产生和LDH的释放,从而对氧化损伤细胞起到保护作用,使细胞存活率增加。本研究以黑灵芝甾醇组分为研究对象,对其分离纯化及生物活性进行了一定研究,为保健食品以及药物开发提供了一定的理论基础。
厉蓉蓉[7]（2016）在《破壁灵芝孢子粉冲剂毒性研究及免疫效应》文中研究说明灵芝是着名的药用真菌之一,灵芝孢子是灵芝的生殖细胞,富含多糖、三萜类、多种氨基酸等生理活性物质,具有抑制肿瘤、免疫调节等多种生理功能。灵芝孢子经破壁后,有利于有效成分的释放和使用,目前国内外常被用来制作保健品的原料。本文主要探讨,破壁灵芝孢子粉的安全性以及免疫调节作用。1 一般毒性试验1.1小鼠经口急性毒性,经口一次性灌胃最大浓度0.25g/mL,连续观察14天,动物无死亡,无中毒,无异常,饮食饮水正常,可判定是无毒。1.2 30天喂养试验,长时间喂饲不同剂量的破壁灵芝孢子粉,观察其对动物引起有害反应的剂量,经过大鼠腹主动脉采血,检测血常规,血生化,动物大体解剖,组织病理学检测,各剂量组结果与对照组比较没有统计学差异,由此可初步认为在本试验条件下长期服用破壁灵芝孢子粉对机体并无明显不良反应,基本上是安全的。2特殊毒性试验2.1鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶（Ames）试验,利用平板掺入法检测供试品的诱变性,预测其遗传危害和可能的潜在致癌作用。结果破壁灵芝孢子粉对鼠伤寒沙门氏菌的TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株,在加与不加S-9时,都没有发现破壁灵芝孢子粉有致基因突变作用。2.2小鼠骨髓细胞微核试验,采用30h给受试物法,两次给受试样品间隔24h,第二次在给受试样品6h后颈椎脱臼法处死动物,取胸骨,挤出骨髓,常规制片、封片、镜检。结果破壁灵芝孢子粉低,中,高剂量组的微核率与阴性对照组（无菌水）相比没有显着性差异（P>0.05）,而阳性对照组（环磷酰胺）则显着高于阴性对照组（P<0.01）。经过观察统计分析,破壁灵芝孢子粉对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核形成及PCE/RBC比值没有产生影响,得出破壁灵芝孢子粉对小鼠骨髓细胞不具有诱发突变作用。2.3小鼠精子畸形试验,小鼠连续灌胃5天,在第一次给受试样品的第35天,颈椎脱臼法处死动物,取两侧附睾精子滤液,按常规制片、封片、镜检并记录精子形态及数目。结果低,中,高剂量组的精子畸形率与阴性对照组（无菌水）比较没有统计学差异（P>0.05）,而阳性对照组（环磷酰胺）则显着高于阴性对照组（P<0.01）。所以破壁灵芝孢子粉对小鼠的精子畸形率没有明显影响。3增强免疫力功能试验小鼠根据体重大小随机分组,灌胃不同浓度（166.7mg/kg·bw/d、333mg/kg·bw/d、1000mg/kg·bw/d）的破壁灵芝孢子粉第30d后,分别测定破壁灵芝孢子粉溶液对细胞免疫、体液免疫、单核巨噬细胞吞噬功能和自然杀伤（NK）细胞活性影响,从而鉴定破壁灵芝孢子粉的免疫调节作用。1.1用MTT法进行刀豆蛋白A诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,结果高剂量组加ConA孔与不加ConA孔光密度的差值高于对照组,所以差异有统计学意义（P<0.01）。1.2小鼠迟发型变态反应,耳肿胀法,结果二硝基氟苯诱导的迟发型变态反应检测中,低剂量组、中剂量组、高剂量组耳壳增重与对照组比较,差异没有统计学意义（P>0.05）。1.3抗体的生成细胞检测试验,结果高剂量组的溶血空斑数比对照组的高,差异有统计学意义（P<0.01）。1.4血清溶血素检测试验,结果高剂量组的小鼠血清半数溶血值比对照组高,差异有统计学意义（P<0.01）。1.5自然杀伤（NK）细胞活性的测定（乳酸脱氢酶测定法）,高剂量组NK细胞活性与对照组组相比较,差异有统计学意义（P<0.01）。1.6碳廓清试验,中剂量、高剂量组吞噬指数a与对照组相比较,差异有统计学意义（P<0.05）。1.7腹腔的巨噬细胞吞噬鸡红细胞,低剂量组、中剂量组、高剂量组吞噬百分率及吞噬指数与对照组相比较,差异无统计学意义（P>0.05）。综上在本试验条件下破壁灵芝孢子粉没有毒性作用且具有增强免疫力的功能。
万明珠[8]（2014）在《灵芝孢子油质量标准及指纹图谱研究》文中认为目的:灵芝（Ganoderma lucidum）,别名灵芝草、木芝、菌灵芝等,是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝和紫芝的干燥子实体。灵芝在我国拥有数千年的药用历史,是传统的中药珍贵药材,具有很高的药用价值和保健价值。灵芝孢子粉（Ganoderma lucidum spore）是灵芝成熟期从菌盖喷发出的生殖细胞,具有灵芝的全部遗传活性物质。灵芝孢子粉含有三萜类、多糖类、脂肪酸类、氨基酸类、维生素类等有效成分,灵芝孢子在调节免疫、抗肿瘤的药效方面远远超过其母体灵芝。灵芝孢子油（Ganoderma lucidum sporeoil）是灵芝孢子粉经超临界CO2流体萃取所得的油脂混合物,主要含有甘油三酯类、脂肪酸类、三萜类、甾醇类等化学成分,具有显着的抗肿瘤、增强免疫调节、护肝等多种生物活性作用。近年来,灵芝孢子油及其制剂类产品大量涌入市场,列入高档保健品行列,拥有十分重要的社会价值和经济价值。但是到目前为止对灵芝孢子油的质量标准的研究报道较少,没有法定的质量标准,市场上的灵芝孢子油产品良莠不齐,伪品无法辨别。因此有必要对灵芝孢子油进行质量标准的研究,制定行之有效的质量控制方法,规范市场上灵芝孢子油的质量,保障人们用药安全有效,本课题在前期对灵芝孢子油化学成分进行深入研究的基础上,提出对灵芝孢子油的质量标准以及指纹图谱进行研究。方法:1、灵芝孢子油的质量标准研究建立灵芝孢子油质量标准的薄层定性鉴别方法,优化AgNO3-薄层硅胶板的制备方法,优化展开剂的溶剂系统,考察不同温度、湿度下的影响。建立HPLC-ELSD法对灵芝孢子油中最大成分1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯（孢子油甘油三酯F）的含量测定方法。2、灵芝孢子油的指纹图谱研究采用HPLC-ELSD法对11批灵芝孢子油样品中的不饱和甘油三酯类成分进行指纹图谱研究,运用指纹图谱参数和相似度进行评价分析,并采用SPSS软件对11批样品的指纹图谱所得的色谱峰进行主成分分析和聚类分析。3、初步起草灵芝孢子油质量标准草案参考《中国药典》2010版一部对中药质量标准的技术要求,结合灵芝孢子油为超临界二氧化碳萃取所得的油脂混合物,初步从性状鉴别、薄层鉴别、含量测定、指纹图谱等方面起草灵芝孢了油质量标准。结果:本实验对灵芝孢子油的质量控制采用定性鉴别与定量测定相结合的方法进行研究,完善灵芝孢子油的质量评价方法。薄层定性实验结果采用浸入法制备10%AgNO:r薄层硅胶板,展开剂为石油醚:乙酸乙酯（5:1）,整体斑点清晰,分离效果较好,Rf分布合理。色谱条件为Diamonsil C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相:乙腈-异丙醇（51:49）,ELSD为检测器,漂移管温度:40℃,流速:1mL · min-1,载气流速:2.4L · min-,进样量:20 μ L。用HPLC-ELSD法测得11批灵芝孢子油中1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯（孢子油甘油三酯F）的平均含量为26.8%。建立了灵芝孢子油的HPLC-ELSD指纹图谱方法,确定了 10个共有指纹峰,鉴定并归属了其中5个色谱峰,建立了灵芝孢子油的对照指纹图谱。指纹图谱的分析结果表明,11批灵芝孢子油指纹图谱的相似度在0.915～1之间。结论:本实验建立了灵芝孢子油的质量标准和HPLC-ELSD指纹图谱研究方法,具有方法简便、准确可靠、重复性好、特征性强等特点,可作为广州汉方现代中药研究开发有限公司对灵芝孢子油质量评价的重要依据之一。
周芬霞[9]（2014）在《孢子粉灵芝粉剂活性成分分析及增强免疫力功能研究》文中指出孢子粉灵芝粉剂是以灵芝孢子粉和灵芝提取物为原料,灵芝子实体经过水提过滤、浓缩、喷雾干燥、混合等工艺制成的散剂,具有增强免疫力功能。本论文建立了多糖肽、灵芝酸及核苷类成分的含量测定方法,并对灵芝多糖类的检测方法做了改进,其中建立的灵芝多糖肽含量测定方法目前国内外尚未见相关报道,同时对产品的安全性及增强免疫力功能进行了研究,为含灵芝提取物及其孢子粉类保健食品的质量控制提供实验参考依据,也为该类产品的开发利用奠定基础。其主要内容包括以下两个方面：一孢子粉灵芝粉剂活性成分含量测定的研究目的：建立孢子粉灵芝粉剂中灵芝多糖类、灵芝酸、核苷类成分的含量测定方法。方法：采用紫外-可见分光光度法,用改良苯酚-硫酸显色法在485nm处测定吸光度值从而测定葡聚糖含量；以水为溶剂60℃水浴30min,用乙醇沉淀离心后,流动相定容,以TSK4000pw （7.8mm x30cm）为色谱柱,甲醇：水=20：80为流动相,流速为1mL/min,柱温：35℃,进样量：10μL, ELSD检测器条件：漂移管温度：55℃,喷雾器为加热模式,气体压力：45psi, HPLC-ELSD法测定多糖肽含量；以氯仿为溶剂回流提取3次,每次1h,过滤得提取液,滤液挥干用甲醇溶解,Agilent C18（4.5x150mm,5μm）为色谱柱,乙腈：1%乙酸水=37：63为流动相,258nm为检测波长,HPLC-PDA法同时测定灵芝酸A、C2含量；以水为溶剂超声提取60rmin,用Symmetry C18（2.1x150mm,3.5μm）为色谱柱,甲醇-0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱,UPLC-MS-MS对胞嘧啶、尿嘧啶、肌苷、鸟苷、腺苷5种核苷类成分进行定性分析,且用Ultimate? AQ-C18（4.6x250mm,5μm）为色谱柱,甲醇-0.01mol/L乙酸钠溶液为流动相梯度洗脱,260nm为检测波长,HPLC-PDA法同时测定5种核苷类成分的含量。结果：孢子粉灵芝粉剂中葡聚糖r为0.993,平均加标回收率95.22%；多糖肽r为0.999,平均加标回收率为99.02%；灵芝酸成分r为0.990～0.992,平均加样回收率为98.30-99.76%；核苷类成分r为0.993-0.999,平均加样回收率为98.46～99.39%。结论：本论文建立的方法适用于孢子粉灵芝粉剂中灵芝葡聚糖、多糖肽、灵芝酸类及核苷类成分含量的测定,方法操作简单、选择性强、重复性好、回收率高。二孢子粉灵芝粉剂增强免疫力功能实验研究目的：对孢子粉灵芝粉剂的增强免疫力保健功能实验进行研究。方法：通过动物实验,运用保健食品功能成分评价技术,先对孢子粉灵芝粉剂安全毒理学进行评价再进一步对其增强免疫力功能实验进行研究。结果：各剂量组小鼠体重、胸腺指数、脾指数、DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应、小鼠碳廓清能力、小鼠NK细胞活性均无统计学意义;样品中、高剂量组ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力明显增强；样品中、高剂量组均能升高血清溶血素水平,并能明显促进小鼠抗体生成；样品高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率、吞噬指数明显升高。结论：根据《保健食品检验与评价技术规范》（卫生部2003版）判定标准,提示孢子粉灵芝粉剂具有增强免疫力功能。
余素[10]（2014）在《灵芝孢子油的化学成分和抗肿瘤活性的研究》文中研究表明灵芝孢子油为灵芝孢子粉经干燥、破壁、超临界二氧化碳萃取工艺制得的提取物,目前灵芝孢子油的市售产品主打提高免疫及抗肿瘤的作用,药理实验研究也表明灵芝孢子油具有抗肿瘤、提高免疫、保肝护肝、抗氧化等活性。但是灵芝中可作为其有效成分的三萜及多糖类在灵芝孢子油中含量较低,无法对灵芝孢子油的品质作出科学有效的评价,因此寻找灵芝孢子油的有效成分对灵芝孢子油质量控制的研究至关重要。本文拟从灵芝孢子油的不皂化物（主要为甾体类）成分入手研究灵芝孢子油的活性成分,主要研究内容分为以下几个方面：一、灵芝孢子油皂化条件考察采用单因素实验分别考察灵芝孢子油皂化碱浓度、皂化碱量、皂化时间、皂化温度,结合实验结果及实际可操作性,确定其皂化方法为皂化碱浓度lmol/L,每克灵芝孢子油皂化碱量0.22g,皂化时间1.5h,皂化温度80℃。二、灵芝孢子油不皂化物的分离纯化及结构鉴定采用硅胶柱层析与制备型高效液相色谱相结合,对灵芝孢子油不皂化物（UMGSO）进行分离纯化,得到8个化合物,利用波谱学手段、理化性质及相关文献报道数据对照鉴定了各化合物,结构分别为：（22E,24R）-麦角甾-7,22-二烯-3β-醇（1）、麦角甾-7-烯-3β-醇（2）、麦角甾-4,6,8（14）,22-四烯-3-酮（3）,β-谷甾醇（4）、异岩藻甾醇（5）、麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇（6）、麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6α-三醇（7）、5α,6α-环氧-（22E,24R）-麦角甾-8（14）,22-二烯-3β,7α-二醇（8）。其中化合物2、4、6、7为首次从灵芝孢子油中分离得到,化合物5、8为首次从灵芝中分离得到。三、灵芝孢子油不皂化物抗肿瘤活性初步研究1.UMGSO对S-180荷瘤小鼠的抑瘤作用研究UMGSO对S-180荷瘤小鼠的抑瘤作用,结果表明高（700mg/kg）、中（140mg/kg）剂量组UMGSO对小鼠肿瘤生长具有显着的抑制作用（p<0.05）,与阴性对照组相比,其抑瘤率分别为45.09%、43.40%,而且各剂量组UMGSO对小鼠脾脏指数没有影响。2.UMGSO对HepG2、 MCF-7细胞生长的影响采用MTT法检测UMGSO对人肝癌细胞MepG2、人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,结果表明：UMGSO对两种肿瘤细胞均有明显的生长抑制作用,且呈剂量依赖性,其IC50分别为14.5μg/mL及16.8μg/mL。以上实验表明：UMGSO在灵芝孢子油的抗肿瘤疗效中发挥着重要作用。四、灵芝孢子油中麦角甾-4,6,8（14）,22-四烯-3-酮的含量测定研究麦角甾-4,6,8（14）,22-四烯-3-酮（EG）是UMGSO主要甾体成分之一,现有研究证明其能够抑制多种肿瘤细胞的增殖[38-40],且EG为菌类植物油的特有成分,与总三萜、脂肪酸、麦角甾醇等质量控制指标相比更具有特征性。因此本章对灵芝孢子油中EG的含量进行研究,采用YMC-Pack ODS-A色谱柱,以纯甲醇为流动相,柱温30℃,流速1mL．mill-1,检测波长350nm,建立高效液相色谱法测定灵芝孢子油中EG的含量。结果表明EG在1.39-33.34μg．mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系r=1),平均加样回收率（n=6）为100.70%（RSD=0.75%）。由于该方法稳定,准确,重复性好,可用于灵芝孢子油中EG的含量测定。
二、萌动激活赤灵芝孢子对肝脏的保护作用研究(摘要)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、萌动激活赤灵芝孢子对肝脏的保护作用研究(摘要)（论文提纲范文）
（1）肠道菌群分析在幼龄动物药物安全性评价中的应用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 第一节 人类生命早期肠道微生物概述 |
| 第二节 儿科用药非临床安全性评价研究现状概述 |
| 第三节 幼龄动物肠道微生物研究现状 |
| 第四节 灵芝孢子粉及其主要活性成分研究现状 |
| 第五节 本文研究依据及研究思路 |
| 1.研究背景 |
| 2.研究目的 |
| 3.研究内容 |
| 4 技术路线图 |
| 第二章 正常幼龄动物肠道菌群结构分析 |
| 第一节 正常幼龄大鼠肠道菌群结构分析 |
| 1.实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.3 粪便样本采集 |
| 1.4 肠道菌群16S rRNA检测分析 |
| 1.5 统计方法 |
| 2.正常幼龄大鼠发育过程中肠道菌群16S rRNA测序结果分析 |
| 2.1 不同日龄大鼠肠道菌群Alpha多样性 |
| 2.2 不同日龄大鼠基于OTU水平的物种Venn图 |
| 2.3 不同日龄幼龄大鼠肠道菌群物种相对丰度柱形图 |
| 2.4 肠道菌群Beta多样性 |
| 2.5 组间差异菌分析 |
| 3.结果讨论 |
| 4.本节小结 |
| 第二节 正常幼龄猴与成年猴肠道菌群结构分析 |
| 1.实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.3 标本采集 |
| 1.4 肠道菌群16S rRNA检测分析 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2.正常幼龄猴与成年猴肠道菌群16S rRNA测序结果分析 |
| 2.1 幼龄猴与成年猴肠道菌群Alpha多样性 |
| 2.2 幼龄猴与成年猴肠道菌群基于OTU水平的物种Venn图 |
| 2.3 幼龄猴与成年猴肠道菌群物种相对丰度柱形图 |
| 2.4 肠道菌群Beta多样性 |
| 2.5 组间差异菌分析 |
| 3.结果讨论 |
| 4.本节小结 |
| 第三章 去壁灵芝孢子粉幼龄大鼠6 周重复给药后肠道菌群分析及其与免疫、行为学指标相关性分析 |
| 第一节 去壁灵芝孢子粉幼龄大鼠6 周重复给药后肠道菌群分析及其与常规免疫毒性和行为学指标相关性分析 |
| 1.实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 供试品 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要实验仪器 |
| 1.5 试验方法 |
| 1.5.1 幼龄动物分组及剂量设计 |
| 1.5.2 幼龄动物起始给药年龄和给药期限 |
| 1.5.3 常规幼龄动物毒性指标 |
| 1.5.4 肠道菌群分析 |
| 1.6 统计方法 |
| 2.试验结果 |
| 2.1 .去壁灵芝孢子粉对幼龄大鼠常规免疫学指标影响 |
| 2.2 去壁灵芝孢子粉对幼龄大鼠行为学指标的影响 |
| 2.3 去壁灵芝孢子粉对幼龄大鼠肠道菌群的影响 |
| 2.3.1 幼龄大鼠肠道菌群Alpha多样性 |
| 2.3.2 幼龄大鼠肠道菌群基于OTU水平的物种Venn图 |
| 2.3.3 幼龄大鼠肠道菌群物种相对丰度柱形图 |
| 2.3.4 肠道菌群Beta多样性 |
| 2.3.5 组间差异菌分析 |
| 2.3.6 差异菌与免疫、行为学指标的相关性分析 |
| 第二节 去壁灵芝孢子粉幼龄大鼠6 周重复给药后肠道菌群与TDAR的相关性分析 |
| 1.实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 供试品 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要实验仪器 |
| 1.5 幼龄动物试验方法 |
| 1.5.1 幼龄动物分组及剂量设计 |
| 1.5.2 幼龄动物起始给药年龄和给药期限 |
| 1.6 T细胞依赖性抗体反应(TDAR)测定 |
| 1.6.1 KLH注射及采血 |
| 1.6.2 TDAR试剂配制 |
| 1.6.3 KLH抗体滴度测定 |
| 1.7 肠道菌群16S rRNA检测 |
| 1.7.1 幼龄大鼠粪便样本采集 |
| 1.7.2 肠道菌群16S rRNA检测分析 |
| 1.8 统计方法 |
| 2.试验结果 |
| 2.1 去壁灵芝孢子粉对幼龄大鼠KLH抗体滴度影响 |
| 2.2 幼龄大鼠肠道差异菌与KLH抗体滴度间的相关性分析 |
| 2.3 去壁灵芝孢子粉给药后与KLH抗体滴度变化相关的主要差异菌分析 |
| 3.结果讨论 |
| 4.本章小结 |
| 第四章 结论与展望 |
| 1.结论 |
| 2.展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附件1 攻读学位期间发表论文目录 |
（2）长根菇菌糠多糖对CCl4诱导的慢性肝损伤的修复作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 食用菌菌糠及其利用 |
| 1.1.1 食用菌菌糠 |
| 1.1.2 食用菌菌糠的利用 |
| 1.1.2.1 用作二次培养基 |
| 1.1.2.2 用作禽畜饲料 |
| 1.1.2.3 用作有机肥 |
| 1.1.2.4 用作沼气生产原料 |
| 1.1.2.5 用作土壤改良剂 |
| 1.2 长根菇 |
| 1.3 食用菌多糖 |
| 1.3.1 生物学功能 |
| 1.3.1.1 免疫调节 |
| 1.3.1.2 抗氧化和抗衰老 |
| 1.3.1.3 抗肿瘤 |
| 1.3.1.4 降血糖和降血脂 |
| 1.3.1.5 其它作用 |
| 1.3.2 提取方法 |
| 1.3.3 分离纯化和结构分析 |
| 1.3.3.1 去蛋白 |
| 1.3.3.2 脱色素 |
| 1.3.3.3 去除小分子杂质 |
| 1.3.3.4 结构分析 |
| 1.4 慢性肝损伤(Chronic liver injury,CLI) |
| 1.4.1 CLI的发病机理 |
| 1.5 本研究的目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.2 主要试剂及仪器设备 |
| 2.2.1 主要试剂 |
| 2.2.2 仪器设备 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 长根菇菌糠多糖提取优化 |
| 2.3.1.1 长根菇菌糠预处理 |
| 2.3.1.2 PB试验 |
| 2.3.1.3 苯酚-硫酸法测多糖含量 |
| 2.3.1.4 RSM试验 |
| 2.3.2 长根菇菌糠多糖的分离纯化 |
| 2.3.2.1 除蛋白 |
| 2.3.2.2 脱色素 |
| 2.3.2.3 透析 |
| 2.3.3 长根菇菌糠多糖的结构分析 |
| 2.3.3.1 单糖组成分析 |
| 2.3.3.2 多糖样品的FT-IR分析 |
| 2.3.4 RPS对 CCl4诱导的慢性肝损伤的修复作用 |
| 2.3.4.1 急性毒性试验 |
| 2.3.4.2 动物试验设计 |
| 2.3.4.3 样品制备 |
| 2.3.4.4 指标检测 |
| 2.3.4.5 免疫印迹法检测 |
| 2.3.4.6 定量实时聚合酶链反应(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR) |
| 2.3.4.7 组织切片制备及观察 |
| 2.3.5 数据统计 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 长根菇菌糠多糖的提取优化 |
| 3.1.1 PB试验 |
| 3.1.2 RSM试验 |
| 3.2 长根菇菌糠多糖结构分析 |
| 3.2.1 单糖组成分析 |
| 3.2.2 红外光谱扫描分析 |
| 3.3 RPS对 CCl4诱导的慢性肝损伤的修复作用 |
| 3.3.1 急性毒性试验 |
| 3.3.2 对CLI小鼠血清指标的影响 |
| 3.3.3 对CLI小鼠肝脏抗氧化能力的影响 |
| 3.3.4 对CLI小鼠肝脏炎症作用的影响 |
| 3.3.4.1 对炎症细胞因子水平的影响 |
| 3.3.4.2 炎症小鼠肝组织病理学观察 |
| 3.3.5 对CLI小鼠肝脏纤维化作用的影响 |
| 3.3.5.1 对纤维化细胞因子水平的影响 |
| 3.3.5.2 Masson三色染色 |
| 3.3.6 对CLI小鼠肝脏细胞凋亡作用的影响 |
| 3.3.6.1 对凋亡相关基因mRNA相对表达量的影响 |
| 3.3.6.2 Hoechst33258 凋亡染色 |
| 4 讨论 |
| 4.1 长根菇RPS的提取和CLI模型的建立 |
| 4.2 RPS的抗氧化活性 |
| 4.3 RPS通过NF-κB途径发挥抗炎症活性 |
| 4.4 RPS的抗纤维化及抗细胞凋亡活性 |
| 4.5 RPS的单糖组成和键型分析 |
| 5 结论 |
| 6 下一步工作 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 |
（3）灵芝孢子粉破壁前后质量评价及药效学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 第一章 灵芝孢子粉破壁前后质量对比研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法与结果 |
| 2.1 灵芝孢子粉外观性状评价 |
| 2.2 灵芝孢子粉定性鉴别 |
| 2.3 灵芝孢子粉质量常规检查 |
| 2.4 浸出物含量测定 |
| 2.5 灵芝孢子粉多糖含量测定(蒽酮法) |
| 2.6 灵芝孢子粉多糖含量测定(苯酚法) |
| 2.7 灵芝孢子粉总三萜含量测定 |
| 3 讨论 |
| 第二章 灵芝孢子粉破壁前后指纹图谱研究 |
| 1 仪器与试剂 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 试剂 |
| 2 方法与结果 |
| 2.1 色谱条件 |
| 2.2 对照品溶液的制备 |
| 2.3 供试品溶液的制备 |
| 2.4 方法学考察 |
| 2.5 指纹图谱分析 |
| 2.5.1 对照品溶液图谱的构建 |
| 2.5.2 样品指纹图谱的构建及色谱峰指认 |
| 2.6 相似度分析 |
| 2.7 含量测定 |
| 3 讨论 |
| 第三章 灵芝孢子粉破壁前后对游泳力竭所致小鼠氧化损伤的保护作用 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物与试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 供试药物的制备 |
| 2.2 动物造模与给药 |
| 2.3 取材 |
| 2.4 病理切片分析 |
| 2.5 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 灵芝孢子粉对小鼠抗氧化能力的影响 |
| 3.2 灵芝孢子粉对小鼠血清中NO、CK活性的影响 |
| 3.3 灵芝孢子粉对小鼠力竭致肝脏损伤的影响 |
| 4 讨论 |
| 第四章 灵芝孢子粉对急性肝损伤小鼠的保护作用及肠道菌群的调节 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物与试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 供试药物的制备 |
| 2.2 动物分组及给药 |
| 2.3 小鼠肝功、炎症因子指标检测 |
| 2.4 肝脏组织学分析 |
| 2.5 16 S rDNA基因测序 |
| 2.6 数据处理 |
| 3.结果与分析 |
| 3.1 灵芝孢子粉对急性酒精肝脏损伤的改善作用 |
| 3.2 灵芝孢子粉对小鼠肝脏炎症因子的影响 |
| 3.3 肝脏病理学结果 |
| 3.4 小鼠肠道菌群门水平结构分析 |
| 3.5 小鼠肠道菌群门水平Heatmap热图分析 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（4）芝芪康艾颗粒的制剂工艺、质量标准、初步安全性和药效研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 主要中英文缩写词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 AIDS流行病学及相关研究进展 |
| 1.1 AIDS流行病学及传播现状 |
| 1.2 AIDS病原学研究 |
| 1.3 AIDS临床分期 |
| 2 AIDS抗病毒药物治疗现状 |
| 2.1 传统AIDS抗病毒治疗药物 |
| 2.2 部分相关治疗新药 |
| 3 AIDS中医药治疗概况 |
| 3.1 病因病机与分证论治 |
| 3.2 单味中药研究 |
| 3.3 复方中药研究 |
| 3.4 其他传统中医疗法 |
| 4 芝芪康艾颗粒组方中主要药味药理作用研究 |
| 4.1 灵芝的药理作用 |
| 4.2 黄芩的药理作用 |
| 5 课题研究意义 |
| 第二章 芝芪康艾颗粒的制剂工艺研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验药品与试剂 |
| 1.2 试验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 黄芩苷含量测定试验 |
| 2.2 除灵芝外的全处方药材提取工艺单因素考察 |
| 2.3 除灵芝外全处方七位药材正交试验优选水提工艺 |
| 2.4 灵芝药材的水提工艺研究 |
| 2.5 芝芪康艾颗粒成型工艺研究 |
| 3 结果 |
| 3.1 黄芩苷含量测定结果 |
| 3.2 除灵芝外的全处方药材提取工艺单因素考察结果 |
| 3.3 除灵芝外全处方七位药材正交试验优选水提工艺试验结果 |
| 3.4 灵芝药材的水提工艺研究结果 |
| 3.5 芝芪康艾颗粒成型工艺单因素考察试验结果 |
| 3.6 芝芪康艾颗粒制剂工艺流程图 |
| 4 讨论 |
| 第三章 芝芪康艾颗粒的质量标准研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验药品与试剂 |
| 1.2 试验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 TCL鉴定 |
| 2.2 黄芩苷含量测定 |
| 3 结果 |
| 3.1 TCL鉴定结果 |
| 3.2 黄芩苷含量测定结果 |
| 4 讨论 |
| 第四章 芝芪康艾颗粒的急性毒性试验研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验药品 |
| 1.2 试验仪器 |
| 1.3 试验动物 |
| 2 方法 |
| 2.1 LD_(50)预试验 |
| 2.2 最大给药量试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 LD_(50) 预试验结果 |
| 3.2 最大耐受量试验结果 |
| 4 讨论 |
| 第五章 芝芪康艾颗粒对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验药品与试剂 |
| 1.2 试验仪器 |
| 1.3 试验动物 |
| 2 方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 检测芝康颗粒对免疫抑制小鼠脏器指数的影响 |
| 2.3 检测芝康颗粒对免疫抑制小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 |
| 2.4 检测芝康颗粒对免疫抑制小鼠脾脏、胸腺显微结构的影响 |
| 2.5 检测芝康颗粒对免疫抑制小鼠血常规的影响 |
| 2.6 检测芝康颗粒对免疫抑制小鼠T淋巴细胞亚群百分比的影响 |
| 2.7 检测芝康颗粒对免疫抑制小鼠细胞因子的影响 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 芝康颗粒对免疫抑制小鼠脏器指数的影响 |
| 3.2 芝康颗粒对免疫抑制小鼠碳廓清试验的影响 |
| 3.3 芝康颗粒对免疫抑制小鼠脾脏、胸腺结构的影响 |
| 3.4 芝康颗粒对免疫抑制小鼠血常规的影响 |
| 3.5 芝康颗粒对免疫抑制小鼠T淋巴细胞的影响 |
| 3.6 芝康颗粒对免疫抑制小鼠细胞因子的影响 |
| 4 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介一 |
| 导师简介二 |
（5）真菌免疫调节蛋白超表达载体的构建及金针菇遗传转化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 食药用真菌简述 |
| 1.2 真菌免疫调节蛋白研究进展 |
| 1.2.1 FIPs家族的生物学结构特征 |
| 1.2.2 FIPs的生物学活性 |
| 1.3 金针菇成分的研究进展 |
| 1.3.1 金针菇的营养成分 |
| 1.3.2 金针菇的化学成分 |
| 1.4 FIP-fve的生物学活性 |
| 1.5 食用菌遗传转化方法 |
| 1.6 金针菇遗传转化研究进展 |
| 1.7 本论文研究目的 |
| 第二章 真菌免疫调节蛋白超表达载体的构建及金针菇遗传转化 |
| 2.1 试验材料与方法 |
| 2.1.1 菌种与质粒 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 培养基 |
| 2.1.4 仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 引物合成 |
| 2.2.2 目的基因获取 |
| 2.2.3 pCAMBIA1301-FIP-fve表达载体构建 |
| 2.2.4 pCAMBIA1301-GPD-FIP-fve表达载体构建 |
| 2.2.5 pCAMBIA1303-GPD-LZ-8 表达载体构建 |
| 2.2.6 农杆菌介导金针菇遗传转化 |
| 2.2.7 菌株检测鉴定 |
| 2.2.8 金针菇阳性转化子栽培 |
| 2.2.9 蛋白表达分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 重组载体pCAMBIA1301-FIP-fve的构建 |
| 2.3.2 重组载体pCAMBIA1301-GPD-FIP-fve的构建 |
| 2.3.3 重组载体pCAMBIA1303-GPD-LZ-8 的构建 |
| 2.3.4 农杆菌LBA4404 转化子鉴定 |
| 2.3.5 金针菇阳性转化子鉴定 |
| 2.3.6 子实体表型观察 |
| 2.3.7 蛋白浓度测定 |
| 2.3.8 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 |
| 2.3.9 Western Blot分析 |
| 第三章 讨论与结论 |
| 3.1 讨论 |
| 3.2 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录:英文缩写词 |
| 攻读学位期间发表的学术文章 |
（6）黑灵芝甾醇组分制备、抑菌活性及其体外抗氧化活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 略语表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 灵芝应用概况 |
| 1.3 灵芝产品安全性 |
| 1.4 灵芝活性成分 |
| 1.4.1 多糖组分 |
| 1.4.2 三萜组分 |
| 1.4.3 蛋白/多肽组分 |
| 1.4.4 甾醇组分 |
| 1.5 本课题研究的目的意义和主要内容 |
| 1.5.1 目的意义 |
| 1.5.2 课题研究的主要内容 |
| 1.6 技术路线 |
| 1.7 创新点 |
| 第2章 黑灵芝甾醇组分的浸提工艺研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 仪器及试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 甾醇组分的提取 |
| 2.3.2 游离甾醇含量的测定 |
| 2.3.3 高效液相色谱法检测 |
| 2.3.4 香草醛-冰醋酸显色法稳定性试验 |
| 2.3.5 单因素试验 |
| 2.3.6 响应面试验设计 |
| 2.3.7 数据分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 香草醛-冰醋酸显色法稳定性 |
| 2.4.2 标准曲线的绘制 |
| 2.4.3 料液比对游离甾醇提取的影响 |
| 2.4.4 浸提时间对麦角甾醇/游离甾醇提取的影响 |
| 2.4.5 温度对麦角甾醇/游离甾醇的影响 |
| 2.4.6 乙醇比例对麦角甾醇/游离甾醇的影响 |
| 2.4.7 响应面分析法优化黑灵芝游离甾醇的提取工艺 |
| 2.4.8 响应面优化试验结果 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 黑灵芝甾醇分离纯化及活性物质抗菌活性测定 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 仪器及试剂 |
| 3.2.1 实验菌株 |
| 3.2.2 仪器 |
| 3.2.3 试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 黑灵芝浸膏的制取 |
| 3.3.2 柱色谱分离及初步检测 |
| 3.3.3 制备液相色谱条件 |
| 3.3.4 高效液相色谱检测 |
| 3.3.5 气相-质谱联用检测条件 |
| 3.3.6 培养基的配制 |
| 3.3.7 供试菌株的活化 |
| 3.3.8 抗菌活性测定 |
| 3.3.9 最低抑菌浓度测定 |
| 3.3.10 数据分析 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 甾醇化合物的GC-MS分析 |
| 3.4.2 洗脱部分甾醇单体的纯化 |
| 3.4.3 溶剂萃取部分抗菌活性 |
| 3.4.4 黑灵芝甾醇组分及甾醇标品抗菌活性 |
| 3.4.5 最低抑菌浓度 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 黑灵芝甾醇组分的体外抗氧化活性研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 仪器及试剂 |
| 4.2.1 实验细胞 |
| 4.2.2 试剂 |
| 4.2.3 仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 黑灵芝甾醇样品制取 |
| 4.3.2 甾醇类化合物GC-MS分析 |
| 4.3.3 体外抗氧化活力测定 |
| 4.3.4 对Caco-2 细胞氧化损伤模型保护作用 |
| 4.3.5 统计分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 化学表征 |
| 4.4.2 抗氧化活性 |
| 4.4.3 细胞毒性 |
| 4.4.4 细胞存活率与LDH |
| 4.4.5 MDA含量测定结果 |
| 4.4.6 抗氧化酶活力测定结果 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 结论和展望 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（7）破壁灵芝孢子粉冲剂毒性研究及免疫效应（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 灵芝简介 |
| 2 破壁灵芝孢子粉概述 |
| 2.1 破壁灵芝孢子粉简介 |
| 2.2 灵芝孢子破壁技术 |
| 2.3 破壁灵芝孢子粉化学成分 |
| 3 破壁灵芝孢子粉药理作用 |
| 3.1 灵芝孢子粉的免疫调节作用 |
| 3.2 灵芝孢子粉对神经系统的作用 |
| 3.3 灵芝孢子粉的抗病毒作用 |
| 3.4 灵芝孢子粉具有降血糖降血脂作用 |
| 3.5 灵芝孢子粉的其它药理作用 |
| 参考文献 |
| 第二章 一般毒性试验 |
| 1 小鼠经口急性毒性试验 |
| 1.1 主要试验材料和方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 2 30天喂养试验 |
| 2.1 主要试验材料和方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 特殊毒性试验 |
| 1 Ames试验 |
| 1.1 主要试验材料和方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小节 |
| 2 小鼠骨髓细胞微核试验 |
| 2.1 主要试验材料和方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小节 |
| 3 小鼠精子畸形试验 |
| 3.1 主要材料和方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小节 |
| 参考文献 |
| 第四章 增强免疫力功能试验 |
| 1 试验样品和配制 |
| 2 试验动物分组及给药 |
| 3 试验方法 |
| 3.1 ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化(MTT法) |
| 3.2 NK细胞活性测定—乳酸脱氢酶(LDH)测定法 |
| 3.3 迟发型变态反应(DTH)--小鼠耳肿胀法 |
| 3.4 小鼠抗体生成细胞检测-Jeme改良玻片法 |
| 3.5 半数溶血值HC_(50)的测定 |
| 3.6 小鼠碳廓清试验 |
| 3.7 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验 |
| 4 讨论 |
| 5 小节 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）灵芝孢子油质量标准及指纹图谱研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 灵芝的研究概况 |
| 1.1 灵芝的本草考证 |
| 1.2 灵芝化学成分的研究 |
| 1.3 灵芝的药理作用与临床应用研究 |
| 第二节 灵芝孢子粉的研究概况 |
| 2.1 灵芝孢子粉的化学成分 |
| 2.2 灵芝孢子的药理作用 |
| 第三节 灵芝孢子油的研究概况 |
| 3.1 灵芝孢子油的化学成分 |
| 3.2 灵芝孢子油的药理作用 |
| 3.3 灵芝孢子油的质量评价方法 |
| 3.4 小结 |
| 第四节 中药指纹图谱色谱技术的研究进展 |
| 4.1 薄层色谱(TLC)法 |
| 4.2 高效液相色谱(HPLC)法 |
| 4.3 气相色谱(GC)法 |
| 4.4 高效毛细管电泳(HPCE)法 |
| 4.5 高速逆流色谱( HSCCC)法 |
| 4.6 超临界流体色谱(SFC)法 |
| 第二章 灵芝孢子油的质量标准研究 |
| 第一节 灵芝孢子油的薄层色谱研究 |
| 1.1 仪器与试药 |
| 1.2 展开条件优化 |
| 1.3 AgNO_3浓度的优化 |
| 1.4 薄层色谱鉴别分析 |
| 1.5 耐受性的考察 |
| 1.6 小结 |
| 第二节 灵芝孢子油化学成分的含量测定 |
| 2.1 仪器与材料 |
| 2.2 方法与结果 |
| 2.3 实验小结 |
| 第三章 灵芝孢子油的HPLC指纹图谱研究 |
| 3.1 仪器与试药 |
| 3.2 分析方法的建立 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 主要色谱峰的归属 |
| 3.3.2 参照峰的选择 |
| 3.3.3 共有指纹峰的标定 |
| 3.3.4 HPLC指纹图谱的建立 |
| 3.3.5 指纹图谱相似度计算 |
| 3.3.6 主成分分析及聚类分析 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 灵芝孢子油质量标准草案(部分) |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 论文发表 |
| 致谢 |
（9）孢子粉灵芝粉剂活性成分分析及增强免疫力功能研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 UV-Vis法测定葡聚糖的含量 |
| 1 引言 |
| 2 实验试剂 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 对照品溶液的制备 |
| 3.2 标准曲线的绘制 |
| 3.3 样品处理 |
| 3.4 结果计算 |
| 4 方法学考察 |
| 4.1 标准曲线与检测限 |
| 4.2 精密度实验 |
| 4.3 重复性实验 |
| 4.4 稳定性实验 |
| 4.5 加样回收率实验 |
| 4.6 样品含量测定 |
| 5 讨论 |
| 5.1 提取方式的选择 |
| 5.2 提取时间的选择 |
| 5.4 料夜比的选择 |
| 5.5 5%苯酚含量的选择 |
| 5.6 硫酸用量的选择 |
| 5.7 沸水浴时间的选择 |
| 6 本章小结 |
| 第二章 HPLC-ELSD法测定灵芝多糖肽含量 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验仪器 |
| 2.2 试剂 |
| 3 实验方法与结果 |
| 3.1 色谱条件 |
| 3.2 溶液的制备 |
| 3.3 方法学考察 |
| 4 讨论 |
| 4.1 检测器的选择 |
| 4.2 蒸发光散色检测器参数条件的优化 |
| 5 本章小结 |
| 第三章 HPLC-PDA法测定孢子粉灵芝粉剂中灵芝酸类成分含量 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验仪器 |
| 2.2 试剂 |
| 3 实验方法与结果 |
| 3.1 色谱条件 |
| 3.2 溶液的制备 |
| 3.3 供试品溶液提取条件的选择 |
| 3.4 色谱条件的选择 |
| 3.5 方法学考察 |
| 4 本章小结 |
| 第四章 UPLC-MS-MS和HPLC-PDA法分析测定孢子粉灵芝粉剂中5种核苷类成分 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验仪器 |
| 2.2 实验试剂与样品 |
| 3 实验方法与结果 |
| 3.1 5种核苷类成分的UPLC-MS-MS的定性分析 |
| 3.2 5种核苷类成分HPLC-PDA含量测定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 色谱条件的优化 |
| 4.2 供试品溶液制备条件的选择 |
| 5 本章小结 |
| 第五章 孢子粉灵芝粉剂增强免疫力保健功能研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品 |
| 1.2 测试仪器与试剂 |
| 1.3 实验动物与分组 |
| 1.4 饲养环境 |
| 1.5 剂量选择及样品配置 |
| 1.6 实验方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 样品对小鼠体重的影响 |
| 2.2 刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠淋巴细胞转化实验 |
| 2.3 DTH测定 |
| 2.4 抗体生成细胞检测实验 |
| 2.5 血清溶血素实验 |
| 2.6 小鼠碳廓血清试验 |
| 2.7 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验 |
| 2.8 胸腺指数和脾指数的测定 |
| 2.9 NK细胞活性测定 |
| 3 本章小结 |
| 第六章 孢子粉灵芝粉剂安全性实验研究 |
| 1 急性毒性实验 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法与结果 |
| 2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法及结果 |
| 3 小鼠精子畸变实验 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法与结果 |
| 4 Ames试验 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法与结果 |
| 5 30天喂养实验 |
| 5.1 实验动物 |
| 5.2 仪器 |
| 5.3 实验方法与结果 |
| 6 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
（10）灵芝孢子油的化学成分和抗肿瘤活性的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩写对照表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 灵芝孢子油皂化条件的优化 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 试药 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 色谱条件 |
| 2.2 灵芝孢子油样品溶液的制备 |
| 2.3 灵芝孢子油不皂化物供试品溶液的制备 |
| 2.4 灵芝孢子油荧光斑点得率的计算 |
| 2.5 灵芝孢子油皂化率的测定 |
| 2.6 灵芝孢子油皂化值的测定 |
| 2.7 灵芝孢子油皂化条件考察 |
| 2.8 验证实验 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 灵芝孢子油皂化值的测定 |
| 3.2 灵芝孢子油皂化条件考察 |
| 3.3 灵芝孢子油皂化方法的验证 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 灵芝孢子油不皂化物的分离纯化及结构鉴定 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 试药 |
| 2 灵芝孢子油不皂化物的分离纯化 |
| 2.1 灵芝孢子油不皂化物的制备及分离纯化 |
| 2.2 提取分离流程图 |
| 3 结构鉴定结果及分析 |
| 3.1 化合物1结构鉴定结果及分析 |
| 3.2 化合物2结构鉴定结果及分析 |
| 3.3 化合物3结构鉴定结果及分析 |
| 3.4 化合物4结构鉴定结果及分析 |
| 3.5 化合物5结构鉴定结果及分析 |
| 3.6 化合物6结构鉴定结果及分析 |
| 3.7 化合物7结构鉴定结果及分析 |
| 3.8 化合物8结构鉴定结果及分析 |
| 4 小结 |
| 第三章 灵芝孢子油不皂化物抗肿瘤活性初步研究 |
| 第一节 UMGSO对S-180荷瘤小鼠的抑瘤作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 药物配置 |
| 2.2 S-180细胞悬液的制备 |
| 2.3 造模及分组给药 |
| 2.4 指标检测 |
| 2.5 数据统计处理 |
| 3 结果及分析 |
| 3.1 UMGSO对S-180荷瘤小鼠瘤重的影响 |
| 3.2 UMGSO对S-180荷瘤小鼠免疫器官脾脏质量的影响 |
| 4 小结 |
| 第二节 UMGSO对HepG2、MCF-7细胞生长的影响 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 细胞 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 HepG2、MCF-7细胞生长曲线的绘制 |
| 2.2 MTT法检测UMGSO对HepG2、MCF-7细胞的增殖抑制作用 |
| 2.3 数据处理 |
| 3 结果及分析 |
| 3.1 HepG2、MCF-7细胞生长曲线 |
| 3.2 MTT法测定UMGSO对HepG2、MCF-7细胞的生长抑制率 |
| 4 小结 |
| 第四章 灵芝孢子油中EG的定性分析及含量测定 |
| 1 仪器与试药 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 试药 |
| 2 灵芝孢子油中EG的定性分析 |
| 2.1 HPLC-ESI-MS定性分析方法 |
| 2.2 对照品溶液及样品溶液定性分析结果 |
| 3 HPLC法测定灵芝孢子油中EG的含量 |
| 3.1 实验方法 |
| 3.2 方法学考察 |
| 3.3 样品测定结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
四、萌动激活赤灵芝孢子对肝脏的保护作用研究(摘要)（论文参考文献）
- [1]肠道菌群分析在幼龄动物药物安全性评价中的应用研究[D]. 吕晗莹. 浙江省医学科学院, 2021
- [2]长根菇菌糠多糖对CCl4诱导的慢性肝损伤的修复作用[D]. 刘新超. 山东农业大学, 2020(09)
- [3]灵芝孢子粉破壁前后质量评价及药效学研究[D]. 王方. 长春中医药大学, 2020(09)
- [4]芝芪康艾颗粒的制剂工艺、质量标准、初步安全性和药效研究[D]. 王兰芳. 甘肃农业大学, 2019(02)
- [5]真菌免疫调节蛋白超表达载体的构建及金针菇遗传转化[D]. 张昕. 沈阳农业大学, 2019(02)
- [6]黑灵芝甾醇组分制备、抑菌活性及其体外抗氧化活性研究[D]. 贾硕. 南昌大学, 2019(02)
- [7]破壁灵芝孢子粉冲剂毒性研究及免疫效应[D]. 厉蓉蓉. 南京农业大学, 2016(04)
- [8]灵芝孢子油质量标准及指纹图谱研究[D]. 万明珠. 广州中医药大学, 2014(06)
- [9]孢子粉灵芝粉剂活性成分分析及增强免疫力功能研究[D]. 周芬霞. 福建中医药大学, 2014(09)
- [10]灵芝孢子油的化学成分和抗肿瘤活性的研究[D]. 余素. 福建中医药大学, 2014(09)