一、健脑益智冲剂对多发梗塞性痴呆大鼠模型大脑皮层单胺类神经递质和P物质含量的影响(论文文献综述)
朱晓婷[1](2021)在《解毒益智方对阿尔茨海默病双转基因小鼠行为学及大脑皮层内β-淀粉样蛋白沉积及BACE1表达影响的研究》文中提出选题依据:阿尔茨海默病(AD)致残、致死率高,发病机制复杂,大脑内Aβ异常沉积是AD发生发展的重要病理变化及核心环节,前期研究已证实了解毒益智方具有抑制AD线虫头部Aβ斑块沉积及相关基因表达的作用,随之开展的随机对照临床研究证实解毒益智方应用6个月后MMSE、MoCA、ADL评分变化明显优于口服尼莫地平片的对照组。黄连为解毒益智方中的君药,为该方的主要成分,在本方中发挥“解毒”的重要功效。经查阅国内外文献发现黄连中发挥“解毒”作用的主要物质为黄连多糖(CCP),因此设计体外细胞实验探究解毒益智方中的君药黄连的主要有效成分CCP对Aβ25-35损伤PC12的保护作用,为“毒损”的病机及“解毒”的治法提供理论依据,为后续研究提供研究基础。因前期开展的研究均是以单基因单细胞的生物为研究对象,不能很好地模拟AD的疾病特点,因此选用APP/PS1双转基因小鼠作为研究对象,该小鼠很好的模拟了中枢神经系统Aβ异常沉积的状态,通过对小鼠的行为学研究及分子生物学研究,进一步评价解毒益智方的治疗作用。目的:通过体外细胞实验探讨基于“补肾益髓、活血化痰解毒”法形成的解毒益智方其中君药的有效成分CCP对Aβ25-35损伤PC12的保护作用。通过行为学、分子生物学等研究手段,对APP/PS1小鼠的认知功能、Aβ沉积、BACE1表达的相关蛋白、基因等方面进行检测和分析,探讨解毒益智方对APP/PS1小鼠的作用机制,为中药治疗AD的推广应用提供可靠的研究证据。方法:1.本研究分别从体外实验、动物实验探究解毒益智方的作用机制。体外实验部分采用MTT还原法、Hoechst33258荧光染色等方法对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤模型进行线粒体活性、细胞活力、细胞凋亡的测定,探究CCP对PC12细胞的保护作用。动物实验部分选用APP/PS1双转基因小鼠为研究对象,随机分为5组,分别是模型组(APP/PS1组)、盐酸多奈哌齐组(Donepezil组)、解毒益智方低剂量组(JDYZFL组)、解毒益智方中剂量组(JDYZFM组)、解毒益智方高剂量组(JDYZFH组),每组16只小鼠,另选用16只C57小鼠作为正常对照组(Control组),于每日早晨8:30进行灌胃治疗,各组每日灌胃药物及剂量分别是,正常组和模型组0.5%CMC溶液0.20g·kg-1·d-1;阳性对照组:盐酸多奈哌齐溶液0.30g·kg-1·d-1;解毒益智方高、中、低剂量组药物浓度依次为0.60g·kg-1·d-1,0.3g·kg-1·d-1,0.15g·kg-1·d-1。持续6个月治疗结束。2.以Aβ25-35损伤的PC12细胞为研究对象,通过测定细胞活力、LDH释放率、细胞凋亡率、和线粒体膜电位的水平等评价CCP的神经保护作用。3.通过水迷宫实验,记录解毒益智方对APP/PS1小鼠学习记忆能力的影响。4.通过ELISE及免疫荧光法检测APP/PS1小鼠脑内Aβ水平的变化,观察解毒益智方对APP/PS1小鼠脑内Aβ沉积的影响。5.采用PCR方法检测脑组织SIRT1、NF-κB、BACE1基因量变化,并进一步采用Western blot方法检测大脑皮层内SIRT1、BACE1、NF-κB蛋白的变化,观察解毒益智方对APP/PS1小鼠脑内AMPK/SIRT1-PPARγ-PGC1α-BACE1转运蛋白通路SIRT1、BACE1、NF-κB的影响。结果:1.通过体外研究观察CCP对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的影响PC12细胞活力测定结果显示:PC12细胞经过浓度为5-50μM的Aβ25–35处理24h后,细胞活力随着Aβ25–35浓度的增加从24%下降至61%。当Aβ25–35在浓度范围为5至50μM时引起PC12细胞中LDH释放增加至对照组的约130-160%。在用不同浓度的CCP(5至200μg/ml)处理PC12细胞24h后,未观察到显着的细胞损失。通过Hoechst33258染色及FCM测定细胞凋亡结果显示:细胞核在荧光显微镜下具有显着的浓缩核和凋亡的细胞形成。与在未处理的PC12细胞中观察到的完整,圆形和相对大的细胞核相比,暴露于50μMAβ25–35 24h的细胞显示出典型的细胞凋亡特征,包括染色质浓缩,核碎裂和凋亡小体的出现。用CCP不同浓度(5,25,50,100,200μg/ml)处理后可有效逆转细胞凋亡,其中100μg/ml效果最明显,FCM分析显示单独暴露于50μMAβ25–35 24h导致58.88±6.12%的凋亡率,这与正常对照组中的7.21±0.82%的值显着不同(P<0.01)。加入100μg/ml的CCP后,细胞凋亡下降至12.51±1.32%。通过JC-1红色荧光与JC-1绿色荧光的比率的变化来检测Aβ诱导的线粒体功能障碍结果显示:当PC12细胞暴露于50μM的Aβ25–35中24h后,与正常对照组相比,显着减弱了JC-1的红色荧光比例,提高了JC-1绿色荧光比例(P<0.01)。用CCP(100μg/ml)预处理Aβ25–35处理的PC12细胞显着抵消了Aβ25–35损伤引起的膜电位损失,JC-1从Aβ25–35处理的PC12细胞中的22.1%变为绿色荧光至84.3%,与正常对照组相近(P>0.05)。通过蛋白质印迹法检测细胞色素C结果显示:经50μMAβ25–35处理PC12细胞24h后细胞色素C在细胞质中的蛋白质表达增加,而预先用CCP(100μg/ml)处理的PC12细胞显着减弱线粒体释放的胞质细胞色素C。2.观察JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的影响。水迷宫实验结果显示:随着实验天数的后移,各组小鼠潜伏期、路径长度、游泳距离均有所缩短,表明随着训练次数的增加各组小鼠对象限平台的定位记忆能力随之有所提升。与Control组相比,APP/PS1组逃避潜伏期、路径长度、游泳距离均明显延长,差异显着(P<0.01)。首次到达平台的时间明显延长,目标停留次数明显减少,差异显着(P<0.01)。与APP/PS1组相比,Donepezil组、JDYZFL组、JDYZFM组逃避潜伏期、路径长度、游泳距离有所缩短,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。首次到达平台的时间缩短,目标停留次数增多,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与Donepezil组相比,JDYZFL组作用与其相当,JDYZFM组略优于Donepezil组,差异有统计学意义(P<0.05)。干预治疗6个月的12月龄小鼠的定位航行实验及空间搜索实验结果优于干预治疗3个月的9月龄小鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。3.观察JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠脑内Aβ沉积的影响。各组小鼠结果如下:与Control组比较,APP/PS1组大脑皮层内可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积极数量明显增多,具有极显着统计学意义(P<0.01)。与APP/PS1组相比,JDYZFL组、JDYZFM组及Donepezil组大脑皮层内可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积数量不同程度降低,具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与Donepezil组比较,JDYZFM组大脑皮层内可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积数量有所降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。通过免疫荧光法测得小鼠大脑皮层内Aβ表达发现,Control组只产生微量Aβ,而APP/PS1组Aβ表达量明显增高,经过用药干预后,12月龄干预组小鼠可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积数量较9月龄小鼠明显减少,免疫荧光标记从宏观上可以发现干预组Aβ沉积明显减少,APP/PS1组Aβ沉积明显增多。4.调控BACE1表达的相关因子结果(1)PCR检测结果各组小鼠进行的PCR检测结果显示:与Control组相比,APP/PS1组小鼠大脑皮层内BACE1/GAPDH、NF-κB/GAPDH表达含量明显增高,SIRT1/GAPDH明显降低,差异有显着统计学意义((P<0.01)。与APP/PS1组相比,Donepezil组、JDYZFL组及JDYZFM组小鼠海马体内BACE1/GAPDH、NF-κB/GAPDH表达含量不同程度降低,SIRT1/GAPDH表达含量不同程度增高,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。JDYZFH组在NF-κB/GAPDH表达上无统计学差异。与Donepezil组相比,JDYZFL组及JDYZFM组BACE1/GAPDH、NF-κB/GAPDH表达含量不同程度降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。PCR结果证实药物干预组可通过提高SIRT1mRNA的含量降低NF-κBmRNA、BACE1mRNA的表达,从而抑制Aβ的产生而起到神经保护的作用。各治疗组大脑皮层Aβ的表达均有所降低。连续灌胃6个月的各组小鼠与连续灌胃3个月的小鼠相比,除APP/PS1组及Control组,其他各组SIRT1mRNA的表达均有所提高,NF-κBmRNA、BACE1mRNA的表达均有所降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)Westorn blot检测结果各组小鼠的Western blot检测结果显示:与Control组相比,APP/PS1组小鼠大脑皮层SIRT1的蛋白表达明显降低,NF-κB、BACE1蛋白表达显着升高(P<0.01)。与APP/PS1相比,Donepezil组、JDYZFL组、JDYZFM组BACE1、NF-κB表达降低,SIRT1蛋白表达增高差异有统计学意义(P<0.05)。与Donepezil比较,JDYZFL组、JDYZFM组NF-κB蛋白表达有所降低,差异有统计学意义(P<0.05)。JDYZFL组SIRT1、BACE1蛋白表达无显着差异,JDYZFM组SIRT1表达有所提高,BACE1蛋白表达量略有降低,差异有统计学意义(P<0.05)。经过为期3个月及6个月的干预后,各治疗组大脑皮层Aβ的表达均有所降低。连续灌胃6个月的各组小鼠与连续灌胃3个月的小鼠相比,除APP/PS1组及Control组,其他各组SIRT1的蛋白表达均有所提高,NF-κB、BACE1蛋白的表达均有所降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1 CCP能够保护Aβ25-35损伤的PC12细胞,其机制可能与提高细胞活力、抑制细胞凋亡、减少LDH释放、阻断膜电位的丧失,并阻止线粒体细胞色素C释放,修复线粒体功能障碍有关。2 JDYZF各剂量组可不同程度提高APP/PS1双转基因小鼠定位航行实验及空间搜索实验的成绩,说明JDYZF可改善小鼠空间学习及记忆能力。3 JDYZF可不同程度降低APP/PS1双转基因小鼠大脑皮层内Aβ的异常沉积。4 JDYZF抑制BACE1的异常表达,其作用机制可能是通过调控大脑内AMPK/SIRT1-PPARγ-PGC1α-BACE1信号通路的相关因子表达实现的。
孙成成[2](2021)在《基于线粒体相关蛋白通路探讨参麻益智方对血管性认知障碍大鼠的作用机制》文中研究表明血管性认知障碍(Vascular cognitive impairment,VCI)是包括一系列因血管因素引起或导致的认知能力下降的综合征,涵盖了与血管疾病相关的所有类型的认知障碍,范围从轻度认知障碍到血管性痴呆(Vascular dementia,VaD)。目前,由于临床表现的异质性和当前诊断标准的局限性,VCI的流行病学较难开展,随着我国人口老龄化加剧及脑血管疾病的发病率上升,VCI的发病率和患病率也不断上升。VCI病因及病理机制复杂,与机体炎症反应、自由基损伤、胆碱能受损、细胞凋亡及遗传等因素密切相关,但VCI仍被认为是可以防治的。目前,VCI的主要治疗方法是通过治疗脑血管疾病和其他VCI危险因素(例如高血压和糖尿病)来预防,目前尚无可改善疾病的有效药物治疗方法。本课题组拟定了防治VCI的中药复方—参麻益智方,已批准为医疗机构应用传统工艺配制中药制剂备案(备案号:Z20200005000)。该方由人参、天麻、鬼箭羽、川芎组成,具有益气增智、活血化瘀的功效。前期动物实验和临床研究表明参麻益智方可以改善VCI大鼠及患者认知和神经功能。由此,本研究以参麻益智方作为干预药物,观察其对VCI模型大鼠的学习记忆和认知能力的影响及其对脑组织线粒体的超微结构和AMPK/PPARα/PGC-1α/UCP2信号通路的影响,探讨其对脑组织能量代谢的作用机制,为其防治VCI提供科学依据。目的确定参麻益智方的提取工艺及主要有效成分;观察参麻益智方对双侧颈总动脉结扎造成慢性脑缺血致血管性认知障碍模型大鼠的学习记忆能力和炎症因子及氧化应激相关指标的影响;探讨慢性脑低灌注大鼠脑能量代谢和线粒体障碍相关蛋白AMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2的病理机制及参麻益智方的干预效应机制及可能的作用靶点。方法采用液相色谱-质谱联用仪系统(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)分析参麻益智方的主要化学成分。SPF级SD大鼠70只,雌雄各半,采用双侧颈总动脉结扎法制备慢性脑缺血模型,手术成功后筛选认知障碍的大鼠按随机数字表分成4组:模型对照组(Model)、盐酸多奈哌齐组(Donepezil)(0.45 mg/kg体质量)、参麻益智方高剂量组(SMYZ-H)(11.88 g生药/kg体质量)和参麻益智方低剂量组(SMYZ-L)(2.97g生药/kg体质量)。另设假手术组(Sham),每组各10只大鼠。灌胃给药,模型对照组和假手术组给予等体积纯净水灌胃,连续灌胃8周后进行相关指标检测。Morris水迷宫(Morris water maze,MWM)检测大鼠学习记忆能力;HE染色法观察大鼠海马CA1区病理形态学改变;比色法检测血清中乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)含量;酶联免疫法测定大鼠血清炎症因子白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)含量;比色法检测谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)含量;非酶促免疫法检测谷胱甘肽过氧化物还原酶(glutathioneperoxidase,GSH-PX)含量。透射电子显微镜观察线粒体的超微结构和形态改变;脑组织中提取线粒体进行逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测AMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5AmRNA表达的水平;蛋白质免疫印迹法(Western Blot,WB)检测 AMPK、pAMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A 蛋白的表达。结果1参麻益智方成分稳定明确课题组采用液相色谱-质谱联用仪系统分析了参麻益智方的主要化学成分,并结合文献报道,确定了参麻益智方中人参皂苷、天麻素、阿魏酸、原儿茶酸、β-谷甾醇等多种主要化学成分。2参麻益智方对VCI大鼠学习记忆能力的影响2.1参麻益智方对VCI大鼠空间学习记忆能力的影响定位航行实验:与第1天相比,所有大鼠在训练第2天的逃避潜伏期(escape latency,EL)均明显缩短(P<0.05,P<0.01),提示所有大鼠均表现出一定的学习记忆能力。经重复测量方差分析,与对照组比较,模型组大鼠第三天开始EL明显延长,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),提示模型组大鼠的空间学习能力明显下降;与模型组比较,参麻益智方高剂量组和盐酸多奈哌齐组EL均明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),提示参麻益智方和盐酸多奈哌齐均可提高VCI大鼠的空间学习能力。空间探索实验:与假手术组比较,模型组穿越原平台次数、目标象限停留时间、目标象限活动路程均显着减少,统计学比较有显着差异(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量组穿越原平台次数均显着增加,参麻益智方高剂量组目标象限停留时间、目标象限活动路程均显着增加,统计学比较有显着差异(P<0.05,P<0.01)。2.2参麻益智方对VCI大鼠海马CA1区病理形态的影响光学显微镜下海马组织显示,假手术组大鼠海马CA1区神经元排列整齐,连接紧密,胞内结构完整,胞膜清晰,胞质丰富,核膜、核仁较明显,未见神经元变性或坏死。模型组大鼠的海马CA1区神经元排列散乱、稀疏,细胞数量明显减少,层次减少,部分出现核固缩现象,可见细胞空泡变性,甚至坏死现象。盐酸多奈哌齐组、参麻益智方低、高剂量组海马CA1区神经元排列较模型组有一定的改善,细胞数量较模型组有明显增加,细胞结构较完整,细胞膜较为清晰,偶见细胞空泡变性,少有细胞坏死现象。2.3参麻益智方对VCI大鼠血清Ach、AchE含量的影响与假手术组比较,模型组Ach含量显着减少,AchE含量显着增多,统计学比较有显着差异(P<0.01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量组Ach含量均显着增加,统计学比较有显着差异(P<0.05,P<0.01);盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量组AchE含量显着减少,统计学比较有显着差异(P<0.05,P<0.01)。各给药组之间比较无显着差异(P>0.05)。2.4参麻益智方对VCI大鼠血清炎症因子IL-1β、TNF-α含量的影响与假手术组比较,模型组IL-1β、TNF-α含量均显着增加,统计学比较有显着差异(P<0.01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和参麻益智方低、高剂量组IL-1β含量均显着减少,统计学比较有显着差异(P<0.01);盐酸多奈哌齐组和参麻益智方低、高剂量组TNF-α含量均显着减少,统计学比较有显着差异(P<0.05,P<0.01)。2.5参麻益智方对VCI大鼠血清GSH、MDA、SOD、GSH-PX含量的影响与假手术组比较,模型组GSH、GSH-PX含量均显着减少,MDA含量均显着增加,统计学比较有显着差异(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量组GSH、GSH-PX含量均显着增加,MDA含量均显着减少,统计学比较有显着差异(P<0.05,P<0.01);参麻益智方高剂量组SOD含量均显着增加,统计学比较有显着差异(P<0.05,P<0.01)。各给药组之间比较无显着差异(P>0.05)。3参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体的影响3.1参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体数量的影响参麻益智方干预后荧光显示线粒体数量有一定程度的增加,说明参麻益智方能增加双侧颈总动脉结扎所致的VCI大鼠的线粒体数量。3.2参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体超微结构的影响假手术组大鼠脑组织线粒体结构基本正常,排列整齐,膜形态基本完整,线粒体嵴致密,无明显肿胀和空泡形成。模型组大鼠脑组织线粒体结构明显改变,线粒体膜模糊,部分膜出现破裂,线粒体嵴断裂,疏松溶解,并伴有基质颗粒减少或消失。盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量、低剂量组线粒体结构明显改善,线粒体膜总体清晰,线粒体嵴基本完整,说明参麻益智方可以改善VCI大鼠脑组织线粒体结构。3.3参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体关键蛋白AMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A mRNA表达水平的影响与假手术组比较,模型组AMPK、PPARα、PGC-1α和ATP5A mRNA表达水平明显低于对照组(P<0.05,P<0.01)。参麻益智方干预后,AMPK、PPARα、PGC-1α和ATP5A mRNA的表达均较模型组显着升高(P<0.05,P<0.01)。模型组UCP2mRNA表达高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,盐酸多奈哌齐组、参麻益智方高剂量组(SMYZ-H)和参麻益智方低剂量组(SMYZ-L)UCP2mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。3.4参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体关键蛋白AMPK、pAMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A蛋白表达的影响与假手术比较,模型组pAMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,参麻益智方高剂量组(SMYZ-H)pAMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A蛋白表达水平均显着升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。而AMPK蛋白表达水平无明显差异,提示AMPK可能通过磷酸化参与此途径。结论1确定了参麻益智方的最佳提取工艺及主要化学成分,为探讨其防治VCI的药理作用和机制研究提供了化学物质基础。2脑组织线粒体结构改变和能量代谢障碍可能是VCI的重要病理基础。3参麻益智方具有提高慢性脑低灌注致VCI大鼠学习记忆能力的作用,并改善海马组织的病理形态,保护神经元,增强胆碱能系统功能,抑制炎症反应,提高机体抗氧化能力。其作用机制和提高线粒体关键蛋白AMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2的表达,改善脑组织能量代谢相关。
李玉秋[3](2021)在《“益气调血、扶本培元”药线灸对多发梗死性痴呆大鼠海马氨基酸类递质含量的影响》文中研究指明目的:观察“益气调血、扶本培元”药线灸对多发性梗死痴呆(MID)模型大鼠海马组织的氨基酸类递质氨酸(Glu)、天门冬氨酸(ASP)、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GABA)含量及相关蛋白N-甲基-D天冬氨酸受体亚型NR1、脑源性神经营养因子(BDNF)的影响作用,为针灸治疗MID提供一定的实验机制依据及推广应用依据。方法:将70只Wistar雄性大鼠使用数字随机法随抽取10只为正常组,余60只为预用栓子造模组;栓子造模组采用微血栓栓塞法造MID模型,经Morris水迷宫筛选出符合MID标准的大鼠40只后,按随机数字法将栓子造模组随机分为模型组、药线灸组、西药组和药线非穴组各10只。药线灸组予“益气调血,扶本培元”药线点灸治疗,西药组给予盐酸美金刚灌胃治疗,药线非穴组给予两肋下非穴点药线点灸治疗,正常组、药线非穴组予同药线灸组相同时间、相同程度的抓摸刺激。干预4w后,用酶联免疫法检测大鼠海马Glu、Asp、Gly、GABA含量,用免疫印迹法检测海马NR1、BDNF蛋白表达。结果:(1)Glu、Asp检测:与正常组相比,模型组大鼠海马组织的含量明显上升(P<0.01);与模型组比较,药线灸组、西药组含量显着降低(P<0.01);药线灸组与西药组含量无统计学差异(P>0.05);药线非穴组与模型组相比含量无统计学差异(P>0.05)。(2)Gly、GABA检测:与正常组相比,模型组的含量明显下降(P<0.01);与模型组比较,药线灸组、西药组的含量显着升高(P<0.01);药线灸组与西药组含量无统计学差异(P>0.05);药线非穴组与模型组相比含量无统计学差异(P>0.05)。(3)NR1蛋白检测:与正常组比较,模型组大鼠海马组织中表达显着上调(P<0.01);与模型组比较,西药组、药线灸组大鼠海马组织蛋白表达显着降低(P<0.01);药线灸组与西药组蛋白表达无统计学差异(P>0.05);药线非穴组与模型组比差异无统计学意义(P>0.05)。(4)BDNF蛋白检测:与正常组比较,模型组大鼠海马组织中表达显着降低(P<0.01);与模型组比较,西药组、药线灸组大鼠海马组织中蛋白表达显着上调(P<0.01);药线灸组与西药组蛋白表达无统计学差异(P>0.05);药线非穴组与模型组比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:“益气调血,扶本培元”药线灸可降低MID大鼠海马兴奋性氨基酸类递质Glu、Asp的含量,提高抑制性氨基酸类递质Gly、GABA的含量,拮抗NR1受体,从而减少兴奋性氨基酸的毒性损伤。“益气调血,扶本培元”药线灸可增加MID大鼠海马BDNF蛋白表达,保护海马记忆神经元,从而有效改善MID的认知功能障碍。
田丹枫[4](2020)在《参知健脑方对拟血管性痴呆细胞模型的神经保护作用及机制研究》文中进行了进一步梳理血管性痴呆(Vascular Dementia,VD)是痴呆常见类型之一,以记忆力进行性衰退、认知功能障碍及性格、情感等精神改变为主要临床表现。VD的病理机制与兴奋性氨基酸毒性损伤、突触可塑性改变、钙超载、氧化应激损伤及细胞凋亡等过程密切相关,早预防、早发现、早治疗可显着提高VD患者的生存率及生活质量,降低死亡率。课题组基于VD的“毒损脑络”中医创新病因病机理论并结合多年临床经验,创制了具有解毒通络作用的参知健脑方。前期动物体内实验研究表明,本方可改善VD大鼠的认知功能,修复受损海马神经元,通过调控谷氨酸突触囊泡转运关键蛋白clathrin介导的NMDA受体内吞过程,减轻谷氨酸所致神经兴奋性毒性而起到神经保护作用。但研究大多仅从单个靶点或通路评估参知健脑方对VD的干预作用,并未完全解释其药效机制;且目前尚未对其进行体外细胞实验深入分析验证,其分子机制值得更深入地探索研究。目的:基于VD“毒损脑络”理论,(1)通过网络药理学探讨参知健脑方治疗VD的药理作用及分子机制;(2)通过体外实验,筛选干预药物的适宜浓度,并探讨参知健脑方对拟VD细胞模型增殖及毒性的影响;(3)研究参知健脑方对拟VD细胞模型周期、凋亡及细胞内游离Ca2+和ROS/Superoxide水平的影响,探讨其对VD细胞模型谷氨酸兴奋性毒性的神经保护作用,并验证参知健脑方的治疗有效性及网络药理学结果的可靠性;(4)研究参知健脑方对拟VD细胞模型clathrin、RAB5B和NMDAR1表达水平的影响,探讨其是否通过调控clathrin介导的NMDA受体内吞过程发挥对VD的治疗作用,并验证网络药理学结果的可靠性。方法:第一部分:依托多种数据库检索并收集参知健脑方的入血化学成分、作用靶点和VD作用靶点,随后整合数据获得参知健脑方治病靶点。通过Cytoscape3.7.1构建参知健脑方-活性化合物-治病靶点网络图,STRING数据库构建蛋白互作网络,DAVID数据库进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。第二部分:采用谷氨酸诱导PC12细胞损伤作为VD细胞模型,采用CCK-8法和IncuCyte动态细胞成像技术筛选出谷氨酸适宜造模剂量及参知健脑方低、中、高干预剂量。参知健脑方各剂量与盐酸美金刚分别干预VD细胞模型,观察其对细胞形态、细胞增殖及毒性的作用。第三部分:采用谷氨酸诱导的PC12细胞损伤作为VD细胞模型,参知健脑方各剂量与盐酸美金刚分别干预VD细胞模型,采用流式细胞术等技术观察其对细胞周期、凋亡、细胞内游离Ca2+、活性氧和超氧化物(ROS/Superoxide)水平的影响,qRT-PCR检测caspase-3 mRNA的相对表达水平。第四部分:采用谷氨酸诱导的PC12细胞损伤作为VD细胞模型,参知健脑方各剂量与盐酸美金刚分别干预VD细胞模型。采用免疫荧光和Western blot技术分别检测clathrin、RAB5B和NMDAR1的分布和蛋白表达水平;qRT-PCR技术检测clathrin和NMDAR1在mRNA水平上的表达情况。结果:第一部分:网络药理学研究结果表明,(1)参知健脑方-活性化合物-治病靶点网络图包含3个单味药,18个活性化合物,154个治病靶点。其中,芍药苷、白芍苷和新芒果苷等活性成分关联基因较多,FGF1和FGF2位列治病靶点首位。(2)PPI网络包含154个靶点蛋白,关键蛋白涉及INS、ALB、AKT1、CASP3、JUN、PTGS2等。(3)GO富集分析共有条目4960个,其中生物过程相关条目4176个,细胞组成相关条目306个,分子功能相关条目478个。(4)KEGG富集分析共有相关通路30条,涉及MAPK信号通路、HIF-1信号通路、凋亡通路、神经活性配体-受体相互作用通路、钙信号通路等。第二部分:体外实验结果表明,(1)药物干预剂量筛选:谷氨酸适宜造模剂量为22.5 mM,参知健脑方低、中、高剂量分别为:0.05、0.1、0.2 mg/mL,盐酸美金刚干预剂量为10 μM。(2)细胞形态学:正常PC12细胞呈不规则长梭形,形态完整,突起明显,贴壁牢固;谷氨酸处理的PC12细胞呈圆球形,结构不完整,胞体皱缩,易聚集成团;突起变短或减少、消失,细胞贴壁不牢;随着时间的增加,死细胞数明显增多,细胞死亡率显着上升。与模型组相比,参知健脑方各剂量组细胞胞体均相对完整,部分细胞突起少量存在,存在突触间联系;细胞贴壁较模型组牢固;随着时间的增加,死细胞数增多不明显,细胞死亡率没有显着上升。盐酸美金刚组细胞形态较模型组略有改善。(3)CCK-8增殖实验:谷氨酸可以显着降低PC12细胞活力,抑制细胞增殖(P<0.05);参知健脑方各剂量和盐酸美金刚均可明显提高PC12细胞活力,促进细胞增殖,降低细胞毒性(P<0.01)。(4)IncuCyte增殖实验:谷氨酸可以持续增加细胞绿色荧光面积和死细胞数,死亡率呈明显上升趋势,细胞融合率持续下降;参知健脑方各剂量均可以有效减少细胞绿色荧光面积和死细胞数,死亡率降低,融合率呈上升趋势;盐酸美金刚的各项结果趋势与谷氨酸类似。(5)CFSE增殖实验:谷氨酸可以明显增高CFSE平均荧光强度(P<0.01),参知健脑方各剂量和盐酸美金刚CFSE平均荧光强度均呈减弱趋势,但差异无显着统计学意义(P>0.05)。第三部分:体外实验结果表明,(1)细胞周期:谷氨酸可以显着增加S期细胞比例,使细胞阻滞在S期(P<0.01);参知健脑方各剂量和盐酸美金刚均可以显着降低S期细胞比例(P<0.01)。(2)细胞凋亡:谷氨酸可以明显增加凋亡率(P<0.01),参知健脑方各剂量和盐酸美金刚均可以显着减少细胞凋亡(P<0.01)。(3)Ca2+和ROS/Superoxide水平:谷氨酸可明显升高细胞内Ca2+和ROS/Superoxide水平(P<0.01),参知健脑方各剂量和盐酸美金刚均可不同程度降低细胞内Ca2+和ROS水平(P<0.05,P<0.01)。(4)qRT-PCR:谷氨酸可以明显增加caspase-3 mRNA的表达水平(P<0.01);参知健脑方和盐酸美金刚均可显着降低caspase-3 mRNA的表达水平(P<0.01)。第四部分:体外实验结果表明,(1)免疫荧光:clathrin主要表达于细胞膜和细胞质;RAB5B主要表达于细胞膜和细胞质中的早期内体;NMDAR1主要表达于细胞膜和突触。谷氨酸显着降低clathrin和RAB5B的表达(P<0.01,P<0.01),增加NMDAR1的水平(P<0.01);参知健脑方各剂量均可上调clathrin、RAB5B水平(P<0.05,P<0.05),下调NMDAR1水平(P<0.05)。(2)qRT-PCR:谷氨酸可明显降低clathrin mRNA的表达(P<0.01),并增加NMDAR1 mRNA的表达水平(P<0.01);参知健脑方可明显增加clathrin的表达并显着降低NMDAR1的表达水平(P<0.01)。(3)Western Blot:谷氨酸可抑制clathrin和RAB5B的表达,明显增加NMDAR1的表达水平(P<0.01);参知健脑方各剂量均可以显着上调clathrin、RAB5B表达水平,下调NMDAR1 的水平(P<0.01)。结论:(1)参知健脑方治疗VD的作用靶点和通路机制呈现多角度、多途径、多环节的特点,其治病靶点大多与血管、神经保护及突触可塑性调节相关,且靶点与通路之间相互协同发挥作用,提示这可能是参知健脑方治疗VD的关键,为深入研究参知健脑方治疗VD的其他机制提供了新思路。(2)适宜浓度的谷氨酸可以显着促进PC12细胞增殖,但谷氨酸浓度过高会产生细胞毒性,导致细胞死亡。参知健脑方各剂量能均能明显促进细胞增殖,提高细胞活力及细胞融合率,减少死细胞数目及死亡率,减少细胞毒性损伤;均对细胞形态有一定修复作用,改善细胞贴壁不牢的状态。(3)参知健脑方能有效修复细胞周期循环,下调caspase-3的表达而减少细胞凋亡;降低细胞内Ca2+浓度而阻止Ca2+内流并增强细胞清除ROS和Superoxide的能力,减少谷氨酸毒性积累及氧化应激损伤。参知健脑方可影响上述多种途径发挥神经保护作用;验证了参知健脑方治疗VD的有效性以及网络药理学计算机预测结果的可靠性。(4)Clathrin介导的NMDA受体胞吞障碍导致谷氨酸兴奋性毒性积累,“解毒通络”的参知健脑方可改善谷氨酸损伤PC12细胞clathrin介导的NMDA受体胞吞过程而降低谷氨酸神经兴奋性毒性。其发挥神经保护的作用机制可能与上调clarhrin和RAB5B的表达,促进clathrin介导的NMDA受体胞吞过程有关。验证了参知健脑方治疗VD的有效性以及网络药理学研究结果的可靠性,为“解毒通络”法则治疗VD提供了微观证据。
刘佳妮[5](2019)在《参麻益智方对血管性痴呆大鼠脑白质的影响和机制研究》文中指出血管性痴呆(Vasculardementia,VaD)是最常见的非变性病痴呆,目前是仅次于阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)第二大痴呆疾病[1]。目前VaD诊断不足、缺乏有效治疗方案,人均预期寿命延长以及高血压、冠心病、糖尿病、代谢综合征和脑卒中等危险因素使VaD患者人数持续上升。但VaD是可以防治的痴呆类型,具有可逆、早期干预预后较好的特点,因此迫切需要开发有效的诊断方法和药物进行诊断指导和治疗。研究表明,脑缺氧缺血引起的白质损伤是VaD的重要病理变化,脑白质的弥漫性改变伴髓鞘和轴突的丢失几乎是所有VaD亚型的共同特征,白质损伤与VaD认知能力下降密切相关,但目前其神经生物学机制尚不明确。参麻益智方是全国名老中医周文泉教授的经验方,以人参、天麻、鬼箭羽、川芎四味中药配伍,临床常用于治疗气虚血瘀阳亢型VaD,并取得了良好疗效,基于此,本实验通过研究参麻益智方对血管性痴呆模型大鼠白质损伤的影响及作用机制,以明确该方对VaD脑缺血缺氧后的白质病变是否有改善作用,本文同时也对VaD的白质损伤与血脑屏障(Blood brain barrier,BBB)破坏、氧化应激的相互关系进行了探讨,以期为探索有效的认知功能保护策略提供帮助。目的:观察参麻益智方对血管性痴呆大鼠白质的影响,并对参麻益智方的作用机制及其与血脑屏障通透性、氧化应激的相关性进行探讨。方法:1.采用聚苯乙烯微球栓塞法建立大鼠多发脑梗死痴呆模型,将56只雄性Wistar大鼠,随机分为空白组(Control)、假手术组(Sham)、模型组(Model)、多奈哌齐组(Donepezil)、参麻益智方低剂量组(SMYZ-L)、中剂量组(SMYZ-M)、高剂量组(SMYZ-H)。造模结束3天后,多奈哌齐组予0.5mg/kg药物灌胃,参麻益智方低、中和高剂量组分别予3.3g/kg、6.6g/kg及16.5g/kg药物灌胃,假手术组、模型组予等量蒸馏水灌胃。2.连续4周给药后,采用Morris水迷宫观测血管性痴呆大鼠的逃避潜伏期、穿台次数、原平台活动时间及路程的结果,评估大鼠空间学习记忆能力;采用苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE)、尼氏染色(Nissl)评估大鼠海马CA1区神经元形态学和尼氏小体的病理变化。3.卢卡斯快蓝染色(Luxol fast blue,LFB)观察胼胝体区髓鞘形态、免疫印迹法(Western blot,WB)检测脑白质髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)以评估髓鞘脱失情况。WB检测海马组织内紧密连接蛋白Occludin、ZO-1,缝隙连接CX43的蛋白表达,评估BBB功能。比色法检测海马组织过氧化氢酶(Catalase Micrococcus lysodeikticus,CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)的活性,微量还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)、细胞丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量,评估氧化应激水平。结果:1.行为学检测定位航行实验:同一天组间比较:与Sham组相比,Model组的潜伏期第二天开始明显高于Sham组,组间相比差异具有统计学意义(P<0.05);提示多发梗死性VaD模型的Model组大鼠学习能力明显下降;与Model组比较,Donepezil组潜伏期第二天开始明显缩短(P<0.05),SMYZ-M、SMYZ-H组在第三天开始明显缩短(P<0.05)。组内比较:与组内第一天比较,所有组大鼠的潜伏期均有缩短,其中Control组、Model组在第二天开始潜伏期均明显缩短(P<0.05),Donepezil组和SMYZ-L、SMYZ-M、SMYZ-H组在训练第三天的潜伏期也明显缩短(P<0.05)。空间探索实验:与Control组相比,Sham组差异无统计学意义;与Sham组比较,Model组穿台次数减少,第一象限时间与路程降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与Model组比较,SMYZ-L、SMYZ-H组的大鼠穿台次数显着增加,差异具有统计学意义(P<0.05);Donepezil组和SMYZ-M组第一象限活动路程增加,差异有统计学意义(P<0.05)。2.脑组织病理形态光学显微镜下观察大鼠海马CA1区的病理形态变化。可见Control及Sham组细胞层次分明,排列整齐有序,细胞形态规则,尼氏体丰富,呈深蓝色的颗粒或斑块状:Model组与Control组相比,大鼠海马CA1区细胞间隙增大,排列散乱无序,细胞形态不规则,尼氏体崩解或丢失,颜色变浅且分布散乱;与Model组大鼠对比,Donepezil、SMYZ-L、SMYZ-M和SMYZ-H组海马CA1区细胞层数增加,排列较为紧密,病理形态均有不同程度改善,胞浆内可见较多尼氏体,丢失不明显。3.胼胝体髓鞘形态和蛋白表达LFB染色可观察到,Control组大鼠胼胝体区髓鞘呈深蓝色,髓鞘染色呈条索状、髓鞘纤维排列致密;与Control组比较,Sham组髓鞘纤维排列稍散乱,髓鞘着色未变浅;Model组大鼠与Control组比较,胼胝体髓鞘着色变浅、结构疏松、胼胝体(Corpus callosum,CC)区域视野下数量较少。Donepezil及SMYZ干预后胼胝体区域髓鞘颜色变深,结构较紧密。WB结果显示,与Control组相比,Sham组的MBP表达量无统计学差异(P>0.05),Model组海马组织中MBP的表达量明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);与Model组相比,Donepezil组和SMYZ-H组的MBP明显增多,差异具有统计学意义(P<0.05),SMYZ-L、SMYZ-M组具有改善作用,但差异无统计学意义。4.BBB相关蛋白表达WB结果显示与Sham组相比,Model组大鼠脑海马组织中Occludin、ZO-1的表达明显减少,Model组与Sham组相比差异有统计学意义(P<0.05)。Donepezil和 SMYZ 干预可增加 Occludin、ZO-1 的表达,其中 Donepezil、SMYZ-H组与Model组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。与Sham组相比,Model组大鼠CX43表达明显增多(P<0.05),SMYZ-M、SMYZ-H组干预可明显减少CX43的表达,与Model组相比差异具有统计学意义(P<0.05);Donepezil组和SMYZ-L组也可一定程度减少CX43的表达,但差异不具有统计学意义(P>0.05)。5.氧化应激水平比色法结果显示,与Control组相比,Sham组CAT、GSH、SOD的活性及MDA含量无统计学差异(P>0.05)。与Sham组相比,Model组CAT、GSH、SOD活性明显下降,且MDA含量明显升高,组间相比差异具有统计学意义(P<0.05)。与Model组相比,Donepezil、SMYZ-H组CAT活性明显升高(P<0.05),SMYZ-L、M组CAT活性相比于Model组具有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);SMYZ-M和SMYZ-H组的GSH活性明显升高(P<0.05);SMYZ-M、SMYZ-H 组 SOD 的活性明显增高(P<0.05),Donepezil与 SMYZ-L组SOD活性相比于Model组具有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);Donepezil、SMYZ-M、SMYZ-H组MDA含量明显降低,与Model组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:一、参麻益智方可明显提高血管性痴呆大鼠空间学习记忆能力,一定程度改善组织细胞病理形态学特征,具有神经保护作用;二、参麻益智方可增加MBP表达,改善胼胝体髓鞘形态,具有脑白质保护作用;三、可降低屏障通透性,改善BBB功能障碍;四、可增强神经细胞清除自由基和活性氧的能力,减轻氧化应激损伤。五、其改善白质的作用机制可能与以下两个方面有关:(1)改善紧密连接和缝隙连接蛋白功能,保护屏障完整性而减轻BBB功能障碍,阻止炎性因子和血浆内有害物质渗漏入脑而改善神经细胞内环境、减少细胞凋亡,从而减轻白质损伤。(2)增强神经细胞清除自由基和活性氧的能力,缓解神经血管单元功能失调,减轻活性氧自由基(Reactive oxygen species,ROS)介导的神经元损伤、细胞能量代谢障碍,减轻脑深部白质微血管损害,从而减缓白质梗死的形成。参麻益智方改善白质损伤的作用机制作为减轻或预防VaD的新型神经保护方法的重点,具有潜在的可行性和应用价值。
伍大华[6](2013)在《基于脑髓理论分阴阳论治的补肾活血法干预血管性痴呆的疗效及作用机制研究》文中认为目的:在中医脑髓理论的指导下,通过随机对照的研究方法,观察温肾活血、滋肾活血两种不同的补肾活血法治疗(Vascular dementia, VaD)的临床疗效,并评价两法对VaD患者胆碱能系统神经递质及血管内皮功能活性物质的影响,以探讨作用机制;另外,通过对肾阳虚血瘀证、肾阴虚血瘀证VaD患者智能障碍结构差异、胆碱能神经递质失衡和血管内皮功能活性物质变化的不同特点及对应治法干预效果的分析,验证补肾活血法治疗VaD分阴阳论治的优越性,提出“脑髓阴阳论”的假说。方法:采用完全随机、对照的原则,用随机数字表法按照1:1的比例将符合肾阳虚血瘀证VaD诊断标准的50例肾阳虚血瘀证患者,随机分为温肾活血组25例和对照1组(奥拉西坦胶囊)25例;将符合肾阴虚血瘀证VaD诊断标准的50例肾阴虚血瘀证患者随机分为滋肾活血组25例和对照2组(奥拉西坦胶囊)25例。温肾活血组给予温肾活血方治疗,滋肾活血组给予滋肾活血方治疗,对照1组和对照2组均给予奥拉西坦胶囊治疗。从简易精神状态量表(MMSE)、日常生活活动能力量表(ADL)、中医证候、中枢胆碱能神经递质、血管内皮活性物质等方面进行研究,观察温肾活血方和滋肾活血方治疗VaD的临床疗效,并探讨其生化机制。另外,从临床表现特点、智能障碍构成、胆碱能神经递质失衡、血管内皮活性物质变化等方面,比较肾阳虚血瘀证和肾阴虚血瘀证VaD的差异,寻找脑髓分阴阳的临床与物质依据。结果:共收集患者100例,包括肾阳虚血瘀证患者50例、肾阴虚血瘀证50例。其中剔除、脱落病例5例,最终纳入统计的病例为95例,其中肾阳虚血瘀患者47例(包括温肾活血组24例、对照1组23例),肾阴虚血瘀患者48例(包括滋肾活血组24例、对照2组24例)。温肾活血组、滋肾活血组、对照1组、对照2组的MMSE评分、ADL评分、中医证候积分等观察指标均明显改善(与治疗前比较,P<0.01或P<0.05),而且温肾活血组、滋肾活血组的疗效均明显优于奥拉西坦胶囊(治疗后组间比较,P<0.05或P<0.01));温肾活血组、滋肾活血组的神经功能缺损评分(NIHSS)均明显改善(与治疗前比较,P<0.05),对照1组、对照2组均不明显(与治疗前比较,P>0.05)。MMSE项目增分上,四组的记忆积分、计算积分均明显改善(与治疗前比较,均P<0.05),温肾活血组与对照1组比较无显着性差异(P>0.05),滋肾活血组与对照2组比较无显着性差异(P>0.05)。温肾活血组的语言积分、滋肾活血组的视空间执行能力积分均得到明显改善(与治疗前比较,P<0.05),对照1组的语言积分、对照2组的视空间执行能力积分均改善不明显(与治疗前比较,P>0.05)。温肾活血组与对照1组的定向力积分、视空间执行能力积分均无明显改善(与治疗前比较,均P>0.05)。滋肾活血组与对照2组的定向力积分、语言积分均无明显改善(与治疗前比较,均P>0.05);肾阳虚血瘀组与肾阴虚血瘀组MMSE构成因子比较:记忆力、计算力、定向力均无显着性差异(P>0.05)。语言有极显着性差异(P<0.01),提示肾阳虚血瘀VaD的语言损害重于肾阴虚血瘀证VaD。视空间执行能力有显着性差异(P<0.05),提示肾阴虚血瘀证VaD的视空间执行能力损害重于肾阳虚血瘀证VaD.肾阳虚血瘀证与肾阴虚血瘀证两组VaD患者的胆碱能神经递质和血管内皮活性物质比较:Ach有极显着性差异(P<0.01),说明肾阳虚血瘀VaD患者的Ach含量较肾阴虚血瘀更低;AchE有极显着性差异(P<0.01),说明肾阴虚血瘀VaD患者的AchE活性较肾阳虚血瘀增加更明显;ET有极显着性差异(P<0.01),说明肾阴虚血瘀VaD患者的血浆ET含量较肾阳虚血瘀增加更明显;CGRP有极显着性差异(P<0.01),说明肾阳虚血瘀VaD患者的血清CGRP含量较肾阴虚血瘀降低更明显。四组的Ach含量提高、AchE活性抑制、ET含量降低、CGRP含量增加均明显(与治疗前比较,P<0.01或P<0.05),而且温肾活血组治疗后的Ach含量提高较对照1组明显(P<0.05)、滋肾活血组治疗后的AchE活性抑制较对照2组明显(P<0.05),两中药组治疗降低ET含量、增加CGRP含量作用均优于对照组(P<0.01)。结论:1.温肾活血方和滋肾活血方均为VaD临床有效的治疗组方,体现了中医辨证论治的优越性。2.温肾活血方和滋肾活血方的临床疗效及对认知障碍因子构成改善的针对性可能是分阴阳论治肾虚血瘀证VaD的优势体现。3.调节胆碱能神经递质失衡及调节血管内皮活性物质失调、改善血管内皮功能可能是温肾活血方和滋肾活血方干预VaD的疗效机制之一。4.脑髓亦有阴阳之分,肾阳虚血瘀证和肾阴虚血瘀证VaD在痴呆临床表现、认知能力构成、胆碱能神经递质失衡、血管内皮活性物质变化等方面存在的差异,可能是脑髓阴阳论的临床和物质基础。
张吉仲[7](2009)在《益智五海胶囊治疗血管性痴呆的作用机理研究》文中进行了进一步梳理目的:研究益智五海胶囊对血管性痴呆动物模型学习记忆行为学的影响;对模型动物的学习记忆相关神经递质——海马的Ach、AchE,大脑皮层单胺类递质5-HT、DA、NE的影响;对模型动物神经毒性相关递质——海马Glu、Gly、GABA、Asp的影响;对影响血液循环的相关血管活性物质ET、CGRP、TXB2、6-Keto-PGF1α以及血液流变性的影响;对肾精亏虚动物模型和记忆障碍动物模型的学习记忆的行为学的影响及体重增长、游泳时间、血液中ChE的影响,进而探求益智五海胶囊治疗血管性痴呆的的作用机制。方法:在结扎双侧颈总动脉(CCA)的基础上建立改良的缺血再灌注血管性痴呆大鼠模型、脉络瘀滞合并缺血再灌注血管性痴呆大鼠模型;建立老年肾精亏虚大鼠模型和氢化可的松肾虚小鼠模型;建立记忆获得障碍小鼠模型、记忆巩固障碍大鼠模型、记忆再现缺失小鼠模型。用跳台法、Morris水迷宫法、避暗法检测空间学习记忆的行为学指标;用ELISA法测定海马中Ach的含量,分光光度法测定海马中AchE的含量,荧光分光光度法测定大脑皮层5-HT、DA、NE的含量;用毛细管电泳法测定海马中Glu、Gly、GABA、Asp含量;放射免疫法测定血液ET、CGRP、TXB2、6-Keto-PGF1α的含量;测定血液流变性;测定氢化可的松肾虚小鼠游泳时间、脏器指数等。用喜得镇作阳性对照药物。采用SPSS11.5进行单因素方差分析法统计实验结果。结果:益智五海胶囊高剂量组的模型动物海马内Ach含量明显升高,与模型组比较差异显着(p<0.05):益智五海胶囊中、高剂量组对缺血再灌注血管性痴呆大鼠模型的NE的升高作用显着(P<0.05);益智五海胶囊各给药组升高CGRP、6-Keto PGF1α的作用显着(P<0.05);益智五海胶囊中、高剂量组降低TXB2作用显着(P<0.05);但是对ET的降低效果不显着(P>0.05);益智五海胶囊各给药组降低全血低切还原粘度,全血低切相对粘度,血浆粘度(P<0.05);降低海马Glu、Asp的含量,升高Gly的海量(P<0.05);益智五海胶囊各给药组延长肾虚小鼠的游泳时间(P<0.05);益智五海胶囊各给药组行为学检测的逃避潜伏期等具较模型组有显着差异(P<0.05)。结论:益智五海胶囊具有补肾益智、通脉活络,通过补肾精、通瘀滞、化痰浊、通经络、舒滞气,使肾精得补,脑髓得养,瘀血得化,痰浊可除,玄府得开,脉络得通,智力得复。可以改善动物模型空间学习记忆功能,提高动物模型的智力,其机制可能为:增加海马Ach的含量和大脑皮层的NE含量,同时,可降低血液中ChE的含量,维持海马神经元的信息传递和胆碱能神经功能的完整性,降低动物模型海马Glu、Asp的含量,提高Gly的含量,减轻氨基酸毒性对海马的损伤,从而维持神经组织功能的完整性。调节血管活性物质CGRP和ET、TXA2和PGI2含量,即升高CGRP、PGI2含量,降低ET、TXA2的含量;扩张血管,提高血液的流变性,改善血液循环,从而改善脑组织的血供和氧供,减轻脑组织因缺血缺氧造成的损伤。
何松彬[8](2008)在《血管性认知功能障碍的中药药理研究进展》文中研究表明随着痴呆研究的深入,血管性认知功能障碍(vascular cognitive impairment,VCI)引起人们的重视,国外学者主张用VCI代替血管性痴呆(vascular dementia,VD)。VCI由各种血管因素引起,血管因素主要指脑内血管,可以是这些血管本身的病变,也可以是颅外大血管及心脏病变间接影响脑内血流灌注;认知障碍则包括了各种水平的认知功能下降。VCI的应用有利于早诊断、早干预,避免漏诊。提出这个概念重点在于强调血管因素,发现可治疗的血管性原因和危险因素,有利于疾病的早期诊断和早期干预,以便早期进行一级预防和二级预防。
武常生[9](2006)在《醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠治疗作用机理研究》文中研究表明目的:血管性痴呆(以下简称VD)属中医学老年呆病范畴。近年来,随着社会人口老龄化,VD的患病率越来越高,成为严重影响人们生活质量的重要因素。因此,深入探讨VD的病理机制,开发和研制防治VD的有效药物具有非常重要的意义。根据中医学对VD的传统认识和现代研究成果,导师以补益肝肾,化痰祛瘀为法,研制成醒脑启智胶囊。采用双侧颈总动脉结扎的方法制备小鼠VD模型,观察了该方药对VD小鼠行为学、脑组织海马区神经递质、海马组织病理形态学、海马细胞增殖与凋亡及海马组织NGBmRNA等指标的影响,以进一步探讨其对VD的治疗作用机理。方法:第一部分醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠行为学及脑组织病理形态学的影响实验采用双侧颈总动脉结扎的方法制备血管性痴呆小鼠模型。健康雄性昆明小鼠360只,随机分为假手术组、模型组、醒脑启智胶囊高剂量组(以下简称“高剂量组”)、醒脑启智胶囊低剂量组(以下简称“低剂量组”)、银杏叶液对照组(以下简称“银杏叶组”)、尼莫地平液对照组(以下简称“尼莫地平组”)6组,每组60只。假手术组小鼠只分离颈总动脉,穿线但不结扎,尾部不放血,其余各组结扎双侧颈总动脉阻断血流加尾部放血,制备反复脑缺血再灌注VD模型。术后第2天开始治疗。高剂量组和低剂量组灌服醒脑液,银杏叶组灌服银杏叶液,尼莫地平组灌服尼莫地平液,假手术组和模型组均灌服生理盐水。分别于术后7、15、30d进行行为学实验(跳台法、水迷宫法)。行为学实验结束后断头处死小鼠,取左侧脑组织固定后切片,常规HE染色,光镜下观察脑组织的形态变化。第二部分醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠脑组织海马区神经递质的影响
林海[10](2005)在《参知健脑方对拟血管性痴呆大鼠的治疗作用及其对胆碱能系统的影响》文中研究说明血管性痴呆(VD)在我国由于脑血管病的多发而成为高发性疾病,是老年期痴呆的主要类型之一。现代医学在血管性痴呆病理及病理生理研究方面已取得了很大进展,并且从多角度、多层次对其进行了研究,而随着近年来中医药基础和临床研究的深入,中医药在本病的防治上日益显示出优势。 论文的综述部分从中医角度对 VD 病因病机、辨证分型及治疗等方面进行探讨,结合导师的临床经验,提出“正虚毒侵”为 VD 的病因病机;“扶正解毒”为其治则治法;参知健脑方的提出既符合痴呆现代药理学的研究,又是针对“正虚毒侵”的病因病机提出的“扶正解毒“治则治法的体现。从现代医学的角度,对 VD 发病的危险因素、病理变化、诊断治疗及胆碱能调控系统等方面进行研究,推论出胆碱能系统对 VD 的发生发展起重要作用;可以通过有效地消除危险因素,控制和改善心脑血管障碍,达到治疗和预防 VD 的目的。 实验研究分为以下四部分: 实验一、行为学实验 ①通过反复夹闭、再通双侧颈总动脉同时腹腔注射硝普钠制造大鼠拟血管性痴呆模型,通过 Morris 水迷宫检验大鼠的学习、记忆功能,并反证模型的成功建立。②使用参知健脑方大、中、小剂量对拟血管性痴呆大鼠进行治疗,通过 Morris 水迷宫来探讨参知健脑方对拟血管性痴呆模型大鼠的作用机理,并确定最佳剂量。 实验二、病理学实验 ①通过制作假手术组、模型组、参知健脑方大、中、小剂量组和阳性药组大鼠脑组织的病理切片并使用 HE 染色来观察拟血管性痴呆造模后大鼠海马 CA1 区整体形态和细胞的变化,使用阳性药和参知健脑方大、中、小剂量治疗后大鼠海马 CA1 区的整体形态和细胞是否有所好转。②计数 HE 染色病理切片中 100μm2内各组大鼠脑组织切片海马 CA1区的细胞数,并进行比较。③通过制作假手术组、模型组、参知健脑方大、中、小剂量组和阳性药组大鼠脑组织的病理切片并使用尼氏体甲苯胺蓝染色来观察拟血管性痴呆造模后大鼠海马 CA1 区整体形态及细胞的变化,使用阳性药和参知健脑方大、中、小剂量治疗后大鼠海马 CA1 区整体形态及细胞是否有所好转。④计数尼氏体甲苯胺蓝染色病理切片中 100μm2内各组大鼠脑组织切片海马 CA1 区的细胞数,并进行比较。 实验三、胆碱能系统部分 ①通过病理学方法制作假手术组、模型组、参知健脑方中剂量组大鼠脑组织的病理切片,并使用免疫组化的方法观察胆碱乙酰转移酶(ChAT)在各组大鼠海马 CA1 区的表达情况。②通过病理学方法制作假手术组、模型组、参知健脑方中剂量组大鼠脑组织的病理切片并使用免疫组化的方法观察乙酰胆碱酯酶(AchE)在各组大鼠海马 CA1 区的表达情况。③通过高效液相电化学工作站检测假手术组、模型组、中剂量参知健脑方治疗组大鼠海马内乙酰胆碱含量的变化。④通过胆碱能系统变化进一步探讨血管性痴呆发生的病理机制及参知健脑方对其的治疗作用。进而进一步论治“正虚”的致病机理及“扶正”的治则治法。 2 参知健脑方对拟血管性痴呆大鼠的治疗作用及其对胆碱能系统的影响实验四、Bax 凋亡相关蛋白的测定通过病理学方法制作假手术组、模型组、参知健脑方中剂量组大鼠脑组织的病理切片并使用免疫组化的方法观察凋亡相关蛋白 Bax 在各组大鼠海马 CA1 区的表达情况并且探测其光密度情况和阳性细胞数。进而进一步论治“毒侵”的致病机理及“解毒”的治则治法。结果:拟血管性痴呆模型组大鼠与假手术组大鼠相比,模型组大鼠较学习、记忆能力有显着的降低,海马 CA1 区中段 100μm2内的的细胞数明显减少,海马 CA1 区的 ChAT和 AchE 表达明显的减少,Bax 表达明显增多,海马内 Ach 含量明显减少。阳性药和小剂量组大鼠与模型组比较没有十分明显的改观,大剂量组和中剂量组大鼠有明显恢复,尤其中剂量组大鼠恢复的最佳。结论:拟血管性痴呆模型大鼠的海马和胆碱能调控系统均受到了严重损害,这正符合我们认为血管性痴呆“正虚”的病因病机;同时,模型大鼠海马 CA1 区中段 Bax 的表达明显增加,而 Bax 能够促进凋亡,从另一角度说明血管性痴呆“毒侵”的病因病机。采用参知健脑方可以明显改善大鼠的学习、记忆行为,减轻海马 CA1 区神经细胞所受的损伤,上调模型大鼠海马 CA1 区 ChAT 和 AchE 的表达,下调模型大鼠海马 CA1 区 Bax的蛋白表达,增加拟血管性痴呆大鼠海马内 Ach 含量。说明参知健脑方通过改善拟血管性痴呆模型大鼠的胆碱能调控系统以及降低海马 CA1 区凋亡相关蛋白 Bax 的表达,达到“扶正解毒”的治疗目的。关键词:血管性痴呆、正虚、毒侵、扶正、解毒、参知健脑方
二、健脑益智冲剂对多发梗塞性痴呆大鼠模型大脑皮层单胺类神经递质和P物质含量的影响(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、健脑益智冲剂对多发梗塞性痴呆大鼠模型大脑皮层单胺类神经递质和P物质含量的影响(论文提纲范文)
(1)解毒益智方对阿尔茨海默病双转基因小鼠行为学及大脑皮层内β-淀粉样蛋白沉积及BACE1表达影响的研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
英文缩略语 |
引言 |
文献综述 |
综述一 AD的病因病机及治疗进展 |
1 中医学对痴呆的系统认识及研究进展 |
1.1 中医学对痴呆病名由来及发展的认识 |
1.2 中医学对痴呆病因病机的古代认识 |
1.3 中医学对痴呆辨证论治及相关研究的认识 |
1.4 中医学对痴呆治疗的古今认识 |
综述二 西医学对AD的发病机制及治疗进展研究 |
1 现代医学对AD的认识及研究进展 |
1.1 AD的概述及流行病学 |
1.2 现代医学对AD发病因素的认识及研究 |
1.3 现代医学对AD发病相关机制的认识 |
2 现代医学对AD治疗的认识 |
2.1 乙酰胆碱酯酶抑制剂(AchEIs) |
2.2 兴奋性氨基酸受体拮抗剂 |
2.3 甘露特纳胶囊 |
2.4 其他非药物治疗 |
3 问题与展望 |
综述三 Aβ在脑内异常沉积的机制 |
1.Aβ的产生、分布与清除、传递与运输的研究进展 |
1.1 Aβ的产生 |
2 Aβ的清除 |
2.1 细胞的清除作用 |
2.2 Aβ被降解酶的清除作用 |
2.3 中枢Aβ的清除途径 |
2.4 血液成分介导的Aβ清除 |
综述四 解毒益智方在阿尔茨海默病中的应用 |
1 解毒益智方的创立 |
1.1 脑髓理论 |
1.2 髓虚毒损 |
1.3 补肾益髓,活血化痰解毒法 |
2 解毒益智方通过调节SIRT1/AMPK通路抑制BACE1表达改善Aβ的沉积 |
3 解毒益智方对阿尔茨海默病的临床应用 |
实验研究 |
第一章 CCP对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤保护性的研究 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
5 小结 |
第二章 JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠行为学的研究 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
5 小结 |
第三章 JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠脑内Aβ水平变化的影响 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
5 小结 |
第四章 JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠脑内BACE1表达的影响 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
5 小结 |
结论 |
本文创新点 |
参考文献 |
附录1 |
致谢 |
在学期间主要研究成果 |
个人简介 |
(2)基于线粒体相关蛋白通路探讨参麻益智方对血管性认知障碍大鼠的作用机制(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
英文缩略词表 |
文献综述 |
综述一 线粒体能量代谢关键蛋白在认知障碍中的作用机制 |
1 能量代谢相关通路在认知障碍中的作用 |
2 线粒体能量代谢相关的关键蛋白在认知障碍中的作用 |
参考文献 |
综述二 基于中医“虚、瘀、毒”病机探讨能量代谢异常和血管性认知障碍的相互关系 |
1 中医“虚、瘀、毒”与血管性认知障碍的关系 |
2 中医“虚、瘀、毒”与能量代谢障碍的关系 |
3 脑的能量代谢与血管性认知障碍的关系 |
4 改善线粒体能量代谢治疗血管性认知障碍的中药复方研究 |
参考文献 |
实验研究 |
前言 |
实验一 参麻益智方的提取方法和主要化学成分分析 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 小结 |
实验二 参麻益智方对慢性脑缺血致血管性认知障碍大鼠学习记忆能力的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 小结 |
实验三 参麻益智方对慢性脑缺血致认知障碍模型大鼠脑组织线粒体障碍相关蛋白的机制研究 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 小结 |
讨论 |
1 参麻益智方的组方特点和前期研究成果 |
2 慢性脑低灌注致血管性认知功能障碍大鼠模型 |
3 参麻益智方改善血管性认知障碍大鼠学习记忆功能 |
4 参麻益智方对血管性认知障碍大鼠线粒体数量和结构的影响 |
5 参麻益智方对线粒体关键蛋白能量代谢的影响 |
6 线粒体能量代谢的中医认识 |
参考文献 |
结论 |
创新点 |
不足与展望 |
致谢 |
个人简介 |
附件 |
(3)“益气调血、扶本培元”药线灸对多发梗死性痴呆大鼠海马氨基酸类递质含量的影响(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
引言 |
第一部分 文献研究 |
1 现代医学对血管性痴呆的认识 |
1.1 血管性痴呆的定义及临床症状 |
1.2 血管性痴呆的诊断标准及量表应用 |
1.3 血管性痴呆的分型 |
1.4 血管性痴呆的病因及发病机制的研究 |
1.5 血管性痴呆的相关危险因素 |
1.6 血管性痴呆的流行病学研究 |
1.7 血管性痴呆的治疗进展 |
1.8 血管性痴呆的动物模型 |
2 中医对血管性痴呆的认识 |
2.1 概述 |
2.2 中医病因病机 |
2.3 针灸治疗血管性痴呆的概况 |
第二部分 实验与研究 |
1 材料与方法 |
1.1 试剂与设备 |
1.2 实验动物及筛选 |
1.3 动物分组 |
1.4 动物模型的制备 |
1.5 模型筛选 |
1.6 干预方法及疗程 |
1.7 取材方法 |
1.8 指标检测 |
1.9 数据统计 |
2 结果 |
2.1 “益气调血、扶本培元”药线灸对MID大鼠海马区各种氨基酸含量的影响结果 |
2.2 “益气调血、扶本培元”药线灸对MID大鼠海马区NR1蛋白表达的影响结果 |
2.3 “益气调血、扶本培元”药线灸对MID大鼠海马区BDNF蛋白表达的影响结果 |
3 讨论 |
3.1 MID的模型选择 |
3.2 海马兴奋性氨基酸的毒性损害和受体损害是MID的重要发病机理 |
3.3 抑制性氨基酸对兴奋性毒性的拮抗作用 |
3.4 BDNF对海马神经元具有保护作用 |
3.5 西药对照组的选择依据 |
3.6 “益气调血,扶本培元”药线灸是传统中医理论和壮医理论结合的创新方法 |
3.7 优选“益气调血,扶本培元”药线灸治疗MID的依据 |
3.8 “益气调血,扶本培元”药线灸通过改善EAA毒性损伤及神经元损伤从而起到治疗MID作用 |
4 问题与展望 |
结论 |
参考文献 |
综述 “益气调血,扶本培源”治则运用于血管性痴呆的研究概况 |
参考文献 |
致谢 |
个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
(4)参知健脑方对拟血管性痴呆细胞模型的神经保护作用及机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
英文缩略词表 |
文献综述 |
综述一 参知健脑方各组分药物改善认知机制研究 |
1 人参 |
1.1 中医认识 |
1.2 化学成分 |
1.3 改善认知机制 |
2 知母 |
2.1 中医认识 |
2.2 化学成分 |
2.3 改善认知机制 |
3 赤芍 |
3.1 中医认识 |
3.2 化学成分 |
3.3 改善认知机制 |
参考文献 |
综述二 神经元突触囊泡内吞途径对神经系统疾病的影响 |
1 网格蛋白介导的内吞作用(CME)与神经系统疾病 |
1.1 网格蛋白包被组装 |
1.2 质膜内陷和凹窝形成 |
1.3 凹陷收缩和剪切 |
1.4 囊泡去包被 |
2 Kiss and run途径 |
3 不依赖网格蛋白的大量内吞作用(clathrin-independent bulk endocytosis,CIE) |
4 超速内吞作用 |
5 讨论与展望 |
参考文献 |
前言 |
第一部分 基于网络药理学的参知健脑方治疗血管性痴呆机制研究 |
1 研究材料 |
1.1 数据库 |
2 研究方法 |
2.1 参知健脑方入血活性化学成分的检索与筛选 |
2.2 参知健脑方药物成分-靶点、VD疾病-靶点及参知健脑方治病靶点的预测 |
2.3 参知健脑方活性成分-VD-靶点的网络构建 |
2.4 基因本体论(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析 |
3 研究结果 |
3.1 参知健脑方潜在入血活性化学成分的筛选结果 |
3.2 参知健脑方药物成分-靶点、VD疾病-靶点及参知健脑方治病靶点预测结果 |
3.3 参知健脑方-活性成分-VD靶点的网络构建 |
3.4 GO功能及KEGG通路富集分析结果 |
4 讨论 |
4.1 中医药研究与网络药理学 |
4.2 参知健脑方的理法方药分析 |
4.3 参知健脑方的网络药理学分析 |
5 小结 |
第二部分 参知健脑方和谷氨酸干预浓度筛选及其对拟VD细胞模型增殖及毒性的影响 |
1 实验材料 |
1.1 实验对象 |
1.2 主要实验药品及试剂 |
1.3 主要仪器设备及耗材 |
1.4 主要试剂的配制 |
2 实验方法 |
2.1 PC12细胞培养 |
2.2 谷氨酸诱导PC12细胞损伤的最适宜造模浓度筛选及参知健脑方低、中、高剂量适宜浓度筛选(CCK-8法) |
2.3 谷氨酸造模适宜浓度及干预药物适宜浓度的筛选验证(IncuCyte长时间动态活细胞成像及功能分析系统) |
2.4 谷氨酸诱导损伤PC12细胞模型的建立及分组给药 |
2.5 CCK-8法检测各组细胞增殖及毒性 |
2.6 IncuCyte长时间动态活细胞成像及功能分析系统检测各组细胞增殖及毒性2.7 CFSE细胞增殖实验 |
2.7 CFSE细胞增殖实验 |
2.8 统计学分析 |
3 研究结果 |
3.1 生理状态下PC12细胞的形态学特征 |
3.2 不同浓度谷氨酸和参知健脑方溶液对PC12细胞增殖及毒性的影响 |
3.3 参知健脑方对拟VD细胞模型的增殖及毒性影响 |
3.4 CFSE细胞增殖实验结果 |
4. 讨论 |
4.1 “毒损脑络”与VD |
4.2 “毒损脑络”的现代生物学内涵 |
4.3 “解毒通络”是治疗VD的重要法则 |
4.4 谷氨酸诱导损伤PC12细胞模型的建立 |
4.5 参知健脑方对谷氨酸损伤PC12细胞的增殖及毒性作用 |
5 小结 |
第三部分 参知健脑方对拟VD细胞模型周期、凋亡、钙离子浓度及活性氧的影响 |
1 实验材料 |
1.1 实验对象 |
1.2 主要实验药品及试剂 |
1.3 主要仪器设备及耗材 |
1.4 主要试剂的配制 |
2 实验方法 |
2.1 PC12细胞培养 |
2.2 谷氨酸损伤的PC12细胞模型的建立及各组给药 |
2.3 流式细胞术检测PC12细胞周期 |
2.4 流式细胞术检测PC12细胞凋亡 |
2.5 高内涵细胞成像分析系统检测PC12细胞内游离钙离子浓度、活性氧及超氧化物的水平 |
2.6 qRT-PCR技术检测PC12细胞caspase-3 mRNA的相对表达水平 |
2.7 统计学分析 |
3 研究结果 |
3.1 PC12细胞周期检测结果 |
3.2 PC12细胞凋亡检测结果 |
3.3 PC12细胞内游离钙离子浓度、活性氧及超氧化物的水平检测结果 |
3.4 参知健脑方对谷氨酸损伤PC12细胞caspase-3 mRNA表达水平的影响 |
4 讨论 |
4.1 参知健脑方与谷氨酸损伤的PC12细胞周期阻滞 |
4.2 参知健脑方与谷氨酸损伤的PC12细胞凋亡 |
4.3 参知健脑方与谷氨酸诱导的PC12细胞内钙超载及氧化应激损伤 |
4.4 “解毒通络”法则的部分生物学内涵 |
5 小结 |
第四部分 参知健脑方对拟VD细胞模型clathrin介导的NMDA受体胞吞过程的作用机制研究 |
1 实验材料 |
1.1 实验对象 |
1.2 主要实验药品及试剂 |
1.3 主要仪器设备及耗材 |
1.4 主要试剂的配制 |
2 实验方法 |
2.1 细胞免疫荧光技术检测PC12细胞clathrin、RAB5B和NMDAR1的分布和表达水平 |
2.2 qRT-PCR检测PC12细胞clathrin mRNA和NMDAR1 mRNA的表达水平 |
2.3 Western Blot检测PC12细胞clathrin、RAB5B及NMDAR1的表达水平 |
3 研究结果 |
3.1 PC12细胞的细胞免疫荧光检测结果 |
3.2 PC12细胞的qRT-PCR检测结果 |
3.3 PC12细胞的Western Blot检测结果 |
4 讨论 |
4.1 参知健脑方与clathrin介导的细胞内吞作用 |
4.2 参知健脑方与NMDA受体的内吞过程 |
4.3 “解毒通络”法则的部分生物学内涵 |
5 小结 |
结语 |
创新点 |
参考文献 |
附录 |
致谢 |
在学期间主要研究成果 |
(5)参麻益智方对血管性痴呆大鼠脑白质的影响和机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
缩略语中英文索引 |
综述部分 |
一 血管性痴呆的中医认识及治疗进展 |
二 血管性痴呆的西医认识及治疗进展 |
前言 |
材料与方法 |
1. 材料 |
1.1 实验动物 |
1.2 实验药物 |
1.3 实验试剂 |
1.4 实验仪器 |
2. 方法 |
2.1 药品制备 |
2.2 模型制备 |
2.3 分组与给药 |
2.4 行为学检测-Morris水迷宫 |
2.5 取材、染色 |
2.6 Western Blot法 |
2.7 比色法 |
2.8 统计学方法 |
结果 |
1 行为学检测 |
2 脑组织病理形态学 |
3 胼胝体髓鞘形态 |
4 MBP蛋白表达 |
5 BBB相关蛋白表达 |
6 氧化应激水平 |
讨论 |
结论 |
不足与展望 |
参考文献 |
致谢 |
个人简介 |
(6)基于脑髓理论分阴阳论治的补肾活血法干预血管性痴呆的疗效及作用机制研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
ABSTRACT |
缩略词简表 |
第一部分 理论探讨与文献研究 |
一、脑髓理论的研究 |
1. 脑髓构造 |
2. 脑髓生理功能 |
3 肾与脑的密切相关 |
3.1 肾与脑结构上的联系 |
3.2 肾精为脑髓之源 |
3.3 肾精与脑髓在生理上密切相关 |
3.4 肾精和脑髓在病理上相互影响 |
4 脑髓理论的阴阳观 |
4.1 脑髓的生成、结构形态与阴阳关系密切 |
4.2 脑髓的功能与阴阳关系密切 |
5 基于脑髓理论的现代研究与应用进展 |
5.1 对脑髓本质内涵的现代研究 |
5.2 基于脑髓理论的应用进展 |
二、从补肾活血论治血管性痴呆的研究进展 |
1 肾虚血瘀为VaD的主要病机 |
1.1 中医传统理论溯源 |
1.2 现代研究 |
2 补肾活血法治疗VaD的临床疗效研究 |
3 补肾活血法治疗VaD的机制研究 |
3.1 补肾中药方、单味中药及有效成分治疗VaD的机制研究 |
3.2 活血中药方、单味中药及有效成分治疗VaD的机制研究 |
3.3 补肾活血法治疗VaD的机制研究 |
4 问题与展望 |
4.1 研究方法方面 |
4.2 具体辨证、治法、方药方面 |
4.3 具体机制方面 |
第二部分 临床研究 |
一、补肾活血方干预VaD的临床疗效观察 |
(一) 研究内容与方法 |
1. 研究内容 |
1.1 病例来源 |
1.2 西医诊断标准(血管性痴呆诊断标准) |
1.3 中医证候诊断标准 |
1.4 纳入标准 |
1.5 排除标准 |
1.7 疗效评定标准 |
2 研究方法 |
2.1 随机、分组方法 |
2.2 药物选择 |
2.3 给药方法、疗程及随访 |
2.4 试验要求 |
3 观察内容 |
3.1 一般信息资料 |
3.2 临床疗效观测 |
3.3 ADL积分比较 |
3.4 MMSE项目增分的比较 |
3.5 NIHSS积分比较 |
3.6 中医证候积分比较 |
3.7 中医证候疗效指数评定 |
4 对安全性指标的影响 |
二、补肾活血方对VaD胆碱能系统、血管内皮功能影响的研究 |
1 研究对象 |
2 检测指标 |
2.1 胆碱能神经递质:Ach、AchE |
2.2 血管内皮活性物质:ET、CGRP |
3 材料与方法 |
3.1 主要仪器 |
3.2 主要化学试剂 |
3.3 方法 |
4 统计方法 |
5 结果与分析 |
5.1 血清胆碱能神经递质含量的测定结果分析 |
5.2 血管内皮活性物质含量的测定结果分析 |
第三部分 讨论 |
一、血管性痴呆与脑髓理论 |
二、补肾活血是治疗VaD的大法 |
1. 肾虚精亏、精不生髓是VaD的发生基础 |
2. 瘀阻脑络为VaD发生的关键 |
3. 补肾活血是治疗VaD的主要治法 |
三、导师分阴阳补肾活血论治VaD的经验与研究 |
1. 理论研究 |
2 临床研究 |
3 实验研究 |
四、温肾活血方、滋肾活血方的方药分析 |
1. 药物组成及方义分析 |
1.1 温肾活血方 |
1.2 滋肾活血方 |
2 现代药理研究 |
五、选用奥拉西坦胶囊作阳性对照的依据 |
六、临床疗效的评价 |
1. 认知功能疗效 |
1.1 温肾活血方 |
1.2 滋肾活血方 |
2 ADL疗效 |
2.1 温肾活血方 |
2.2 滋肾活血方 |
3 NIHSS疗效 |
3.1 温肾活血方 |
3.2 滋肾活血方 |
4 中医证候的疗效 |
4.1 温肾活血方 |
4.2 滋肾活血方 |
5 对VaD患者胆碱能神经递质的影响 |
5.1 温肾活血方 |
5.2 滋肾活血方 |
6 对VaD患者血管内皮活性物质的影响 |
6.1 温肾活血方 |
6.2 滋肾活血方 |
7 随访疗效分析 |
七、温肾活血方、滋肾活血方的疗效作用机制分析 |
1. 对中枢性胆碱能神经递质的影响 |
2 对血管内皮活性物质的影响 |
八 脑髓阴阳论假说的提出依据 |
1 肾阳虚血瘀证与肾阴虚血瘀证VaD患者的差异 |
1.1 一般临床特点的差异 |
1.2 痴呆特点差异 |
1.3 胆碱能神经递质失衡特点差异 |
1.4 血管内皮活性物质变化差异 |
2 差异分析 |
九、本课题特色及创新点 |
1. 基于脑髓理论分阴阳论治VaD |
2. 提出“脑髓阴阳论”的假说 |
十、本研究的问题与展望 |
第四部分 结论 |
致谢 |
参考文献 |
读博期间主持读题及发表论文 |
附录 |
文献综述 |
参考文献 |
(7)益智五海胶囊治疗血管性痴呆的作用机理研究(论文提纲范文)
缩略词表 |
中文摘要 |
英文摘要 |
前言 |
实验研究 |
第一部分 益智五海胶囊补肾益智作用实验研究 |
实验研究一 益智五海胶囊对年老肾精亏虚模型一的实验研究 |
1 实验材料 |
1.1 实验药物 |
1.2 实验动物 |
1.3 实验仪器 |
1.4 实验试剂 |
2 实验方法 |
2.1 建立模型和分组给药 |
2.2 学习记忆行为学检测 |
2.2.1 定位航行测试 |
2.2.2 空间搜索测试 |
2.3 海马Ach和AchE检测 |
2.4 海马Glu、Gly、Asp、GABA检测 |
2.5 大脑皮层5-HT、NE、DA检测 |
3 实验结果 |
3.1 益智五海胶囊对学习记忆行为学的影响 |
3.1.1 益智五海胶囊对定位航行的影响 |
3.1.2 益智五海胶囊对空间搜索的影响 |
3.2 益智五海胶囊对海马Ach和AchE的影响 |
3.3 益智五海胶囊对海马Glu、Gly、Asp、GABA的影响 |
3.4 益智五海胶囊对大脑皮层5-HT、NE、DA的影响 |
实验研究二 益智五海胶囊对氢化可的松致肾虚动物模型的实验研 究 |
1 实验材料 |
1.1 实验药物 |
1.2 实验动物 |
1.3 实验器具 |
1.4 实验试剂 |
2 实验方法 |
2.1 建立模型和分组给药 |
2.2 一般活动情况的变化 |
2.3 游泳时间检测 |
2.4 相关脏器指数变化 |
2.4 血清ChE的检测 |
3 实验结果 |
3.1 益智五海胶囊对肾虚小鼠模型一般状态的影响 |
3.2 益智五海胶囊对肾虚小鼠模型游泳时间的影响 |
3.3 益智五海胶囊对肾虚小鼠模型相关脏器指数的影响 |
3.4 益智五海胶囊对肾虚小鼠模型血清ChE的影响 |
实验研究三 益智五海胶囊对学习记忆障碍模型的实验研究 |
1 实验材料 |
1.1 实验药物 |
1.2 实验动物 |
1.3 实验仪器 |
1.4 实验试剂 |
2 实验方法 |
2.1 建立模型和分组给药 |
2.1.1 记忆获得障碍实验 |
2.1.2 记忆巩固障碍实验 |
2.1.3 记忆再现缺失实验 |
2.2 跳台法检测记忆获得障碍模型学习记忆能力的变化 |
2.3 Morris水迷宫法检测记忆巩固障碍模型学习记忆能力的变化 |
2.4 避暗法检测记忆再现缺失模型学习记忆能力的变化 |
3 实验结果 |
3.1 益智五海胶囊对记忆获得障碍模型学习记忆的影响 |
3.2 益智五海胶囊对记忆巩固障碍大鼠模型学习记忆的影响 |
3.3 益智五海胶囊对记忆再现缺失模型学习记忆的影响 |
第二部分 益智五海胶囊对血管性痴呆动物模型的实验研究 |
实验研究四 益智五海胶囊对缺血再灌注血管性痴呆模型的实验研 究 |
1 实验材料 |
1.1 实验药物 |
1.2 实验动物 |
1.3 实验仪器 |
1.4 实验试剂 |
2 实验方法 |
2.1 建立模型和分组给药 |
2.2 学习记忆行为学检测 |
2.2.1 定位航行测试 |
2.2.2 空间搜索测试 |
2.3 海马Ach和AchE检测 |
2.4 海马Glu、Gly、Asp、GABA检测 |
2.5 大脑皮层5-HT、NE、DA检测 |
2.6 血液流变学检测 |
2.7 血管活性物质ET、TXA_2、CGRP、6-Keto-PGF_(1α)检测 |
3 实验结果 |
3.1 益智五海胶囊对学习记忆行为学的影响 |
3.1.1 益智五海胶囊对定位航行的影响 |
3.1.2 益智五海胶囊对空间搜索的影响 |
3.2 益智五海胶囊对海马Ach和AchE的影响 |
3.3 益智五海胶囊对海马Glu、Gly、Asp、GABA的影响 |
3.4 益智五海胶囊对大脑皮层5-HT、NE、DA的影响 |
3.5 益智五海胶囊对血液流变性的影响 |
3.6 益智五海胶囊对血管活性物质ET、TXA_2、CGRP、6-Keto-PGF_(1α)的影响 |
实验研究五 益智五海胶囊对脉络癖滞合并缺血再灌注血管性痴呆 模型的实验研究 |
1 实验材料 |
1.1 实验药物 |
1.2 实验动物 |
1.3 实验仪器 |
1.4 实验试剂 |
2 实验方法 |
2.1 建立模型和分组给药 |
2.2 学习记忆行为学检测 |
2.3 海马Ach和AchE检测 |
2.4大脑皮层5-HT、NE、DA检测 |
2.5血液流变学检测 |
3 实验结果 |
3.1 益智五海胶囊对学习记忆行为学的影响 |
3.1.1 益智五海胶囊对定位航行的影响 |
3.1.2 益智五海胶囊对空间搜索的影响 |
3.2 益智五海胶囊对海马Ach和AchE的影响 |
3.3 益智五海胶囊对大脑皮层5-HT、NE、DA的影响 |
3.4 益智五海胶囊对血液流变性的影响 |
讨论 |
1 血管性痴呆和肾精亏虚、脉络瘀滞 |
1.1 现代医学对血管性痴呆的认识 |
1.1.1 流行病学 |
1.1.2 发病机制 |
1.1.3 病理改变 |
1.1.4 治疗现状 |
1.2 中医药学对血管性痴呆的认识 |
1.2.1 古代医家的认识 |
1.2.2 现当代医家的发展 |
1.2.3 中医药治疗现状 |
1.3 肾精亏虚、络脉阻滞 |
2 益智五海胶囊 |
3 脉络癖滞型血管性痴呆病证动物模型 |
3.1 关于造模因素 |
3.2 关于临床表现及指标检测 |
3.3 药物反证 |
3.4 模型稳定性 |
4 益智五海胶囊补肾益智作用 |
4.1 益智五海胶囊对氢化可的松致肾虚小鼠的影响 |
4.2 益智五海胶囊对记忆障碍模型学习记忆行为的影响 |
5 益智五海胶囊治疗血管性痴呆机理分析 |
5.1 益智五海胶囊对记忆的相关神经递质的影响 |
5.1.1 益智五海胶囊对海马乙酰胆碱及乙酰胆碱酯酶的影响 |
5.1.2 益智五海胶囊对大脑皮层单胺类递质的影响 |
5.2 益智五海胶囊对神经毒性相关递质的影响 |
5.3 益智五海胶囊对血管活性物质及血液流变学的影响 |
5.3.1 益智五海胶囊对血管活性物质的影响 |
5.3.2 益智五海胶囊对血液流变学的影响 |
结论 |
问题与展望 |
致谢 |
参考文献 |
附件1 血管性痴呆动物模型研究状况 |
附件2 血管性痴呆的实验研究进展 |
在校期间发表的论文和参加的课题 |
(9)醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠治疗作用机理研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
英文缩写 |
研究论文 醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠治疗作用机理研究 |
引言 |
第一部分 醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠行为学及脑组织病理形态学的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
附图 |
附表 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
第二部分 醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠海马组织神经递质的影响 |
实验一 醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠脑组织海马区钙离子及谷氨酸含量的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
附表 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
实验二 醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠脑组织海马区乙酰胆碱酯酶及乙酰胆碱转移酶的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
附图 |
附表 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
实验三 醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠脑组织海马区5-HT、NE和DA含量的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
附表 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
实验四 醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠脑组织海马区CGRP 和SS 含量的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
附表 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
第三部分 醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠海马细胞增殖及凋亡及相关分子机制的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
附图 |
附表 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
第四部分 醒脑启智胶囊对拟血管性痴呆小鼠脑组织超微结构、ATP 酶活力及脑红蛋白mRNA 的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
附图 |
附表 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
结论 |
综述一 |
综述二 |
致谢 |
个人简历 |
(10)参知健脑方对拟血管性痴呆大鼠的治疗作用及其对胆碱能系统的影响(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
缩略语中英文对照 |
血管性痴呆(VD)病因病机、诊断、治疗的研究进展 |
1 中医学对VD 的认识 |
1.1 古代文献对V D 的认识 |
1.2 病名和诊断标准的确定 |
1.3 对病因病机的认识 |
1.4 辨证分型 |
1.5 辨证论治 |
2 中药人参、知母用于痴呆的现代研究 |
2.1 人参用于痴呆的现代研究 |
2.2 知母用于痴呆的现代研究 |
3 现代医学对VD 的认识 |
3.1 流行病学研究 |
3.2 危险因素的研究 |
3.3 病理变化 |
3.4 诊断标准 |
3.5 预防和治疗 |
4 VD 对胆碱能调控系统的影响 |
4.1 胆碱能系统的生理功能 |
4.2 VD 对脑内胆碱能神经递质的影响 |
4.3 VD 对脑内胆碱能神经递质受体的影响 |
4.4 脑内突触超微结构与功能改变与VD 的关系 |
参考文献 |
前言 |
实验研究 |
实验一 行为学实验 |
1 材料及方法 |
2 一般状况及大体行为观察 |
3 各组大鼠逃避潜伏期的比较 |
4 各组大鼠空间探索实验120 秒内第一象限游泳时间的比较 |
5 各组大鼠空间探索实验120 秒内第一象限游泳距离的比较 |
6 分析大鼠在 120s 内搜索平台的路线图 |
7 讨论 |
参考文献 |
实验二 病理学实验 |
1 材料及方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
参考文献 |
实验三 胆碱能系统部分 |
第一部分 ChAT 和AchE 的检测 |
1 材料及方法 |
2 结果 |
第二部分 乙酰胆碱的检测 |
1 材料及方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
参考文献 |
实验四 Bax 凋亡相关蛋白的测定 |
1 材料及方法 |
2 实验结果 |
3 讨论 |
参考文献 |
结语 |
致谢 |
个人简历 |
四、健脑益智冲剂对多发梗塞性痴呆大鼠模型大脑皮层单胺类神经递质和P物质含量的影响(论文参考文献)
- [1]解毒益智方对阿尔茨海默病双转基因小鼠行为学及大脑皮层内β-淀粉样蛋白沉积及BACE1表达影响的研究[D]. 朱晓婷. 长春中医药大学, 2021(01)
- [2]基于线粒体相关蛋白通路探讨参麻益智方对血管性认知障碍大鼠的作用机制[D]. 孙成成. 中国中医科学院, 2021(02)
- [3]“益气调血、扶本培元”药线灸对多发梗死性痴呆大鼠海马氨基酸类递质含量的影响[D]. 李玉秋. 广西中医药大学, 2021(02)
- [4]参知健脑方对拟血管性痴呆细胞模型的神经保护作用及机制研究[D]. 田丹枫. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]参麻益智方对血管性痴呆大鼠脑白质的影响和机制研究[D]. 刘佳妮. 中国中医科学院, 2019(01)
- [6]基于脑髓理论分阴阳论治的补肾活血法干预血管性痴呆的疗效及作用机制研究[D]. 伍大华. 湖南中医药大学, 2013(08)
- [7]益智五海胶囊治疗血管性痴呆的作用机理研究[D]. 张吉仲. 成都中医药大学, 2009(02)
- [8]血管性认知功能障碍的中药药理研究进展[A]. 何松彬. 浙江省中西医结合学会神经内科专业委员会第六次学术年会暨国家级继续教育学习班资料汇编, 2008
- [9]醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠治疗作用机理研究[D]. 武常生. 河北医科大学, 2006(11)
- [10]参知健脑方对拟血管性痴呆大鼠的治疗作用及其对胆碱能系统的影响[D]. 林海. 北京中医药大学, 2005(04)