一、N-乙酰半胱氨酸对胃腺癌细胞株增殖凋亡及细胞内Ca~(2+)浓度的影响（论文文献综述）
韩笑[1]（2021）在《盐霉素对耐顺铂人胃癌细胞增敏作用及其机制研究》文中研究表明目的:2020年全球癌症数据显示,胃癌的发病率全球第五,死亡率居于全球第四,且面临严重的预后及耐药困扰。盐霉素（SAL）是一种广谱抗菌药物,亦具有抗肿瘤特性,特别是盐霉素与化疗或放疗联合使用的协同效应是一个值得探讨的问题。目前SAL如何影响耐顺铂胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡,以及如何逆转癌细胞放疗抵抗及多重耐药,其机制尚不清楚,盐霉素能否对耐顺铂胃癌细胞产生较好的增敏作用目前未见报道。基于此,本实验将盐霉素（SAL）和顺铂（DDP）作用于人胃粘膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞SGC-7901、耐顺铂胃癌细胞SGC-7901/DDP,确定盐霉素是否能在体外提高耐顺铂胃癌细胞SGC-7901/DDP对顺铂化疗的敏感性。同时初步探究盐霉素与顺铂联合作用的分子机制及盐霉素对耐顺铂胃癌细胞的增敏机制,从而为改善顺铂耐药和胃癌的治疗新方案的提出提供理论依据,为临床应用提供新的思路。方法:1.CCK-8法检测SAL对SGC-7901、SGC-7901/DDP细胞活力的影响,筛选SAL与DDP单药及联合应用的最佳浓度。2.CCK-8、Transwell及细胞划痕实验检测SAL与DDP单药及联合应用对SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞增殖、侵袭、迁移的影响,CCK-8法同时检测SAL对GES-1细胞增殖的影响。3.流式细胞术检测SAL与DDP单药及联合应用对SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞周期及凋亡的影响。4.免疫印迹实验及免疫组化实验检测SAL与DDP单药及联合应用对SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase 3、Caspase 9、Fas-L、NF-κBp65表达的影响,探究SAL诱导凋亡的可能机制。5.免疫印迹实验检测SAL、SAL与Wnt-C59联合处理SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞后Wnt/β-catenin通路效应物p-GSK-3β（Ser9）、β-catenin与靶基因Axin2和CCND1、EMT标记蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达;免疫荧光检测SAL、SAL与Wnt-C59联合处理SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞后β-catenin的核定位;探究SAL作用于SGC-7901和SGC-7901/DDP细胞的化疗增敏机制。结果:1.CCK-8法筛选出SAL-8μM与DDP-3μg/m L作用24 h为最佳作用浓度和时间。2.SAL-8μM作用于GES-1细胞24 h抑制率与对照组（0μM）比较差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组比较,SAL与DDP分别处理SGC-7901和SGC-7901/DDP细胞24 h均能显着降低两种细胞的的增殖、侵袭和迁移能力,并显着增加细胞凋亡率（P<0.01）;其中在SGC-7901细胞中,与SAL组相比,DDP组、双药组均显着降低SGC-7901细胞的增殖能力（P<0.05）、侵袭能力（P<0.05）、迁移能力（P<0.05）并显着增加细胞凋亡率（P<0.05）;在SGC-7901/DDP细胞中,与DDP组相比,SAL组、双药联合组均显着降低SGC-7901/DDP的增殖能力（P<0.05）、侵袭能力（P<0.05）、迁移能力（P<0.05）并显着增加细胞凋亡率（P<0.05）。3.在SGC-7901和SGC-7901/DDP细胞中,DDP处理组中G0/G1期细胞比例均显着高于对照组和SAL组（P<0.01）;同时,SAL处理组中S期细胞比例均显着高于对照组和DDP组（P<0.01）。4.与对照组比较,SAL和DDP分别处理24 h后,SGC-7901和SGC-7901/DDP两种细胞中Caspase 3、Caspase 9、Bax的表达量均显着上调（P<0.01）且Bcl-2的表达量均显着下调（P<0.01）;且与单药组相比,双药联合组表达量变化量更明显（P<0.01）;在SGC-7901/DDP细胞中,与DDP组相比,SAL组、双药联合组均显着升高Caspase 3、Caspase 9、Bax表达水平（P<0.01）。5.在SGC-7901细胞中,与对照组比较,SAL及DDP分别处理均增加了Fas-L、细胞质中NF-κBp65的表达,但是DDP组中Fas-L、细胞质中NF-κBp65的表达更明显,双药联合使用未见明显的协同作用;在SGC-7901/DDP细胞中,SAL及DDP分别处理均增加了Fas-L、细胞质中NF-κBp65的表达,双药联合使用表现出协同作用。6.在SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞中,与对照组比较,SAL处理组N-cadherin、Vimentin、p-GSK-3β（Ser9）、β-catenin、Axin2、CCND1蛋白表达量均降低（P<0.01）,而E-cadherin的表达量增高（P<0.01）,β-catenin的核外移增多;与SAL组相比,SAL与Wnt-C59联合处理组两种胃癌细胞中N-cadherin和Vimentin、p-GSK-3β（Ser9）及β-catenin、Axin2和CCND1的表达量进一步下调（P<0.01）,E-cadherin的含量进一步上调（P<0.01）,β-catenin的细胞核外移进一步增多。7.与SGC-7901比较,SGC-7901/DDP耐药株SAL处理组、SAL与Wnt-C59联合处理组,N-cadherin、Vimentin、p-GSK-3β（Ser9）、β-catenin、Axin2、CCND1表达的下调和E-cadherin的上调及β-catenin的核外移程度均增强。结论:1.SAL-8μM作用24 h对人胃粘膜上皮细胞GES-1细胞的无明显抑制作用,但可以抑制胃癌细胞SGC-7901及SGC-7901/DDP的增殖。2.SAL与DDP均能抑制SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞的增殖、侵袭、迁移和诱导凋亡,SAL可调节并增强DDP对胃癌细胞SGC-7901及顺铂耐药细胞SGC-7901/DDP增殖、侵袭、迁移的抑制作用和诱导凋亡作用,两药联合具有协同作用;与SGC-7901不同,SAL、双药联合均比DDP对SGC-7901/DDP迁移抑制、诱导凋亡作用更强。3.DDP可致胃癌细胞SGC-7901、SGC-7901/DDP周期阻滞于G0/G1期,SAL可阻滞于S期,两药可分别作用于不同周期时间点发挥细胞阻滞作用。4.SAL与DDP通过Fas-L通路,上调凋亡相关因子Caspase 3、Caspase 9、Bax、Fas-L并下调Bcl-2的表达,同时抑制核内NF-κBp65的表达来调节胃癌细胞SGC-7901及SGC-7901/DDP凋亡,且仅在SGC-7901/DDP中,两药具有明显协同作用。5.SAL通过下调Wnt/β-catenin通路效应物p-GSK-3β（Ser9）、β-catenin及靶蛋白Axin2和CCND1等的表达抑制EMT进程,从而抑制肿瘤细胞的侵袭迁移,增加肿瘤细胞对DDP的敏感性,逆转耐药细胞耐药抵抗。
常明鑫[2]（2021）在《阿卡宁所致DNA氧化损伤与PARP抑制剂在结直肠癌细胞中形成的协同致死作用研究》文中研究说明近年来,随着对癌细胞新陈代谢过程的认识不断深入,针对癌特异性生化代谢脆弱性来选择性地攻击肿瘤细胞被认为是一种很有前途的抗癌策略。多数癌细胞共有的生化代谢特征之一是与恶性转化相伴的活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）自由基含量的升高。大量基础和临床研究证明,内在的高氧化压力使癌细胞比正常细胞对进一步氧化压力升高更敏感,因此,升高ROS或抑制细胞抗氧化能力的药物可选择性地使癌细胞遭受氧化损伤,如DNA碱基损伤和DNA单链断裂（single-strand DNA break,SSB）等。快速、大量DNA氧化损伤的产生,会与DNA复制、修复或转录发生冲突,导致DNA复制压力升高及形成致命的DNA双链断裂（double-strand DNA break,DSB）,进而激发程序性细胞死亡。然而,DNA损伤反应（DNA damage response,DDR）信号通路的激活,会通过调节细胞周期检查点和促进DNA修复及维持基因组完整性等,增进癌细胞的存活。因此,通过外源性氧化打击选择性地在癌细胞中诱导DNA氧化损伤,同时抑制DNA损伤反应或DNA修复,有望产生癌特异性协同致死效应。PARP1和PARP2（PARP1/2）启动DNA碱基损伤和SSB的修复,并在DSB修复中发挥调节作用;此外,PARP1还参与受阻的DNA复制叉的稳定和重启。因此,PARP1/2在DNA氧化损伤的修复和DDR信号通路中起非常重要的作用。PARP1/2活性的缺失对于胚胎来说是致死的,不过对于一个具有正常同源重组介导的DNA修复（HDR）功能的成年细胞来说是不致命的,但PARP1/2活性的缺失会使细胞对电离辐射和引起DNA损伤的治疗药物更敏感。因此,在过去数十年中开展的许多临床试验对PARP抑制剂联合放疗或化疗进行了测试,但至今尚未开发出可供临床应用的成功方案,其中主要障碍是对正常组织的严重毒副作用。如上所述,外源性氧化应激可以选择性地在癌细胞中诱导DNA氧化损伤,这启发我们去探讨促氧化或抑制细胞抗氧化能力的药物与PARP抑制剂联合是否能在癌细胞中形成特异性协同致死作用。紫草是紫草科的一种多年生草本植物,其粗制品具有多种药理活性,中医常用紫草根的干粉治疗烧伤创面。紫草原产于内蒙古和中国东北部,其主要药理成分为阿卡宁（alkannin）和紫草素（shikonin）及其衍生物。大量研究显示阿卡宁和紫草素均具有高效、广谱抗肿瘤活性。实验发现,阿卡宁和紫草素能够进行氧化-还原循环（redox cycling）导致ROS形成,并可以直接结合并抑制硫氧还蛋白还原酶-1（Trx R1）引起ROS累积,致使细胞内氧化压力升高。ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）可完全阻断阿卡宁和紫草素的抗肿瘤活性,表明氧化压力升高是其抗肿瘤活性的主要基础。鉴于ROS毒性的非特异性,使用阿卡宁或紫草素的单一疗法很难达到没有严重毒副作用的治疗效果。为此,在本研究中我们探讨了阿卡宁与PARP抑制剂在结直肠癌细胞中的联合作用效果及其机理。首先,我们发现在无细胞毒性的浓度范围内,阿卡宁可在结直肠癌细胞中引起ROS升高和DNA氧化损伤,包括氧化鸟嘌呤碱基（8-oxo G）的累积和DNA链断裂,而在正常结肠上皮细胞中无明显作用。加入ROS抑制剂NAC后ROS水平的上升以及与之相伴的DNA氧化损伤均被抑制,表明低剂量、无细胞毒性的阿卡宁可特异性地在结直肠癌细胞中引起DNA氧化损伤。其次,MTT和集落形成实验显示,无细胞毒性的阿卡宁与同样无细胞毒性的PARP抑制剂olaparib（奥拉帕尼）联合使用,在结直肠癌细胞中产生了显着协同致死效应,而在正常结肠上皮细胞中无明显抑制作用。RAD51免疫荧光染色实验表明,药物处理对癌细胞的同源重组功能没有影响,表明药物联合产生的协同致死效应与细胞的HDR功能状态无关。ROS抑制剂NAC显着降低阿卡宁与奥拉帕尼在结直肠癌细胞中的协同致死作用,显示阿卡宁引起的DNA氧化损伤是阿卡宁和奥拉帕尼协同作用的基础。OGG1抑制剂也显着降低了阿卡宁和奥拉帕尼的协同效应,表明OGG1介导的碱基切除修复（BER）过程中产生的DNA单链断裂是药物协同毒性的根源。此外,无PARP捕获（PARP-trapping）能力的PARP抑制剂veliparib（维利帕尼）和阿卡宁没有产生协同致死作用,说明阿卡宁和奥拉帕尼的协同作用是由于奥拉帕尼引起的PARP捕获所致。进一步的实验发现,无细胞毒性的阿卡宁和奥拉帕尼的联合在结直肠癌细胞中引起了显着的DNA复制压力和广泛的DNA双链断裂及DNA损伤反应信号上调,进而导致G2/M细胞周期检验点的激活和G2期阻滞,并激发显着的细胞凋亡。在裸鼠体内,阿卡宁和奥拉帕尼联合引起了异种接种的肿瘤的显着抑制肿瘤生长,而两种药物的单独使用对肿瘤生长没有影响。综上所述,本研究发现在无细胞毒性的浓度范围内,阿卡宁可以特异性地在结直肠癌细胞内产生DNA氧化损伤,提高结直肠癌细胞对PARP抑制剂奥拉帕尼的敏感性,进而形成癌特异性协同致死效应。实验结果明确了阿卡宁引起的DNA氧化损伤与奥拉帕尼形成的PARP捕获是协同致死作用的主要机理。以上研究为针对癌细胞与正常细胞在生化代谢方面的差异来设计癌症治疗新方案提供了思路和可行性数据。
李惠兰[3]（2021）在《新型NO供体聚合物紫杉醇胶束的制备及抗肿瘤作用和机制研究》文中研究说明目的:设计与合成NO供体（mPEG-PLA-NO）型可生物降解的聚合物胶束包载紫杉醇作为纳米药物输送系统（NO/PTX）,旨在增强紫杉醇的溶解度,降低毒性和增强抗肿瘤活性,并对其进行急性毒性研究,药物动力学研究,抗肿瘤的作用和机制研究以及药性评价,为新药开发提供依据。方法:第一部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束的制备和表征选用呋咱型一氧化氮供体,采用活性酸酐法制备了m PEG-PLA-NO两亲性聚合物胶束,采用核磁共振谱（1H NMR）,凝胶渗透色谱仪对m PEG-PLA-NO进行分析。采用自乳化法制备包载紫杉醇于聚合物胶束内核的一氧化氮供体型聚合物紫杉醇纳米胶束（NO/PTX）,采用透射电镜,马尔文激光散射粒度仪对NO/PTX进行形态表征。采用高效液相法对药物载药量和包封率进行了检测和计算。采用Greiss法测定NO/PTX体外一氧化氮的释放。第二部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束急性毒性研究SPF级昆明小鼠60只,适应喂养3 d后,分为m PEG-PLA组和m PEG-PLA-NO组。从800 mg/kg剂量开始,以20 m L/kg的给药体积进行尾静脉注射m PEG-PLA或m PEG-PLA-NO,每个剂量组最少6只小鼠。计算出LD50,进行载药材料安全性评价。另取SPF级昆明小鼠120只,适应喂养3 d后,分为PTX组,NO/PTX组,每组KM小鼠40只,禁食不禁水,称重标记。进行PTX组与NO/PTX组的急性毒性比较。按照15、30、45、60、75 mg/kg浓度梯度尾静脉注射的紫杉醇。在确定Dn和Dm后,根据给药间隔i,以i或i的倍数确定3-5个给药剂量。每个剂量至少5只小鼠,观察,记录状态和死亡情况。计算出LD50,进行药物安全性的比较。观察,记录状态和死亡情况。并且连续观察14 d内小鼠的体重变化,以及毛色、四肢活动、进食、饮水、排泄等情况,并记录各组有无中毒情况出现,以及是否有死亡情况。第三部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束药物动力学研究采用H22细胞建立的雄性KM小鼠异种移植模型,研究了药代动力学和组织分布,以描述NO/PTX在体内的分布。通过尾静脉给小鼠注射盐水中的PTX（20 mg/kg,以紫杉醇计算）或NO/PTX（50 mg/kg,以紫杉醇计算）溶液。在0、0.05、0.5、1、2、3、4、8、12和24 h收集血浆和肿瘤。在每个采样时间点,用乙醚麻醉3至4只小鼠,并通过心脏穿刺从每只小鼠收集血液。然后,处死这些小鼠并收集所有肿瘤。离心后,从每只小鼠收集约100μL血浆并冷冻。通过HPLC测定血浆和肿瘤中PTX的浓度,并以多西紫杉醇为内标,通过HPLC-MS/MS测定心脏,肝脏,脾脏,肺和肾脏中PTX的浓度。使用DAS 2.0软件包（中国药理学会）通过房室分析处理药代动力学参数。第四部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束体外抗肿瘤细胞及对P-gp蛋白的影响体外培养SMMC-7721,SCG-7901,SW480,Sk-ov-3,A549,Bel-7402,HCT-116,MCF-7,Hela,HEPG-2,HT29和NCI-H460共12株人源性肿瘤细胞,采用MTT法检测PTX和NO/PTX对肿瘤细胞的抑制率,并计算半效抑制浓度IC50,实验至少重复3次。体外培养SMMC-7721,SCG-7901,SW480,Sk-ov-3,A549,Bel-7402,HCT-116,MCF-7,Hela,HEPG-2,HT29和NCI-H460共12株人源性肿瘤细胞,采用Western blotting检测PTX和NO/PTX干预后,外排蛋白P-gp蛋白的表达。第五部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束抗结肠癌和紫杉醇耐药性结肠癌作用机制研究通过体外培养人HCT116细胞,PTX,NO/PTX或不含一氧化氮供体的聚合物紫杉醇胶束（PTX Nano）干预24 h后,采用Hoechest/PI染色,倒置荧光显微镜观察细胞数量和形态;流式细胞术观察PTX,NO/PTX对HCT116细胞周期的影响;细胞划痕实验检测PTX,NO/PTX对细胞迁移的影响;Western Blot检测与细胞凋亡和增殖迁移相关蛋白的表达。通过体外培养人HCT116细胞和Taxol/HCT116细胞,倒置荧光显微镜观察两者细胞形态差异;CCK8实验检测PTX和NO/PTX对HCT116细胞和Taxol/HCT116细胞增殖的影响,并计算IC50值和Taxol/HCT116细胞的耐药指数;Western blotting检测HCT116与Taxol/HCT116细胞P-gp蛋白的表达差异以及PTX、NO/PTX对Taxol/HCT116细胞紫杉醇耐药关键蛋白P-gp蛋白和β3-Tublin蛋白的表达。第六部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束抗肝癌作用机制研究通过体外培养人Bel-7402细胞,CCK8检测PTX和NO/PTX对Bel-7402细胞的抑制作用。采用Hoechst 33258染色观察细胞形态和数量。建立H22肝癌小鼠模型,分为空白组,m PEG-PLA组和m PEG-PLA-NO组,给药3次,每次间隔72 h,末次给药后72 h取瘤,称量瘤重计算抑瘤率（%）,观察m PEG-PLA和m PEG-PLA-NO干预后对各移植瘤的影响。通过建立H22肝癌小鼠模型,通过尾静脉注射PTX,Genexol?-PM和NO/PTX,并以生理盐水作为对照。同样给药3次,每次间隔72 h,末次给药后72 h取瘤,称量瘤重计算抑瘤率（%）,观察PTX和NO/PTX干预后对各移植瘤的影响。通过体外培养人Bel-7402细胞,给与PTX和NO/PTX 48 h后,提取Bel-7402细胞蛋白质,采用试剂盒检测细胞内SOD、MDA和GSH-PX水平。流式细胞术观察PTX和NO/PTX对细胞Bel-7402凋亡检测。Western Blot检测NO/PTX对于铁死亡,焦亡,内质网应激相关蛋白的作用。第七部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束药性评价SD大鼠40只,分为空白组,PTX组,NO/PTX组,PTX Nano组。每组10只。每三天给药一次,共给药七次。检测大鼠体温和体重变化,安捷伦1290串联6460三重四级杆质谱仪检测大鼠尿液代谢组。正交偏最小二乘（OSC-PLS-DA）分析数据,进行药性判别。结果第一部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束的制备和表征制备并合成了m PEG-PLA-NO,核磁共振谱（1H NMR）结构确证其分子结构,凝胶渗透色谱仪（GPC）分析m PEG-PLA的PDI为1.19,m PEG-PLA-NO的PDI为1.13。制备了聚合物胶束NO/PTX,粒径为30±0.58 nm,zeta电位为-2.76±0.25。透射电镜结果表明NO/PTX呈球形,分布均匀。NO/PTX的包封率为98.6%,NO/PTX的紫杉醇载药量4.69%。Greiss法测定一氧化氮释放率,结果表明,与硝酸甘油和PTX相比,NO/PTX在10 h内具有良好的释放性能,在6 h内释放率最高,达到66.8%。第二部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束急性毒性研究通过CALC 2.0软件和BLISS方法确定半数致死量(LD50)和最大非致死剂量（MNLD）。m PEG-PLA和m PEG-PLA-NO的MNLD分别为2000 mg/kg和1500 mg/kg,表明m PEG-PLA和m PEG-PLA-NO均为无毒两亲性共聚物。PTX的最大耐受剂量LD0为36.3 mg/kg,绝对致死剂量LD100为45 mg/kg。NO/PTX的最大耐受剂量LD0为80 mg/kg,绝对致死剂量LD100为160 mg/kg。KM小鼠中PTX和NO/PTX的LD50分别为39.9 mg/kg和137.1 mg/kg。NO/PTX的急性毒性比PTX降低了3.43倍。第三部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束药物动力学研究血清样品预处理后,其中的内源性物质不干扰紫杉醇和内标的测定。在此色谱条件下血浆中多西紫杉醇、紫杉醇的保留时间分别为19.43 min和22.08 min。按照加权最小二乘法计算线性关系式为:Y=0.0618X-0.0648（R2=0.9986）,（n=3）表明血浆紫杉醇的质量浓度在0.5～150μg/m L内线性关系好。按照加权最小二乘法计算线性关系式为:Y=0.0783X-0.2581（R2=0.9961）,（n=3）表明肿瘤组织紫杉醇的质量浓度在1～150μg/m L内线性关系好。紫杉醇浓度由高到低逐渐稀释,测定出最低检测限紫杉醇浓度为0.25μg/m L,最低定量限血浆紫杉醇浓度为0.5μM/m L,肿瘤组织为1μg/m L,准确度均在85%-115%之间,精密度RSD均小于15%。血浆提取回收率分别为103.2%,99.4%,95.7%,肿瘤提取去回收率分别为112.0%,95.2%,95.5%。内标提取回收率为92.55%。小鼠尾静脉注射PTX或NO/PTX后在体内的代谢与二室模型相符。小鼠尾静脉注射50 mg/kg剂量的NO/PTX后,获得的峰值血浆浓度(Cmax)为105.2μg/m L,尾静脉注射20 mg/kg剂量的PTX后,Cmax为71.7μg/m L。PTX的消除半衰期(t1/2β)1.5 h,NO/PTX的t1/2β为1.7 h。NO/PTX和PTX的血浆浓度-时间曲线下的面积(AUC（0-∞）)分别为128.1μg.h/m L和86.9μg.h/m L/kg。NO/PTX的AUC（0-∞）是PTX的1.35倍。在给药用后,紫杉醇广泛分布于大多数组织中。其中,在肿瘤中明显发现了最高的紫杉醇浓度。在所有时间点,肿瘤中NO/PTX组的紫杉醇浓度均高于PTX组,并在3 h左右达到最大紫杉醇浓度。除肿瘤外的各组织器官中紫杉醇的浓度较低,在KM小鼠组织器官中,紫杉醇最高浓度低于10μg/m L,大部分在24 h以后消除完全。给药后（3 min以后）,PTX在组织器官中分布顺序为:肿瘤>肾>肺>心>脾>肝,NO/PTX在各组织器官中分布顺序为:肿瘤>肺>肾>心>脾>肝。第四部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束体外抗肿瘤细胞及对P-gp蛋白的影响本实验采MTT法对12种人源性肿瘤细胞进行药效学研究,实验均最少重复三次。结果显示NO/PTX在人乳腺癌细胞MCF-7,人胃腺癌细胞SCG-7901,人结肠癌细胞SW480,人结直肠腺癌细胞HCT-116,人肝癌细胞Bel-7402的IC50值较国产紫杉醇注射液低,表明其抗肿瘤效果优于国产紫杉醇注射液。电泳显色结果显示,在紫杉醇0.01μg/mL的浓度下,NO/PTX组Bel-7402细胞SW480细胞,Hela细胞,SMMC-7721细胞,HCT-116细胞,Hep G2细胞,MCF-7细胞,HT29细胞,SCG-7901细胞的P-gp蛋白表达量低于PTX组,表明NO/PTX增强紫杉醇抗肿瘤效果可能与抑制P-gp蛋白相关。第五部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束抗结肠癌和紫杉醇耐药性结肠癌作用机制研究首先,通过Hoechst/PI染色,可以更直观的观察到NO/PTX较PTX具有更好的抗结肠癌HCT116作用。通过细胞周期实验,我们检测到NO/PTX在0.001μg/m L和PTX 0.01μg/m L两个浓度对细胞G2M期的抑制作用均大于PTX（NO/PTX抑制率为39.6%和50%,PTX为30.2%和36.3%）。Western Blot检测结果表明,NO/PTX较空白组,PTX组更能够降低HCT116细胞P-gp蛋白的表达。Western Blot检测同时表明,NO/PTX较空白组和PTX组,能够增加促凋亡蛋白BAX表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达,升高BAX/Bcl-2的比值,增加Cleaved Caspase 3的表达,显示出比市售紫杉醇注射液PTX更好的抗人结肠癌HCT116的结果。无一氧化氮供体的聚合物紫杉醇纳米胶束PTX Nano较空白组和PTX组,也能够降低HCT116细胞P-gp蛋白和增加Cleaved Caspase 3的表达,但降低P-gp蛋白和增加Cleaved Caspase 3的表达的作用比不上NO/PTX。PTX Nano证明m PEG-PLA聚合物胶束具有一定的抗肿瘤制剂优势,同时表明NO/PTX抗肿瘤作用不仅仅是因为制剂优势,还是紫杉醇与一氧化氮供体双重阻断的结果。其次,细胞划痕实验表明,NO/PTX较空白组和PTX组具有更好的抗HCT116细胞增殖迁移的能力。Western Blot检测结果表明,NO/PTX降低Vimentin蛋白表达,增加ZO-1蛋白表达,降低β3-Tublin和p-GSK-3β表达。PTX Nano较NO/PTX显示出更好的降低Vimentin蛋白表达,增加ZO-1蛋白表达能力,然而对于没有显示出降低β3-Tublin和p-GSK-3β表达作用。再者,NO/PTX抗结肠癌肿瘤优势还体现在对于结肠癌耐药细胞具有更好的抗肿瘤作用。我们首先对耐紫杉醇人结肠癌细胞Taxol/HCT116细胞的细胞形态,耐药稀释和P-gp蛋白表达进行了研究。确认Taxol/HCT116细胞较HCT116细胞具有强的紫杉醇耐药性。CCK8实验分析PTX和NO/PTX对taxol/HCT116细胞的增殖的影响,结果表明NO/PTX(IC50:1.2±0.4μg/m L)的IC50显着低于PTX(IC50:5.6±1.9μg/m L),NO/PTX具有比PTX低至4.66倍的IC50值,表明NO/PTX较PTX具有更加显着的抗结肠癌耐药性作用。Western Blot检测结果表明,NO/PTX较空白组和PTX组,显着降低了紫杉醇耐药性的关键蛋白P-gp蛋白和β3-tublin蛋白的表达。第六部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束抗肝癌作用机制研究首先,我们用CCK8检查了NO/PTX和PTX对肝癌Bel-7402细胞的影响。PTX的IC50为7.8±0.4μg/m L,NO/PTX IC50为3.7±1.1μg/m L。这些结果表明,NO/PTX对Bel-7402细胞的毒性比PTX强。用Hoechst 33258染色法检测各组细胞凋亡情况有相同结论。其次,本部分首先制备了H22肝癌荷瘤小鼠模型,实验结果表明,聚合物m PEG-PLA没有显示任何抗肿瘤反应,在m PEG-PLA-NO组中观察到轻微的抗肿瘤作用。在PTX,Genexol?-PM和NO/PTX组中观察到了显着的抗肿瘤活性。PTX,Genexol?-PM和NO/PTX组在低剂量（10 mg/kg）下显示出可比的抗肿瘤活性（抑制率分别为39%,36%和41%）。此外,当剂量达到15 mg/kg时,NO/PTX的抗肿瘤作用明显强于PTX和Genexol?-PM组（PTX,Genexol?-PM和NO/PTX组分别为53%,41%和67%）,证明NO和紫杉醇的协同作用增强了抗肿瘤活性。此外,我们阐明了NO/PTX诱导肝癌细胞死亡是由铁死亡,焦亡,内质网应激（ERS）和凋亡相关网络介导的。NO/PTX通过增加活性氧（ROS）和丙二醛的水平,并降低谷胱甘肽过氧化物酶,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶4的水平引起铁死亡。使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1或ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸会降低NO/PTX的抗癌活性。此外,NO/PTX上调了caspase-1的表达,下调了炎性细胞因子IL-1β,这是细胞焦亡的关键蛋白。此外,NO/PTX上调了一系列调节剂的表达,例如钙结合蛋白,需肌醇酶1a（IRE1a）,葡萄糖调节蛋白78（GRP78）,cleaved-caspase-7,cleaved-caspase-3和降低的B-细胞淋巴瘤2（BCL-2）,核NF-κB,可诱导Bel-7402内质网介导的应激和凋亡。更重要的是,我们证明了NO/PTX增强的抗肿瘤作用可能与下调多药耐药转运蛋白P-gp蛋白,β3-微管蛋白,致敏紫杉醇化疗有关。最后,我们通过流式细胞仪,紫杉醇干预48 h后,检测了Bel-7402细胞凋亡率。NO/PTX在各浓度的凋亡率均高于PTX,表明NO/PTX较PTX具有更好的抗Bel-7402细胞作用。第七部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束药性评价PTX组,NO/PTX组和PTX Nano组均位于寒性药区域,无明显的差异。表明PTX,NO/PTX和PTX Nano均属于寒性药,通过制剂手段制备成聚合物紫杉醇胶束或者连接供体的聚合物紫杉醇胶束,均没有改变药物的药性。结论1、NO/PTX是一种粒径为30 nm左右,呈球形,分布均匀的一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束,NO/PTX的包封率为98.6%,NO/PTX的紫杉醇的载药量4.69%,具有良好的一氧化氮释放性能。载药材料m PEG-PLA和m PEG-PLA-NO均具有良好的安全性。NO/PTX耐受性好,最大耐受剂量是PTX的2.2倍。NO/PTX主要分布于肿瘤组织中,在组织器官中的浓度低。2、NO/PTX对MCF-7,SCG-7901,SW480,HCT-116,Bel-7402细胞中抗肿瘤效果优于国产紫杉醇注射液PTX,其增强紫杉醇的抗肿瘤效果与抑制P-gp蛋白表达相关。3、NO/PTX较PTX具有更好的抗结肠癌HCT116作用和抗HCT116细胞增殖迁移的能力,与紫杉醇和一氧化氮供体双重阻断相关。NO/PTX较PTX对于结肠癌耐药具有更好的抗紫杉醇耐药性,NO/PTX的抗紫杉醇耐药性作用与NO/PTX抑制P-gp和β3-tublin蛋白表达相关。4、NO/PTX诱导肝癌细胞死亡是由铁死亡,焦亡,内质网应激和凋亡相关网络介导的。抑制铁死亡降低了NO/PTX对Bel-7402细胞毒性。高浓度的NO/PTX引起Bel-7402细胞主要死亡方式为凋亡,而焦亡发生在NO/PTX中低浓度。5、PTX,NO/PTX和PTX Nano均属于寒性药,通过制剂手段制备成PTX Nano或者连接供体的NO/PTX,均没有改变药物的药性。
解鸿青[4]（2021）在《蝉花活性成分抗肿瘤作用机制及以蚕蛹为替代寄主人工培育技术的研究》文中研究表明蝉花（Cordyceps cicadae）,又名金蝉花,是我国一种传统名贵中药材,是蝉拟青霉（Paecilomyces cicadas）感染寄生蝉科昆虫而形成的虫菌复合体。蝉花的重要生物活性物质包括核苷类成分、多糖、虫草酸、多球壳菌素等,具有抗肿瘤、免疫调节、保护神经、改善肾功能、降血糖、抗菌等广泛的药理作用。抗肿瘤功能是蝉花的重要的药理作用之一,但其相关的作用机制缺乏系统研究。同时由于天然蝉花资源渐趋枯竭,远不能满足市场日益增长的需求。基于以上问题,本论文对蝉花活性成分抗肿瘤作用及其机制,以及用家蚕蛹作为替代寄主人工培育技术进行了研究,主要研究结果如下:1、采用蒸馏水和乙醇两种常见溶剂提取蝉花有效成分,分别得到蝉花水提物（WEC）和蝉花醇提物（Ethanolic extract of Cordyceps cicadae,EEC）,再采用MTT（3-（4,5-Dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,噻唑蓝）法分别检测WEC和EEC对癌细胞活力的影响,发现WEC和EEC对胃癌细胞SGC-7901的细胞活力均有明显的体外抑制作用,其中EEC的体外抑制作用更强。在对EEC敏感的肿瘤细胞株筛选中,发现EEC对SGC-7901细胞、H1299细胞、HeLa细胞、HepG2细胞和A549细胞均具有细胞毒性,其中对胃癌细胞SGC-7901的毒性最强。2、通过细胞凋亡测定、细胞周期测定、线粒体膜电位变化测定、胞内Ca2+水平测定和Western blotting等实验,发现EEC处理可引起SGC-7901细胞凋亡、S期阻滞、MMP（Mitochondrial membrane potential,线粒体膜电位）去极化和Ca2+水平过载,这些都可能是EEC抑制SGC-7901细胞生长的有效途径。此外,EEC能分别调控细胞凋亡、细胞周期以及内质网应激的相关蛋白在SGC-7901细胞中的表达水平,揭示EEC主要是通过激活caspases家族介导的细胞凋亡途径,来诱导SGC-7901细胞凋亡以及调节细胞周期、内质网应激相关调控因子表达,从而发挥其体外抗肿瘤作用。3、采用苯酚-硫酸法、BCA蛋白含量测定法、高效液相色谱法测定EEC中活性成分,发现EEC中总糖含量为211.6 μg/mg,蛋白含量为336.5 μg/mg,核苷类物质有腺嘌呤、尿苷、腺苷、N6-（2-羟乙基）-腺苷（N6-（2-Hydroxyethyl）-adenosine,HEA）,其含量分别为 1.841±0.007μg/mg、6.015±0.018 μg/mg、1.774±0.030μg/mg、5.388±0.019μg/mg。MTT法检测发现,腺嘌呤、尿苷、腺苷和HEA对SGC-7901细胞生长均有抑制作用,其中HEA的抑制作用最强。4、通过CCK-8实验、细胞凋亡测定、细胞周期测定、ROS（Reactiveoxygen species,活性氧）水平测定、MMP变化测定、Ca2+水平测定、细胞自噬水平测定和Western blotting等实验,发现HEA对胃癌细胞SGC-7901和AGS均具有体外抑制作用和促凋亡作用,HEA能诱导SGC-7901细胞的ROS产生和MMP去极化,触发caspase依赖性细胞凋亡,通过Ca2+调节诱导内质网应激,诱导细胞自噬并产生S期细胞周期阻滞。5、采用基因表达谱技术探究HEA体外抗肿瘤作用机制,发现HEA诱导SGC-7901细胞产生差异基因,这些差异基因参与细胞凋亡、细胞周期阻滞、内质网应激、细胞自噬等。GO富集分析和KEGG通路分析表明,HEA上调或下调基因主要参与癌症发生发展相关的多种信号通路。6、建立SGC-7901细胞实体瘤裸鼠模型,灌胃法给药,探究HEA的体内抗肿瘤功能,发现HEA可呈剂量依赖性地抑制模型裸鼠肿瘤大小和重量的增长,诱导肿瘤组织坏死与细胞凋亡,从而实现体内抗肿瘤作用。7、用组织分离法从天然蝉花体中分离纯化出蝉拟青霉,采用体喷法将分生孢子接种于蚕蛹体,模拟天然蝉花生长的生态环境条件,人工培育出“金蚕花”,并探明了其适宜的人工培育条件。本研究结果为扩大蝉花的药用和保健作用范围提供了理论依据,也为蝉花代用品的开发利用奠定了基础。
阳帆[5]（2020）在《紫花牡荆素抑制胃癌细胞迁移与侵袭的机制研究》文中指出目的:紫花牡荆素能抑制多种肿瘤细胞的增殖,本研究旨在研究其对胃癌细胞迁移与侵袭的影响,并探讨其分子机制,从而为紫花牡荆素的抗肿瘤机制提供依据。方法:1)Casticin对胃癌细胞的影响体外培养AGS和NCI-N87细胞,加入不同浓度Casticin后进行CCK-8、克隆形成实验;Transwell小室及划痕实验检测细胞的侵袭能力及迁移能力;流式细胞仪、DAPI染色法检测细胞周期及细胞凋亡。qRT-PCR、WB检测MMP-2、9的表达,明胶酶谱检测其活性。2)Casticin抑制胃癌细胞迁移、侵袭的分子机制研究紫花牡荆素处理AGS和NCI-N87细胞后,qRT-PCR和WB检测其对RECK表达的影响,BSP实验检测Casticin对RECK甲基化状态的影响;siRECK、RECK-OV转染胃癌细胞后,qRT-PCR、WB检测MMP-2和MMP-9表达变化,以明确胃癌细胞中RECK与MMP-2、-9间的关系;PP2A抑制剂（LB-100）和PP2A激活剂（DES）处理胃癌细胞后,qRT-PCR、WB检测细胞中RECK、MMP-2和MMP-9的表达,BSP检测RECK甲基化状态变化。LB-100和DES处理胃癌细胞后,WB检测DNMT1,MEK和p-MEK表达,以明确PP2A活化/抑制引起RECK表达变化的信号通路。qRT-PCR、WB检测Casticin对PP2A、DNMT1、MEK和p-MEK表达的影响;此外采用PP2A抑制剂处理后用Casticin处理,并通过回复验证明确Casticin对PP2A表达及下游信号分子的影响。3)移植瘤裸鼠模型评价Casticin的抑癌效果分别AGS、NCI-N87细胞移植于裸鼠体内,给予不同浓度Casticin处理,并设置对照组,期间持续观察肿瘤体积变化;采用免疫组化染色、WB检测MMP-2/9、PP2A,RECK 的表达变化。结果:1)Casticin对胃癌细胞的影响通过CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术、DAPI染色、划痕实验、Transwell、qRT-PCR、WB和明胶谱实验的结果,发现不同浓度Casticin可以显着抑制胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭和MMP-2/9的表达及活性,且呈浓度依赖性;而对人胃平滑肌细胞影响较小。2)Casticin抑制胃癌细胞迁移、侵袭的分子机制qRT-PCR、WB和甲基化实验发现Casticin通过促进PP2A表达,进而抑制MEK活化和DNMT1的表达,削弱RECK甲基化并上调RECK表达,从而抑制MMP-2/9表达,最终使得细胞迁移和侵袭能力下降。3)利用胃癌裸鼠成瘤模型评价Casticin的抑癌效果Casticin处理后移植瘤体积明显小于对照组;免疫组化结果发现,Casticin处理后的肿瘤组织中MMP-2/9明显低表达,呈浓度依赖性;相反,PP2A和RECK的表达增高。WB检测发现Casticin处理后肿瘤组织中MMP-2/9蛋白表达量均有明显下调,PP2A,RECK蛋白表达量均有明显上调。结论:1)Casticin有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭与迁移;2)Casticin通过促进PP2A表达来抑制MEK活化和DNMT1表达,进而上调RECK表达,导致MMP-2/9的表达下降,最终抑制胃癌细胞侵袭和转移;3)Casticin可明显抑制移植瘤小鼠皮下瘤的生长,且Casticin处理后肿瘤组织中MMP-2/9明显低表达,同时促进了肿瘤组织中PP2A和RECK的表达。
刘超[6]（2020）在《MG53与胃泌素缓解急性肾损伤的研究》文中提出急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）已成为全世界范围内的公共卫生问题,它起病急、发病率高且无特效治疗药物,具有很高的死亡风险,而其预后不良则可进展至慢性肾脏病,给我们带来了沉重的医疗负担。近年来,由于心血管介入诊断治疗与碘造影剂的广泛运用,以及创伤、休克的发生和肾移植手术的开展,造影剂诱导的AKI（contrast-induced acute kidney injury,CI-AKI）以及缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）诱导的AKI成为两类比较常见的AKI。身体是一个有机整体,我们之前发现其他器官如骨骼肌和胃肠道对肾脏有一定的“对话”作用。当发生AKI时,骨骼肌和胃肠道可能对损伤的肾脏有什么影响呢?因此,我们围绕这一思路,尝试了以下两个主要部分的探究:（1）肌肉因子MG53（Mitsugumin 53）缓解造影剂诱导的急性肾损伤的作用与机制研究;（2）胃肠激素胃泌素缓解缺血再灌注诱导的急性肾损伤的作用及机制研究。第一部分MG53缓解造影剂诱导的急性肾损伤的作用与机制研究研究背景:MG53是一种新发现的由骨骼肌分泌的膜修复蛋白,通过其膜修复功能,MG53能缓解多种器官的损伤;CI-AKI是临床上由于碘造影剂（contrast media,CM）的使用而引起的常见肾脏并发症。有文献报道在CI-AKI中,碘造影剂对肾小管细胞的毒性作用可能是由其对细胞膜的直接损伤而引发。因此,我们提出假设:MG53可能通过其细胞膜修复作用而缓解CI-AKI。目的:探究MG53对CI-AKI是否具有缓解作用及其潜在的作用机制,为临床上治疗及预防CI-AKI提供可能的新策略。方法:（1）建立大鼠CI-AKI模型,检测大鼠血肌酐（Serum creatinine,SCr）、血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）的含量,验证建模是否成功;通过免疫印迹（Western Blot,WB）检测CI-AKI大鼠血浆和肾脏中MG53蛋白的含量变化;通过免疫组化染色检测CI-AKI大鼠肾脏内源性MG53的定位变化;通过免疫荧光观察外源性荧光标记重组人源MG53蛋白（recombinant human MG53,rh MG53）能否在CI-AKI大鼠肾脏聚集。（2）通过检测SCr与BUN水平,并通过大鼠肾脏切片苏木素伊红（hematoxylin-eosin,H&E）染色,明确rh MG53预处理对CI-AKI有无缓解作用。（3）通过TUNEL染色,探究CI-AKI后大鼠肾小管细胞凋亡的变化,并研究rh MG53预处理有无缓解凋亡的作用。（4）建立体外碘普罗胺诱导肾近端小管（renal proximal tubular,RPT）细胞损伤的细胞模型,采用TUNEL染色验证碘普罗胺对RPT细胞凋亡的影响,并研究rh MG53预处理对其有无保护作用。（5）通过细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）检测rh MG53对碘普罗胺诱导的RPT细胞损伤有无缓解作用。（6）通过乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放实验与FM1-43荧光染色检测碘普罗胺对RPT细胞膜的损伤作用,并研究rh MG53预处理对RPT细胞膜是否有保护作用。（7）通过免疫荧光染色检测MG53在RPT细胞中的定位分布。（8）通过q PCR与WB分别检测MG53的m RNA及蛋白水平变化。（9）通过免疫荧光染色观察MG53与Annexin V（一种在凋亡细胞外膜上标记磷脂酰丝氨酸的敏感且特异的探针）的共定位情况。结果:（1）大鼠CI-AKI模型被成功建立,其血浆MG53蛋白含量减少而肾脏MG53蛋白增多,提示MG53从血浆向肾脏富集;MG53在大鼠肾小管细胞中存在表达,而CI-AKI后MG53向肾小管管腔侧聚集;外源性荧光标记rh MG53在CI-AKI大鼠肾脏聚集。（2）SCr、BUN水平以及H&E染色分别表明rh MG53预处理能够缓解CI-AKI的肾功能损伤及肾脏病理损伤。（3）CI-AKI大鼠肾小管细胞凋亡显着增加,rh MG53预处理可减少其中的细胞凋亡。（4）碘普罗胺可导致培养的RPT细胞凋亡,rh MG53预处理可缓解碘普罗胺诱导的RPT细胞凋亡。（5）碘普罗胺以浓度和时间依赖性方式导致RPT细胞损伤,而rh MG53预处理可缓解该损伤。（6）碘普罗胺导致RPT细胞膜损伤,而rh MG53以浓度依赖性方式缓解碘普罗胺诱导的膜损伤。（7）MG53在RPT细胞膜与胞浆均有分布,但碘普罗胺处理后,MG53向RPT细胞膜聚集。（8）碘普罗胺处理后RPT细胞MG53的m RNA及蛋白表达无明显改变,但碘普罗胺损伤的RPT细胞可大量摄取rh MG53蛋白。（9）MG53与Annexin V存在共定位,提示MG53通过与磷脂酰丝氨酸结合发挥其膜修复作用。结论:肌肉因子MG53可以通过修复细胞膜损伤及减少细胞凋亡来缓解CI-AKI,MG53可能成为治疗或预防CI-AKI的有效药物。第二部分胃泌素缓解缺血再灌注诱导的急性肾损伤的作用及机制研究研究背景:急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）的另一类主要原因为缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）损伤;胃肠道与肾脏之间存在密切的调节联系,“胃肾轴”是近年来被提出的新颖概念,有文献报道,胃肠激素胃泌素参与了对肾脏排钠功能的调节并进一步参与血压调控。然而,胃泌素是否也能在I/R损伤的肾脏中发挥一定的作用仍不清楚。因此,我们提出假设:胃泌素可能对肾脏I/R损伤有一定的保护作用。目的:探究胃泌素对肾脏I/R损伤的作用及其机制,为临床预防及治疗肾脏I/R损伤提供新的可能的方法。方法:（1）构建肾脏I/R损伤的小鼠模型,分别通过q PCR、WB及IHC检测肾脏I/R后胃泌素受体（也称胆囊收缩素B型受体,cholecystokinin B receptor,CCKBR）的表达及定位有无改变。（2）小鼠肾脏I/R前给予胃泌素,通过检测肾功能指标SCr与BUN、肾脏切片H&E与过碘酸-雪夫（periodic acid-Schiff,PAS）染色以及小管损伤标志物肾损伤分子-1（kidney injury molecule-1,KIM-1）的表达,判断胃泌素预处理能否缓解肾脏I/R损伤。（3）通过TUNEL染色及caspase-3活性测定,探究胃泌素对I/R诱导的细胞凋亡有无影响,并通过WB检测胃泌素对凋亡上游分子Akt磷酸化水平的影响。（4）建立体外HK-2（human kidney-2）细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤模型,CCK-8及LDH检测胃泌素对H/R处理的HK-2细胞活力的影响。（5）通过WB检测体外H/R处理后HK-2细胞CCKBR蛋白的表达变化。（6）通过TUNEL染色及caspase-3活性测定,探究胃泌素对H/R处理的HK-2细胞凋亡的影响。（7）通过二氢乙锭（dihydroethidium,DHE）染色、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平测定,探究胃泌素对H/R处理的HK-2细胞氧化应激的影响。（8）通过WB检测胃泌素对HK-2细胞PI3K、Akt及Bad磷酸化的影响。（9）通过CCK-8检测渥曼青霉素（PI3K抑制剂）及Akt抑制剂VIII能否阻断胃泌素介导的HK-2细胞活力保护作用。结果:（1）小鼠肾脏I/R损伤后,CCKBR的m RNA及蛋白水平均显着上调,CCKBR在肾小管细胞膜及胞浆均有分布。（2）小鼠肾脏I/R前给予胃泌素,缓解了I/R导致的SCr及BUN的升高幅度,缓解了肾小管病理损伤,减少了小管损伤标志物KIM-1的增高幅度。（3）胃泌素预处理缓解了I/R诱导肾小管细胞凋亡,且胃泌素促进肾组织Akt的磷酸化水平。（4）胃泌素在常氧条件下对HK-2细胞活力无明显影响,但以浓度依赖性方式缓解H/R导致的HK-2细胞活力损伤,且该保护作用能被胃泌素特异性拮抗剂CI-988阻断。（5）H/R处理后,HK-2细胞CCKBR蛋白的表达显着上调。（6）胃泌素缓解H/R诱导的HK-2细胞凋亡及细胞氧化应激。（7）胃泌素预处理H/R损伤的HK-2细胞后,PI3K、Akt及Bad磷酸化水平增加。（8）渥曼青霉素（PI3K抑制剂）与Akt抑制剂VIII可阻断胃泌素对HK-2细胞活力的保护作用。结论:胃肠激素胃泌素可通过PI3K/Akt/Bad通路缓解I/R诱导的肾小管细胞凋亡,从而缓解I/R诱导的急性肾损伤,胃泌素可能成为临床预防或治疗急性肾损伤的潜在药物。研究背景:肾损伤与高血压之间存在极为密切的关系,血管紧张素II 1型受体（angiotensin II type 1 receptor,AT1R）被认为是高血压治疗的关键靶点。分选蛋白（sorting nexins,SNXs）是一组以含有PX（phox homology）结构域为特征的胞内物流系统蛋白,它们在蛋白质分选和运输的调控中起关键作用。有文献报道分选蛋白1（sorting nexin 1,SNX1）参与肾脏多巴胺D5受体的分选和运输,而血管紧张素和多巴胺是血压调节中相互拮抗的系统,SNX1是否也参与了AT1R的分选和运输仍不清楚。因此,我们提出假设:SNX1缺失可能导致血管平滑肌中AT1R的分选及运输障碍,从而导致AT1R含量增多、血管收缩功能增强及高血压。目的:探究SNX1是否参与血管平滑肌细胞中AT1R的分选和运输,为高血压的预防与治疗提供新思路。方法:（1）通过CRISPR/Cas9技术构建基于C57BL/6背景的SNX1基因敲除(Snx1-/-)小鼠,分别从DNA、m RNA及蛋白水平层面验证小鼠的基因型。（2）采用尾套法测量Snx1-/-小鼠及其同窝野生型小鼠的收缩压、舒张压及平均动脉压水平。（3）通过肠系膜血管环实验,检测Snx1-/-小鼠肠系膜动脉对苯肾上腺素、硝普钠及血管紧张素II的反应性变化。（4）通过WB检测Snx1-/-小鼠动脉组织中AT1R、AT2R及D5R的蛋白表达变化;通过免疫荧光染色共定位分析探究野生型小鼠动脉组织中AT1R与SNX1有无共定位。（5）在A10细胞中敲低SNX1后,检测AT1R蛋白含量的变化及其下游Ca2+信号变化;通过免疫沉淀（immunoprecipitation,IP）检测A10细胞中AT1R与SNX1的有无结合。（6）在A10细胞中敲低SNX1后,检测AT1R的m RNA水平变化;用放线菌酮（cycloheximide,CHX）抑制新蛋白从头合成后,检测SNX1是否影响AT1R蛋白的衰减。（7）用CHX抑制新蛋白从头合成后,再分别抑制溶酶体及蛋白酶体途径,探究AT1R蛋白的降解途径。结果:（1）Snx1-/-小鼠被成功构建,其收缩压、舒张压及平均动脉压较其同窝野生型小鼠均显着增高。（3）Snx1-/-小鼠肠系膜动脉对苯肾上腺素、硝普钠的反应性未发生显着改变,但其对血管紧张素II的反应性显着增强。（4）Snx1-/-小鼠主动脉组织中AT2R与D5R的蛋白表达较对照组未见明显改变,但其AT1R的表达显着增加,且WT小鼠主动脉中AT1R与SNX1存在共定位。（5）在A10细胞中敲低SNX1后,AT1R蛋白含量显着增加,且其下游Ca2+信号增强,且A10细胞中AT1R与SNX1存在结合。（6）在A10细胞中敲低SNX1后,AT1R的m RNA水平无明显变化,而用CHX进一步抑制新蛋白从头合成后,在SNX1敲低的A10细胞中,AT1R蛋白衰减显着减慢。（7）用CHX抑制新蛋白从头合成,并用clasto-乳胞素β-内酯（clasto-lactacystinβ-lactone,CLBL）抑制蛋白酶体降解途径,AT1R蛋白的降解进一步被抑制。结论:SNX1缺失可导致血管平滑肌细胞中AT1R的分选和运输异常、AT1R在蛋白酶体系统中的降解减少,进而导致AT1R含量增加及血管收缩性增强,最终导致血压升高。
郑佳彬[7]（2020）在《复方苦参注射液对恶性T细胞淋巴瘤作用机制研究》文中提出立题依据:研究背景:恶性淋巴瘤（ML）是一组起源于淋巴系统的恶性肿瘤,多发生于淋巴结和（或）结外部位淋巴组织,通过肿瘤细胞表面的白细胞分化抗原不同可将其分为T细胞来源淋巴瘤及B细胞来源淋巴瘤两大类。T细胞淋巴瘤临床较B细胞淋巴瘤较为少见,仅约占所有淋巴瘤的10%-15%。但这类淋巴瘤由于其亚洲人群高发病率、明显的个体异质性、广泛的症状特异性、较差的治疗预后和转归及大多数在治疗2-3年内复发的特点,也一直受到国内外学者的广泛重视。复方苦参注射液由于其抗肿瘤、镇痛、增强免疫等功效,常用于晚期患者的维持治疗及放化疗辅助治疗。中国中医科学院首席研究员、中国中医科学院广安门医院肿瘤科前主任林洪生教授在多年的淋巴瘤患者诊治过程中发现复方苦参注射液在治疗缓慢进展的T细胞淋巴瘤,尤以伴以多种形式皮肤损伤的患者效果显着,填补了缓慢进展或除皮肤受累症状外并无其他淋巴结或结外器官受累症状的患者等待观察期无药可用的空白,缓解了患者症状,显着改善生活质量。研究目的:本研究分别通过体内及体外实验设计,探索复方苦参注射液对不同人源淋巴瘤细胞系的干预作用,并在小鼠体内模型中进一步验证和探索其免疫调控作用机制。为复方苦参注射液临床有效性是否源于其对淋巴瘤抑制调节作用提供进一步科学依据。研究方法:1.复方苦参注射液对淋巴瘤细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响1.1复方苦参注射液对不同淋巴瘤细胞系增殖的影响及筛选分别培养Hut78（人源皮肤T细胞淋巴瘤细胞株）、Loucy（人源T淋巴细胞白血病细胞株）、Jurkat（人源T淋巴细胞白血病细胞株）、Raji（人源B细胞淋巴瘤细胞株）、EL4（鼠源T淋巴细胞白血病细胞株）5种不同淋巴瘤细胞株。通过比较CCK8及prestoblue敏感度及复方苦参注射液颜色带来的影响,选择prestoblue法作为细胞活力检测试剂。使用prestoblue法及细胞计数法重复验证不同浓度（0.039-5mg/ml）复方苦参注射液对不同细胞株干预后24h、48h、72 h、96h后对其增殖的影响。从而筛选增殖抑制有效及敏感的细胞株。1.2复方苦参注射液对T细胞淋巴瘤Hut78、Loucy细胞周期的调节作用对上一步筛选敏感细胞株Hut78、Loucy细胞采用PI染色,通过流式细胞仪检测细胞周期,分析不同剂量复方苦参注射液对细胞周期的调节作用。1.3复方苦参注射液对T细胞淋巴瘤Hut78、Loucy细胞凋亡的影响对敏感细胞株Hut78、Loucy细胞采用7AAD/AnnexinV双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率,分析不同剂量复方苦参注射液对细胞凋亡的诱导作用。并通过Western Blot法检测凋亡相关内切酶casepase3、casepase7表达进一步证实凋亡的发生。2.复方苦参注射液对Hut78、Loucy细胞信号调控通路蛋白表达的影响应用反向蛋白阵列术（RPPA）检测敏感细胞株Hut78经不同剂量复方苦参注射液干预24h后蛋白表达差异,聚类分析潜在作用通路,蛋白质印迹法（WB）验证相关有效通路蛋白在复方苦参注射液干预的Hut78、Loucy细胞蛋白表达中的影响,明确复方苦参注射液抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等生物学行为的调控机制。3.复方苦参注射液对Hut78、Loucy细胞能量代谢的影响使用高压液相和质谱联用的方法定量检测敏感细胞株Hut78、Loucy经不同剂量复方苦参注射液干预24h后代谢产物表达差异,明确复方苦参注射液影响肿瘤细胞能量代谢生物学行为的调控机制。4.复方苦参注射液对EL4淋巴瘤动物模型的体内实验研究4.1复方苦参注射液对EL4淋巴瘤模型生存期的影响使用C57BL/6J小鼠构建EL4淋巴瘤动物模型,将荷瘤小鼠随机分为低、中、高剂量（2ml/kg、4ml/kg、8ml/kg）复方苦参注射液组,甲氨喋呤（MTX）组,生理盐水组以腹腔注射方式干预荷瘤小鼠14天,观察记录其对瘤体大小、小鼠体重及生存期的影响,探索CKI治疗的最佳剂量。4.2复方苦参注射液对EL4淋巴瘤模型免疫调节及肿瘤能量代谢的影响使用C57BL/6J小鼠构建EL4淋巴瘤动物模型,将荷瘤小鼠随机分为最佳剂量复方苦参注射液组（2ml/kg,4ml/kg）及生理盐水组以腹腔注射方式干预荷瘤小鼠7天,观察比较瘤体大小,绘制瘤体生长曲线;通过免疫细胞亚群测定检测小鼠肿瘤及脾脏免疫细胞分型表达;通过高压液相和质谱联用的方法进行肿瘤组织代谢产物检测。以进一步验证探索复方苦参注射液体内作用机制;小鼠肿瘤组织石蜡切片的制作及Cleave Casepase3 IHC染色用以检测肿瘤组织凋亡情况。以进一步验证探索复方苦参注射液体内作用机制。研究结果:1.通过细胞活力鉴定的方法学摸索,CCK8及Prestoblue均具有良好的敏感性,但复方苦参注射液颜色对Prestoblue读数的影响程度更小。因此选择prestoblue法及细胞计数法重复验证CKI在淋巴瘤细胞增殖中发挥的作用。Prestoblue法结果显示复方苦参注射液对5种淋巴瘤细胞均显示出生长抑制作用。其中T细胞淋巴瘤细胞系Hut-78、EL4、Loucy、Jurkat要显着强于B细胞淋巴瘤细胞Raji,在人源T细胞淋巴瘤细胞系中,复方苦参注射液对Hut-78（人源皮肤T细胞淋巴瘤细胞）抑制效果最强,Loucy（人源T淋巴细胞白血病细胞株）的抑制效果次之,均呈现显着的剂量及时间依赖性。细胞计数法结果与Prestoblue检测结果趋势一致,也进一步验证Prestoblue细胞增殖-活力检测方法检测结果的真实性及准确性。细胞周期检测结果显示CKI处理后Hut-78、Loucy细胞的细胞周期G0-G1,S,G2/M期并未见明显的周期停滞作用。但是subG 1期的比例呈明显剂量依赖性增加,提示细胞凋亡在CKI的作用机制中或许扮演着重要作用。细胞凋亡检测结果显示CKI可以诱导Hut-78、Loucy细胞的凋亡,凋亡相关内切酶casepase3、casepase7蛋白表达的Western Blot检测也进一步证实了这一点。不同的是,CKI在48h更多的引起Hut-78细胞的早期凋亡,其凋亡率增高明显;但在Loucy细胞中,晚期凋亡和坏死细胞比率更多,这说明CKI诱导Loucy细胞死亡的方式或机制与Hut-78可能纯在差异。2.通过分析反向蛋白阵列术（RPPA）结果发现CKI的潜在作用通路可以聚焦在 PI3K/Akt/mTOR、NF-KB、MEK/ERK 等通路,其中 PI3K/Akt/mTOR 通路的多数蛋白表达调节符合CKI调节分子机制的构想。Western Blot验证结果证实CKI可通过下调Hut-78细胞中PI3K/Akt/mTOR通路蛋白表达,进一步调控其下游AMPK/TSC1/mTor/S6通路,从而影响细胞增殖或诱导凋亡。这种现象在Loucy细胞中同样可见。可见,调控PI3K/Akt/mTOR通路及AMPK/TSC1/mTor/S6通路也许是CKI作用T细胞淋巴瘤的主要分子机制。3.高压液相和质谱联用的方法检测提示CKI具有潜在调控谷氨酸及乳酸代谢的作用。CKI可以通过直接减少谷氨酸或乳酸代谢的途径抑制糖解途径酵,减少肿瘤能量代谢。Western Blot蛋白表达验证结果证实CKI具有潜在下调GLS1、LDHA蛋白表达的作用,从而干预肿瘤能量代谢途径,减少肿瘤能量供应。4.通过对C57BL/6J小鼠构建EL4淋巴瘤动物模型,我们发现CKI、MTX干预相比生理盐水组可显着提高生存率,延长生存期,相较于化疗药物MTX,CKI表现出非劣势的作用。比较两个实验的小鼠瘤体生长曲线,发现CKI干预后瘤组织的瘤体积增长速度呈降低趋势,与生存期研究结果相一致,相较于化疗药物MTX,CKI依然表现出非劣势的肿瘤抑制作用。免疫细胞亚群结果提示CKI可以选择性上调T细胞亚群（CD3+）,而其中发挥作用的主要免疫细胞群体可能是上调辅助T细胞（CD3+CD4+）、调节性T细胞（CD4+FoxP3）,或下调Th17细胞（CD3+CD4+IL17）比例达成的。这一发现提示CKI的抗肿瘤作用可能与免疫调控有关。通过对肿瘤组织代谢产物的高压液相和质谱联用的方法发现CKI在谷氨酸途径代谢中,可以显着降低谷氨酰胺、谷氨酸及乳酸含量。这与Hut-78及Loucy的实验结果相一致,也进一步提示CKI可以通过抑制谷氨酸及糖酵解途径影响肿瘤能量代谢,降低肿瘤供能,从而发挥抑制肿瘤生长的作用。小鼠肿瘤组织石蜡切片的制作及Cleave Casepase3 IHC染色的结果显示CKI的抑瘤作用可能是通过诱导细胞凋亡产生的,这也进一步印证了体外实验的结论。研究结论:1.复方苦参注射液对淋巴瘤细胞均显示出生长抑制作用。其中对T细胞淋巴瘤要显着强于B细胞淋巴瘤。其发挥细胞增殖抑制的作用可能是通过诱导细胞凋亡完成;2.调控PI3K/Akt/mTOR通路及AMPK/TSC1/mTor/S6通路也许是CKI作用T细胞淋巴瘤的主要分子机制;3.CKI具有降低谷氨酸及乳酸代谢的作用,从而抑制糖解酵途径,减少肿瘤能量代谢,这一点在体内外实验中均得到了验证;4.CKI干预EL4淋巴瘤动物模型可以提高生存率,延长生存期,降低肿瘤生长速度,相较于化疗药物MTX,CKI表现出非劣势的作用;5.CKI发挥肿瘤免疫调节的机制可能是下调Th17（CD3+CD4+IL17）/Treg（CD4+FoxP3）比例,提示CKI的抗肿瘤作用可能是通过抑制肿瘤相关性炎症发挥的。
颜廷华[8]（2020）在《秦皮乙素通过氧化应激与内质网应激对SGC-7901细胞凋亡的影响》文中提出胃癌是在我国常见的恶性肿瘤之一,发病率居高不下,死亡率高,严重危害人类健康,因此,胃癌治疗药物的开发刻不容缓。秦皮乙素是从中药秦皮中提取的一类香豆素类化合物,具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用。近年来的研究表明秦皮乙素具有抑制多种肿瘤的增殖、侵袭迁移和诱导细胞凋亡等作用,并且涉及到多条信号通路。本课题选用人胃癌SGC-7901细胞为研究对象,在以往研究中表明秦皮乙素可以通过线粒体途径和死亡受体途径诱导细胞凋亡,因此本课题以氧化应激和内质网应激为切入点,对秦皮乙素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用机制展开研究,以期为秦皮乙素的抗肿瘤作用提供更加充分的理论依据。方法:（1）Western Blot法检测人胃癌SGC-7901细胞内质网应激相关蛋白GRP78与CHOP的表达;（2）MTT法检测秦皮乙素对SGC-7901细胞增殖的影响;Hoechst33258法检测秦皮乙素对SGC-7901细胞凋亡的影响;（3）H2DCFDA染色法检测秦皮乙素对SGC-7901细胞中ROS水平的影响;MTT法检测NAC对秦皮乙素抑制SGC-7901细胞增殖的影响;Hoechst 33258法检测NAC对秦皮乙素诱导SGC-7901细胞凋亡的影响;（4）Western Blot法检测秦皮乙素对SGC-7901细胞中GRP78、p-PERK、peIF2α、ATF-4、CHOP蛋白表达的影响;MTT法检测TUDCA对秦皮乙素抑制SGC-7901细胞增殖的影响;Hoechst 33258法检测TUDCA对秦皮乙素诱导SGC-7901细胞凋亡的影响;（5）H2DCFDA染色法检测TUDCA对秦皮乙素诱导SGC-7901细胞中ROS水平影响;Western Blot法检测NAC对秦皮乙素诱导SGC-7901细胞中GRP78和CHOP蛋白表达影响。结果:（1）通过Western Blot法检测内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP在人胃癌SGC-7901细胞中有表达,提示GRP78与CHOP等内质网应激相关蛋白表达的平衡与人胃癌SGC-7901细胞的发生发展相关。（2）通过MTT法检测秦皮乙素可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,随着秦皮乙素浓度的增加,细胞存活率越低,具有剂量依赖性;Hoechst 33258染色观察秦皮乙素0.28、0.56、1.12 mmol/L处理细胞后细胞核质的形态学变化,发现随着秦皮乙素浓度的增加,出现了细胞核质固缩、核碎裂等明显的细胞凋亡形态学特征,提示秦皮乙素可通过诱导SGC-7901细胞发生凋亡,发挥其抗癌活性。（3）H2DCFDA染色观察用秦皮乙素0.28、0.56、1.12 mmol/L处理后细胞内ROS水平明显升高并具有剂量依赖性;用100μmol/L的NAC预处理细胞1 h后,MTT法检测NAC+秦皮乙素组细胞存活率（67.25±4.28）%明显高于秦皮乙素组（56.36±4.68）%（P<0.05）,表明抑制ROS的产生能抑制秦皮乙素对SGC-7901细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258染色观察NAC+秦皮乙素组细胞凋亡程度较秦皮乙素组明显降低,表明抑制ROS能抑制秦皮乙素的细胞凋亡作用,提示秦皮乙素诱导SGC-7901细胞凋亡与ROS密切相关。（4）通过Western Blot法检测秦皮乙素0.28、0.56、1.12 mmol/L给药后细胞中GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF-4、CHOP蛋白表达均有不同程度的上调,用50μmol/L的TUDCA预处理细胞1 h后,MTT法检测TUDCA+秦皮乙素组细胞存活率（58.77±3.46）%明显高于秦皮乙素组（48.43±2.51）%（P<0.05）,表明抑制ERS能抑制秦皮乙素对SGC-7901细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258染色观察TUDCA+秦皮乙素组细胞凋亡程度较秦皮乙素组明显降低,表明抑制ERS能抑制秦皮乙素的细胞凋亡作用,提示秦皮乙素可通过内质网应激诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡。（5）通过H2DCFDA染色观察用50μmol/L的TUDCA预处理细胞1 h后,TUDCA+秦皮乙素组的ROS水平明显低于秦皮乙素组,表示抑制ERS能抑制秦皮乙素诱导ROS的产生;用100μmol/L的NAC预处理细胞1 h后,通过Western Blot法检测NAC+秦皮乙素组GRP78和CHOP蛋白表达较秦皮乙素组均有所减少,表示抑制ROS也能影响ERS的作用,提示秦皮乙素对SGC-7901细胞中ROS和内质网应激具有双重调控作用。结论:GRP78和CHOP内质网应激相关蛋白在人胃癌SGC-7901细胞中有表达,表示GRP78和CHOP等内质网应激相关蛋白与人胃癌SGC-7901细胞的发生发展有关,秦皮乙素可以通过氧化应激和内质网应激抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,促进人胃癌SGC-7901细胞的凋亡,并且ERS能升高人胃癌SGC-7901细胞中ROS的水平,相反,ROS的产生也能诱导ERS的发生,提示秦皮乙素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡机制可能与氧化应激与内质网应激的交互作用有关。
常渊[9]（2020）在《COX-2、PD-L1和ANXA2在腮腺良恶性肿瘤的表达》文中提出目的通过研究环氧合酶2（COX-2）、程序性死亡分子配体-1（PD-L1）、膜联蛋白A2（ANXA2）在腮腺良恶性肿瘤中的特异性表达及其表达强度,结合其在不同临床病理学分级的恶性肿瘤中的梯度表达变化及其相关程度,可以辅助判断肿瘤的恶性或为术后评估提供较为可靠的病理学依据,为腮腺良恶性肿瘤的鉴别诊断及腮腺恶性肿瘤的临床预估和治疗思路提供有意义的病理学参考。方法收集2014年9月1日到2019年9月2日这五年期间在华北理工大学附属医院口腔科住院并经过手术治疗的,且由本院病理科确诊证实的腮腺恶性肿瘤组织标本存档蜡块50例,作为恶性标本实验组。再从同期组织标本存档中随机选取肿瘤组织和正常腺叶各50例,分别作为良性标本实验组和正常标本对照组。上述病理切片来源患者均为初次手术治疗,术前均未经任何手术治疗和放化疗或激素治疗,全身无其它肿瘤病史。在本院病案科和病理科收集以上患者完整的病历资料和病理信息。其中,腮腺恶性肿瘤依据2019年6月美国国立综合癌症网络修订的《Head and Neck Cancer》的标准进行病理学分类。利用免疫组化SP法分别检测COX-2、PD-L1及ANXA2在腮腺良恶性标本实验组和对照组中的表达及其表达强度。所得实验结果基于统计软件SPSS 21.0进行相关性和显着性检验。结果1在腮腺正常、良性腮腺肿瘤、恶性腮腺肿瘤组织,COX-2的阳性表达率分别为10.0%、42.0%、90.0%;PD-L1的阳性表达率分别为8.0%、46.0%、82.0%;ANXA2的阳性表达率分别为38.0%、58.0%、78.0%,分析可得COX-2、PD-L1和ANXA2在腮腺正常、腮腺良性、腮腺恶性肿瘤组织中的阳性表达率均呈递增趋势,统计验证有效（检验水准取P<0.05）。2（1）在腮腺恶性肿瘤组织中,COX-2在不同的T分类的四组中的阳性表达率分别为33.3%、92.9%、100.0%、100.0%,在四组间存在明显差异;在长期吸烟和非长期吸烟患者中的表达率分别为100.0%、77.3%,个人吸烟史不同的两组中表达具有显着差异（P<0.05）;但其表达与性别、肿瘤的淋巴结和组织转移无统计学意义（P>0.05）。（2）在腮腺恶性肿瘤组织中,PD-L1在T分类组织中的阳性表达率分别为33.3%、78.6%、90.5%、100.0%,不同T分类的四组,组间表达存在显着差异（P<0.05）;其表达率与肿瘤的淋巴结转移、远端转移、性别和吸烟史的差异结果无统计学意义（P>0.05）;（3）在腮腺恶性肿瘤组织中,ANXA2的阳性率在N分类组织中分别为62.5%、94.1%、88.9%,不同N分类的三组组间差异有统计学研究意义（P<0.05）;在长期吸烟和非长期吸烟患者中阳性率分别为92.8%、59.1%,个人吸烟史不同的两组中表达不同,结果有统计意义（P<0.05）。ANXA2的阳性表达差异与性别、肿瘤的大小和远端转移情况无统计学意义（P>0.05）。3在恶性腮腺肿瘤组织,COX-2与PD-L1的表达强度互为正向相关,r=0.468,相关程度具有统计学研究意义（P<0.05）;PD-L1与ANXA2的阳性表达率存在正相关的关系,r=0.364,关系具有统计学意义（P<0.05）;COX-2与ANXA2阳性表达率为正相关,r=0.505（P<0.05）,相关性具有统计意义。结论1 COX-2、PD-L1及ANXA2在腮腺正常组织、良性肿瘤和恶性肿瘤中的阳性表达均呈递增趋势。2 COX-2的阳性表达率与肿瘤的直径有关,而且长期吸烟患者肿瘤组织中表达率更高;PD-L1的阳性表达率在直径越大的恶性腮腺肿瘤组织中表达越强;ANXA2的阳性表达率与腮腺恶性肿瘤淋巴结转移和吸烟史有关。3在腮腺恶性肿瘤中,COX-2、PD-L1和ANXA2均互为正相关。图7幅;表7个;参45篇。
朱雷[10]（2020）在《ZEA与DON对仔猪睾丸支持细胞的联合毒性作用及NAC的保护效应研究》文中指出玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEA）与脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）是农产品及饲料中检出率和检出量较高的两种霉菌毒素。研究表明,ZEA与DON均可造成雄性动物的生殖毒性,可引起雄性动物睾丸组织中的生殖细胞减少,降低血清中睾酮浓度,影响生育能力。因此,本试验以仔猪睾丸支持细胞为试验对象,探讨ZEA与DON对猪睾丸支持细胞的联合毒性作用并评价N-乙酰半胱氨酸（N-Acetyl-L-cysteine,NAC）对ZEA与DON联合毒性的缓解作用。首先采用CCK-8法,通过检测细胞活率确定最适染毒浓度与NAC浓度。以不同浓度ZEA（10μg/m L）、DON（0.2μg/m L）以及NAC（0.6 mg/m L）单一及联合作用于仔猪睾丸支持细胞24h,通过倒置显微镜、透射电镜观察细胞形态变化以及超微结构的变化;采用激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位及紧密连接蛋白的表达与分布变化;通过流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位、活性氧表达水平以及细胞周期变化;通过q RT-PCR技术检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bid、caspase-3和caspase-9 m RNA的相对表达量;通过Western-blot检测联合毒素及保护剂对睾丸支持细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bid、caspase-3和caspase-9表达水平的影响,综合评价ZEA与DON对仔猪睾丸支持细胞的联合毒性作用以及NAC的缓解效应。试验结果显示:1.10μg/m L的ZEA即可显着降低细胞活率（P<0.05）,0.2μg/m L的DON即可导致细胞活率显着下降（P<0.05）,10μg/m L ZEA与0.2μg/m L DON联合可导致睾丸支持细胞活率极显着降低（P<0.01）,联合毒性表现为亚加性效应。倒置显微镜观察结果显示,ZEA与DON联合可导致睾丸支持细胞生长状态明显变差,细胞皱缩,细胞间排列稀疏,悬浮及贴壁不紧的细胞增多;电镜结果表明ZEA与DON联合染毒导致细胞明显皱缩,细胞膜破损,胞质内自噬泡增多,内质网与线粒体嵴断裂,核染色质颜色加深并发生浓缩;免疫荧光结果显示,ZEA与DON可对紧密连接蛋白ZO-1的表达与分布造成显着影响,ZEA与DON单一及联合染毒均导致ZO-1蛋白的表达水平降低,联合毒性作用最显着。2.ZEA与DON可对仔猪睾丸支持细胞造成氧化损伤,扰乱细胞周期。ZEA与DON可极显着增加睾丸支持细胞ROS表达（P<0.01）,显着或极显着降低SOD、CAT、GSH-Px的活性（P<0.05或P<0.01）,并显着或极显着增加MDA含量的表达（P<0.05或P<0.01）;ZEA与DON可导致睾丸支持细胞线粒体膜电位极显着下降（P<0.01）,并扰乱细胞周期,造成G2期阻滞。3.ZEA与DON致睾丸支持细胞凋亡作用的检测结果显示,ZEA与DON可导致睾丸支持细胞凋亡率显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）,并可显着或极显着增加促凋亡相关基因Bax、Bid、Caspase-3和Caspase-9 m RNA以及促凋亡相关蛋白Bax、Bid、Caspase-3和Caspase-9的表达水平（P<0.05或P<0.01）,并显着或极显着降低Bcl-2 m RNA及蛋白的表达水平（P<0.05或P<0.01）。4.用NAC、ZEA与DON对睾丸支持细胞联合培养,通过对细胞形态、超微结构、氧化与抗氧化指标,细胞周期及凋亡等指标进行检测,评价NAC对ZEA与DON联合致睾丸支持细胞损伤的保护效应。检测结果显示,NAC可显着降低ZEA与DON引起的细胞损伤与凋亡。与毒素联合组相比,NAC可明显缓解ZEA与DON对睾丸支持细胞细胞器及细胞结构造成的损伤,极显着降低ROS、MDA的表达量（P<0.01）,并显着或极显着升高SOD、CAT、GSH-Px的活性（P<0.05或P<0.01）;NAC可缓解ZEA与DON造成的细胞周期阻滞作用,极显着降低睾丸支持细胞的凋亡率（P<0.01）,显着或极显着降低促凋亡相关基因Bax、Bid、Caspase-3和Caspase-9m RNA及促凋亡相关蛋白Bax、Bid、Caspase-3和Caspase-9的表达水平（P<0.05或P<0.01）,并显着增加Bcl-2 m RNA及蛋白的表达水平（P<0.05）。综上所述,ZEA与DON联合染毒,可对睾丸支持细胞造成氧化损伤,破坏细胞器及超微结构,阻滞细胞周期,并诱导其发生凋亡,其诱导凋亡的作用途径与线粒体介导的凋亡途径有关;ZEA与DON的氧化损伤效应加剧了细胞的凋亡;NAC对ZEA与DON联合致睾丸支持细胞损伤具有较好的缓解效应,并可通过抗氧化作用降低ZEA与DON的氧化损伤效应来缓解细胞凋亡。
二、N-乙酰半胱氨酸对胃腺癌细胞株增殖凋亡及细胞内Ca~(2+)浓度的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、N-乙酰半胱氨酸对胃腺癌细胞株增殖凋亡及细胞内Ca~(2+)浓度的影响（论文提纲范文）
（1）盐霉素对耐顺铂人胃癌细胞增敏作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文对照缩略表 |
| 引言 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 药品及试剂 |
| 1.2 主要溶液的配制 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 细胞来源 |
| 2.方法 |
| 2.1 SGC-7901、GES-1 细胞培养 |
| 2.2 人胃癌顺铂耐药株SGC-7901/DDP细胞培养 |
| 2.3 细胞的冻存 |
| 2.4 CCK-8 实验 |
| 2.5 细胞周期实验 |
| 2.6 细胞凋亡实验 |
| 2.7 细胞侵袭实验 |
| 2.8 细胞划痕实验 |
| 2.9 蛋白免疫印迹实验 |
| 2.10 免疫组化实验 |
| 2.11 免疫荧光实验 |
| 2.12 统计分析 |
| 第二章 实验结果 |
| 1.SGC-7901/DDP耐药株的耐药鉴定 |
| 2.CCK-8 法进行SAL作用浓度及时间点筛选 |
| 3.SAL及 DDP对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响 |
| 4.流式细胞术检测SAL及 DDP对胃癌细胞凋亡的影响 |
| 5.流式细胞术检测SAL及 DDP对胃癌细胞周期的影响 |
| 6.SAL及 DDP诱导胃癌细胞凋亡的机制研究 |
| 7. SAL 对胃癌细胞 Wnt/ β-catenin 通路效应物及 EMT 标记物表达的影响 |
| 第三章 讨论 |
| 第四章 总结与展望 |
| 1.结论 |
| 2.创新点 |
| 3 后续研究工作及展望 |
| 参考文献 |
| 综述 盐霉素的生物作用综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间科研成果 |
（2）阿卡宁所致DNA氧化损伤与PARP抑制剂在结直肠癌细胞中形成的协同致死作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩写对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 肿瘤概论 |
| 1.1.1 肿瘤定义及特性 |
| 1.1.2 肿瘤的常规治疗方式研究进展 |
| 1.2 PARP1结构功能及抑制剂 |
| 1.2.1 PARP1结构 |
| 1.2.2 PARP1功能 |
| 1.2.3 PARP抑制剂的研究现状 |
| 1.3 阿卡宁结构功能 |
| 1.3.1 阿卡宁结构 |
| 1.3.2 抑制细胞增殖 |
| 1.3.3 诱导细胞凋亡 |
| 1.3.4 抑制细胞迁移和侵袭 |
| 1.3.5 诱导自噬、坏死性凋亡和细胞免疫 |
| 1.3.6 抗炎作用 |
| 1.4 设计思路 |
| 第2章 材料方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 溶液试剂 |
| 2.1.4 仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 溶液配制 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 MTT测定细胞存活 |
| 2.2.4 克隆形成实验 |
| 2.2.5 ROS测定实验 |
| 2.2.6 碱性彗星实验 |
| 2.2.7 免疫荧光染色实验 |
| 2.2.8 线粒体膜电位测定实验 |
| 2.2.9 细胞周期检测 |
| 2.2.10 细胞凋亡实验 |
| 2.2.11 BCA蛋白定量 |
| 2.2.12 Western blot实验 |
| 2.2.13 小鼠肿瘤模型的建立 |
| 2.2.14 肿瘤组织中γH2AX的免疫组织化学染色 |
| 2.2.15 肿瘤组织中TUNEL染色 |
| 2.2.16 结果统计 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 低剂量阿卡宁在结直肠癌细胞中引起DNA氧化损伤 |
| 3.1.1 低剂量阿卡宁升高结直肠癌细胞的ROS水平 |
| 3.1.2 低剂量阿卡宁诱导的ROS升高导致DNA氧化损伤 |
| 3.2 阿卡宁与奥拉帕尼在结直肠癌细胞中的协同致死作用 |
| 3.2.1 低剂量阿卡宁提高结直肠癌细胞对奥拉帕尼的敏感性 |
| 3.2.2 碱基切除修复所致SSB和PARP捕获导致协同作用 |
| 3.3 阿卡宁和奥拉帕尼联合导致DNA复制压力和DNA断裂 |
| 3.3.1 阿卡宁和奥拉帕尼联合导致DNA复制压力升高 |
| 3.3.2 阿卡宁和奥拉帕尼联合引起DNA双链断裂 |
| 3.4 DNA损伤反应导致G2期阻滞和细胞凋亡 |
| 3.4.1 阿卡宁和奥拉帕尼联合激活DNA损伤反应 |
| 3.4.2 阿卡宁和奥拉帕尼联合导致G_2期阻滞 |
| 3.4.3 阿卡宁和奥拉帕尼联合诱导癌细胞凋亡 |
| 3.5 阿卡宁和奥拉帕尼联合在体内抑制肿瘤生长 |
| 3.6 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及科研成果 |
| 致谢 |
（3）新型NO供体聚合物紫杉醇胶束的制备及抗肿瘤作用和机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束的制备和表征 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 4 讨论与小结 |
| 第二部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束急性毒性研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 4 讨论与小结 |
| 第三部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束药物动力学研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 4 讨论与小结 |
| 第四部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束体外抗肿瘤细胞及对P-糖蛋白的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 4 讨论与小结 |
| 第五部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束抗结肠癌和紫杉醇耐药性结肠癌作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 4 讨论与小结 |
| 第六部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束抗肝癌作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 4 讨论与小结 |
| 第七部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束药性评价 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果和讨论 |
| 4 讨论与小结 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 一氧化氮对肿瘤作用的浓度依赖作用和化疗增敏机制 |
| References |
| 个人简介 |
（4）蝉花活性成分抗肿瘤作用机制及以蚕蛹为替代寄主人工培育技术的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 缩略语对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 蝉花的概述 |
| 1.1.1 蝉花的形成 |
| 1.1.2 蝉花的生态分布 |
| 1.2 蝉花的化学成分 |
| 1.2.1 核苷类物质 |
| 1.2.2 麦角甾醇及其过氧化物 |
| 1.2.3 多糖 |
| 1.2.4 多球壳菌素 |
| 1.2.5 虫草酸 |
| 1.3 蝉花的药理作用与保健功能 |
| 1.3.1 蝉花的实用方法 |
| 1.3.2 蝉花的安全性 |
| 1.3.3 蝉花的抗肿瘤活性 |
| 1.3.4 蝉花的免疫调节活性 |
| 1.3.5 蝉花的神经保护功能 |
| 1.3.6 蝉花的肾脏保护功能 |
| 1.3.7 蝉花的降血糖能力 |
| 1.3.8 蝉花的抗菌功能 |
| 1.4 虫草的人工培育 |
| 1.4.1 虫草菌的液体发酵 |
| 1.4.2 虫草菌的固体发酵 |
| 1.4.3 用替代寄主昆虫人工培育虫草 |
| 1.5 本研究的目的意义、研究内容和技术路线 |
| 1.5.1 研究的目的和意义 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 1.5.3 技术路线 |
| 第2章 蝉花不同溶剂提取物对体外肿瘤细胞活力的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料和仪器 |
| 2.2.1 实验材料和试剂 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 蝉花粉的制备 |
| 2.3.2 蝉花水提物的制备 |
| 2.3.3 蝉花醇提物的制备 |
| 2.3.4 细胞培养 |
| 2.3.5 MTT实验 |
| 2.3.6 细胞形态学观察 |
| 2.3.7 数据处理和分析 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 蝉花水提物和醇提物的抗肿瘤活性比较 |
| 2.4.2 蝉花醇提物体外对多种肿瘤细胞活力的影响 |
| 2.4.3 蝉花醇提物不同作用时间对SGC-7901细胞活力的影响 |
| 2.4.4 蝉花醇提物对SGC-7901细胞形态的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 蝉花醇提物的体外抗肿瘤作用机理研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料和仪器 |
| 3.2.1 实验材料和试剂 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 蝉花醇提物的制备 |
| 3.3.2 细胞凋亡实验 |
| 3.3.3 细胞周期实验 |
| 3.3.4 线粒体膜电位变化测定 |
| 3.3.5 细胞内Ca~(2+)浓度测定 |
| 3.3.6 蛋白表达量检测 |
| 3.3.7 统计分析 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 蝉花醇提物EEC对SGC-7901细胞凋亡的影响 |
| 3.4.2 蝉花醇提物EEC对SGC-7901细胞周期的影响 |
| 3.4.3 蝉花醇提物EEC对SGC-7901细胞线粒体膜电位的影响 |
| 3.4.4 蝉花醇提物EEC对SGC-7901细胞Ca~(2+)浓度的影响 |
| 3.4.5 蝉花醇提物EEC对SGC-7901细胞凋亡、细胞周期和内质网应激相关蛋白表达的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 蝉花醇提物的化学成分分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料和仪器 |
| 4.2.1 实验材料和试剂 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 多糖含量测定 |
| 4.3.2 蛋白质含量测定 |
| 4.3.3 核苷类物质鉴定及其含量测定 |
| 4.3.4 EEC中几种核苷类物质的抗肿瘤活性 |
| 4.3.5 统计分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 蝉花醇提物中的多糖含量 |
| 4.4.2 蝉花醇提物中的蛋白质含量 |
| 4.4.3 蝉花醇提物中的核苷类物质鉴定及其含量分析 |
| 4.4.4 蝉花醇提物中核苷类物质抗肿瘤效果的比较 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 N6-(2-羟乙基)-腺苷的体外抗肿瘤作用及其机理研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料和仪器 |
| 5.2.1 实验材料和试剂 |
| 5.2.2 主要仪器与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 CCK-8实验 |
| 5.3.2 相差显微镜观察细胞形态 |
| 5.3.3 细胞凋亡实验 |
| 5.3.4 激光共聚焦观察细胞凋亡 |
| 5.3.5 细胞周期实验 |
| 5.3.6 细胞活性氧水平检测 |
| 5.3.7 线粒体膜电位变化测定 |
| 5.3.8 细胞内Ca~(2+)浓度测定 |
| 5.3.9 透射电镜(Transmission electron microscopy, TEM)观察细胞自噬 |
| 5.3.10 蛋白表达水平的检测 |
| 5.3.11 统计分析 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 N6-(2-羟乙基)-腺苷对人胃癌细胞SGC-7901和AGS以及人正常细胞HEK293活力的影响 |
| 5.4.2 N6-(2-羟乙基)-腺苷处理时间对人胃癌细胞SGC-7901活力的影响 |
| 5.4.3 N6-(2-羟乙基)-腺苷处理时间对人胃癌细胞AGS活力的影响 |
| 5.4.4 N6-(2-羟乙基)-腺苷对SGC-7901细胞形态的影响 |
| 5.4.5 N6-(2-羟乙基)-腺苷对人胃癌细胞凋亡的影响 |
| 5.4.6 N6-(2-羟乙基)-腺苷诱导SGC-7901细胞凋亡的共聚焦显微镜观察 |
| 5.4.7 Caspase抑制剂与N6-(2-羟乙基)-腺苷联合给药对SGC-7901细胞凋亡的影响 |
| 5.4.8 N6-(2-羟乙基)-腺苷对SGC-7901细胞活性氧(ROS)水平的影响 |
| 5.4.9 N6-(2-羟乙基)-腺苷对SGC-7901细胞线粒体膜电位的影响 |
| 5.4.10 N6-(2-羟乙基)-腺苷对SGC-7901细胞周期分布的影响 |
| 5.4.11 N6-(2-羟乙基)-腺苷对SGC-7901细胞Ca~(2+)浓度的影响 |
| 5.4.12 内质网应激抑制剂4-PBA对N6-(2-羟乙基)-腺苷诱导细胞凋亡的影响 |
| 5.4.13 N6-(2-羟乙基)-腺苷对SGC-7901细胞自噬的影响 |
| 5.4.14 自噬抑制剂3-MA对N6-(2-羟乙基)-腺苷诱导细胞凋亡的影响 |
| 5.4.15 N6-(2-羟乙基)-腺苷对SGC-7901细胞凋亡、细胞周期、内质网应激以及自噬相关蛋白表达的影响 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第6章 基于基因表达谱的N6-(2-羟乙基)-腺苷体外抗肿瘤机制研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料和仪器 |
| 6.2.1 实验仪器 |
| 6.2.2 实验材料和试剂 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 细胞培养 |
| 6.3.2 表达谱样品RNA提取 |
| 6.3.3 样品文库构建及测序 |
| 6.3.4 测序数据分析 |
| 6.3.5 差异基因正确性验证 |
| 6.4 结果与分析 |
| 6.4.1 基因测序数据过滤 |
| 6.4.2 差异基因检测 |
| 6.4.3 差异基因GO功能分析 |
| 6.4.4 差异基因Pathway功能分析 |
| 6.4.5 差异表达基因的qRT-PCR验证 |
| 6.5 讨论 |
| 6.6 小结 |
| 第7章 N6-(2-羟乙基)-腺苷的体内抗肿瘤作用及其机理研究 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 实验材料和仪器 |
| 7.2.1 实验动物 |
| 7.2.2 实验材料和仪器 |
| 7.3 实验方法 |
| 7.3.1 裸鼠移植瘤模型的建立 |
| 7.3.2 试验分区与处理 |
| 7.3.3 一般情况观察 |
| 7.3.4 肿瘤重量测定以及抑瘤率计算 |
| 7.3.5 肿瘤组织标本制备 |
| 7.3.6 苏木精伊红(Hematoxylin-eosin,H&E)染色 |
| 7.3.7 TUNEL染色 |
| 7.3.8 统计分析 |
| 7.4 结果与分析 |
| 7.4.1 N6-(2-羟乙基)-腺苷对SGC-7901细胞移植瘤模型裸鼠肿瘤体积的影响 |
| 7.4.2 N6-(2-羟乙基)-腺苷对SGC-7901细胞移植瘤模型裸鼠肿瘤重量的影响 |
| 7.4.3 N6-(2-羟乙基)-腺苷对SGC-7901细胞移植瘤模型裸鼠肿瘤抑制率的影响 |
| 7.4.4 N6-(2-羟乙基)-腺苷对SGC-7901细胞移植瘤模型裸鼠体重的影响 |
| 7.4.5 N6-(2-羟乙基)-腺苷灌胃SGC-7901细胞移植瘤模型裸鼠肿瘤组织的H&E染色情况 |
| 7.4.6 N6-(2-羟乙基)-腺苷灌胃SGC-7901细胞移植瘤模型裸鼠肿瘤组织的TUNEL染色情况 |
| 7.5 讨论 |
| 7.6 小结 |
| 第8章 以家蚕蛹为替代寄主人工培育“金蚕花”的研究 |
| 8.1 引言 |
| 8.2 实验材料和仪器 |
| 8.2.1 实验材料和试剂 |
| 8.2.2 主要仪器与设备 |
| 8.3 实验方法 |
| 8.3.1 培养基制作 |
| 8.3.2 菌种分离 |
| 8.3.3 菌种纯化 |
| 8.3.4 菌种鉴定 |
| 8.3.5 接种感染蚕蛹 |
| 8.3.6 人工培育 |
| 8.3.7 数据处理和分析 |
| 8.4 结果与分析 |
| 8.4.1 蝉花菌株的分离与纯化 |
| 8.4.2 蝉花菌株的鉴定 |
| 8.4.3 以家蚕蛹为替代宿主人工培育“金蚕花” |
| 8.4.4 接菌时期对“金蚕花”培育的影响 |
| 8.4.5 温度对“金蚕花”培育的影响 |
| 8.4.6 湿度对“金蚕花”培育的影响 |
| 8.5 讨论 |
| 8.6 小结 |
| 第9章 总结与展望 |
| 9.1 全文总结 |
| 9.2 特色与创新 |
| 9.3 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 博士期间取得的科研成果 |
（5）紫花牡荆素抑制胃癌细胞迁移与侵袭的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 Casticin对胃癌发展的影响 |
| 1.1 绪论 |
| 1.1.1 胃癌 |
| 1.1.2 胃癌的发生与转移 |
| 1.1.3 紫花牡荆素(Casticin) |
| 1.2 主要实验材料 |
| 1.2.1 细胞株 |
| 1.2.2 主要实验试剂 |
| 1.2.3 主要实验仪器 |
| 1.2.4 药物配制 |
| 1.3 主要实验方法 |
| 1.3.1 CCK-8检测 |
| 1.3.2 细胞克隆检测 |
| 1.3.3 DAPI染色检测 |
| 1.3.4 FITC-Annexin V/PI染色检测 |
| 1.3.5 细胞周期检测 |
| 1.3.6 细胞划痕检测 |
| 1.3.7 Transwell侵袭实验 |
| 1.3.8 qRT-PCR检测Casticin对MMP-2/9表达的影响 |
| 1.3.9 Western blotting检测Casticin对MMP-2/9蛋白表达的影响 |
| 1.3.10 明胶酶谱检测Casticin对MMP-2/9活性的影响 |
| 1.3.11 统计与分析 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.4.1 Casticin抑制胃癌细胞增殖 |
| 1.4.2 Casticin抑制胃癌细胞克隆形成 |
| 1.4.3 Casticin诱导胃癌细胞凋亡 |
| 1.4.4 Casticin诱导胃癌细胞周期阻滞 |
| 1.4.5 Casticin抑制胃癌细胞迁移 |
| 1.4.6 Casticin抑制胃癌细胞侵袭 |
| 1.4.7 不同浓度Casticin抑制胃癌细胞MMP-2/9 mRNA表达 |
| 1.4.8 不同浓度Casticin抑制胃癌细胞MMP-2/9蛋白表达 |
| 1.4.9 不同浓度Casticin抑制胃癌细胞MMP-2/9活性 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 Casticin通过下调MMP-2/9的表达抑制胃癌细胞侵袭转移的分子机制 |
| 2.1 绪论 |
| 2.1.1 基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs) |
| 2.1.2 MMPs和RECK的关系 |
| 2.1.3 DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase 1,DNMT1) |
| 2.1.4 蛋白磷酸酶2A (Protein Phosphatase 2A,PP2A) |
| 2.1.5 丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(Mitogen-activated extracellularsignal-regulated kinase,MEK) |
| 2.2 主要实验材料 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.2.4 药物配制 |
| 2.3 主要实验方法 |
| 2.3.1 si-RECK瞬时转染 |
| 2.3.2 过表达RECK瞬时转染 |
| 2.3.3 Western blotting检测 |
| 2.3.4 qRT-PCR检测 |
| 2.3.5 BSP检测基因启动子甲基化状态 |
| 2.3.6 统计与分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 Casticin通过消除胃癌细胞中RECK甲基化抑制MMP-2/9表达 |
| 2.4.2 PP2A表达增强可削弱RECK甲基化状态,进而促进RECK表达 |
| 2.4.3 Casticin通过促进PP2A的表达来抑制MEK活化和DNMT1的表达,进而抑制MMP-2/9表达 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 利用胃癌裸鼠成瘤模型评价Casticin的抑癌效果 |
| 3.1 绪论 |
| 3.1.1 肿瘤 |
| 3.1.2 胃癌 |
| 3.1.3 Casticin的抗肿瘤作用 |
| 3.2 主要实验材料 |
| 3.2.1 细胞株 |
| 3.2.2 试剂 |
| 3.2.3 仪器 |
| 3.3 主要实验方法 |
| 3.3.1 皮下成瘤 |
| 3.3.2 免疫组化检测 |
| 3.3.3 Western blotting检测 |
| 3.3.4 统计与分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 Casticin对体内胃癌肿瘤的抑制作用 |
| 3.4.2 Casticin可增强移植瘤小鼠体内PP2A/RECK的表达,抑制MMP-2/9表达 |
| 3.4.3 Casticin可增强移植瘤小鼠体内PP2A/RECK蛋白表达,抑制MMP-2/9蛋白表达 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 参考文献 |
| 综述 RECK基因与侵袭性癌的发展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其它研究成果 |
| 致谢 |
（6）MG53与胃泌素缓解急性肾损伤的研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一部分 MG53缓解造影剂诱导的急性肾损伤的研究 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 MG53缓解造影剂诱导的急性肾损伤的研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要实验材料 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要实验试剂及耗材 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 MG53 缓解大鼠CI-AKI |
| 2.2.2 MG53减少碘普罗胺诱导的RPT细胞凋亡 |
| 2.2.3 MG53减轻碘普罗胺诱导的RPT细胞膜损伤 |
| 2.2.4 MG53转位至胞膜并结合PS以介导膜保护作用 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 第二部分 胃泌素缓解缺血再灌注诱导的急性肾损伤的研究 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 胃泌素缓解缺血再灌注诱导的急性肾损伤的研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要实验材料 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要实验试剂 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 小鼠肾脏I/R损伤后CCKBR的表达增加 |
| 2.2.2 胃泌素缓解I/R损伤后肾功能及肾脏病理损害 |
| 2.2.3 胃泌素减少I/R诱导的肾小管细胞凋亡 |
| 2.2.4 胃泌素缓解H/R诱导的HK-2细胞活力抑制 |
| 2.2.5 胃泌素减少H/R诱导的HK-2 细胞凋亡和ROS生成 |
| 2.2.6 PI3K/Akt/Bad途径参与了胃泌素的保护作用 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 第三部分 SNX1 调控AT1R参与血压调节的初步拓展探究 |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 SNX1 调控AT1R参与血压调节的初步拓展探究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要实验材料 |
| 2.1.2 主要仪器设备与耗材 |
| 2.1.3 主要实验试剂 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 SNX1基因敲除小鼠的构建和鉴定 |
| 2.2.2 Snx1-/-小鼠血压升高、肠系膜动脉对Ang II的反应性增强 |
| 2.2.3 Snx1-/-小鼠动脉中AT1R的表达增加 |
| 2.2.4 SNX1 敲低的A10 细胞中AT1R的表达增加 |
| 2.2.5 蛋白酶体途径参与A10 细胞中SNX1 介导AT1R降解 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 急性肾损伤中细胞凋亡的研究进展 |
| 参考文献 |
| 读博士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（7）复方苦参注射液对恶性T细胞淋巴瘤作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 文献综述 |
| 文献综述一: T细胞淋巴瘤的治疗现状及进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二: 复方苦参注射液抗肿瘤作用及其机制实验研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 复方苦参注射液对恶性T细胞淋巴瘤作用机制研究 |
| 实验一 复方苦参注射液对不同淋巴瘤细胞系增殖的影响及筛选 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 实验二 复方苦参注射液对T细胞淋巴瘤Hut78、Loucy细胞周期的调节作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 实验三 复方苦参注射液对T细胞淋巴瘤Hut78、Loucy细胞凋亡的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 第三部分 复方苦参注射液对Hut78、Loucy细胞信号调控通路蛋白表达的影响 |
| 方法 |
| 结果 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 第四部分 复方苦参注射液对Hut78、Loucy细胞能量代谢的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 第五部分 复方苦参注射液对EL4淋巴瘤动物模型体内实验研究 |
| 实验一 复方苦参注射液对EL4淋巴瘤模型生存期的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 实验二 复方苦参注射液对EL4淋巴瘤模型免疫调节及肿瘤能量代谢的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
| 中医药科技查新报告书 |
（8）秦皮乙素通过氧化应激与内质网应激对SGC-7901细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 课题背景 |
| 1.2 内质网应激概述 |
| 1.2.1 内质网的生理病理机制 |
| 1.2.2 未折叠蛋白反应 |
| 1.2.3 内质网应激诱导凋亡的信号通路 |
| 1.3 氧化应激与内质网应激交互影响 |
| 1.3.1 氧化应激及其相关信号通路 |
| 1.3.2 氧化应激与内质网应激 |
| 1.4 秦皮乙素的抗肿瘤作用及其相关信号通路 |
| 1.5 本课题的来源及研究意义 |
| 1.5.1 本课题来源 |
| 1.5.2 本课题的研究目的与意义 |
| 1.6 论文研究内容 |
| 2 WesternBlot法检测人胃癌SGC-7901 细胞中内质网应激相关蛋白GRP78与CHOP的表达 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验用细胞株 |
| 2.2.2 试剂 |
| 2.2.3 耗材与仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 试剂配制 |
| 2.3.2 贴壁细胞的传代培养 |
| 2.3.3 细胞全蛋白的提取 |
| 2.3.4 蛋白定量 |
| 2.3.5 Western blot法 |
| 2.3.6 数据处理 |
| 2.4 实验结果与分析 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 秦皮乙素对人胃癌SGC-7901 细胞增殖及凋亡的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验用细胞株 |
| 3.2.2 药物 |
| 3.2.3 试剂 |
| 3.2.4 耗材与仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 试剂配制 |
| 3.3.2 MTT法检测秦皮乙素对SGC-7901 细胞增殖的影响 |
| 3.3.3 Hoechst33258 法检测秦皮乙素对SGC-7901 细胞凋亡的影响 |
| 3.3.4 数据处理 |
| 3.4 实验结果与分析 |
| 3.4.1 秦皮乙素对SGC-7901 细胞增殖的影响 |
| 3.4.2 秦皮乙素对SGC-7901 细胞凋亡的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 4 秦皮乙素通过氧化应激诱导人胃癌SGC-7901 细胞凋亡 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与仪器 |
| 4.2.1 实验用细胞株 |
| 4.2.2 药物 |
| 4.2.3 试剂 |
| 4.2.4 耗材与仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 试剂配制 |
| 4.3.2 H2DCFDA染色观察秦皮乙素对SGC-7901 细胞ROS水平的影响 |
| 4.3.3 MTT法检测NAC对秦皮乙素抑制SGC-7901 细胞增殖的影响 |
| 4.3.4 Hoechst33258 法检测NAC对秦皮乙素诱导SGC-7901 细胞凋亡的影响 |
| 4.3.5 数据处理 |
| 4.4 实验结果与分析 |
| 4.4.1 秦皮乙素对SGC-7901 细胞中ROS水平的影响 |
| 4.4.2 秦皮乙素在NAC干扰后对抑制SGC-7901 细胞增殖的影响 |
| 4.4.3 秦皮乙素在NAC干扰后对诱导SGC-7901 细胞凋亡的影响 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 秦皮乙素通过内质网应激诱导人胃癌SGC-7901 细胞凋亡 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与仪器 |
| 5.2.1 实验用细胞株 |
| 5.2.2 药物 |
| 5.2.3 试剂 |
| 5.2.4 耗材与仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 试剂配制 |
| 5.3.2 WesternBlot法检测秦皮乙素对SGC-7901 细胞中GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF-4、CHOP蛋白表达影响 |
| 5.3.3 MTT法检测TUDCA对秦皮乙素抑制SGC-7901 细胞增殖的影响 |
| 5.3.4 Hoechst33258 法检测TUDCA对秦皮乙素诱导SGC-7901 细胞凋亡的影响 |
| 5.3.5 数据处理 |
| 5.4 实验结果与分析 |
| 5.4.1 秦皮乙素对SGC-7901 细胞中GRP78、p-PERK、p-e IF2α、ATF-4、CHOP蛋白表达影响 |
| 5.4.2 秦皮乙素在TUDCA干扰后对抑制SGC-7901 细胞增殖的影响 |
| 5.4.3 秦皮乙素在TUDCA干扰后对诱导SGC-7901 细胞凋亡的影响 |
| 5.5 本章小结 |
| 6 秦皮乙素对人胃癌SGC-7901 细胞中氧化应激和内质网应激具有双重调控作用 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料与仪器 |
| 6.2.1 实验用细胞株 |
| 6.2.2 药物 |
| 6.2.3 试剂 |
| 6.2.4 耗材与仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 试剂配制 |
| 6.3.2 H2DCFDA染色观察TUDCA对秦皮乙素诱导SGC-7901 细胞中ROS水平影响 |
| 6.3.3 Western Blot法检测NAC对秦皮乙素诱导SGC-7901 细胞GRP78 蛋白表达影响 |
| 6.3.4 Western Blot法检测NAC对秦皮乙素诱导SGC-7901 细胞CHOP蛋白表达影响 |
| 6.3.5 数据处理 |
| 6.4 实验结果与分析 |
| 6.4.1 秦皮乙素在TUDCA干扰后对诱导SGC-7901 细胞中ROS水平影响 |
| 6.4.2 秦皮乙素在NAC干扰后对诱导SGC-7901 细胞中GRP78 蛋白表达影响 |
| 6.4.3 秦皮乙素在NAC干扰后对诱导SGC-7901 细胞中CHOP蛋白表达影响 |
| 6.5 本章小结 |
| 7 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（9）COX-2、PD-L1和ANXA2在腮腺良恶性肿瘤的表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 引言 |
| 第1章 实验研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验材料与分组 |
| 1.1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 实验方法 |
| 1.2.2 统计学处理 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 免疫组化染色结果 |
| 1.3.2 HE染色结果 |
| 1.3.3 在三种组织中COX-2、PD-L1和ANXA2 的表达情况及其差异性 |
| 1.3.4 在腮腺恶性肿瘤中,COX-2、PD-L1和ANXA2 的表达情况与临床因素间的关系 |
| 1.3.5 C0X-2、PD-L1和ANXA2 在恶性腮腺肿瘤中表达的相关性 |
| 1.4 讨论 |
| 1.4.1 分子水平的诊断对颌面外科肿瘤诊治的意义 |
| 1.4.2 COX-2在腮腺恶性肿瘤中差异性表达的意义 |
| 1.4.3 PD-L1在恶性腮腺肿瘤中表达差异性的意义 |
| 1.4.4 ANXA2在腮腺恶性肿瘤的差异性表达及其意义 |
| 1.4.5 COX-2、PD-L1和ANXA2 在恶性腮腺肿瘤中表达水平的关系 |
| 1.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第2章 综述 Annexin A2对癌症的作用及机制 |
| 2.1 Annexin家族 |
| 2.1.1 Annexin家族概述 |
| 2.1.2 Annexins的演变 |
| 2.1.3 Annexins的分子结构 |
| 2.1.4 Annexins的生化特性 |
| 2.2ANXA2 |
| 2.2.1 ANXA2概述 |
| 2.2.2 ANXA2基本结构 |
| 2.2.3 ANXA2的生理功能 |
| 2.2.4 ANXA2与其他蛋白的相互作用 |
| 2.2.5 ANXA2表达与癌症的关系 |
| 2.2.6 ANXA2在肿瘤细胞学行为中的表现和影响 |
| 2.2.7 对ANXA2表达调控的研究进展 |
| 2.3 本章小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 在学期间研究成果 |
（10）ZEA与DON对仔猪睾丸支持细胞的联合毒性作用及NAC的保护效应研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号注释表 |
| 文献综述 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验细胞株 |
| 1.2 试剂材料 |
| 1.3 仪器 |
| 1.4 细胞培养与溶液配制 |
| 1.4.1 细胞冻存与复苏 |
| 1.4.2 细胞的培养 |
| 1.4.3 溶液配制 |
| 1.5 ZEA与 DON对睾丸支持细胞活率及超微结构的影响 |
| 1.5.1 ZEA与 DON染毒浓度筛选 |
| 1.5.2 细胞形态学观察 |
| 1.5.3 细胞超微结构检测 |
| 1.5.4 ZO-1蛋白表达与分布检测 |
| 1.6 ZEA与 DON对睾丸支持细胞氧化损伤及细胞周期的影响 |
| 1.6.1 氧化与抗氧化指标检测 |
| 1.6.2 线粒体膜电位的检测 |
| 1.6.3 细胞周期的检测 |
| 1.7 ZEA与 DON对睾丸支持细胞凋亡的影响 |
| 1.7.1 细胞凋亡率的检测 |
| 1.7.2 凋亡相关基因的表达水平检测 |
| 1.7.3 凋亡相关蛋白的检测 |
| 1.8 NAC的保护效应研究 |
| 1.8.1 NAC浓度筛选 |
| 1.8.2 细胞形态学观察 |
| 1.8.3 细胞超微结构检测 |
| 1.8.4 ZO-1蛋白表达与分布检测 |
| 1.8.5 氧化与抗氧化指标检测 |
| 1.8.6 线粒体膜电位检测 |
| 1.8.7 细胞周期检测 |
| 1.8.8 细胞凋亡率检测 |
| 1.8.9 凋亡相关蛋白表达水平检测 |
| 1.8.10 凋亡相关基因表达水平检测 |
| 1.9 数据处理与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 ZEA与 DON对睾丸支持细胞活率及超微结构的影响 |
| 2.1.1 ZEA与 DON攻毒浓度筛选与分组 |
| 2.1.2 ZEA与 DON对细胞形态的影响 |
| 2.1.3 ZEA与 DON对细胞超微结构的影响 |
| 2.1.4 ZEA于 DON对睾丸支持细胞ZO-1 蛋白的影响 |
| 2.2 ZEA与 DON对睾丸支持细胞氧化损伤及细胞周期的影响 |
| 2.2.1 ZEA与 DON对睾丸支持细胞氧化与抗氧化指标的影响 |
| 2.2.2 线粒体膜电位的检测 |
| 2.2.3 细胞周期的检测 |
| 2.3 ZEA与 DON对睾丸支持细胞凋亡的影响 |
| 2.3.1 ZEA与 DON对睾丸支持细胞凋亡率的影响 |
| 2.3.2 ZEA与 DON对睾丸支持细胞凋亡相关基因表达量的影响 |
| 2.3.3 ZEA与 DON对睾丸支持细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响 |
| 2.4 NAC对 ZEA与 DON联合毒性的保护效应 |
| 2.4.1 NAC、ZEA与 DON对细胞活率的影响及分组 |
| 2.4.2 NAC、ZEA与 DON对细胞形态的影响 |
| 2.4.3 NAC、ZEA与 DON对细胞超微结构的影响 |
| 2.4.4 NAC、ZEA与 DON对睾丸支持细胞ZO-1 蛋白的影响 |
| 2.4.5 NAC、ZEA与 DON对氧化损伤指标与细胞周期的影响 |
| 2.4.6 NAC、ZEA与 DON对细胞凋亡的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 ZEA与 DON对睾丸支持细胞活率及超微结构的影响 |
| 3.2 ZEA与 DON对睾丸支持细胞氧化损伤及细胞周期的影响 |
| 3.3 ZEA与 DON对睾丸支持细胞凋亡的影响 |
| 3.4 NAC对 ZEA与 DON联合毒性的保护效应 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
四、N-乙酰半胱氨酸对胃腺癌细胞株增殖凋亡及细胞内Ca~(2+)浓度的影响（论文参考文献）
- [1]盐霉素对耐顺铂人胃癌细胞增敏作用及其机制研究[D]. 韩笑. 延安大学, 2021(09)
- [2]阿卡宁所致DNA氧化损伤与PARP抑制剂在结直肠癌细胞中形成的协同致死作用研究[D]. 常明鑫. 吉林大学, 2021(01)
- [3]新型NO供体聚合物紫杉醇胶束的制备及抗肿瘤作用和机制研究[D]. 李惠兰. 江西中医药大学, 2021(01)
- [4]蝉花活性成分抗肿瘤作用机制及以蚕蛹为替代寄主人工培育技术的研究[D]. 解鸿青. 浙江大学, 2021(01)
- [5]紫花牡荆素抑制胃癌细胞迁移与侵袭的机制研究[D]. 阳帆. 南方医科大学, 2020(06)
- [6]MG53与胃泌素缓解急性肾损伤的研究[D]. 刘超. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020(07)
- [7]复方苦参注射液对恶性T细胞淋巴瘤作用机制研究[D]. 郑佳彬. 中国中医科学院, 2020(01)
- [8]秦皮乙素通过氧化应激与内质网应激对SGC-7901细胞凋亡的影响[D]. 颜廷华. 哈尔滨商业大学, 2020(11)
- [9]COX-2、PD-L1和ANXA2在腮腺良恶性肿瘤的表达[D]. 常渊. 华北理工大学, 2020(02)
- [10]ZEA与DON对仔猪睾丸支持细胞的联合毒性作用及NAC的保护效应研究[D]. 朱雷. 安徽农业大学, 2020(04)