一、动物的胚胎发育和胚层的分化（论文文献综述）
张琼宇,唐甲卉,彭娟,唐鹏程,孙远东[1]（2022）在《金鱼雌核发育单倍体胚胎血液循环障碍产生机制》文中指出为研究鱼类单倍体血液循环障碍产生机制,人工诱导获得金鱼（Carassius auratus）雌核发育单倍体胚胎并进行活体观察及邻联茴香胺染色,结果显示金鱼雌核发育单倍体胚胎存在不同程度的血液循环不良和红细胞生成缺陷。为进一步探讨其发生的分子机制,利用反义RNA整胚原位杂交技术比较分析了原始造血和血管发生关键基因scl （Stem cell leukemia）、gata-1 （Gata binding protein-1）和flk-1 （Fetal liver kinase-1）在雌核发育单倍体和自交二倍体胚胎中的表达模式。原始造血关键基因scl和gata-1的检测结果显示,在金鱼单倍体胚胎中,后侧板中胚层（Posterior lateral-plate mesoderm, PLM）不能正常迁移至胚体中线融合形成原始造血关键部位中间细胞群（Intermediate cell mass, ICM）;同时, scl和gata-1的表达沿单倍体胚胎前后轴缩短,并在躯干区域逐渐减弱。血管内皮标记基因flk-1的检测结果显示,单倍体胚胎原始体轴血管结构紊乱,节间血管发育不良或者缺失,没有形成完整的血管系统。此外,活体观察及gsc （Goosecoid）和N-cadherin （Neural cadherin）原位杂交检测结果显示,金鱼雌核发育单倍体胚胎原肠胚期存在细胞运动缺陷。以上研究结果提示,细胞运动迁移异常导致ICM和原始体轴血管发育缺陷,同时红细胞分化减少及外周血管发育不全,可能是造成金鱼雌核发育单倍体胚胎血液循环障碍的重要原因。
刘慧,张朴尧,于洋[2]（2021）在《干细胞分化为生殖细胞及重构胚胎的研究进展》文中研究说明随着辅助生殖技术（assisted reproduction technology, ART）的发展, 其需求日益增长。但是ART目前对于缺少功能配子的患者尚无有效的解决方案。由于实验材料的稀缺和伦理限制, 科研人员只能对人类配子和胚胎进行有限的研究, 该领域迫切需求能够模拟生殖细胞及胚胎的体外模型。人工配子和体外重构胚胎的出现为生殖医学的基础研究和临床应用带来了新的希望。从成体干细胞和胚胎干细胞（embryonic stem cells, ESCs）分化来源的生殖细胞以及通过干细胞分化或不同类型干细胞组装构建类囊胚结构的技术已在一些非人类哺乳动物中实现, 部分也可在人的细胞中实现。本文综述了人工配子和体外重构胚胎在小鼠、猴子和人类等不同物种中的研究进展和可能的应用。
陈然然,宋殿荣[3]（2021）在《胚胎早期发育过程中主要信号通路的作用机制》文中研究说明胚胎发育始于受精卵,后者经过多次卵裂,胚胎的形态发生变化的同时,内部细胞也向不同谱系分化,为随后原肠胚的形成奠定基础。在胚胎早期发育过程中,多种信号通路参与了精细调控,如Hippo信号通路的差异性激活导致了滋养外胚层（trophectoderm,TE）和内细胞群（inner cell mass,ICM）的分化;成纤维细胞生长因子/细胞外信号调节激酶（fibroblast growth factor/extracellular signal-regulated kinase,FGF/ERK）信号通路使ICM进一步分化为原始内胚层（primitive endoderm,PE）和外胚层（epiblast,EPI）;骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）信号通路及经典Wnt信号通路不仅与胚胎细胞的多能性相关,还在胚轴的建立中发挥重要作用;Notch信号通路和Nodal信号通路主要参与了胚胎左右不对称的形成等。综述胚胎发育早期的几条主要信号通路的作用,为深入了解胚胎早期发育及其调控提供参考。
崔梦露,郇聘,刘保忠[4]（2021）在《笠贝（Lottia goshimai）早期发育过程的扫描电镜观察》文中认为软体动物的早期发育研究对于理解其发育及演化机制有重要意义。利用扫描电子显微镜对笠贝（Lottia goshimai）的早期发育过程进行研究,结果表明,笠贝早期发育过程十分迅速,受精后9 h左右即形成担轮幼虫,在24h内发育为典型的面盘幼虫。扫描电镜下,可以观察到原肠作用中很有特色的外包式的细胞运动过程,并清晰地观察到前担轮环、贝壳形成区以及足原基的渐次发育。总体而言,笠贝的早期发育过程既体现了等裂型软体动物发育的典型过程（如外包式原肠作用）,又展现出腹足纲动物的种系特异性特点（如贝壳的生长方向）。研究结果可以为深入解析笠贝早期发育机制提供基础支持。
张丹丹,许腾腾,高迪,齐昕,宁伟,汝振远,张翔栋,郭腾龙,申屠璐燕,于童,马洋洋,李运生,张运海,曹祖兵[5]（2021）在《转录因子TEAD4对猪早期胚胎发育的调控》文中研究指明【背景】众所周知TEA结构域转录因子4（TEA domain transcription factor 4,TEAD4）是TEAD转录因子家族中的一员,在决定啮齿类动物着床前胚胎的特性中发挥关键作用。在小鼠胚胎中发现,可以通过促进Cdx2表达来参与调控着床前胚胎滋养层细胞的谱系分化。若当小鼠胚胎中缺乏TEAD4时可导致小鼠囊胚形成失败。然而,TEAD4在猪早期胚胎发育中的作用尚不清楚。【目的】通过初步阐明TEAD4对猪早期胚胎发育的影响,以期为进一步探索转录因子对猪早期胚胎发育的分子机制奠定理论基础。【方法】利用网页版工具对猪TEAD4进行生物信息学分析,主要包括对猪TEAD4序列的分析,猪与人、小鼠之间同源性的比较,以及TEAD4在不同物种之间进化关系的比较。再通过试验检测TEAD4在猪早期胚胎发育中的作用。首先采用荧光定量PCR技术检测TEAD4在猪卵母细胞和早期胚胎中m RNA表达水平,再通过设计靶向TEAD4的si RNA,采用显微注射技术注入成熟卵母细胞中,降低卵胞质内源性的TEAD4水平,并确定TEAD4 siRNA仅作用于TEAD4,以期确定TEAD4在猪早期胚胎发育中的作用。【结果】序列分析结果显示:猪TEAD4包含11个外显子,定位于5号染色体上,跨越长度37.188 kb,mRNA全长1 473 bp,编码区全长1 305 bp,编码434个氨基酸;与人、小鼠的同源性分析揭示TEAD4在不同物种中的保守性较高;且在猪和牛上的亲缘关系最近。荧光定量PCR检测基因表达水平结果显示:TEAD4 m RNA在猪卵母细胞和早期胚胎中均有表达,且以GV期卵母细胞为参照时比较发现,MII期卵母细胞表达量最低,并保持较低水平直至4-细胞时期,但到8-细胞时期表达量达到最高,而到桑椹胚和囊胚时期又逐渐下降。通过显微注射靶向TEAD4的si RNA发现:TEAD4 siRNA仅作用于卵母细胞中内源性的TEAD4,而对TEAD1和TEAD3不发挥作用;并与对照组和阴性对照siRNA组相比,注射TEAD4 siRNA显着降低8-细胞和桑椹胚时期TEAD4 m RNA表达量,敲低效率达到80%。当敲低TEAD4表达时观察猪孤雌激活和体外受精胚胎的发育效率表明,与对照组和阴性对照si RNA组相比,显着降低TEAD4 siRNA敲低组从8-细胞至囊胚阶段的发育效率。【结论】TEAD4在各物种间保守性高,在猪和牛上的亲缘性最近,TEDA4可参与调控猪早期胚胎的发育。
齐子成,刘忠华[6]（2021）在《八聚体结合转录因子4在哺乳动物早期胚胎发育中的研究进展》文中研究说明八聚体结合转录因子4（octamer-binding transcription factor 4,OCT4）属于POU （Pit-Oct-Unc）转录因子,在早期胚胎、胚胎干细胞及生殖细胞中特异性表达。由于胚胎干细胞与生殖细胞均来自早期胚胎,尤其是内细胞团（inner cell mass, ICM）细胞,而OCT4作为核心发育因子参与协调早期胚胎全能性的维持和ICM的形成。OCT4和尾型同源盒转录因子2（caudal type homeobox transcription factor 2,CDX2）在小鼠早期胚胎细胞中互斥性表达对于ICM和滋养层（trophectoderm, TE）分化具有重要作用,在囊胚中OCT4特异性表达于ICM,而CDX2特异性表达于TE。但在以猪为代表的其他大型哺乳动物,OCT4持续在囊胚TE中表达,表明OCT4在具有高度保守性的同时还有一定的物种特异性。研究OCT4在哺乳动物早期胚胎发育中的表达规律与调控机理对于了解胚胎干细胞的多能性及其维持也具有十分重要的意义。文章总结了哺乳动物早期胚胎发育中OCT4的表达规律和表达调控机制,以期为深入理解哺乳动物早期胚胎发育调控机制提供参考。
齐子成,柴壮,崔洪帝,张宇霆,刘龑,伟人悦,徐倩倩,金君学,刘忠华[7]（2021）在《转录因子OCT4在猪早期胚胎的表达模式及其在滋养层中的生物学功能》文中研究指明八聚体结合转录因子4 （octamer-binding transcription factor 4, OCT4）属于POU （Pit-Oct-Unc）家族转录因子,在早期胚胎、胚胎干细胞及生殖细胞中特异性表达。研究OCT4在猪（Sus scrofa）早期胚胎发育中的表达规律和功能,对于解析早期发育机制和多能性调控具有重要意义。本研究通过免疫荧光和qPCR技术对OCT4在猪早期胚胎中的分布和表达模式进行检测。结果显示,在孤雌激活胚胎、体外受精胚胎和体细胞核移植胚胎中,OCT4蛋白在体外培养的胚胎2-细胞期到桑葚期的卵裂球中广泛表达,在囊胚期的内细胞团和滋养层同时表达;OCT4在孤雌激活胚胎和体外受精胚胎中的基因表达呈现相似模式,均在2-细胞期开始下降、在8-细胞期开始升高,在囊胚的滋养层中表达;在滋养层中特异性过表达OCT4,胚胎的细胞数和直径均显着增加,滋养层发育相关基因E74样因子5 （E74-like factor 5, ELF5）下调表达、EOMES （eomesodermin）显着上调表达,成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor, FGF）信号通路相关基因显着下调,极化基因PKCα（protein kinase Cα）和ERZIN显着下调,甲基化基因TET1显着上调、DNA甲基转移酶3B （DNA methyltransferases 3B, DNMT3b）显着下调。上述结果表明,OCT4在第一次谱系分化后的滋养层中持续表达,可能对滋养层增殖具有调控功能。本研究为深入探讨猪早期胚胎发育机制及猪胚胎干细胞的建立提供基础资料。
葛文燕[8]（2021）在《人多能干细胞向肝脏样细胞定向分化体系的优化》文中研究说明近年来,多种肝脏疾病的发病率逐渐升高,严重影响着人们的健康。目前,治疗终末期肝病的有效方法是供体肝移植和肝细胞移植,但肝供体的缺乏使这两种方法的开展都面临着巨大的挑战。因此,开发可再生的肝细胞来源是一个亟待解决的问题。人多能干细胞具有自我更新以及分化为多种细胞类型的潜能,成为了产生肝脏样细胞的理想细胞来源之一。近年来,将多能干细胞分化为肝脏样细胞的研究有了诸多进展,但该领域仍存在一些问题,例如:得到的肝脏样细胞异质性高;培养系统中存在异种动物产品及昂贵的生长因子,难以满足临床和大规模生产的要求;肝脏细胞的功能和成熟度都有待提高。在本课题中,我们将人胚胎干细胞到肝细胞过程中的中间阶段——定型内胚层细胞在体外扩增和纯化,形成内胚层祖细胞系,并将其继续分化为肝脏样细胞。利用这种方法可以降低分化细胞的异质性,减少移植后的致瘤风险,也有利于分化机制的研究。此外,结合化学小分子筛选,我们建立了内胚层祖细胞扩增和高效分化的新体系,去除了对生长因子的依赖。结果显示,利用新体系分化获得的肝细胞,与基于生长因子分化体系获得的肝细胞形态相似,可以表达高水平的肝脏特异性标志物,并具有糖原合成和脂质代谢等生物学功能。综上所述,这项研究优化并建立了内胚层祖细胞系培养的新体系,为体外大规模的肝细胞生产提供了基础,为肝脏发育过程及机制研究提供了平台,并且有助于促进肝脏样细胞在临床上的应用。
任灵通,刘凌斌,李佳璐,成磊,刘安芳[9]（2021）在《肌肉发生相关长链非编码RNA研究进展》文中指出肌肉参与机体的运动、协调和体温调节等一系列生命活动,同时畜禽肌肉是人类重要的蛋白质来源。肌肉发生过程中的不同调控机制可引起肌肉发育的阶段性差异,而整个肌肉发育主要以两个时期（胚胎期和出生后）的发育状态体现。长链非编码RNA（lncRNA）是一类不具有蛋白编码能力且长度>200 nt的RNA分子。近年来,随着基因组学和分子生物学技术的高速发展,发现lncRNA广泛参与到肌肉发育的各个阶段,以多种作用机制调控肌肉的发育过程。作者介绍了肌肉的发育过程,综述了目前发现的与肌肉发育相关的lncRNAs及其作用机制,并阐述其在肌肉发育的不同阶段发挥的重要作用,为进一步研究肌肉发育相关lncRNAs提供了参考。
刘文叶[10]（2021）在《铜过载斑马鱼胚胎中肌细胞发育和epc1/2介导的造血细胞发育缺陷下的表观调控机制研究》文中认为环境胁迫下鱼类呈现行动能力以及抗病、耐低氧能力降低等现象,但其潜在调控机制仍少有报道。本研究将就铜胁迫导致斑马鱼胚胎肌细胞发育缺陷以及铜胁迫通过调控斑马鱼epc1/2基因差异表达以调控造血干细胞发育的分子机制展开研究。1.Cu2+通过表观调控影响斑马鱼肌细胞发育铜是机体内必不可少的微量元素,然而铜在体内积累过量也会危害机体健康。本研究以斑马鱼为研究对象,利用转录组分析和免疫荧光等实验技术探究Cu2+通过表观调控影响肌细胞发育的潜在分子机制。研究结果如下:1)Cu2+胁迫导致斑马鱼肌纤维发育缺陷免疫染色结果显示,24 hpf Cu2+胁迫胚胎躯干的f-Actin、α-Actinin和s My HC存在不规则排列;TEM分析显示Cu2+胁迫胚胎存在肌质网三联体缺陷。综上表明Cu2+胁迫导致斑马鱼骨骼肌纤维发育缺陷。2)Cu2+通过抑制smyd1b启动子上SRF和Myog的转录活性抑制smyd1b基因表达且不依赖于铜转运蛋白Cox17和Atp7b的功能完整性双荧光素酶活性分析结果显示Cu2+可通过抑制smyd1b启动子上SRF和Myog的转录活性,进而抑制smyd1b的表达。WISH检测肌细胞标记基因mylpfa、smyhc1l和smyd1b在cox17-/-、atp7b-/-以及Cu2+胁迫后cox17-/-和atp7b-/-胚胎中的表达。结果显示相较于Cu2+胁迫的野生型胚胎,Cu2+胁迫的cox17-/-和atp7b-/-胚胎中mylpfa、smyhc1l和smyd1b基因的表达也显着下调,这表明在斑马鱼胚胎发生过程中Cu2+对以上基因表达的抑制不依赖于Cox17和Atp7b的功能完整性。3)Cu2+胁迫胚胎中肌细胞相关基因受甲基化调控全基因组甲基化测序数据的生物信息学分析表明Cu2+胁迫导致肌细胞相关基因rab3ip、fgfbp2b和smyd5的启动子区域发生超甲基化,arpc1a的启动子发生去甲基化。启动子甲基化分析进一步验证Cu2+胁迫组中smyd5启动子呈现高甲基化。综上表明,Cu2+胁迫通过抑制SRF和Myog的转录活性,从而下调smyd1b的表达。同时,Cu2+胁迫导致smyd5启动子高甲基化。smyd1b的下调表达和smyd5启动子的高甲基化水平共同导致斑马鱼骨骼肌纤维分化缺陷。2.EPC1、EPC2表观调控造血干细胞发育EPC1、EPC2是染色质调控复合物的重要组成部分,其功能异常与包括白血病在内的多种人类疾病有关。然而,有关它们在抗病和耐低氧中的调控作用,以及在造血发育中的功能还鲜为人知。在本研究中,我们发现Cu2+胁迫胚胎以及Cu2+过载造血干细胞呈现epc1和epc2基因的差异表达,并利用基因敲降/敲除、转录组分析以及免疫荧光等实验技术探究epc1-/-和epc2-/-突变体的抗细菌胁迫和耐低氧能力以及EPC1、EPC2对造血干细胞发育的表观调控机制。本课题研究结果如下:1)epc2缺失导致胚胎/幼鱼的耐低氧能力减弱epc1-/-和epc2-/-突变体的低氧耐受性检测结果显示epc1-/-突变体的耐低氧能力不受影响,而epc2-/-突变体对于低氧胁迫比较敏感。这表明epc2功能缺失可能导致斑马鱼的低氧应答过程受阻。2)造血干细胞增殖减少导致epc1-/-和epc2-/-突变体的造血缺陷WISH分析和共聚焦显微镜观察结果显示,敲降/敲除epc1/2会导致斑马鱼胚胎AGM区造血干细胞标记基因c-myb/runx1和胸腺标记基因rag1表达显着下调;同时,Cell-direct q PCR分析显示epc1、epc2缺失导致造血干细胞中c-myb/runx1基因表达下调。这表明epc1和epc2功能缺失导致造血干细胞以及胸腺发育缺陷。造血干细胞增殖和凋亡检测结果显示,epc1-/-和epc2-/-突变体的AGM区和CHT区Brd U+runx1+细胞数量显着降低,epc1-/-和epc2-/-胚胎中Annexin V-PE标记的凋亡runx1+细胞数量占runx1+细胞总量的比例均没有显着变化。这表明epc1/2功能缺失导致的造血干细胞减少可能是由于造血干细胞增殖缺陷造成的。3)epc1和epc2通过调节组蛋白乙酰化调控造血发育Western Blot和免疫染色结果显示,在epc1和epc2突变体整胚的乙酰化组蛋白（H3K9Ac、H3K27Ac和H3K56Ac）和CHT区造血干细胞的乙酰化组蛋白的表达均显着下调;Cell-direct q PCR分析结果显示epc1和epc2缺失影响造血干细胞中多种乙酰化/去乙酰化调控基因的表达;WISH结果显示去乙酰化酶抑制剂可以部分挽救24 hpf epc1-/-和epc2-/-胚胎AGM区c-myb的表达以及血管标记基因fli1/flk1的下调表达。综上表明epc1和epc2可能通过调节组蛋白乙酰化调控造血发育。4)napl14a、dlst和mbd3b可能位于epc1/2下游调控造血干细胞发育epc1-/-突变体转录组分析和WISH分析结果显示,napl14a、dlst和mbd3b在AGM区有表达,并且napl14a和dlst的表达下调,mbd3b的表达上调;Cell-direct q PCR分析表明epc1或epc2缺失导致造血干细胞中napl14a和dlst的表达显着下调和mbd3b表达的显着上调;敲降/敲除napl14a、dlst可导致c-myb/runx1表达降低,mbd3b敲降/敲除导致c-myb/runx1的表达上调。以上数据表明napl14a、dlst和mbd3b可能位于epc1/2的下游并参与调控斑马鱼的造血干细胞发育。5)EPC1/2通过FOXR2或SRF等调控NAP1L4、DLST和MBD3双荧光素酶活性分析显示FOXR2或SRF与EPC1/EPC2共转染导致DLST启动子荧光素酶活性显着增强,而MBD3启动子的荧光素酶活性显着下调。这表明EPC1/EPC2可招募FOXR2/SRF到DLST或MBD3启动子以促进或抑制基因表达,进而影响造血发育。在本文中,关于Cu2+通过组蛋白甲基化/DNA甲基化调控斑马鱼骨骼肌纤维分化,以及通过表观调控因子epc1、epc2调控造血干细胞发育的研究,进一步丰富了铜稳态代谢失衡下的鱼类胚胎肌、造血干细胞发育的理论研究数据,完善了表观调控在肌/造血干细胞发育过程中的功能,为探究肌/造血干细胞发育的表观调控提供分子理论依据。
二、动物的胚胎发育和胚层的分化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、动物的胚胎发育和胚层的分化（论文提纲范文）
（1）金鱼雌核发育单倍体胚胎血液循环障碍产生机制（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 金鱼雌核发育单倍体和自交二倍体的获得 |
| 1.3 不同表型单倍体胚胎的鉴定、分类和统计分析 |
| 1.4 流式细胞仪检测染色体倍性 |
| 1.5 邻联茴香胺染色 |
| 1.6 金鱼造血与血管发生相关基因的部分c DNA序列获得 |
| 1.7 整胚原位杂交 |
| 2 结果 |
| 2.1 金鱼雌核发育单倍体胚胎呈现不同程度的循环系统发育缺陷 |
| 2.2 金鱼雌核发育单倍体胚胎存在原始造血缺陷 |
| 2.3 金鱼雌核发育单倍体胚胎存在血管发育缺陷 |
| 2.4 金鱼雌核发育单倍体胚胎原肠胚期存在细胞运动缺陷 |
| 3 讨论 |
| 3.1 金鱼雌核发育单倍体胚胎细胞的发育潜能 |
| 3.2 金鱼雌核发育单倍体胚胎血液循环障碍的产生原因 |
| 3.3 广泛的细胞运动迁移异常可能是金鱼雌核发育单倍体胚胎发育畸形的重要原因 |
（3）胚胎早期发育过程中主要信号通路的作用机制（论文提纲范文）
| 1 Hippo信号通路 |
| 2 成纤维细胞生长因子/细胞外信号调节激酶（fibroblast growth factor/extracellular signalregulated kinase,FGF/ERK）信号通路 |
| 3 骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）信号通路 |
| 4 Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路 |
| 5 Notch信号通路 |
| 6 Nodal信号通路 |
| 7 结语 |
（4）笠贝（Lottia goshimai）早期发育过程的扫描电镜观察（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 笠贝采集及幼虫培养 |
| 1.2 扫描电子显微镜观察 |
| 2 结果 |
| 2.1 原肠作用前的笠贝胚胎(4 hpf前) |
| 2.2 原肠胚阶段(4—8 hpf) |
| 2.3 幼虫发育过程(9—24 hpf) |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（5）转录因子TEAD4对猪早期胚胎发育的调控（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 猪TEAD4生物信息学分析 |
| 1.3.2猪卵母细胞体外成熟 |
| 1.3.3 显微注射 |
| 1.3.4 孤雌激活及胚胎培养 |
| 1.3.5 体外受精及胚胎培养 |
| 1.3.6 荧光定量PCR |
| 2 结果 |
| 2.1 猪TEAD4生物信息学分析 |
| 2.1.1 猪TEAD4序列分析 |
| 2.1.2 猪、人和小鼠TEAD4基因同源性比较 |
| 2.1.3 TEAD4在不同物种间的分子进化关系 |
| 2.2 猪早期胚胎发育中TEAD4 m RNA表达 |
| 2.3 TEAD4 si RNA特异性靶向TEAD4并有效降低猪早期胚胎TEDA4 m RNA表达 |
| 2.4 TEAD4敲低对猪孤雌激活胚胎早期发育的影响 |
| 2.5 TEAD4敲低对猪体外受精胚胎早期发育的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（6）八聚体结合转录因子4在哺乳动物早期胚胎发育中的研究进展（论文提纲范文）
| 1 哺乳动物OCT4分子生物学特征 |
| 2 OCT4在哺乳动物早期胚胎中的表达模式 |
| 3 OCT4在哺乳动物早期胚胎发育过程中的作用 |
| 3.1 母源OCT4的作用 |
| 3.2 OCT4在胚胎第1次谱系分化中的作用 |
| 3.3 OCT4在胚胎第2次谱系分化中的作用 |
| 4 OCT4的表达调控 |
| 4.1 启动子相关的OCT4转录调控 |
| 4.2 增强子相关的OCT4转录调控 |
| 4.3 表观遗传修饰与OCT4转录调控 |
| 5 展 望 |
（7）转录因子OCT4在猪早期胚胎的表达模式及其在滋养层中的生物学功能（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 卵母细胞 |
| 1.1.2 猪胎儿成纤维细胞系 |
| 1.1.3 细胞培养液 |
| 1.1.4 猪合子培养液(PZM-3) |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 孤雌胚胎、体外受精胚胎和核移植胚胎的获取 |
| 1.2.2 胚胎细胞中OCT4的免疫荧光染色 |
| 1.2.3 RNA提取和cDNA合成 |
| 1.2.4 OCT4慢病毒过表达载体的构建 |
| 1.2.5 慢病毒包装 |
| 1.2.6 滋养层细胞病毒感染 |
| 1.2.7 胚胎细胞凋亡的TUNEL检测 |
| 1.2.8 内细胞团与滋养层细胞的分离 |
| 1.2.9 胚胎发育相关基因的qPCR检测 |
| 1.2.1 0 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 猪早期胚胎中OCT4分布 |
| 2.2 猪早期胚胎中OCT4基因表达模式 |
| 2.3 OCT4过表达病毒载体的验证 |
| 2.4 OCT4在滋养层中特异性过表达的验证 |
| 2.5 OCT4在滋养层中特异性过表达对胚胎发育和增殖的影响 |
| 2.6 OCT4在滋养层中特异性过表达对胚胎发育相关基因表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（8）人多能干细胞向肝脏样细胞定向分化体系的优化（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 1 引言 |
| 1.1 肝脏发育过程和调控因素 |
| 1.1.1 肝脏的功能和结构 |
| 1.1.2 肝脏发育过程 |
| 1.1.3 调节肝脏发育的信号通路介绍 |
| 1.1.4 肝脏发育过程中的遗传控制 |
| 1.2 体外获得人肝细胞的方法 |
| 1.2.1 分离原代肝细胞及肝脏干细胞 |
| 1.2.2 分化人多能干细胞 |
| 1.2.3 分化人成体干细胞 |
| 1.2.4 转分化人成纤维细胞 |
| 1.3 分化人多能干细胞到肝脏样细胞的方法和应用 |
| 1.3.1 分化方法和进展介绍 |
| 1.3.2 肝脏样细胞的鉴定方法 |
| 1.3.3 肝脏样细胞在疾病模型和药物筛选中的应用 |
| 1.3.4 肝脏样细胞临床应用的局限性和发展方向 |
| 1.4 内胚层祖细胞/肝祖细胞的获得和应用 |
| 1.4.1 体外获得可扩增的内胚层祖细胞 |
| 1.4.2 体外获得可扩增的肝祖细胞 |
| 1.5 化学小分子诱导体系的介绍 |
| 1.6 本课题的研究内容 |
| 2 实验材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器及设备 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 |
| 2.1.3 检测试剂盒 |
| 2.1.4 抗体及小分子 |
| 2.1.5 主要细胞系 |
| 2.1.6 小鼠品系 |
| 2.1.7 常用试剂配方 |
| 2.2 分子生物学及细胞生物学实验方法 |
| 2.2.1 细胞内总RNA的提取和反转录 |
| 2.2.2 实时荧光定量PCR (qRT-PCR) |
| 2.2.3 免疫荧光染色 |
| 2.2.4 FACS流式分析实验 |
| 2.2.5 过碘酸雪夫(PAS)染色 |
| 2.2.6 油红O染色 |
| 2.3 细胞实验方法 |
| 2.3.1 细胞复苏、传代与冻存 |
| 2.3.2 细胞计数 |
| 2.3.3 细胞培养 |
| 2.3.4 干细胞向定型内胚层的分化 |
| 2.3.5 内胚层祖细胞向肝脏样细胞的分化 |
| 2.3.6 Foxa3慢病毒包装及转染 |
| 2.3.7 Foxa3介导的转分化 |
| 2.3.8 化学小分子筛选 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 带有报告基因的人胚胎干细胞系的鉴定 |
| 3.2 诱导人胚胎干细胞向定型内胚层细胞分化 |
| 3.3 内胚层祖细胞的获得和鉴定 |
| 3.4 内胚层祖细胞扩增过程的优化 |
| 3.4.1 去除生长因子严重影响了内胚层祖细胞的增殖 |
| 3.4.2 PKC激活剂恢复了内胚层祖细胞的增殖能力 |
| 3.4.3 PKC激活剂不能恢复SOX17的表达 |
| 3.4.4 CHIR99021对内胚层祖细胞有浓度依赖性作用 |
| 3.4.5 OEM培养的内胚层祖细胞可以维持长期自我更新能力 |
| 3.4.6 OEM-EPCs在Matrigel基质上可维持正常生长 |
| 3.4.7 OEM扩增体系具有可重复性 |
| 3.5 OEM-EPCs具有分化为肝脏样细胞的能力 |
| 3.6 内胚层祖细胞向肝细胞分化过程的优化 |
| 3.6.1 RA显着促进内胚层祖细胞向肝脏样细胞分化的效率 |
| 3.6.2 VX-11e显着促进内胚层祖细胞向肝脏样细胞分化的效率 |
| 3.6.3 RA和VX-11e叠加可将肝脏分化的效率进一步提高 |
| 3.6.4 VX-11e促进早期的肝脏命运决定 |
| 3.6.5 VX-11e在肝脏转分化过程中也有一定促进效果 |
| 3.7 优化后的肝脏分化体系的鉴定 |
| 4 结论 |
| 5 讨论 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 答辩决议书 |
（9）肌肉发生相关长链非编码RNA研究进展（论文提纲范文）
| 1 肌肉发育过程 |
| 2 lncRNA概述及其作用机制 |
| 2.1 lncRNA概述 |
| 2.2 lncRNA作用机制 |
| 3 lncRNA调节肌肉发育的不同阶段 |
| 3.1 lncRNA参与胚胎期肌肉发育 |
| 3.1.1 参与维持肌源性祖细胞功能 |
| 3.1.2 参与成肌细胞的维持 |
| 3.1.3 参与多核肌管的形成 |
| 3.2 lncRNA参与出生后肌肉发育 |
| 4 小 结 |
（10）铜过载斑马鱼胚胎中肌细胞发育和epc1/2介导的造血细胞发育缺陷下的表观调控机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 铜概述 |
| 1.1.1 铜的生物学功能 |
| 1.1.2 铜过载与机体发育 |
| 1.2 肌细胞发育概况 |
| 1.2.1 肌细胞发育简介 |
| 1.2.2 肌细胞发育相关基因Smy D1和Smy D5 |
| 1.3 造血发育概况 |
| 1.3.1 小鼠和斑马鱼造血过程 |
| 1.3.2 造血发育相关基因 |
| 1.3.3 EPC1、EPC2的功能与造血发育 |
| 1.3.4 NAP1L4、DLST和MBD3的功能与造血发育 |
| 1.3.5 FOXR2、SRF功能与造血发育 |
| 1.4 表观调控与肌细胞/造血细胞发育 |
| 1.4.1 DNA甲基化对肌细胞发育的调控 |
| 1.4.2 组蛋白乙酰化/去乙酰化对造血发育的调控 |
| 1.5 斑马鱼简介 |
| 1.6 研究目的及意义 |
| 第二章 Cu~(2+)通过表观调控影响斑马鱼肌原纤维分化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 重金属铜胁迫 |
| 2.2.3 基因组DNA的提取 |
| 2.2.4 质粒构建 |
| 2.2.5 基因组甲基化检测 |
| 2.2.6 斑马鱼胚胎整体原位杂交 |
| 2.2.7 WB分析 |
| 2.2.8 免疫荧光 |
| 2.2.9 鬼笔环肽染色 |
| 2.2.10 细胞实验 |
| 2.2.11 数据分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 Cu~(2+)导致斑马鱼肌原纤维发育缺陷 |
| 2.3.2 Cu~(2+)抑制smyd1b启动子上SRF和Myog的转录活性 |
| 2.3.3 Cu~(2+)对smyd1b基因表达的抑制不依赖于铜转运蛋白Cox17和Atp7b |
| 2.3.4 Cu~(2+)胁迫胚胎/幼鱼中肌细胞相关基因受甲基化调控 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 epc1/2 调控造血干细胞发育的分子机制 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 CRISPR/Cas9基因编辑技术建立突变体 |
| 3.2.3 药物处理斑马鱼胚胎/幼鱼 |
| 3.2.4 低氧胁迫实验 |
| 3.2.5 共聚焦显微镜观察 |
| 3.2.6 流式细胞仪(FACS)分选细胞 |
| 3.2.7 RNA抽提 |
| 3.2.8 总cDNA的合成 |
| 3.2.9 qRT-PCR |
| 3.2.10 Cell-direct qPCR |
| 3.2.11 质粒构建 |
| 3.2.12 体外转录合成基因CDS mRNA |
| 3.2.13 显微注射 |
| 3.2.14 转录组测序及分析 |
| 3.2.15 斑马鱼胚胎整体原位杂交 |
| 3.2.16 WB分析 |
| 3.2.17 免疫荧光 |
| 3.2.18 Brd U细胞增殖实验 |
| 3.2.19 细胞凋亡检测 |
| 3.2.20 细胞实验 |
| 3.2.21 数据分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 Cu~(2+)胁迫胚胎的造血干细胞中epc1和epc2表达异常 |
| 3.3.2 epc1、epc2基因在斑马鱼胚胎发育过程中的时空表达 |
| 3.3.3 epc1、epc2功能缺失导致斑马鱼造血发育缺陷 |
| 3.3.4 epc1、epc2在造血发育过程中的功能冗余 |
| 3.3.5 epc1和epc2调控鱼类胚胎发育呈现组织特异性特征 |
| 3.3.6 造血干细胞增殖减少导致epc1~(-/-)和epc2~(-/-)突变体造血缺陷 |
| 3.3.7 epc1和epc2通过调控组蛋白乙酰化影响造血发育 |
| 3.3.8 napl14a/dlst/mbd3b在epc1/2的下游调控造血发育 |
| 3.3.9 EPC1、EPC2敲降细胞系转录组分析 |
| 3.3.10 EPC1、EPC2与DLST和MBD3的间接相互作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 Cu~(2+)胁迫胚胎的造血干细胞中epc1和epc2表达异常 |
| 3.4.2 epc1、epc2缺失影响斑马鱼胚胎低氧耐受性 |
| 3.4.3 epc1、epc2缺失导致斑马鱼造血发育缺陷 |
| 3.4.4 epc1、epc2对基因调控的组织特异性 |
| 3.4.5 epc1、epc2通过调控组蛋白乙酰化调控HSCs的发育 |
| 3.4.6 napl14a/dlst/mbd3b在epc1/2的下游调控造血发育 |
| 3.4.7 EPC1/EPC2与FOXR2/SRF互作以促进或抑制DLST和MBD3表达 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 总结与展望 |
| 4.1 本文主要内容及结论 |
| 4.2 本文的主要创新点 |
| 4.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附表 |
| 发表论文 |
| 发明专利 |
| 获奖情况 |
| 致谢 |
四、动物的胚胎发育和胚层的分化（论文参考文献）
- [1]金鱼雌核发育单倍体胚胎血液循环障碍产生机制[J]. 张琼宇,唐甲卉,彭娟,唐鹏程,孙远东. 水生生物学报, 2022
- [2]干细胞分化为生殖细胞及重构胚胎的研究进展[J]. 刘慧,张朴尧,于洋. 中华生殖与避孕杂志, 2021(12)
- [3]胚胎早期发育过程中主要信号通路的作用机制[J]. 陈然然,宋殿荣. 国际生殖健康/计划生育杂志, 2021(06)
- [4]笠贝（Lottia goshimai）早期发育过程的扫描电镜观察[J]. 崔梦露,郇聘,刘保忠. 海洋与湖沼, 2021(06)
- [5]转录因子TEAD4对猪早期胚胎发育的调控[J]. 张丹丹,许腾腾,高迪,齐昕,宁伟,汝振远,张翔栋,郭腾龙,申屠璐燕,于童,马洋洋,李运生,张运海,曹祖兵. 中国农业科学, 2021(20)
- [6]八聚体结合转录因子4在哺乳动物早期胚胎发育中的研究进展[J]. 齐子成,刘忠华. 中国畜牧兽医, 2021(10)
- [7]转录因子OCT4在猪早期胚胎的表达模式及其在滋养层中的生物学功能[J]. 齐子成,柴壮,崔洪帝,张宇霆,刘龑,伟人悦,徐倩倩,金君学,刘忠华. 农业生物技术学报, 2021(10)
- [8]人多能干细胞向肝脏样细胞定向分化体系的优化[D]. 葛文燕. 浙江大学, 2021(01)
- [9]肌肉发生相关长链非编码RNA研究进展[J]. 任灵通,刘凌斌,李佳璐,成磊,刘安芳. 中国畜牧兽医, 2021(08)
- [10]铜过载斑马鱼胚胎中肌细胞发育和epc1/2介导的造血细胞发育缺陷下的表观调控机制研究[D]. 刘文叶. 华中农业大学, 2021