一、EB病毒与恶性肿瘤（论文文献综述）
蔡曌[1]（2021）在《1、DNA拷贝数异常改变作为膀胱癌预后判断相关分子标志物的研究 2、EB病毒相关上皮性恶性肿瘤中病毒miRNA与宿主相互作用的分子机制及其意义》文中研究表明这一博士学位课题由相对独立的两部分研究工作构成。第一章DNA拷贝数异常改变作为膀胱癌预后判断相关分子标志物的研究膀胱癌的高复发率为患者带来了长期的身体和经济负担。目前对于膀胱癌的诊断已有多种基于不同技术平台的生物标志物,然而,对于患者复发风险的评估和预测还较少有相关标志物的报道。尽管在膀胱癌肿瘤的发生发展过程中存在大量基因组序列的改变,但目前对于膀胱癌肿瘤预后风险评估还尚未有获得广泛认可的生物标志物可供临床使用。本项研究旨在膀胱癌组织和尿液中探索与膀胱癌患者预后相关的分子标志物,评估其在患者预后评估中的临床应用价值。本实验室前期工作中对65例膀胱癌肿瘤组织DNA进行了基于芯片的比较基因组杂交实验,发现并通过real-time PCR验证了在膀胱癌组织中高频出现的5个高频拷贝数变异的基因CEP63、FOSL2、GHR、PAQR6、ZFAND3。本项研究对候选的5个拷贝数高频变异的基因在219例于中国医学科学院肿瘤医院初治的膀胱癌患者手术切除的新鲜肿瘤组织样本和123例初治膀胱癌患者术前尿沉渣脱落细胞样本中的拷贝数变异与患者临床特征的相关性进行了进一步分析。为分析候选拷贝数变异与患者预后的相关性,研究中对所有入组患者均开展了术后随访,获得其无瘤生存期。研究应用Kaplan-Meier生存曲线、Cox风险比例回归、Logestic线性回归分析候选拷贝数变异与患者肿瘤复发风险的关系,并分别对非肌层浸润性和肌层浸润性膀胱癌构建了预后预测模型。为提高在尿液中检测拷贝数变异的准确性,研究中采用了高灵敏的3D数字PCR技术,并运用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve,ROC 曲线）比较了 real-time PCR 与 3D 数字PCR在尿沉渣脱落细胞中对拷贝数变异基因的检测效能,建立了尿样本中膀胱癌的诊断模型。在5个候选拷贝数变异的基因中,CEP63（p<0.01）、FOSL2（p<0.01）、PAQR6（p<0.01）在219例肿瘤组织中相比于健康人外周血白细胞中的基因拷贝数显着增加。CEP63（p<0.01）和FOSL2（p<0.01）的拷贝数在肌层浸润性膀胱癌肿瘤组织中显着高于非肌层浸润性膀胱癌肿瘤组织。CEP63（p<0.01）和FOSL2（p=0.047）的拷贝数在高级别肿瘤中显着高于低级别肿瘤。在发生淋巴结转移患者的肿瘤组织中CEP63的拷贝数显着增加（p<0.01）。研究中对所有病例进行了随访,随访时间为3个月至188个月,中位随访时间为61个月。所有入组患者的5年无瘤生存率为48.3%;10年无瘤生存率为22.7%。基于219例肿瘤组织中CEP63、FOSL2、PAQR6的拷贝数变异,分别对非肌层浸润性膀胱癌患者和肌层浸润性膀胱癌患者进行生存分析,发现CEP63和FOSL2的拷贝数增加是非肌层浸润性膀胱癌的独立预后因素（p<0.05）。FOSL2和PAQR6的拷贝数增加是肌层浸润性膀胱癌的独立预后因素（p<0.05）。基于CEP63、FOSL2的拷贝数变异构建非肌层浸润性膀胱癌的肿瘤复发预测模型计算预后指数（Prognostic Index,PI）,预测模型为PI=1.5095×CEP63+1.47123×FOSL2,结果显示,预后指数高的非肌层浸润性膀胱癌患者肿瘤复发风险是预后指数低的患者的3.434倍（p=0.0003）。基于FOSL2和PAQR6拷贝数变异,构建肌层浸润性膀胱癌的肿瘤复发预测模型计算预后指数,预测模型为PI=2.0440×FOSL2+2.2079×PAQR6,结果显示预后指数高的肌层浸润性膀胱癌患者发生肿瘤复发的风险是预后指数低的患者的5.443倍（p=0.0001）。对于基于传统危险分层中的高风险非肌层浸润性膀胱癌患者,生存分析结果显示,预后指数高的患者无瘤生存期更短（p=0.00056）。在膀胱癌患者尿沉渣脱落细胞中CEP63（p=0.036）与FOSL2（p<0.01）的拷贝数相比于正常对照尿沉渣脱落细胞样本显着增加。应用3D数字PCR检测,发现肌层浸润性膀胱癌尿沉渣脱落细胞样本中CEP63（p<0.01）与FOSL2（p=0.046）的拷贝数显着高于非肌层浸润性膀胱癌样本,CEP63的拷贝数在发生淋巴结转移的膀胱癌患者中显着增加（p=0.042）。生存分析结果显示非肌层浸润性膀胱癌患者尿沉渣脱落细胞中CEP63的拷贝数增加（p<0.01）或FOSL2的拷贝数增加（p=0.018）预示着更大的肿瘤复发风险。基于尿样本中CEP63、FOSL2的拷贝数变异在训练集（n=41）中构建非肌层浸润性膀胱癌12个月内发生肿瘤复发的预测模型并在验证集（n=41）中进行验证,预测模型为PIL=-2.679+2.083×CEP63+1.827×FOSL2,结果显示,预后指数高的非肌层浸润性膀胱癌患者12个月内发生肿瘤复发的风险是预后指数低的患者的6.612倍（p=0.002）。ROC曲线分析结果显示3D数字PCR检测尿沉渣脱落细胞样本中CEP63和FOSL2拷贝数变异的曲线下面积分别为0.848和0.803,灵敏度分别为0.750和0.650,阴性预测值分别为0.786和0.708。而real-time PCR检测CEP63和FOSL2拷贝数变异的曲线下面积分别为0.601和0.685,灵敏度分别为0.475和0.425,阴性预测值分别为0.644和0.646。进一步基于3D数字PCR联合尿样本中CEP63与 FOSL2 的拷贝数变异构建膀胱癌患者诊断型:L=-1.817+2.267×CEP63+2.695×FOSL2,该模型的 ROC 曲线下面积为 0.858,灵敏度为85.0%,阴性预测值为83.8%。本项研究发现CEP63、FOSL2、PAQR6在膀胱癌中拷贝数增加,前两者与膀胱癌肿瘤的分期和病理分级显着相关。CEP63、FOSL2的拷贝数变异能够对非肌层浸润性膀胱癌患者的肿瘤复发风险进行评估和预测,FOSL2、PAQR6的拷贝数变异可应用于肌层浸润性膀胱癌患者肿瘤复发的预测。在膀胱癌患者尿样本中CEP63、FOSL2的拷贝数显着增加,并与肿瘤分期相关。尿样本中CEP63和FOSL2拷贝数增加的非肌层浸润性膀胱癌患者1年内发生肿瘤复发风险更高。研究中应用的3D数字PCR相比于real-time PCR检测效能更高,基于3D数字PCR的尿样本诊断模型能够较好的区分膀胱癌与正常人,为未来膀胱癌尿液检测提供了新途径。第二章EB病毒相关上皮性恶性肿瘤中病毒miRNA与宿主相互作用的分子机制及其意义EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）属于疱疹病毒科γ亚科,是双链DNA病毒。EB病毒是人类普遍且长期感染的病毒。在世界人口中大约有95%存在终生的无症状感染。EB病毒参与了人类多种恶性肿瘤的形成,包括Burkitt’s淋巴瘤、鼻咽癌、霍奇金氏淋巴瘤、NK/T细胞淋巴瘤、胃癌等。EB病毒的发现距今已有50余年,但病毒的致癌机制目前仍然尚未清楚。miRNA是基因表达转录后调控的重要因子,在多种复杂的细胞生物学进程,例如细胞发育和分化中扮演着十分重要的作用。越来越多的研究发现某些特定miRNA的负调控作用能够引起多种器官的癌变发生。EB病毒是第一个发现的能够编码miRNA的病毒,已有研究发现部分EB病毒编码的miRNA能够调控宿主基因的表达。但对于其他EB病毒编码的miRNA在癌变过程中的作用机制目前还尚未完全了解。本项研究旨在通过miRNA表达谱芯片和转录组测序分析,构建EB病毒相关上皮性恶性肿瘤即EB病毒相关胃癌和鼻咽癌中病毒miRNA的表达谱,分析病毒miRNA在宿主细胞中对宿主基因表达的调控作用,进而探索病毒miRNA对宿主细胞生物学功能的影响,以及在癌变发生和发展过程中所起到的作用。EB病毒相关胃癌在亚洲胃癌患者中约占6%,需要通过EBER原位杂交检测证实肿瘤组织中存在EB病毒的感染,由于EBER原位杂交尚未作为胃癌患者的常规病理检测项目,受到样本收集难度的限制,以及RNA较容易降解的特性,目前国内还尚未有基于EB病毒相关胃癌新鲜组织的转录组测序分析研究。在本项研究中,我们对8例EB病毒相关胃癌新鲜冻存组织、2株EB病毒相关胃癌细胞系SNU719、YCCEL1和2株EB病毒阴性胃癌细胞系AGS、HGC27进行了miRNA表达谱芯片和转录组测序分析宿主基因、宿主miRNA和EB病毒miRNA的表达情况。通过生物信息学分析,联合公共数据库中38例EB病毒相关胃癌的基因表达数据,探索EB病毒miRNA与宿主miRNA以及宿主基因的关系。为验证数据分析结果,进一步对筛选出的病毒miRNA进行体外细胞功能实验,探索其对胃癌细胞增殖能力、细胞周期以及细胞迁移能力的影响。为了解筛选出的在EB病毒相关胃癌中能够显着影响细胞生物学功能的病毒miRNA在另一种EB病毒相关上皮性恶性肿瘤即鼻咽癌中的作用。我们对33例鼻咽癌新鲜冻存组织进行了转录组测序。并通过体外细胞功能实验探索候选病毒miRNA在鼻咽癌细胞中对细胞增殖能力、细胞周期以及细胞迁移能力的调控作用。在本项研究中,我们通过对miRNA表达谱芯片和转录组测序数据分析获得了 EB病毒相关胃癌中病毒miRNA的表达谱,筛选出在肿瘤组织和EB病毒相关胃癌细胞系中均高表达的4个病毒miRNA。对其进行靶基因预测,我们发现在EB病毒相关胃癌中高表达的4个病毒miRNA靶基因主要富集于细胞迁移、细胞周期调控、细胞间信号转导和DNA复制等重要生物学功能上。而对于肿瘤组织和EB病毒相关胃癌细胞系中宿主miRNA的差异表达分析水平的分析发现,4个宿主miRNA在肿瘤组织与细胞系中的表达水平与EB病毒miRNA的表达成正相关关系,相关系数大于等于0.9。进一步分析这4个宿主miRNA与EB病毒miRNA的序列,发现 EB 病毒 miRNA miR-BARTl-3p 与宿主 miRNA hsa-miR-29a-3p 具有相同的5’端种子区序列;而miR-BART7-3p则与宿主miRNA hsa-miR-154-3p具有相同的5’端种子区序列。由此推测上述病毒miRNA与宿主miRNA的调控功能具有一定的相似性。为进一步探索“EB病毒miRNA-宿主miRNA”关系对中的病毒miRNA与宿主miRNA是否协同作用共同参与调控细胞生物学功能。首先联合TCGA（The Cancer Genome Atlas）数据库中转录组数据和 GEO（Gene Expression Omnibus）数据库中表达谱芯片数据,以及本项研究中的转录组测序数据,分析共计46例EB病毒相关胃癌中肿瘤与癌旁组织的差异宿主基因,结合在EB病毒相关胃癌相比于EB病毒阴性胃癌细胞中差异的宿主基因,以此对“EB病毒miRNA-宿主miRNA”关系对中的病毒miRNA与宿主miRNA的交集靶基因进行筛选,结果显示,在EB病毒相关胃癌肿瘤组织中差异表达,并与EB病毒感染相关的宿主靶基因,其信号通路主要富集于涉及细胞生长、迁移、分化等重要功能的2个信号通路。说明候选的病毒miRNA可能与其相关的宿主miRNA共同参与到对细胞生长、迁移等重要功能的调控中。进一步的体外细胞功能实验也表明了miR-BART1-3p和miR-BART7-3p能够抑制胃癌细胞的增殖和迁移,对细胞的生长起负向调控作用。此外,在另一种EB病毒相关上皮性恶性肿瘤,鼻咽癌中,我们也构建了 EB病毒miRNA的表达谱,与EB病毒相关胃癌不同的是,miR-BART1-3p在鼻咽癌中的表达水平较低而miR-BART7-3p在鼻咽癌中的表达水平也仅处于中等。但通过体外细胞功能实验,我们发现miR-BART7-3p在鼻咽癌细胞中,仍具有对细胞增殖和迁移功能的抑制作用。在上述研究中,我们构建了 EB病毒相关胃癌和鼻咽癌中病毒miRNA的表达谱。通过生物信息学分析获得了具有相同种子区序列的病毒和宿主miRNA,两者共同参与了涉及细胞增殖、迁移、分化等重要生物学功能的信号通路调控。体外细胞实验结果表明了病毒miRNA对于胃癌和鼻咽癌细胞在增殖、细胞周期和细胞迁移能力的抑制作用。本项研究对病毒miRNA miR-BART1-3p和miR-BART7-3p在胃癌细胞中的作用及其可能的机制进行探索,发现了miR-BART7-3p在两种EB病毒相关恶性肿瘤中具有相似的生物学功能,研究从新的视角提供了 EB病毒影响肿瘤进展的可能机制,有助于促进对于上皮性恶性肿瘤中EB病毒感染在癌变中作用的理解。
赵爽[2]（2021）在《基于转录组测序分析的鼻咽癌相关EB病毒变异亚型及预后模型的研究》文中研究表明背景:EB病毒（Epstein-Barrvirus,EBV）广泛感染人类,引发多种疾病包括恶性肿瘤,其中与鼻咽癌发病密切相关——在约98%的鼻咽癌患者的肿瘤组织中,可以检测到EBV的核酸。目前,已有多种EBV毒株的基因序列发表,不同肿瘤来源的EBV毒株携带不同的基因变异。EBV的变异可能在其致瘤过程中发挥作用,从而影响特定类型肿瘤的生物学行为。然而,对与鼻咽癌相关的EBV基因变异尚缺乏系统性研究。鼻咽癌是一种具有高度侵袭性和转移性的恶性肿瘤,目前,TNM分期系统是鼻咽癌治疗决策和预后评估的主要依据。然而,该系统对于评估鼻咽癌预后的价值有限,已经不能完全满足临床需求。目的:这一博士学位课题的研究工作基于转录组测序数据分析,目的有二,①发现、鉴定与鼻咽癌相关的EBV基因变异,解析不同EBV亚型与鼻咽癌临床特征的关系,初步揭示鼻咽癌相关EBV基因变异的生物学功能。②筛选、构建鼻咽癌预后分子模型。方法:本项研究共纳入两组鼻咽癌患者;第一组67个病例,主要参加转录组测序及相关分析;第二组32个病例,主要参加EBV基因变异的验证分析。此两组鼻咽癌病例互为独立样本。针对第一组67例鼻咽癌患者的肿瘤和癌旁组织进行转录组测序。对测序数据进行生物信息学分析,从中发现鼻咽癌相关EBV的基因变异。采用RNA原位杂交技术BaseScope联合免疫组化共染色的方法,在第二组32例鼻咽癌组织样本中对测序发现的EBV基因变异进行验证。将上述在鼻咽癌中发现、鉴定的EBV变异位点,与公共数据中非鼻咽癌来源的EBV序列进行聚类分析;从中找出鼻咽癌相关的EBV亚型,并分析不同病毒亚型与鼻咽癌患者临床特征及预后的关系。另外,采用常规细胞分子生物学方法,建立稳定表达上述EBV变异基因的鼻咽癌细胞株,通过体外实验探索鼻咽癌相关EBV变异基因的基本生物学功能。构建鼻咽癌预后分子模型的工作,从第一组参加转录组测序的67例鼻咽癌患者之中选择随访信息完善的60例入组,分为“复发转移组”和“非复发转移组”两组。通过对测序数据的分析,采用随机森林和极限梯度提升的机器学习方法,筛选出宿主的与鼻咽癌预后相关的特征基因。基于这一组特征基因,进一步采用Cox 比例风险回归模型构建鼻咽癌预后模型。继而采用GSEA和相关性分析,评价该模型的医学生物学功能。结果:①转录组测序结果显示,入组的鼻咽癌组织中存在EBV基因变异。其中,EBER2和LMP2基因具有最高的变异频率,分别在65/66和64/66例鼻咽癌组织中被检测到。②采用BaseScope和免疫组化共染技术,在独立样本32个鼻咽癌病例中以单细胞原位的方式验证了测序检出的EBER2的变异;并且证明携带病毒变异的细胞为肿瘤（上皮）细胞,而不是肿瘤组织中的浸润免疫细胞,由此明确了 EBV变异活跃转录的组织细胞来源。③根据EBER2的变异位点,将测序获得的EBV序列与已发表的EBV序列进行聚类分析,可将EBV分为两种亚型:EB-1和EB-2。其中,根据EBER2 7123位点,可进一步将EB-2细分为A>T和A>G两种亚型。EB-1基因型EBV显着富集于鼻咽癌（卡方检验,p<0.0001）;而EB-2亚型富集于中国北方鼻咽癌患者,且与肿瘤T分期相关（卡方检验,p<0.05）。生存分析显示,相较于EB-1亚型和EB-2-A>G,感染EB-2-A>T亚型EBV的患者预后最差（Log-rank,p=0.026）。④结合宿主mRNA表达谱数据进行差异表达基因分析和富集分析发现,EB-1和EB-2亚型参与影响宿主细胞不同的生物学过程。其中,EB-1亚型主要激活“Epithelial mesenchymal transition”,而 EB-2 亚型则主要激活“MYC targets v1”等。⑤针对另一个发生高频率变异的病毒基因LMP2变异的体外实验分析发现,相较于对照组,变异的LMP2B有显着促进鼻咽癌细胞增殖、迁移,抑制凋亡的作用。构建鼻咽癌预后分子模型的工作,对于转录组测序数据重点关注宿主的基因表达。⑥采用机器学习方法筛选出“复发转移组”和“非复发转移组”之间的特征基因,共 13 个:CES4A、GIMAP1.GIMAP5、GLB1L、LGR5、LOC730098、MLF1、MTHFD1L、MYLPF、NUP160、SIRPB1、TCN2、TMEM265、U2AF1L5。⑦基于这些特征基因构建Cox风险比例模型,得到一个4-mRNA signature,包括U2AF1L5、TMEM265、GLB1L和MLF1基因。根据这一模型计算每个患者的风险评分,并将患者分为高风险组和低风险组。⑧Kapan-Meier生存曲线和ROC曲线分析显示,这一预后模型能较好地评估鼻咽癌患者的预后,高风险组患者预后显着差于低风险组（Log-Rank,总生存:p=0.00126,无病生存:p=0.000059）。这一 4-mRNA signature在评估患者总生存以及无病生存的效果（AUC分别为0.893和0.86,）优于T分期（AUC为0.619和0.538）及N分期（AUC:0.582和0.622）。⑨多因素Cox分析结果显示,风险评分是鼻咽癌的独立预后因素（总生存,HR=14.501,p=0.012,无病生存:HR=13.752,p<0.001）。⑩GSEA 富集分析发现 4-mRNA signature 与细胞增殖和宿主免疫应答密切相关。结论:鼻咽癌组织中存在EBV基因变异。其中EBER2和LMP2基因具有最高的变异频率。鼻咽癌组织内发生基因变异的EBV存在于肿瘤细胞而非浸润免疫细胞中。根据EBER2的变异模式,可将EBV分为两种亚型:EB-1和EB-2;它们与鼻咽癌患者的临床特征、预后相关,并可能与宿主发生不同的相互作用。通过对转录组数据的分析挖掘,构建了包含4个基因的4-mRNA signature模型,可用于鼻咽癌预后评估。
李红玉[3]（2021）在《HLA-DPB1和EB病毒gp42蛋白的结合方式与新疆地区霍奇金淋巴瘤发病的相关性研究》文中研究说明研究目的:为了探索EB病毒与新疆地区霍奇金淋巴瘤的发病的相关性,了解新疆地区霍奇金淋巴瘤患者的临床现状,在已筛选出新疆地区人群与霍奇金淋巴瘤相关HLA-DPB1分型的基础上,进一步检测新疆地区健康人群HLA-DPB1亚型与霍奇金淋巴瘤HLA-DPB1亚型与EB病毒gp42的的结合方式、结合力的大小及差异。研究方法:1)我们使用慢病毒感染的方式,对T1细胞进行HLA-DPB1亚型的慢病毒感染,构建HLA-DPB1重组载体;2)使用免疫荧光标记的方法标记gp42蛋白,探索不同浓度下,gp42蛋白与HLA-DPB1重组载体的结合效率,获取最佳的gp42蛋白的结合浓度;3)使用流式细胞术检测HLA-DP+gp42+双阳性细胞,计算HLA-DPB1亚型与gp42蛋白亲和力大小及差异;4)我们使用分子动力学模拟的方式模拟gp42蛋白和HLA-DPB1亚型的结合,获取两者的结合方式、结合形态及所形成复合物的基本属性;5)回顾性分析在2016年1月1日至2020年9月1日期间初次就诊于新疆肿瘤医院的霍奇金淋巴瘤患者105例,收集该患者的临床特征,结合实验室检查结果及病理组织学检测,利用SPSS16.0软件进行统计学分析,探讨EB病毒感染者与非EB病毒感染者之间的临床特征及病理学特征的差异;6)分别选取EB病毒阳性霍奇金淋巴瘤患者15例及淋巴结反应性增生的患者10例,检测两组患者的CD3、CD4、CD8、PD1、PDL-1、HLA-DPB1、LMP1、CD30等分子的表达,对比免疫功能及表达产物的差异。研究结果:1)T1细胞进行慢病毒感染的最佳条件是选择B2助感染液、MOI=100、感染时间为72小时,在此基础上成功构建LV-DPB1-H组和LV-DPB1-HL组质粒载体;2)探索出gp42蛋白的最佳结合浓度,即gp42蛋白在80μg浓度时,HLA-DPB1与gp42的结合效率最高;3)HLA-DPB1的B链与gp42的A链通过氢键结合形成一个复合物,该复合物属亲水类蛋白,Resolution为3.25;4)LV-DPB1-HL组的HLA-DP+gp42+的双阳性率明显高与LV-DPB1-H组（29.467±2.108vs 15.867±0.929）,差异具有统计学意义;5)收集了105例霍奇金淋巴瘤患者的临床资料及病理特征并进行统计学分析,单因素分析结果显示:性别（P=0.007<0.1）、年龄（P=0.000<0.1）,Ann Arbor分期（P=0.088<0.1）、病理分型（P=0.000<0.1）是影响EB病毒阳性预后的因素;经多因素COX回归分析结果显示:年龄是影响EB病毒阳性霍奇金淋巴瘤预后的独立因素（P=0.000<0.05,HR:1.026,95%CI:1.014～1.042）;6)通过对15例EB病毒阳性霍奇金淋巴瘤患者及10例淋巴结反应性增生患者的免疫功能及表达产物分析,EB病毒阳性霍奇金淋巴瘤患者中LMP1、CD30、PDL1的表达量均高于EB病毒阳性淋巴结反应性增生患者,提示LMP1、CD30、PDL1与EB病毒阳性霍奇金淋巴瘤患者的发病机制存在相关性;与对照组相比,CD4+T细胞在病例组中的表达比例升高,差异有统计学意义;CD8+T细胞在病例组中的表达比例降低,差异有统计学意义;HLA-DPB1的表达量在病例组vs对照组的比例降低,差异有统计学意义。研究结论:EB病毒的gp42蛋白可以与人类白细胞抗原HLA-DPB1在细胞表面相结合,在gp42蛋白的浓度达到80μg时,两个蛋白可以达到较高的结合效率,共同结合后可以在细胞内作用,导致人体的免疫抑制作用发生改变,共同参与到霍奇金淋巴瘤的发病过程中。在EB病毒阳性霍奇金淋巴瘤组中,性别、部位、EBV-DNA复制、Ann Arbor分期、病理组织分型、初始治疗方案与EB病毒感染患者的预后无相关性,但年龄、血液EB病毒检测是影响EB病毒感染患者预后的独立预后因素,且EB病毒感染后,霍奇金淋巴瘤的免疫功能及免疫产物较淋巴结反应性增生均发生变化。因此,我们也许可以通过降低gp42浓度,即降低EB病毒的感染率来降低霍奇金淋巴瘤的发病;另一方面,根据分子动力学模拟的结果:我们可以通过断裂氢键、阻止亲水性结合等方式阻止疾病的发生,这些数据可能为后期霍奇金淋巴瘤的治疗方式及疫苗研究提供一定的参考价值。
霍少芬[4]（2020）在《EBV-EBNA1通过募集Treg细胞构建鼻咽癌免疫抑制微环境的机制研究》文中提出研究背景及研究目的:鼻咽癌是一种起源于鼻咽上皮并好发于广东地区的恶性肿瘤,EBV感染是鼻咽癌发生、发展过程中的重要病原学因素。EBNA1是EBV编码的核抗原,在EBV基因组的维持、复制、有丝分裂后的EBV基因组分离等方面起着关键作用。EBNA1在所有EBV相关性疾病中均表达,为宿主细胞提供生存能力。然而,EBNA1抗原蛋白在鼻咽癌构建免疫抑制微环境中发挥何种作用?Treg细胞是限制抗肿瘤免疫反应的重要因素,然而Treg细胞是如何募集到鼻咽癌微环境中构建抑制性免疫微环境的机制尚不明确,本课题将就此切入点进行深入探讨。研究方法及研究内容:原位杂交（ISH）检测组织EBER以明确EBV感染;二代测序（NGS）及生物信息学分析筛选EBNA1过表达前后的差异表达基因;qRT-PCR、WB、IHC、transwe11、流式细胞术、裸鼠成瘤实验在体内、体外及患者组织水平验证EBV-EBNA1-TGFβ 1-SMAD3-PI3K-AKT-c-JUN-miR-200a-CXCL12-CXCR4 反馈环路调控Treg细胞向鼻咽癌微环境趋向性迁移;共聚焦共定位分析和Co-IP实验验证SMAD3和c-JUN形成蛋白复合体介导TGF β1信号;ChIP实验和双荧光素酶报告实验验证c-JUN作用于miR-200a启动子;双荧光素酶报告实验还用于验证miR-200a靶向CXCL12 3’UTR;肝癌裸鼠成瘤实验及C57BL/6小鼠成瘤实验验证CXCL12-CXCR4-Treg轴构建抑制性免疫微环境的作用在实体瘤中具有普遍适用性。研究结果:1、EBNA1表达水平与鼻咽癌Treg细胞浸润密度呈正相关关系;EBNA1高表达是鼻咽癌构建免疫抑制微环境和预后不良的重要预测指标。2、EBNA1通过激活TGF β 1-SMAD3通路促进Treg细胞向鼻咽癌微环境迁移。3、EBV-EBNA1-TGF β 1-SMAD3轴通过抑制miR-200a来募集Treg细胞构建鼻咽癌免疫抑制微环境。4、miR-200a直接靶向调控CXCL12 3’UTR区域,并与CXCL12形成CXCL12-miR-200a-CXCL12负性反馈调控环路,共同调节Treg细胞趋向性迁移。5、c-JUN直接靶向抑制miR-200a启动子区域并与CXCL12互为正性调控。EBNA1通过 CXCL12-PI3K-AKT-c-JUN-miR-200a-CXCL12反馈调控环路调节 Treg 细胞募集,构建以Treg细胞介导的免疫抑制微环境。6、TGFβ 1通过促进c-JUN表达及增强SMAD3/c-JUN蛋白-蛋白复合体的相互作用程度来抑制miR-200a转录。7、TGF β 1以miR-200a依赖性方式正性调控CXCL12表达及由CXCL12介导的Treg细胞趋向性迁移。8、CXCL12通过上调Treg细胞的CXCR4受体来招募Treg向鼻咽癌微环境富集,且CXCL12-CXCR4-Treg轴在实体瘤免疫抑制微环境的构建中具有普遍适用性。研究结论:EB病毒EBNA1 抗原蛋白通过上调鼻咽癌细胞内部的TGF β1-SMAD3-PI3K-AKT-c-JUN-CXCL12 信号轴及抑制 miR-200a 表达,并诱导 Treg 细胞表面的CXCR4受体表达上调,增强由CXCL12-CXCR4配体受体调控轴介导的趋化作用,从而促进Treg细胞向鼻咽癌微环境迁移,形成了 EBV-EBNA1-TGFβ1-SMAD3-PI3K-AKT-c-JUN-miR-200a-CXCL12-CXCR4-Treg 这种病毒—肿瘤-免疫三位一体的反馈调控机制,构建以Treg细胞介导的免疫抑制微环境,促进鼻咽癌免疫逃逸。本研究创新性:我们发现并证明了 EB病毒如何建立病毒-肿瘤-免疫三位一体的反馈调控机制为鼻咽癌创造免疫抑制微环境,促进鼻咽癌免疫逃逸。
胡颖[5]（2020）在《成人EB病毒感染的临床及实验室特征分析》文中认为目的通过检测成人Epstein-Barr病毒（EB病毒）感染患者的EB病毒相关抗体及EB病毒DNA、血常规、血生化及免疫指标,并对其临床症状进行分析,探讨成人EB病毒感染的临床特点。方法收集67例成人EB病毒感染患者的临床资料及实验室检测结果,并将其按年龄分为青中年组（18～59岁,19例）和老年组（?60岁,48例）,另收集同期的49名健康体检者按前述年龄分为2组,分别作为年龄对照组,分析成人EB病毒感染的临床特点及不同年龄患者间的异同。结果67例成人EB病毒感染患者中,最常见的症状为发热（37例,55.2%）;其次为淋巴结肿大（13例,19.4%）、脾肿大（9例,13.4%）、肝脏肿大（8例,11.9%）、咽部充血（6例,9.0%）和皮疹（5例,7.5%）。EB病毒感染的青中年患者与老年患者相比较,发热（16例,84.2%）vs（21例,43.8%）、咽部充血（5例,26.3%）vs（1例,2.1%）、皮疹（4例,21.1%）vs（1例,2.1%）、肝脏肿大（6例,31.6%）vs（2例,4.2%）的临床症状明显（χ2值分别为9.012、7.057、4.612、7.295,P均<0.05）。19例青中年患者,有2例伴发恶性肿瘤性疾病;而48例老年患者,有2例（4.1%）伴发嗜血细胞淋巴组织细胞增生症,17例（34.7%）伴发恶性肿瘤性疾病,2组间的恶性肿瘤患病构成比差异有统计学意义（χ2=4.15,P=0.042）。EB病毒感染老年组的T淋巴细胞总数、CD4+T淋巴细胞数、B淋巴细胞数均低于健康老年组（t分别为4.525,5.960,2.999,P均<0.05）,而EB病毒感染青中年组的淋巴细胞亚群数与健康青年组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。青中年患者与老年患者比较,EB病毒相关抗体表达水平及肝功能指标差异无统计学意义（P均>0.05）。早期初级感染组与既往感染组淋巴细胞亚群表达无统计学差异（P均>0.05）。结论成人EB病毒感染患者的临床表现各异,青中年患者的急性感染症状较老年患者明显,而老年患者的细胞免疫及体液免疫降低,且EB病毒相关肿瘤患病构成比高。EB病毒感染患者的临床表现多不典型。
李仕聪[6]（2020）在《胸腺瘤中EBV定量检测方法的建立及应用》文中指出目的:EBV（Epstein-Barr virus,EBV）感染与胸腺瘤及胸腺相关自身免疫性疾病的关系日益成为研究的热点,目前关于二者相关性的研究结果存在一定的差异,相互作用机制也尚不明确。EBV相关疾病患者血中存在游离的EBV DNA,本实验旨在定量检测胸腺瘤及胸腺相关疾病患者血液中游离EBV DNA,探索EBV DNA拷贝数与胸腺瘤及胸腺相关疾病的关系,以及EBV DNA拷贝数与胸腺瘤分型、分期之间的关联,为进一步用于指导治疗、判断疗效及预后提供理论支持。同时,构建包含EBV DNA的质粒以期为后续分子机制研究提供支持。方法:本实验利用实时定量荧光PCR（Quantitative Real-time PCR,q PCR）技术建立EBV DNA定量检测方法,检测胸腺瘤及胸腺相关疾病患者血中EBV DNA拷贝数。通过对实验样本的不同分组,研究胸腺瘤、重症肌无力患者血中EBV DNA拷贝数与正常对照组之间的差异,探究EBV感染与胸腺瘤及重症肌无力发病的相关性。此外,本实验利用流式细胞术检测胸腺瘤及胸腺相关疾病患者EBV DNA拷贝数与血液中各淋巴细胞亚型之间的联系。构建包含EBV感染患者EBV DNA的质粒,以及包含EBV DNA标准序列的质粒,为进一步研究EBV DNA在EBV相关疾病中的作用机制提供帮助。结果:利用实时定量荧光PCR技术定量检测36例实验样本,其中包括胸腺瘤患者血液样本23例,重症肌无力患者血液样本15例。发现胸腺瘤患者血液中EBV DNA Bam HI-W拷贝数与正常对照组存在差异,且明显高于正常对照组,提示EBV的活跃状态与胸腺瘤的发生相关。对比重症肌无力患者与正常对照组血中EBV DNA Bam HI-W拷贝数,发现重症肌无力组具有较高的Bam HI-W拷贝数,但二者之间差异不明显,EBV感染在重症肌无力的发生中的作用机制仍需进一步探索。分析发现胸腺瘤WHO病理分型和Masaoka-Koga分期各亚组之间EBV DNA拷贝数差异不明显。此外,流式细胞术结果显示,随着EBV DNA拷贝数的增加,B细胞表面分子CD19和CD20表达上调。未得到EBV DNA拷贝数与Th17或Treg细胞比例变化之间的明显相关性,但是患者血中Th17/Treg比值随着患者血液样本中Bam HI-W拷贝数的增多而增大,具有显着相关性。同时,本实验成功构建出含有标准EBV Bam HI-W基因,以及包含感染EBV胸腺瘤患者的Bam HI-W基因的质粒,为后续研究EBV感染在胸腺瘤及重症肌无力发病过程中的作用机制奠定了基础。结论:本实验利用实时定量荧光PCR技术成功建立定量检测胸腺瘤及胸腺相关自身免疫性疾病患者血液中EBV DNA拷贝数的方法,并检测临床血液样本,具有较好的重复性和准确性。这一方法为监测胸腺瘤及胸腺相关自身免疫性疾病患者治疗过程中EBV DNA拷贝数奠定了基础,有利于辅助临床的抗病毒治疗的实施,并为胸腺瘤及重症肌无力患者抗病毒治疗预后提供参考。EBV感染后,随着EBV活跃状态改变,患者体内淋巴细胞表面膜分子表达存在一定的变化趋势,为后续研究EBV感染与胸腺瘤和胸腺相关自身免疫性疾病的发生机制提供帮助。
黄玲[7]（2020）在《EBV抗体及核酸定量检测在鼻咽癌早期诊断及筛查中的应用》文中研究说明目的:探讨EB病毒抗体及核酸定量检测与鼻咽癌的相关性,研究EB病毒EA-IgA、Rta-IgG、VCA-IgA及EB病毒DNA在鼻咽癌早期诊断、治疗及筛查中的应用。材料和方法:收集2016年1月2018年12月在郴州市第一人民医院首次确诊、无远处转移且治疗方案为同步放化疗的100例鼻咽癌患者为实验组,鼻咽部炎症者、健康体检者各100例作为对照组。鼻咽癌组分别于治疗前、治疗后采集空腹静脉血,对照组于体检或就诊时采集空腹静脉血。采用全自动酶联免疫分析仪检测EB病毒EA-IgA、RtaIgG、VCA-IgA,用荧光定量PCR检测鼻咽癌患者血浆EB病毒DNA含量。招募于2017年12月至2019年12月在郴州市第一人民医院健康管理中心体检的鼻咽癌筛查志愿者,共纳入8243个研究对象。采集纳入对象空腹静脉血2管,各5ml,分别用于EB病毒抗体和核酸检测。EB病毒VCA-IgA、Rta-IgG、EA-IgA三项抗体至少一项阳性（即EBV抗体阳性）,且EBV DNA同时阳性者,再连续2次检测血浆EBV DNA（每次间隔60天）。连续三次EBV DNA阳性者纳入为高危对象,进行2年的追踪随访,目前中期随访时间为1年,定期复查EBV抗体及EBV DNA,同时做鼻咽部MRI或鼻咽镜检查（异常者取病理活检）。数据资料均采用SPSS 20.0统计学软件分析。定性资料分析采用卡方检验,用率（%）表示。定量资料结果符合正态分布采用t检验,用均值±标准差（X±s）表示;非正态分布的用非参检验分析,用中位数及四分位数间距[M（25%,75%）]描述。治疗前、后定量结果对比分析采用配对t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1、通过对EBV抗体及EBV DNA定性结果做ROC曲线分析得到:EBV VCA-IgA的AUC、敏感性、特异度、Youden指数分别是0.773、74%、80.5%、0.545;EBV EA-IgA的AUC、敏感性、特异度、Youden指数分别是0.768、79%、74.5%、0.535;EBV Rta-IgG的AUC、敏感性、特异度、Youden指数分别为0.742、63%、85.5%、0.485;EBV DNA的AUC、敏感度、特异性、Youden指数分别是0.875、80%、95%、0.750。其中EBV DNA的诊断效能最好。2、在本研究试剂检测的线性范围内,EB病毒DNA的cut off值为100 copies/ml时的诊断效能最佳,其敏感性、特异度、Youden指数、AUC分别为80%、95%、0.750、0.875。3、联合EBV抗体、核酸诊断EA-IgA/Rta-IgG/VCA-IgA+EBV DNA的诊断效能比单项抗体或核酸更好。EB病毒DNA的cut off值为100 copies/ml时,EA-IgA/Rta-IgG/VCA-IgA+EBV DNA诊断的敏感度、特异性、AUC分别为77%、97.5%、0.873。4、根据RECIST疗效评估标准,鼻咽癌患者根据疗效分为缓解组（CR+PR）和非缓解组（SD+PD）。对比分析鼻咽癌患者治疗前后四个指标在两组间的变化。非缓解组log（EBV DNA）治疗前、治疗后均数水平高于缓解组,两组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;在两组中,治疗前log（EBV DNA）水平均高于治疗后水平,两者比较有统计学差异（P<0.05）。EA-IgA治疗前、治疗后均数水平在缓解组与非缓解组间无统计学差异（P>0.05）,但缓解组治疗前水平高于治疗后水平,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）;非缓解组中两者相比无统计学差异（P>0.05）。VCA-IgA、Rta-IgG在缓解组及非缓解组均数水平无显着性差异（P>0.05）,其治疗前后的变化在两组间亦无统计学差异（P>0.05）。5、鼻咽癌患者复发转移组治疗前、治疗后log（EBV DNA）水平均高于未复发转移组,两组间比较有统计学差异（P<0.05）;在两组中,治疗前水平均高于治疗后水平,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前、治疗后EA-IgA均数水平在复发转移组和未复发转移组间比差异无统计学意义（P>0.05）;无复发转移组中EA-IgA治疗前水平高于治疗后水平,两者相比差异有统计学意义（P<0.05）,在复发转移组中,两者无统计学差异（P>0.05）。6、8243名纳入对象中EBV VCA-IgA、Rta-IgG、EA-IgA三项抗体至少一项阳性,且连续3次检测EBV DNA（每次间隔2个月）阳性者共10人,其中5人已确诊为NPC,另外5人随访中;筛查阴性者8233人中,有14人失访,其余8219人仍在随访中,随访期内未发现鼻咽癌患者。目前为止,该早筛方案的敏感度是100%,特异性是99.94%。结论:1、在本研究中,EBV DNA cut off值取100 copies/ml对NPC有较好的诊断效能。2、EBV EA-IgA可能是鼻咽癌疗效监测、预后评估的敏感指标。3、将EBV抗体及连续3次（每次间隔60天）血浆EBV DNA检测的鼻咽癌早筛模式,用于健康体检人群鼻咽癌的早期筛查,可有助于提高鼻咽癌早期筛查的敏感性与特异度。
胡颖,包玉洁,白玉盘,陆观珠,成亚娇,郭竹英,许洁[8]（2020）在《67例成人EB病毒感染临床及实验室特征分析》文中研究说明目的:检测成人Epstein-Barr病毒（EB病毒）感染患者的EB病毒相关抗体及EB病毒DNA、血常规、血生化指标,对其临床症状进行分析,探讨成人EB病毒感染的临床特点。方法:收集67例成人EB病毒感染患者的临床资料及实验室检测结果,并将其按年龄分为青中年组（18～59岁,19例）和老年组（≥60岁,48例）;另收集同期的49名健康体检者,按前述年龄分为2组,分别作为年龄对照组。分析成人EB病毒感染的临床特点及不同年龄段患者间的异同。结果:67例成人EB病毒感染患者中,最常见的症状为发热（37例,55.2%）;其次为淋巴结肿大（13例,19.4%）、脾肿大（9例,13.4%）、肝脏肿大（8例,11.9%）、咽部充血（6例,9.0%）和皮疹（5例,7.5%）。EB病毒感染的青中年患者与老年患者相比较,发热（84.2%比43.8%）、咽部充血（26.3%比2.1%）、皮疹（21.1%比2.1%）、肝脏肿大（31.6%比4.2%）的临床症状明显（χ2值分别为9.012、7.057、4.612、7.295,P均<0.05）。19例青中年患者中有2例伴发恶性肿瘤性疾病;而48例老年患者中有2例（4.1%）伴发嗜血细胞淋巴组织细胞增生症,17例（34.7%）伴发恶性肿瘤性疾病,2组间的恶性肿瘤患病构成比差异有统计学意义（χ2=4.15,P=0.042）。EB病毒感染老年组的T淋巴细胞总数、CD4+T淋巴细胞计数、B淋巴细胞计数均低于健康老年组（t分别为4.525,5.960,2.999,P均<0.05）,而EB病毒感染青中年组的淋巴细胞亚群数与健康青中年组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。青中年EB病毒感染患者与老年患者比较,EB病毒相关抗体表达水平及肝功能指标差异无统计学意义（P均>0.05）。结论:成人EB病毒感染患者的临床表现各异,青中年患者的急性感染症状较老年患者明显,而老年患者的细胞免疫及体液免疫功能降低,且EB病毒相关肿瘤患病者构成比高。
邱烨[9]（2019）在《基于鼻咽部粘膜细胞稳定性FH检测的联合检测手段在鼻咽癌筛查中的应用》文中研究表明目的 探讨鼻咽部粘膜细胞稳定性FH检测、纤维鼻咽镜以及EB病毒血清学检查三种检测方法单独及联合检测在鼻咽癌诊断中的价值。方法 选取2017年6月至2018年6月于长沙市第一医院耳鼻喉科就诊的门诊及住院病人共108例,所有受试者均行鼻咽部活检,以病理学检查为金标准,将确诊为鼻咽癌及癌前病变患者54例分为观察组,以鼻咽部正常及良性病变患者分为对照组,以鼻咽部粘膜细胞稳定性FH检测、纤维鼻咽镜以及EB病毒血清学检测三种检查方法分别对观察组及对照组患者进行检查,观察两组患者中三种检测方式的阳性及阴性结果,记录三者结果并通过SPSS22.0软件进行统计分析,并计算三种检测方式的灵敏度、特异度、假阳性率、假阴性率、阳性似然比、阴性似然比、诊断指数、阳性预测值、阴性预测值、符合一致性、粗符合率等评价指标,评估三种检测方式在鼻咽癌筛查中的价值,并通过计算三种检测方式4种联合检测方案的灵敏度、特异度、假阳性率、假阴性率阳性似然比、阴性似然比、诊断指数、阳性预测值、阴性预测值、符合一致性、粗符合率等评价指标,评估联合检测方式在鼻咽癌筛查中的价值。结果 （1）在病检确诊为鼻咽癌及癌前病变的观察组54例患者中,FH筛查、EB病毒血清VCA-IgA检测、纤维鼻咽镜检查的阳性率分别:85.2%、79.6%、90.7%。在病检确诊为鼻咽部正常或良性病变的对照组54例患者中,FH筛查、EB病毒血清VCA-IgA检测、纤维鼻咽镜检查的阳性率分别:24.0%、27.8%、18.5%。在观察组中X2=2.641,P=0.267>0.005,三种检测方式在观察组中的检出率差异不具备统计学差异,在对照组中X2=1.306,P=0.520>0.005,三种检测方式在对照组中的检出率差异不具备统计学差异。（2）FH筛查、EB病毒血清VCA-IgA检测、纤维鼻咽镜检查的临床筛检评价常用指标:灵敏度分别为85.2%、79.6%、90.7%;特异度分别为:76.0%、72.2%、81.5%;假阳性率分别为:24.0%、27.8%、18.5%;假阴性率分别为14.8%、20.4%、9.3%;阳性似然比分别为3.54、2.86、4.90;阴性似然比分别为0.19、0.28、0.20;诊断指数分别为161.2%、151.8%、172.2%;阳性预测值分别为78.0%、74.1%、83.1%;阴性预测值分别为82.7%、78.0%、89.8%。（3）FH筛查、EB病毒血清VCA-IgA检测、纤维鼻咽镜检查分别联合检测时,灵敏度、假阳性率均较单独检测时降低,但特异度及假阴性率均较单独检测时有所升高。其中任意两种方法联合检测方式以鼻咽部粘膜细胞稳定性FH检测联合EB病毒血清学检测敏感性最高（77.8%）;鼻咽部粘膜细胞稳定性FH检测联合电子鼻咽镜检查特异性最高（90.7%）。三者联合检测敏感性显着降低（66.7%）,但其特异性升高（92.6%）。结论 鼻咽部粘膜细胞稳定性FH检测联合EB病毒VCA-IgA检测的方法对鼻咽癌的诊断具有较高的敏感性和特异性。因FH筛查检测试剂产品简便、经济、快速、高效等更适合广泛筛查的特点,联合EB病毒VCA-IgA检测可提高鼻咽癌在人群中的检出率,该法简单可行,适于临床推广应用。
郭玉虹[10]（2019）在《EB病毒相关性胃癌临床病理分析》文中研究表明研究目的:相对于经典型胃癌而言,EB病毒相关性胃癌（Epstein-Barr Virus-associated gastric carcinoma,EBVaGC）似乎具有独特的临床病理学特征,与经典型胃癌不同的胃癌发生机制以及相对较好的预后。因此,尽管EBVaGC仅占胃癌总体的相对小比例,其应被视为胃癌的一个独特亚组进行研究和分析。虽然EBER-ISH被认定为确诊EBVaGC的金标准,但是其具体组织病理学特点仍然不明确。因此本研究拟通过观察较比已确诊的EBVaGC病理切片,总结其与经典型胃癌不同的组织病理学特点,为后续肿瘤发生机制研究提供可能的线索。研究方法:收集2016年1月-2017年12月天津医科大学肿瘤医院行根治性手术切除的胃癌病例的组织切片,由两名高年资病理主诊医师,按照胃癌和EBER-ISH（+）的规范诊断标准,复查诊断,筛选出EBVaGC确诊病例,对其HE和免疫组化染色切片进行统计,并分析临床病理学特征、免疫组化、原位杂交结果,结合相关参考文献进行讨论。研究结果:收集2016年1月-2017年12月天津医科大学肿瘤医院单纯行胃癌根治性手术切除的病例538例,经筛选符合EBVaGC诊断标准27例,占比5.02%。其中,男性24例,女性3例;年龄43-76岁（57.48±8.33岁）。患者临床主要症状为间断上腹部疼痛,偶有呕血,黑便。27例肿瘤中25例位于胃体,1例位于贲门,1例位于胃底。所有患者均接受了腹腔镜下胃癌根治术,术后随访1-3年,27例患者均无瘤存活。肿瘤位于贲门1例,胃底1例,胃体25例。其中24例单发肿瘤,3例多发肿瘤。标本肉眼所见:27例均为溃疡型。肿瘤长径2-8cm。切面灰红、灰白色,晚期肿瘤边界不清、质硬。光学显微镜下观察:大量的淋巴细胞浸润,呈条索状、小巢状。肿瘤细胞中等大小,圆形或不规则形,胞质嗜双色,核呈空泡状,核膜较厚,可见核仁,有的可见核分裂象,间质可见淋巴细胞,浆细胞,少见纤维组织。EBER原位杂交27例均显示核阳性,阳性信号均匀分布在肿瘤细胞核中,周围的非肿瘤细胞中不表达。免疫组化显示:所有27例CK8&18、CD3、CD4、CD8均为阳性。研究结论:EBVaGC是胃癌的一个独特的亚组,占世界上所有胃癌病例的约10%。本研究观察到EBVaGC显示出一些独特的临床病理学特征,包括男性优势,高龄易感倾向性,近端胃易感,溃疡型为主,及HE染色切片中大量淋巴细胞浸润、伴CD3、CD4、CD8均为阳性高表达的特点;以及EBVaGC相对较好的临床预后。然而,EBV在胃癌发生中的确切作用仍未完全了解。需要进一步的研究来证实EBV感染、环境因素和EBVaGC遗传背景之间的相互作用。
二、EB病毒与恶性肿瘤（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、EB病毒与恶性肿瘤（论文提纲范文）
（1）1、DNA拷贝数异常改变作为膀胱癌预后判断相关分子标志物的研究 2、EB病毒相关上皮性恶性肿瘤中病毒miRNA与宿主相互作用的分子机制及其意义（论文提纲范文）
| 英语缩略词 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 DNA拷贝数异常改变作为膀胱癌预后判断相关分子标志物的研究 |
| 导论 |
| 1. 膀胱癌概述 |
| 2. 基因拷贝数变异的生物学意义 |
| 3. 基因拷贝数变异与恶性肿瘤的关系 |
| 4. 膀胱癌中的基因拷贝数异常 |
| 5. 问题与展望 |
| 6. 本项研究的目的和基本策略 |
| 结果 |
| 第一节 本研究入组病例及其临床病理特征 |
| 1. 膀胱癌肿瘤组织病例 |
| 1.1 膀胱癌肿瘤组织病例的临床病理特征 |
| 1.2 膀胱癌肿瘤组织病例随访情况 |
| 2. 膀胱癌尿样本 |
| 2.1 膀胱癌尿样本病例的临床病理特征 |
| 2.2 膀胱癌尿样本病例随访情况 |
| 第二节 膀胱癌组织中DNA拷贝数异常改变辅助膀胱癌预后判断 |
| 1. DNA拷贝数异常与临床病理风险因素的相关性分析 |
| 1.1 膀胱癌肿瘤组织中的DNA拷贝数异常 |
| 1.2 膀胱癌肿瘤组织中DNA拷贝数异常与临床病理风险因素的关系 |
| 2. DNA拷贝数异常与患者预后的相关性分析 |
| 2.1 DNA拷贝数异常与非肌层浸润性膀胱癌预后的相关性 |
| 2.2 DNA拷贝数异常与肌层浸润性膀胱癌预后的相关性 |
| 3. 基于临床病理风险因素与DNA拷贝数异常的预后预测模型 |
| 3.1 Cox风险比例回归分析影响膀胱癌患者无瘤生存期的独立预后因素 |
| 3.2 基于膀胱癌独立预后因素构建预后预测模型 |
| 3.2.1 构建非肌层浸润性膀胱癌患者预后预测模型 |
| 3.2.2 构建肌层浸润性膀胱癌患者预后预测模型 |
| 3.2.3 高风险非肌层浸润性膀胱癌患者预后预测 |
| 第三节 基于Real-time PCR方法检测膀胱癌术前尿脱落细胞中DNA拷贝数异常改变辅助膀胱癌预后判断 |
| 1. 膀胱癌患者尿样本中DNA拷贝数异常与临床病理风险因素的相关性分析 |
| 1.1 膀胱癌患者术前尿样本中的DNA拷贝数异常改变 |
| 1.2 术前尿样本中DNA拷贝数异常与临床病理风险因素的关系 |
| 2. 膀胱癌患者术前尿样本中DNA拷贝数异常与预后的相关性分析 |
| 2.1 术前尿样本中DNA拷贝数异常与预后的关系 |
| 2.2 术前尿样本中DNA拷贝数异常与非肌层浸润性膀胱癌短期肿瘤复发的相关性 |
| 2.3 构建非肌层浸润性膀胱癌短期肿瘤复发预测模型 |
| 第四节 基于3D数字PCR方法检测膀胱癌术前尿脱落细胞中DNA拷贝数异常改变辅助膀胱癌预后判断 |
| 1. 膀胱癌患者术前尿样本中DNA拷贝数异常与临床病理风险因素的相关性分析 |
| 1.1 膀胱癌患者术前尿样本中的DNA拷贝数异常改变 |
| 1.2 术前尿样本中DNA拷贝数异常与临床病理风险因素的关系 |
| 2. 3D数字PCR与real-time PCR对尿液中拷贝数变异分子的检测效能比较 |
| 2.1 受试者工作曲线分析比较两者检测效能 |
| 2.2 构建基于3D数字PCR的术前尿样本诊断模型 |
| 3. 膀胱癌患者术前尿样本中DNA拷贝数异常与预后的相关性分析 |
| 3.1 尿样本中DNA拷贝数异常与非肌层浸润性膀胱癌预后的相关性 |
| 3.2 尿样本中DNA拷贝数异常与肌层浸润性膀胱癌预后的相关性 |
| 讨论 |
| 1. 膀胱癌相关分子标志物研究的策略 |
| 2. 组织中膀胱癌预后相关分子标志物 |
| 3. 尿液中膀胱癌预后相关分子标志物 |
| 4. 3D数字PCR在膀胱癌患者尿液检测中的应用 |
| 5. CEP63、FOSL2及PAQR6的异常改变与肿瘤的关系 |
| 6. 本项研究的局限性 |
| 本章小结 |
| 材料与方法 |
| 一、研究病例和实验材料 |
| 1. 膀胱癌患者及其生物学样品 |
| 2. 生物样品收集、制备和鉴定所需试剂 |
| 3. 实时荧光定量PCR |
| 4. 3D数字PCR |
| 5. 引物序列 |
| 6. 主要仪器和设备 |
| 7. 主要分析软件 |
| 二、实验方法 |
| 1. 尿沉渣DNA提取 |
| 2. 实时荧光定量PCR |
| 3. 扩增产物质量检测 |
| 4. 引物扩增标准曲线 |
| 5. 3D数字PCR |
| 6. 统计学方法 |
| 第二章 EB病毒相关上皮性恶性肿瘤中病毒miRNA与宿主相互作用的分子机制及其意义 |
| 导论 |
| 1. EB病毒概述 |
| 2. EB病毒相关的上皮性恶性肿瘤 |
| 3. EB病毒编码基因及其变异与恶性肿瘤的关系 |
| 4. EB病毒编码的小RNA与恶性肿瘤的关系 |
| 5. 本项研究的目的和策略 |
| 结果 |
| 第一节 EB病毒编码的miRNA在胃癌中的表达及其医学生物学意义 |
| 一、研究入组病例及其临床病理特征 |
| 二、EB病毒相关胃癌中病毒及宿主miRNA的表达 |
| 1. EB病毒相关胃癌中病毒miRNA的表达谱 |
| 1.1 miRNA芯片质量控制 |
| 1.2 EB病毒相关胃癌肿瘤组织中病毒miRNA的表达谱 |
| 1.3 EB病毒相关胃癌细胞系中病毒miRNA的表达谱 |
| 1.4 EB病毒相关胃癌中高表达的病毒miRNA |
| 1.5 探索EB病毒相关胃癌中高表达病毒miRNA的靶基因及其功能 |
| 2. EB病毒相关胃癌中宿主miRNA的表达 |
| 2.1 EB病毒相关胃癌组织中宿主miRNA的差异表达分析 |
| 2.2 EB病毒相关胃癌细胞系中宿主miRNA的差异表达分析 |
| 2.3 EB病毒相关胃癌中与病毒有关的宿主miRNA |
| 3. EB病毒编码的miRNA与宿主miRNA的相关性分析 |
| 3.1 探索EB编码的miRNA与宿主细胞miRNA表达的相关性 |
| 3.2 探索与EB病毒miRNA与相关宿主miRNA结构的相关性 |
| 3.3 探索与EB病毒相关的宿主miRNA的靶基因及其功能 |
| 三、EB病毒相关胃癌中病毒miRNA对宿主基因表达的影响 |
| 1. EB病毒相关胃癌中差异表达的宿主基因 |
| 1.1 转录组测序EB病毒相关胃癌组织中宿主基因的差异表达 |
| 1.2 公共数据库中EB病毒相关胃癌组织中宿主基因的差异表达 |
| 1.3 EB病毒相关胃癌与EB病毒阴性胃癌中宿主基因的差异表达 |
| 2. 差异表达的宿主基因与病毒miRNA的相关性 |
| 2.1 从差异表达的宿主基因中筛选病毒与宿主miRNA的共同靶基因 |
| 2.2 病毒与宿主miRNA共同靶基因KEGG信号通路富集 |
| 四、EB病毒相关胃癌中病毒miRNA的功能研究 |
| 1. 瞬时转染后细胞中miR-BART1-3p和miR-BART7-3p的表达变化 |
| 2. EB病毒miRNA对胃癌细胞增殖能力的影响 |
| 2.1 miR-BART1-3p及miR-BART7-3p过表达对细胞增殖能力的影响 |
| 2.2 miR-BART1-3p及miR-BART7-3p敲降对细胞增殖能力的影响 |
| 3. EB病毒miRNA对胃癌细胞周期的影响 |
| 3.1 miR-BART1-3p及miR-BART7-3p过表达对细胞周期的影响 |
| 3.2 miR-BART1-3p及miR-BART7-3p敲降对细胞周期的影响 |
| 4. EB病毒miRNA对胃癌细胞迁移能力的影响 |
| 4.1 miR-BART1-3p及miR-BART7-3p过表达对细胞迁移能力的影响 |
| 4.2 miR-BART1-3p及miR-BART7-3p敲降对细胞迁移能力的影响 |
| 第二节 EB病毒编码的miRNA在鼻咽癌中的表达及其医学生物学意义 |
| 一、研究入组病例及其临床病理特征 |
| 二、鼻咽癌中EB病毒miRNA的表达 |
| 三、鼻咽癌中EB病毒miR-BART7-3p的功能研究 |
| 1. 瞬时转染后细胞中miR-BART7-3p的表达变化 |
| 2. miR-BART7-3p对鼻咽癌细胞增殖能力的影响 |
| 2.1 miR-BART7-3p过表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响 |
| 2.2 miR-BART7-3p敲降对鼻咽癌细胞增殖能力的影响 |
| 3. miR-BART7-3p对鼻咽癌细胞周期的影响 |
| 3.1 miR-BART7-3p过表达对鼻咽癌细胞周期的影响 |
| 3.2 miR-BART7-3p敲降对鼻咽癌细胞周期的影响 |
| 4. miR-BART7-3p对鼻咽癌细胞迁移能力的影响 |
| 4.1 miR-BART7-3p过表达对鼻咽癌细胞迁移能力的影响 |
| 4.2 miR-BART7-3p敲降对鼻咽癌细胞迁移能力的影响 |
| 讨论 |
| 1. 临床相关研究质量控制 |
| 2. EB病毒相关胃癌中病毒miRNA的研究 |
| 3. 本项研究中病毒miRNA在EB病毒相关胃癌中的表达及其意义 |
| 4. 鼻咽癌中病毒miRNA的研究 |
| 5. 本项研究中病毒miRNA在鼻咽癌中的表达及其意义 |
| 本章小结 |
| 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 1. EB病毒相关胃癌患者及其生物学样品 |
| 2. 鼻咽癌相关患者及其生物学样品 |
| 3. 临床样品收集、制备和鉴定所需试剂 |
| 4. 主要试剂盒 |
| 5. 实时定量荧光PCR试剂 |
| 6. 细胞培养和miRNA转染 |
| 7. 常用试剂配制 |
| 8. 细胞培养用主要器皿 |
| 9. 主要仪器 |
| 10. 主要分析软件 |
| 二、实验方法 |
| 1. 基因表达谱芯片技术 |
| 2. 芯片数据读取 |
| 3. 芯片数据预处理和标准化 |
| 4. 第二代测序 |
| 5. miRNA实时定量荧光PCR |
| 6. 总RNA样品的提取、制备及质量鉴定 |
| 7. 细胞生物学实验方法 |
| 参考文献 |
| 基金资助 |
| 致谢 |
（2）基于转录组测序分析的鼻咽癌相关EB病毒变异亚型及预后模型的研究（论文提纲范文）
| 英语缩略词 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 与鼻咽癌相关的EBV基因变异及其医学生物学功能 |
| 第一节 导论 |
| 1.EBV概述 |
| 1.1 EBV的基本生物学特征 |
| 1.2 EBV潜伏感染 |
| 1.3 EBV潜伏基因 |
| 2 鼻咽癌概述 |
| 3.鼻咽癌中EBV基因的变异 |
| 4.本项研究的目的和基本策略 |
| 第二节 结果 |
| 1.纳入转录组测序分析的鼻咽癌病例入组及其基本特征 |
| 2.入组样品的转录组测序分析 |
| 3.鼻咽癌组织中EBV基因变异的分析 |
| 3.1 鼻咽癌组织中EBER2和LMP2携带高频变异 |
| 3.2 EBER2变异与鼻咽癌 |
| 4.鼻咽癌中EBER2变异亚型及其临床意义 |
| 4.1 EBER2亚型与鼻咽癌患者临床特征的关系 |
| 4.2 EBER2亚型与鼻咽癌患者预后的关系 |
| 5.EBER变异在鼻咽癌独立样本中的实验验证 |
| 5.1 在EBV阳性细胞中验证EBER的变异 |
| 5.2 在鼻咽癌组织中验证EBER的变异 |
| 5.3 独立样本验证中EBER2亚型分布及与临床表型的关系 |
| 6.EBER2亚型对应宿主基因的表达分析 |
| 7.鼻咽癌组织中LMP2B的变异位点 |
| 8.LMP2B-C666和LMP2B-Raji在鼻咽癌细胞中的生物学功能 |
| 8.1 稳定表达外源性LMP2B-C666和LMP2B-Raji的鼻咽癌细胞的构建 |
| 8.2 LMP2B-C666和LMP2B-Raji对鼻咽癌细胞表型的影响 |
| 8.3 LMP2B-C666的蛋白稳定性 |
| 9.LMP2B变异与EBER2亚型的关联 |
| 第三节 讨论 |
| 1.临床相关研究的质量控制 |
| 2.以转录组测序数据分析EBV基因变异 |
| 3.EBER2的变异与鼻咽癌患者预后的关系 |
| 4.EBER变异的独立样本验证与细胞定位 |
| 5.LMP2B在鼻咽癌中的生物学功能 |
| 本章小结 |
| 第二章 鼻咽癌预后评估模型的建立 |
| 第一节 导论 |
| 1.鼻咽癌概述 |
| 2.与鼻咽癌预后相关的分子标志物 |
| 3.免疫微环境与鼻咽癌预后的关系 |
| 3.1 鼻咽癌与免疫治疗 |
| 3.2 浸润免疫细胞与鼻咽癌预后 |
| 4.本项研究的目的和基本策略 |
| 第二节 结果 |
| 1.鼻咽癌“复发转移组”和“非复发转移组”的特征性基因表达谱 |
| 1.1 入组的鼻咽癌病例及其临床信息 |
| 1.2 转录组测序数据的主成分分析(principal component analysis,PCA) |
| 1.3 机器学习方法筛选两组鼻咽癌病例肿瘤组织的特征基因 |
| 1.4 两组鼻咽癌患者肿瘤组织中的差异表达mRNA |
| 2.筛选出的13个特征基因与鼻咽癌预后的关系 |
| 2.1 13个特征基因与鼻咽癌患者无进展生存的关系 |
| 2.2 13个特征基因与鼻咽癌患者总生存的关系 |
| 3.鼻咽癌预后模型的建立 |
| 3.1 13个特征基因分别对于鼻咽癌预后的影响 |
| 3.2 多因素Cox比例风险回归模型 |
| 3.3 4-gene signature预后预测能力的评估 |
| 3.4 基于4-gene signature的风险评分与其预后能力的关联 |
| 3.5 基于4-gene signature的风险评分是否为预后的独立因素 |
| 4.4-gene signature的生物学功能 |
| 5.肿瘤免疫浸润和鼻咽癌预后的关系 |
| 5.1 本组鼻咽癌病例肿瘤组织中浸润免疫细胞与鼻咽癌预后的关系 |
| 5.2 GEO数据中浸润免疫细胞与鼻咽癌预后的关系 |
| 6.4-mRNA signature表达水平与肿瘤浸润免疫细胞的关系 |
| 第三节 讨论 |
| 1.筛选与鼻咽癌预后相关的基因 |
| 2.干扰素在鼻咽癌发生发展中的作用 |
| 3.鼻咽癌4-gene signature预后评估模型及其生物学功能 |
| 4.免疫微环境与鼻咽癌预后的关系 |
| 本章小结 |
| 第三章 材料与方法 |
| 第一节 研究对象和实验材料 |
| 1.鼻咽癌病例及其组织样品 |
| 2.细胞系 |
| 3.菌株和质粒载体 |
| 4.抗体 |
| 5.主要试剂与耗材 |
| 6.细胞培养的器皿 |
| 7.常用试剂的配制 |
| 8.主要仪器 |
| 9.主要分析软件及网站 |
| 第二节 实验方法 |
| 1.分子生物学实验方法 |
| 2.细胞生物学实验方法 |
| 3.生物学信息分析 |
| 4.统计学方法 |
| 参考文献 |
| 基金资助 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）HLA-DPB1和EB病毒gp42蛋白的结合方式与新疆地区霍奇金淋巴瘤发病的相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 新疆地区EB病毒阳性霍奇金淋巴瘤患者的生存状况分析 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 临床资料的收集 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 HLA-DPB1与EB病毒gp42 蛋白的结合方式研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 主要试剂与耗材 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 实验方法与步骤 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 新疆地区EB病毒阳性霍奇金淋巴瘤患者的免疫分子检测 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 主要实验试剂与耗材 |
| 1.3 主要实验方法与步骤 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 EB病毒与霍奇金淋巴瘤发病机制的相关研究 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（4）EBV-EBNA1通过募集Treg细胞构建鼻咽癌免疫抑制微环境的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 实验材料与实验方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 第一章 EBV-EBNA1在鼻咽癌患者中的表达特征、临床病理联系及其与肿瘤浸润性Treg细胞募集的相关性分析 |
| 一、结果 |
| 1、临床组织标本中EBV-EBNA1表达丰度的鉴定及其临床病理特征 |
| 2、临床组织标本中EBV-EBNA1感染状态与肿瘤浸润性Treg细胞募集相关 |
| 二、讨论 |
| 第二章 EBV-EBNA1通过激活TGFβ1通路促进Treg细胞向鼻咽癌微环境迁移 |
| 一、结果 |
| 1、TGFβ1在EBNA1阳性的鼻咽癌细胞和EBNA1高表达的鼻咽癌组织中表达上调 |
| 2、磷酸化SMAD3在EBNA1阳性的鼻咽癌细胞和EBNA1高表达的鼻咽癌组织中表达上调 |
| 3 、TGFβ1信号的激活促进Treg细胞在EBV-EBNA1高表达的鼻咽癌微环境中募集 |
| 二、讨论 |
| 第三章 EBV-EBNA1-TGFβ1-SMAD3轴通过抑制miR-200a来募集Treg细胞构建鼻咽癌免疫抑制微环境 |
| 一、结果 |
| 1、由EBV-EBNA1诱导的TGFβ1通过自分泌效应抑制miR-200a表达 |
| 2、miR-200a是TGFβ1-SMAD3信号轴的下游因子 |
| 3、动物模型体内验证EBV-EBNA1-TGFβ1-SMAD3轴通过抑制miR-200a来募集Treg细胞构建鼻咽癌免疫抑制微环境 |
| 二、讨论 |
| 第四章 miR-200a直接靶向调控CXCL12 3‘UTR区域,并与CXCL12形成负性反馈调控环路,共同调节Treg细胞向鼻咽癌迁移 |
| 一、结果 |
| 1、生物信息学预测CXCL12是miR-200a的靶基因 |
| 2、验证CXCL12是miR-200a的靶基因,miR-200a通过转录后调控机制抑制CXCL12表达及由CXCL12介导的Treg迁移 |
| 3、CXCL12可反向负性调控miR-200a表达 |
| 4、体内验证CXCL12调控Treg细胞向鼻咽癌微环境迁移 |
| 5、临床样本验证CXCL12调控Treg细胞向鼻咽癌微环境募集 |
| 二、讨论 |
| 第五章 c-JUN直接靶向调控miR-200a启动子区域并与CXCL12互为正性调控 |
| 一、结果 |
| 1、生物信息学预测c-JUN直接与miR-200a启动子区域结合 |
| 2、CXCL12通过正性调控PI3K/AKT/c-JUN信号通路来反向负性调控miR-200a表达 |
| 3、c-JUN通过直接结合和间接结合miR-200a启动子的方式负性调控miR-200a转录 |
| 4、c-JUN与CXCL12互为正性调控并形成CXCL12-PI3K-AKT-c-JUN-miR-200a-CXCL12反馈调控环路 |
| 5、临床样本验证c-JUN调控Treg细胞向鼻咽癌微环境募集 |
| 二、讨论 |
| 第六章 TGFβ1通过促进c-JUN表达及增强SMAD3/c-JUN蛋白-蛋白复合体的相互作用程度来抑制miR-200a转录 |
| 一、结果 |
| 1、TGFβ1通过上调SMAD3-c-JUN轴来抑制下游的miR-200a转录表达,形成TGFβ1-SMAD3-c-JUN-miR-200a调控轴 |
| 2、EBV-EBNA1以TGFβ1依赖性的方式调控SMAD3/c-JUN蛋白-蛋白相互作用复合体的丰度 |
| 3、临床样本验证c-JUN与TGFβ1-SMAD3轴的关系 |
| 二、讨论 |
| 第七章 TGFβ1以miR-200a依赖性方式正性调控CXCL12表达及由CXCL12介导的Treg细胞趋向性迁移 |
| 一、结果 |
| 1、TGFβ1可正性调控CXCL12表达 |
| 2、TGFβ1以miR-200a依赖性的方式调控CXCL12表达及由CXCL12介导的Treg细胞趋向性迁移 |
| 3、临床样本验证CXCL12与TGFβ1-SMAD3信号轴的关系 |
| 二、讨论 |
| 第八章 CXCL12通过上调Treg细胞的CXCR4受体来招募Treg向鼻咽癌微环境富集,且CXCL12-CXCR4-Treg轴在实体瘤免疫抑制微环境的构建中具有普遍适用性 |
| 一、结果 |
| 1、CXCL12-CXCR4配体受体调控轴调节Treg细胞的趋向性迁移 |
| 2、CXCL12-CXCR4配体受体调控轴在构建以Treg细胞介导的实体瘤免疫抑制微环境中具有普遍适用性 |
| 二、讨论 |
| 全文小结 |
| 课题创新性 |
| References |
| 附录 |
| Western Blot原始图片 |
| 中英文缩略词 |
| 致谢 |
| 博士期间发表论文 |
（5）成人EB病毒感染的临床及实验室特征分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 绪论 |
| 一、研究过程 |
| 1.1 资料与方法 |
| 1.1.1 分组 |
| 1.1.2 血常规检测 |
| 1.1.3 肝功能检测 |
| 1.1.4 EB病毒检测 |
| 1.1.5 统计学处理 |
| 1.2 成人EB病毒感染后的临床特征 |
| 1.2.1 患者的一般资料 |
| 1.2.2 伴随的临床症状 |
| 1.3 成人EB病毒感染后的实验室指标特征 |
| 1.3.1 EB病毒感染患者血生化及淋巴细胞亚群特征 |
| 1.3.2 EB病毒相关抗体 |
| 1.3.3 EB病毒不同抗体组淋巴细胞亚群比较 |
| 二、结果与讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学术论文和科研成果目录 |
（6）胸腺瘤中EBV定量检测方法的建立及应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.1.1 EBV阳性患者样本 |
| 1.1.2 实验研究对象 |
| 1.1.3 诊断标准 |
| 1.2 仪器与试剂 |
| 1.2.1 实验仪器设备 |
| 1.2.2 实验试剂(订购类) |
| 1.2.3 实验试剂(自行配制) |
| 1.3 实验步骤及实验方法 |
| 1.3.1 重组质粒的转化 |
| 1.3.2 重组质粒的提取 |
| 1.3.3 重组质粒的鉴定 |
| 1.3.4 胸腺瘤中EBV DNA拷贝数标准曲线的建立 |
| 1.3.5 实时定量荧光PCR检测实验样本中EBV DNA拷贝数 |
| 1.3.6 Bam HI-W片段的扩增 |
| 1.3.7 PCR产物琼脂糖凝胶电泳回收 |
| 1.3.8 重组质粒pc DNA-3.1(+)-Bam HI-W的构建 |
| 1.3.9 EBV阳性患者及实验样本血液基因组DNA提取 |
| 1.3.10 PCR扩增血液基因组DNA中 EBV Bam HI-W片段 |
| 1.3.11 重组质粒p UCm-T-Bam HI-W的构建 |
| 1.3.12 流式细胞术检测EBV感染患者淋巴细胞表面分子 |
| 二、实验结果 |
| 2.1 重组质粒的获得 |
| 2.1.1 重组质粒p UC57-Bam HI-W酶切鉴定结果 |
| 2.2 胸腺瘤中EBV DNA定量检测方法的建立与应用 |
| 2.2.1 Bam HI-W标准曲线 |
| 2.2.2 实验样本基本情况 |
| 2.2.3 实验样本全血DNA提取溶液的浓度 |
| 2.2.4 实验样本EBV DNA Bam HI-W实时定量荧光PCR检测结果 |
| 2.3 Bam HI-W表达质粒的构建 |
| 2.3.1 EB病毒Bam HI-W表达质粒pc DNA-3.1(+)-Bam HI-W的构建 |
| 2.3.2 胸腺瘤EBV阳性患者EBV DNA Bam HI-W表达质粒p UCm-T-Bam HI-W的构建 |
| 2.4 胸腺瘤中EBV感染水平对淋巴细胞及其表面分子表达的影响 |
| 2.4.1 胸腺瘤中CD19/CD20与EBV病毒感染水平的相关性 |
| 2.4.2 胸腺瘤中Th17/Treg与 EBV病毒感染水平的相关性 |
| 三、讨论 |
| 3.1 实时定量荧光PCR技术在EBV检测方面的优势与不足 |
| 3.2 EBV DNA Bam HI-W与胸腺瘤之间的关系 |
| 3.3 EB病毒感染在胸腺瘤及重症肌无力发病过程中的作用机制 |
| 3.4 检测EBV DNA拷贝数用于指导重症肌无力的治疗 |
| 3.5 构建EBV DNA Bam HI-W重组质粒的意义 |
| 3.6 胸腺瘤中EBV感染水平与淋巴细胞及其表面分子的相关性 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 病毒在肿瘤病发副肿瘤综合症的作用研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）EBV抗体及核酸定量检测在鼻咽癌早期诊断及筛查中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要缩略英文索引 |
| 第一部分 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 鼻咽癌研究现状 |
| 1.2 EB病毒国内外研究现状 |
| 1.3 EBV DNA及抗体在鼻咽癌中的研究进展 |
| 第2章 实验材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计学方法 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 鼻咽癌患者治疗前EBV DNA定量结果分析 |
| 3.2 EBV四项检测结果在鼻咽癌诊断中的分析 |
| 3.3 鼻咽癌患者治疗前后EBV四个指标检测结果变化的分析 |
| 3.4 血浆Log(EBV-DNA)、血清EA-Ig A治疗前后结果对比在鼻咽癌患者预后中的分析 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 诊断鼻咽癌患者血浆EBV DNA cut off值的标准 |
| 4.2 不同组合联合检测在鼻咽癌诊断中评价 |
| 4.3 鼻咽癌患者治疗前后EBV四个指标水平变化 |
| 4.4 鼻咽癌患者治疗前后血浆EBVDNA、血清EA-Ig A对于预后的评估 |
| 第5章 结论 |
| 第二部分 |
| 第1章 前言 |
| 第2章 实验材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 跟踪随访 |
| 2.4 数据管理及统计分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 纳入对象基本信息分析 |
| 3.2 阳性对象的筛查 |
| 3.3 随访 |
| 3.4 目前阶段实验结果分析 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的科研成果 |
| 致谢 |
（8）67例成人EB病毒感染临床及实验室特征分析（论文提纲范文）
| 资料与方法 |
| 一、资料 |
| 二、方法 |
| 三、统计学处理 |
| 结果 |
| 一、一般资料 |
| 二、伴随临床症状 |
| 三、实验室指标 |
| 四、EB病毒相关抗体 |
| 讨论 |
| 一、青中年及老年EB病毒感染者的临床特点 |
| 二、导致不同年龄EB病毒感染者组间免疫指标差异的可能机制 |
（9）基于鼻咽部粘膜细胞稳定性FH检测的联合检测手段在鼻咽癌筛查中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 第二章 材料和方法 |
| 2.1 实验设计 |
| 2.2 资料来源 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 观察指标 |
| 2.5 统计学方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 三种检测方式分别单独检测时的结果比较 |
| 3.2 三种检测方式单独运用的临床应用价值常用评价指标结果 |
| 3.3 将三种检测方法联合检测时临床应用价值常用评价指标结果 |
| 3.4 常用评价指标比较 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（10）EB病毒相关性胃癌临床病理分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、对象和方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 试剂及仪器 |
| 1.3 研究方法 |
| 1.3.1 组织处理 |
| 1.3.2 组织H&E染色 |
| 1.3.3 EBER-ISH |
| 1.3.4 免疫组化染色 |
| 1.3.5 EBVaGC诊断判定标准 |
| 1.3.6 EBVaGC的组织病理学特征的观察 |
| 二、结果 |
| 2.1 临床数据 |
| 2.2 病理学特征 |
| 2.2.1 肿瘤部位 |
| 2.2.2 大体检查 |
| 2.2.3 组织学病理 |
| 2.2.4 EBER-ISH |
| 2.2.5 免疫表型 |
| 三、讨论 |
| 3.1 EB病毒 |
| 3.1.1 EB病毒的主要特征 |
| 3.1.2 EB病毒株的地理区域分布特点 |
| 3.1.3 EB病毒与疾病 |
| 3.2 EBVaGC的流行病学特征 |
| 3.2.1 地理分布 |
| 3.2.2 年龄和性别分布 |
| 3.2.3 风险因素 |
| 3.3 EBVaGC的临床病理学特征 |
| 3.3.1 临床病理特征 |
| 3.3.2 组织病理学鉴别诊断 |
| 3.3.3 EBVaGC的分子生物学特点 |
| 3.3.4 EBVaGC中的局部免疫 |
| 3.4 EBVaGC的治疗 |
| 3.4.1 早期EBVaGC的治疗 |
| 3.4.2 晚期EBVaGC的治疗 |
| 3.5 预后 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 EB病毒相关性胃癌 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、EB病毒与恶性肿瘤（论文参考文献）
- [1]1、DNA拷贝数异常改变作为膀胱癌预后判断相关分子标志物的研究 2、EB病毒相关上皮性恶性肿瘤中病毒miRNA与宿主相互作用的分子机制及其意义[D]. 蔡曌. 北京协和医学院, 2021
- [2]基于转录组测序分析的鼻咽癌相关EB病毒变异亚型及预后模型的研究[D]. 赵爽. 北京协和医学院, 2021
- [3]HLA-DPB1和EB病毒gp42蛋白的结合方式与新疆地区霍奇金淋巴瘤发病的相关性研究[D]. 李红玉. 新疆医科大学, 2021(08)
- [4]EBV-EBNA1通过募集Treg细胞构建鼻咽癌免疫抑制微环境的机制研究[D]. 霍少芬. 南方医科大学, 2020(06)
- [5]成人EB病毒感染的临床及实验室特征分析[D]. 胡颖. 上海交通大学, 2020(01)
- [6]胸腺瘤中EBV定量检测方法的建立及应用[D]. 李仕聪. 天津医科大学, 2020(06)
- [7]EBV抗体及核酸定量检测在鼻咽癌早期诊断及筛查中的应用[D]. 黄玲. 南华大学, 2020(01)
- [8]67例成人EB病毒感染临床及实验室特征分析[J]. 胡颖,包玉洁,白玉盘,陆观珠,成亚娇,郭竹英,许洁. 诊断学理论与实践, 2020(01)
- [9]基于鼻咽部粘膜细胞稳定性FH检测的联合检测手段在鼻咽癌筛查中的应用[D]. 邱烨. 南华大学, 2019(01)
- [10]EB病毒相关性胃癌临床病理分析[D]. 郭玉虹. 天津医科大学, 2019(02)