一、乙醇对大鼠肝细胞和脑神经细胞超微结构的影响（论文文献综述）
姚奇鹏,廖敏[1]（2022）在《电针干预对缺血再灌注模型大鼠的神经保护与神经调节蛋白1/表皮生长因子受体4信号通路的关系》文中提出背景:电针干预曲池、足三里穴位能够起到神经保护作用,改善患者的运动功能,然而针对其作用机制的深入研究则相对较少。目的:基于神经调节蛋白1/表皮生长因子受体4信号通路观察电针干预对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的神经保护作用。方法:取90只SPF级雄性Wistar大鼠,采用改良线栓法制备脑缺血再灌注损伤大鼠模型,并随机分为模型组、非穴位组和穴位组;另取30只大鼠只予以左侧颈部血管的分离作为假手术组。造模后3 h,非穴位组用电针刺激右侧肢体腋横纹下和尾骨尖下3 mm的非穴位处,穴位组用电针刺激曲池和足三里,共治疗7 d;假手术组和模型组不予任何治疗,只进行与治疗组相同条件的抓取与固定。造模完成后,以神经功能缺损评分进行模型评价;治疗结束后评价各组大鼠的神经功能缺损评分;检测缺血侧局部脑血流量和血流速度;TTC染色观察并计算脑梗死体积;电镜观察神经元的超微结构;TUNEL染色观察神经细胞凋亡情况;Western blotting检测神经调节蛋白1/表皮生长因子受体4通路蛋白表达水平。结果与结论:（1）与假手术组相比,模型组和非穴位组大鼠的神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经细胞凋亡率、神经调节蛋白1、表皮生长因子受体4蛋白表达水平明显升高,脑血流量、脑血流速度明显下降（P <0.05）,神经元超微结构异常,模型组与非穴位组间差异无显着性意义（P> 0.05）;（2）与模型组相比,穴位组大鼠的神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经细胞凋亡率明显下降,脑血流量、脑血流速度、神经调节蛋白1、表皮生长因子受体4蛋白表达水平明显上升（P <0.05）,神经元超微结构明显改善;（3）说明电针刺激曲池、足三里穴位能够明显改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能缺损状态和脑神经元超微结构,抑制神经细胞凋亡,起到神经保护作用,其机制可能与神经调节蛋白1/表皮生长因子受体4信号通路的调控有关。
刘鑫[2]（2021）在《基于核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α研究酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠中枢SCN昼夜节律及能量代谢的并联调控机制》文中进行了进一步梳理目的:查阅、整理失眠、昼夜节律、能量代谢与酸枣仁汤的相关文献,结合本课题组前期研究基础,本课题拟进一步深入探索老年失眠模型中枢SCN系统昼夜节律与相应不同部位（脑、心、肝）组织细胞线粒体能量代谢的相关性,阐明中医病机“肝血不足,阴虚内扰”造成心烦不寐的科学内涵,探索“养血滋阴安神”治法代表方酸枣仁汤对昼夜节律及能量代谢的并联调控机制。方法:1将80只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、阳性对照组(0.26mg·kg-1·d-1)、酸枣仁汤高、低剂量组(18.72 g·kg-1·d-1、9.36g·kg-1·d-1),给药体积均为0.2m L·10g-1,每日一次,连续7d,空白对照组给予等体积生理盐水,于末次给药30min后,分别进行戊巴比妥钠阈下和阈上睡眠实验,观察酸枣仁汤的镇静催眠作用。2将50只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组(0.18mg·kg-1·d-1)、酸枣仁汤高、低剂量组(12.96 g·kg-1·d-1、6.48 g·kg-1·d-1),除空白对照组外,其余各组均皮下注射D-半乳糖,各组大鼠按0.125g·kg-1·d-1剂量给药,给药容量均为0.5m L·100g-1,每日一次,连续42天,于末次给药结束后进行多平台水环境慢性睡眠剥夺,每天剥夺18h,连续剥夺21天,制作老年慢性快动眼睡眠剥夺模型,造模结束后各组开始灌胃给药,给药容量均为2m L·100g-1,每日一次,连续7d,空白对照组、模型对照组给予等体积的生理盐水。采用自主活动仪检测酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠自主活动的影响,采用Real-Time PCR和免疫组化法分别检测各组大鼠下丘脑生物钟基因Clock、Bmal1和钟控基因Rev-erbα、Rorα的m RNA和蛋白表达水平,观察酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠昼夜节律的影响。3采用Real-Time PCR、Western-blot分别检测各组大鼠下丘脑核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1αm RNA和蛋白表达水平,观察酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠下丘脑核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1αm RNA的影响。4采用透射电镜观察各组大鼠中枢下丘脑线粒体形态,采用比色法检测各组大鼠下丘脑ATP含量,采用分光光度法检测检测各组大鼠中枢下丘脑中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,Western blot法检测各组大鼠中枢下丘脑细胞Cyt C、Bcl-2、Bax及Caspase 3表达水平,观察酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠中枢下丘脑线粒体能量代谢的影响。5采用透射电镜观察各组大鼠心脏线粒体形态,采用比色法检测各组大鼠心肌ATP含量,采用分光光度法检测各组大鼠心肌丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性,采用Real-Time PCR法检测各组大鼠心肌去乙酰化酶沉默信息调节因子3（SIRT3）、锰超氧化物歧化酶（SOD2）m RNA表达水平,采用Western Blot法检测各组大鼠心肌SIRT3、SOD2的蛋白质表达水平,采用免疫荧光染色法检测各组大鼠心肌SIRT3的定位表达,观察酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠心肌线粒体能量代谢的影响。6采用透射电镜观察各组大鼠肝脏线粒体形态,采用比色法检测各组大鼠肝脏ATP含量,采用比色法检测各组大鼠肝脏线粒体呼吸链复合物Ⅰ-Ⅳ活性,采用Western Blot法检测各组大鼠肝脏CS、IDH、ATP5F1蛋白的表达水平,观察酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠肝脏线粒体能量代谢的影响。结果:1与空白对照组比较,酸枣仁汤高剂量组、阳性对照组入睡率显着增加,睡眠潜伏期显着缩短,入睡时间显着延长（P<0.01）,酸枣仁汤低剂量组无显着性差异（P>0.05）。2与空白对照组比较,模型对照组大鼠光照环境活动路程、时间,黑暗环境活动路程、时间,总活动路程、时间均显着增加（P<0.01）,Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα的m RNA和蛋白表达水平显着降低（P<0.01）;与模型对照组比较,阳性对照组、酸枣仁汤高剂量组光照环境活动路程、时间,黑暗环境路程、时间,总活动路程、时间均显着减少（P<0.05,P<0.01）,Clock、Bmal、Rev-erbα、Rorα的m RNA和蛋白表达水平显着升高（P<0.01）;酸枣仁汤低剂量组Bmal1、Rorα的m RNA表达显着升高（P<0.05,P<0.01）,Clock、Rev-erbα的m RNA表达水平,光照环境活动路程、时间,黑暗环境路程、时间,总活动路程、时间,Clock、Bmal、Rev-erbα、Rorα的蛋白表达水平无显着性差异（P>0.05）。3与空白对照组比较,模型对照组大鼠下丘脑核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1αm RNA与蛋白表达水平显着降低（P<0.01）;与模型对照组比较,阳性对照组、酸枣仁汤高剂量组核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1αm RNA与蛋白表达水平显着升高（P<0.05,P<0.01）,酸枣仁汤低剂量组PGC-1αm RNA表达显着升高（P<0.01）,PGC-1α蛋白、PPARγm RNA与蛋白表达无显着性差异（P>0.05）。4透射电子显微镜下可见,空白对照组大鼠下丘脑线粒体未见明显病理改变,大小适中,形态多呈椭圆或梭形,嵴排列较整齐。模型对照组线粒体形态异常,线粒体发生明显肿胀并且伴有空泡化,出现了“髓鞘样”,嵴发生断裂且数量减少;与模型对照组比较,阳性对照组、酸枣仁汤高剂量组线粒体损伤减轻,空泡化现象减少,部分嵴断裂,并未出现明显肿胀,酸枣仁汤低剂量组未见明显改善。与空白对照组比较,模型对照组下丘脑ATP含量、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性、Bcl-2蛋白显着降低（P<0.01）,Cyt C、Bax、Caspase3蛋白表达水平显着升高（P<0.01）;与模型对照组比较,阳性对照组、酸枣仁汤高剂量组下丘脑ATP含量、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性、Bcl-2蛋白表达水平显着升高（P<0.05,P<0.01）,Cyt C、Bax、Caspase 3蛋白表达水平显着降低（P<0.01）,酸枣仁汤低剂量组Na+-K+-ATP酶活性、Bcl-2蛋白表达水平显着升高（P<0.05,P<0.01）,Bax蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,Cyt C、Caspase 3蛋白表达水平无显着性差异（P>0.05）。5透射电子显微镜下可见,空白对照组大鼠心肌细胞结构清楚,粗细肌丝排列整齐、有序,细胞核形态规整,大小相对均一的线粒体在肌丝之间密集分布,线粒体形状多为圆形或椭圆形,线粒体膜完整,线粒体嵴保存相对完好;模型对照组大鼠心肌组织肌丝排列紊乱,伴有肌丝断裂与溶解,线粒体肿胀明显,线粒体排列紊乱,多数线粒体嵴模糊甚至断裂;与模型对照组比较,阳性对照组、酸枣仁汤高剂量组肌丝排列较整齐,线粒体损伤减轻,仅见部分嵴断裂,肿胀程度亦相对较轻,酸枣仁汤低剂量组未见明显改善。与空白对照组比较,模型对照组大鼠心肌ATP含量、SOD活性、SIRT3、SOD2 m RNA与蛋白表达水平显着降低（P<0.01）,MDA含量显着升高（P<0.01）;与模型对照组比较,酸枣仁汤高剂量组大鼠心肌ATP含量、SOD活性、SIRT3、SOD2 m RNA与蛋白表达水平显着升高（P<0.05,P<0.01）,MDA含量显着降低,阳性对照组SOD活性、SIRT3、SOD2 m RNA与蛋白表达水平显着升高（P<0.05,P<0.01）,MDA含量显着降低（P<0.01）,ATP含量,SIRT3平均荧光强度无显着性差异（P>0.05）,酸枣仁汤低剂量组SOD活性、SOD2蛋白表达水平显着升高（P<0.05,P<0.01）,ATP、MDA含量,SIRT3、SOD2 m RNA表达,SIRT3平均荧光强度无显着性差异（P>0.05）。6透射电子显微镜下可见,空白对照组大鼠肝脏内线粒体形态规则,大小适中,多呈圆形或椭圆形,排列较整齐,模型对照组大鼠肝脏内线粒体出现异常,线粒体发生肿胀、变形,嵴断裂并且数量有一定的减少,与模型对照组比较,阳性对照组、酸枣仁汤高、低剂量组线粒体损伤减轻,肿胀、变形情况减少,嵴断裂减少。与空白对照组比较,模型对照组大鼠肝脏ATP含量、线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性、IDH、CS、ATP5F1蛋白表达水平显着降低（P<0.01）;与模型对照组比较,酸枣仁汤高剂量组大鼠肝脏ATP含量、线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性、IDH、CS、ATP5F1蛋白表达显着升高（P<0.01）,阳性对照组大鼠肝脏ATP含量、线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅲ活性、CS、ATP5F1蛋白表达水平显着升高（P<0.05,P<0.01）,Ⅱ、Ⅳ活性,IDH蛋白表达水平无显着性差异（P>0.05）,酸枣仁汤低剂量组大鼠肝脏线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅲ活性、ATP5F1蛋白表达显着升高（P<0.01,P<0.05）,Ⅱ、Ⅳ活性,IDH、CS蛋白表达水平无显着性差异（P>0.05）。结论:1酸枣仁汤具有良好的镇静催眠作用。2酸枣仁汤可以改善老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠昼夜节律。3酸枣仁汤可以使大鼠下丘脑核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α表达增加。4酸枣仁汤可以改善老年慢性快动眼睡眠剥夺诱导的大鼠下丘脑能量代谢异常,抑制神经细胞凋亡,保护下丘脑神经细胞。5酸枣仁汤可以改善老年慢性快动眼睡眠剥夺诱导的大鼠心肌细胞线粒体损伤、能量代谢异常,保护心肌细胞。6酸枣仁汤可以改善老年慢性快动眼睡眠剥夺诱导的大鼠肝脏能量代谢异常,恢复线粒体正常功能,保护肝脏。7酸枣仁汤有可能基于下丘脑核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α表达增加,改善老年慢性快动眼睡眠剥夺诱导的大鼠昼夜节律,进而调控大鼠脑、心、肝的能量代谢,以此改善睡眠。
曹智怡[3]（2021）在《基于内质网应激PERK-ATF4-CHOP通路探讨对药酸枣仁-合欢花抗抑郁作用机制》文中研究说明目的:基于内质网应激PERK-ATF4-CHOP通路,探讨对药酸枣仁-合欢花抗抑郁作用的机制。方法:将健康的雄性SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,盐酸文拉法辛组（0.008g/kg）和对药酸枣仁-合欢花高（16g/kg）、中（8g/kg）、低剂量（4g/kg）组,共6组,每组15只。除正常组外,其它5组用慢性不可预见性温和应激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）结合孤养的方法制备抑郁大鼠模型。造模同时,正常组和模型组按10ml/kg体重灌胃等体积的蒸馏水,其余各组灌胃等体积的相应药物悬浊液,持续21天。在造模前1天和造模第21天进行旷场实验和糖水偏爱度实验,观察各组大鼠的行为学变化。在造模第21天行为学检测结束后,对大鼠进行解剖取材,在透射电镜下观察各组大鼠的海马神经元超微结构变化,用TUNEL法观察各组大鼠海马区神经元凋亡情况,用蛋白质免疫印迹法（Western blot）观察各组大鼠海马组织PERK、CHOP、Bax、Caspase-3的蛋白表达水平。结果:旷场实验显示,与正常组比较,模型组大鼠水平运动和直立次数得分下降（P<0.01）。与模型组比较,对药酸枣仁-合欢花高、中、低剂量组及盐酸文拉法辛组大鼠水平运动得分、直立次数得分升高（P<0.01）。对药酸枣仁-合欢花中剂量组水平运动和直立次数得分高于其他剂量对药酸枣仁-合欢花组（P<0.01）。糖水偏爱度显示,与正常组比较,模型组大鼠糖水偏爱度下降（P<0.01）。与模型组比较,对药酸枣仁-合欢花高、中、低剂量组和盐酸文拉法辛组大鼠糖水偏爱度均升高（P<0.01）。对药酸枣仁-合欢花中剂量组糖水偏爱度高于其他剂量对药酸枣仁-合欢花组（P<0.01）。透射电镜显示,模型组大鼠海马区神经元受损明显,对药酸枣仁-合欢花高、中、低剂量组及盐酸文拉法辛组大鼠海马区神经元损伤较轻。TUNEL显示,模型组大鼠海马区神经元凋亡细胞数量增加（P<0.01）,对药酸枣仁-合欢花高、中、低剂量组及盐酸文拉法辛组大鼠海马区神经元凋亡细胞数量减少（P<0.01）。对药酸枣仁-合欢花中剂量组大鼠海马区神经元凋亡细胞数量低于其他剂量对药酸枣仁-合欢花组（P<0.01）。Western blot显示,与正常组大鼠比较,模型组大鼠海马PERK、CHOP、Bax、Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。相较于模型组,对药酸枣仁-合欢花高、中、低剂量组和盐酸文拉法辛组大鼠海马PERK、CHOP、Bax、Caspase-3蛋白表达水平均降低（P<0.05或P<0.01）,对药酸枣仁-合欢花中剂量组大鼠海马PERK、CHOP、Bax、Caspase-3蛋白表达水平低于其他剂量对药酸枣仁-合欢花组（P<0.01）。结论:1.采用CUMS结合孤养的方法可以成功建立抑郁大鼠模型,表现为旷场实验得分降低、糖水偏爱度下降。抑郁模型状态持续时间较长且稳定,具有较高的应用价值。2.抑郁大鼠的抑郁样行为可能与大鼠海马组织中内质网应激相关,对药酸枣仁-合欢花可以改善抑郁大鼠的抑郁样行为。3.对药酸枣仁-合欢花可以改善抑郁大鼠海马神经元受损情况,并减少海马神经元细胞的凋亡。4.对药酸枣仁-合欢花可能通过调节PERK-ATF4-CHOP信号通路中的相关因子表达而发挥抗抑郁作用,以中剂量为佳。5.具有疏肝解郁、宁心安神的对药酸枣仁-合欢花能够通过心、肝二脏发挥抗抑郁作用。
谭爱华[4]（2021）在《痰瘀同治 清热解毒法防治AD的理论探讨及其调控HSP70介导的神经保护机制研究》文中研究表明目的:通过理论研究初步提出较为系统的AD病变全过程的病机演变规律,探析由因虚生热和痰瘀化热导致的“热”推动AD病变发展这一重要病机,及AD病理变化的四个关键过程:“虚生痰瘀-痰瘀化热-热结酿毒-毒损脑络”,探讨AD病理进程中的“热”和“毒”的理论内涵,梳理痰瘀同治、清热解毒法防治AD的理论依据。通过实验研究探索建立稳定可靠的AD-痰瘀互结病证结合动物模型,解析痰瘀同治、清热解毒法对AD-痰瘀互结病证结合动物模型的干预作用及其可能的作用机制,阐明痰、瘀在AD的病理变化过程中存在“化热”这一关键过程,并尝试揭示“痰瘀化热酿毒”“毒损脑络”的生物学过程以及“热”和“毒”可能的生物学基础,初步证实痰瘀同治、清热解毒法可通过调控HSP70介导的神经保护机制发挥改善脑神经炎症、改善海马神经元突触结构和可塑性、抑制神经元凋亡等作用。方法:1、理论研究方法:以《古今图书集成医部全录》、《四库全书》子部、《中华医典》（第5版）为主要工具,综合古今医家之言,系统梳理虚、痰、瘀及痰瘀互结、化热酿毒、毒损脑络这些因素和环节与AD的关联,整理中医学对AD病变全过程的病机演变认识,探析“热”和“毒”的理论内涵,梳理痰瘀同治、清热解毒法防治AD的的理论依据。2、实验研究方法:（1）以3月龄APP/PS1双转基因小鼠作为AD的疾病模型动物,用D12492高脂饮食饲喂,改变其血脂指标,以模拟中医“痰”证的病理状态;用0℃冰水浴处理,改变其血液流变指标,以模拟中医“瘀”证的病理状态;二者结合模拟同时存在“痰”“瘀”的病理状态,分别建立AD-痰、瘀、痰瘀互结病证结合动物模型。通过比较各组小鼠的学习与记忆能力,舌色客观变化,以及血脂、血液流变学、脑神经炎症、AD相关病理变化的指标来评价模型,探索建立稳定可靠的AD-痰、瘀、痰瘀互结病证结合动物模型。（2）复制AD-痰瘀互结证病证结合动物模型,分为5个组:不予给药处理的模型组、给予痰瘀同治的益智温胆汤组、给予清热解毒的黄连解毒汤组、同时给予痰瘀同治和清热解毒的益智温胆汤+黄连解毒汤组,以及作用机制对照药物替普瑞酮组,并以同系遗传背景的非转基因C57小鼠作为空白对照组,分别处理40天。Morris水迷宫法检测各组小鼠学习记忆能力;刚果红染色法、甘氨酸镀银染色法、透射电镜法、高尔基染色法等方法分别观察各组小鼠海马区SP、NFTs、神经元超微结构变化、突触和树突棘的改变等;使用免疫荧光标记法,Western Blot法检测各组小鼠海马组织内相关蛋白的表达和共定位关系,比较各组小鼠的病理改变、脑神经炎症、凋亡、突触、线粒体功能等的变化情况。结果:1、实验一结果（1）Morris水迷宫:与AD-Model组比较,各组小鼠的平均游泳速度差异无统计学意义。Control组小鼠游泳总路程和上平台潜伏期明显更短,穿越平台次数明显更多,其余各组小鼠的游泳总路程、上平台潜伏期和穿越平台次数差异无统计学意义。（2）舌色对比:与AD-Model组小鼠相比,Control组小鼠舌色偏淡红,其余各组小鼠舌色偏暗红。AD-Pbs组小鼠的舌色r值最小。（3）血液流变学指标检测:与AD-Model组小鼠相比,Control组小鼠全血黏度和血浆黏度更低。其余各组小鼠的全血黏度和血浆黏度均有不同程度升高。而与AD-Model组小鼠相比,AD-Bss组和AD-Pbs组小鼠的全血黏度和血浆黏度更高。（4）血脂指标检测:与AD-Model组小鼠相比,Control组小鼠血脂指标差异无统计学意义。其余各组小鼠的血脂指标均有不同程度升高,与AD-Model组小鼠相比,AD-Ps组和AD-Pbs组小鼠的各项血脂指标更高,但其差异不具有统计学意义。（5）Western Blot:与Control组小鼠相比,各组小鼠的海马组织TNF-α、IL-1β和T-Tau均明显升高。与AD-Model组小鼠比较,AD-Pbs组小鼠海马组织中的TNF-α、IL-1β和T-Tau的差异具有统计学意义。2、实验二结果:（1）Morris水迷宫:与Control组比较,各组小鼠游泳总路程和上平台潜伏期明显延长,穿越平台次数明显减少。与Model组比较,各组小鼠平均游泳速度差异无统计学意义,各给药组小鼠游泳总路程和上平台潜伏期均缩短,穿越平台次数有不同程度的增加。（2）跳台实验:与Control组比较,各组小鼠潜伏期明显缩短、出错次数增加;与Model组比较,各给药组小鼠潜伏期延长、出错次数减少。3、实验三结果:（1）刚果红染色:Control组小鼠海马区和皮层中几乎没有观察到SP,而Model组小鼠海马区和皮层中散在分布着许多SP,各给药组SP均有不同程度的减少。（2）甘氨酸银浸镀:与Control组小鼠相比,Model组小鼠海马区染色明显加深,镜下可见大量被染成黑色条状的NFTs,以CA3区最为明显;各给药组小鼠海马区的NFTs有不同程度减少。（3）透射电镜:Control组小鼠海马神经元细胞结构完整,染色质团聚在核内,线粒体丰富,核糖体和粗面内质网均匀散在分布在胞质中。Model组小鼠海马神经元出现细胞死亡现象,镜下可见细胞核塌陷,边界破解甚至消失,染色质固缩或消失,视野内可见若干凋亡小体分布,线粒体数量明显减少,且大部分线粒体出现肿胀甚至破裂,粗面内质网结构松散,仅可见少量零星分布的核糖体。各给药组小鼠海马神经元也存在不同程度的损伤,但细胞核整体形态正常、结构完整,镜下可见部分线粒体肿胀,粗面内质网排列松散,核糖体减少等现象。（4）Western Blot:与Control组小鼠比较,各组小鼠总Tau蛋白和三个不同位点磷酸化的Tau蛋白含量均有不同程度的升高,与Model组小鼠相比,各给药组小鼠总Tau蛋白和三个不同位点磷酸化的Tau蛋白均有不同程度的减少。4、实验四结果:（1）免疫荧光:与Control组小鼠相比:Model组小鼠海马区Aβ1-42、GFAP、Iba-1、的荧光数量和强度均明显上升,DG区Aβ1-42蛋白的周围分布着大量的GFAP蛋白和Iba-1蛋白;PSD95荧光数量和强度明显减少;Model组小鼠皮层和海马区均可见大量HSP70荧光,各给药组小鼠皮层和海马各个区域的HSP70荧光数量和强度均有不同程度的增强,CA3区和DG区更为明显。与Model组小鼠相比,各个给药组小鼠海马区Aβ1-42蛋白、GFAP蛋白和Iba-1蛋白荧光数量和荧光强度均不同程度的降低,PSD95荧光数量和强度有不同程度增加。（2）HSP70和Aβ1-42、Tau荧光共定位:胞内外均可见由HSP70的红色荧光和Aβ1-42的绿色荧光重叠的黄色荧光。由红色荧光的HSP70和绿色荧光的Tau重叠的黄色荧光,几乎都分布在胞外。（3）Western Blot:与Control组相比:Model组小鼠海马组织中的TNF-α、IL-1β、IL-10等脑神经炎症指标和HSF1、HSP70均明显上升;各组小鼠Bcl-2蛋白表达均有不同程度的下调、Bax蛋白和c-Caspase-3蛋白表达均有不同程度的上调、均有不同程度的上调,Model组小鼠尤其明显,而YZ+HL组与Control组的差异不具有统计学意义;Model组小鼠海马组织中的均明显上升。与Model组相比:各给药组小鼠海马组织中的促炎因子TNF-α、IL-1β有明显的下调,IL-10除GGA组的差异具有统计学意义外,其余各给药组与Model组的差异均无统计学意义;各给药组小鼠的Bcl-2蛋白均有上调,Bax蛋白和c-Caspase-3蛋白均有下调;YZ+HL组和GGA组小鼠海马组织中HSF1有明显的上调;其余各给药组与Model组相比,HSP70蛋白的差异均具有高度统计学意义;对YZ+HL和GGA组进行LSD分析,两者在HSF1表达的差异具有统计学意义,HSP70表达的差异无统计学意义。（4）高尔基染色:与Control组比较,Model组小鼠脑组织中神经元数量和树突棘均明显减少,镜下可见CA3和DG区的神经元丢失情况最为明显。与Model组相比,各给药组小鼠脑组织中神经元数量、树突棘数量均有不同程度的增多,各给药组海马区神经元树突棘均有明显增加,其差异均具有统计学意义。结论:1、虚是AD发生的根本,痰、瘀是AD的病理过程中的重要推动因素,痰瘀化热酿毒进一步加速了AD的发生发展。“虚生痰瘀-痰瘀化热-热结酿毒-毒损脑络”是AD发生发展的四个关键过程。2、起于病之始的“因虚生热”和现于病之中的“痰瘀化热”导致了“热”可能是推动AD病变发展的重要因素。3、痰瘀热化酿毒,毒损脑络是AD的最终环节。“痰瘀化热酿毒”的生物学过程可能是错误折叠沉积的Aβ蛋白和异常磷酸化的Tau过度活化了小胶质细胞和星形胶质细胞,诱发了脑神经炎症,促进了SP和NTFs的形成;“毒损脑络”的生物学过程可能是具有神经毒性的寡聚态Aβ蛋白、异常磷酸化的Tau和它们引起的各种致炎因子释放,导致了神经元的凋亡和突触的损伤。“毒”的生物学基础可能是神经损害性错误折叠沉积的Aβ蛋白形成SP和异常磷酸化的Tau形成的NTFs;“热”的生物学基础可能是脑神经炎症反应过程中产生和释放的各种致炎因子。4、痰瘀同治、清热解毒法可以有效改善AD-痰瘀模型小鼠的学习记忆能力和病理改变,其可能的作用机制是通过调控HSP70介导的神经保护机制,抑制了Aβ的生成和沉积、Tau的异常磷酸化,进而抑制了星形胶质细胞和小胶质细胞的激活,减轻了脑神经炎反应,减少了神经元的凋亡,保护了海马神经元和树突棘,发挥了神经保护作用。
张丽凤[5]（2020）在《五味子乙素对慢性酒精中毒大鼠学习记忆的影响及其分子机制的研究》文中研究表明目的:观察五味子乙素（Schisandrin B,Sch B）对慢性酒精中毒大鼠学习记忆障碍的影响,探讨五味子乙素改善慢性酒精中毒大鼠学习记忆障碍的可能作用机制,为慢性酒精中毒导致学习记忆障碍的防治提供理论和实验依据。方法:（1）65只成年清洁级Wistar雄性大鼠,随机选取13只每天灌胃蒸馏水,作为空白对照组。另外52只大鼠每日以56°北京红星二锅头白酒灌胃,连续8w,建立慢性酒精中毒动物模型,于酒精戒断24h后,对动物进行评分,判定慢性酒精中毒模型复制是否成功;将动物模型建立成功的52只大鼠随机分为酒精中毒模型组、Sch B低剂量组、Sch B中剂量组、Sch B高剂量组,每组均13只;酒精中毒模型组每天只给白酒灌胃,Sch B低剂量组、Sch B中剂量组、Sch B高剂量组每天白酒灌胃30 min后,分别按10mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg给予Sch B灌胃,1天1次,连续30天。（2）采用Morris水迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力。（3）应用HE染色观察各组大鼠海马CA1区神经元形态改变。（4）应用透射电镜观察各组大鼠海马CA1区神经元的超微结构及测定突触结构的形态参数。（5）应用免疫组化检测各组大鼠海马CA1区突触后致密蛋白95（Postsynaptic density protein-95,PSD-95）、突触素（Synaptophysin,SYN）的表达。（6）应用Western Blot检测各组大鼠海马组织中的PSD-95、SYN蛋白的表达。结果:（1）Morris水迷宫实验结果显示,与空白对照组相比,酒精中毒模型组空间探索实验潜伏期明显变长,而平台穿越次数减少（P<0.05）;与酒精中毒模型组比,Sch B低剂量组、Sch B中剂量组、Sch B高剂量组空间探索实验潜伏期均缩短,而平台穿越次数增多,以Sch B高剂量组变化明显（P<0.05）。（2）HE染色结果显示:与空白对照组相比,酒精中毒模型组海马组织结构异常,海马区神经元排列紊乱,大量神经元胞核异形,染色质深染,病变严重;与酒精中毒模型组相比,Sch B低剂量组、Sch B中剂量组、Sch B高剂量组海马组织结构异常较轻,细胞排列无明显紊乱,病变减轻,以Sch B中剂量组、Sch B高剂量组变化明显。（3）透射电镜观察到酒精中毒模型组大鼠海马组织神经细胞水肿,细胞核肿胀,细胞器减少,线粒体明显肿胀,突触小体肿胀严重,间隙变宽,突触后膜致密物质不均,突触数量明显减少;通过Sch B干预后,神经细胞胞质丰富,细胞器增多,细胞损伤程度降低,突触小体水肿程度较低,突触间隙清晰,突触后致密区增厚,突触界面较长,突触数量增加。（4）免疫组化结果显示,与空白对照组比较,酒精中毒模型组PSD-95、SYN表达显着减少（P<0.05）;与酒精中毒模型组比较,Sch B低剂量组、Sch B中剂量组、Sch B高剂量组PSD-95、SYN表达均增多,Sch B高剂量组增多明显（P<0.05）。（5）Western Blot实验结果显示,与空白对照组比较,酒精中毒模型组PSD-95、SYN蛋白表达降低（P<0.05）;与酒精中毒模型组相比,Sch B低剂量组、Sch B中剂量组、Sch B高剂量组海马组织中的PSD-95、SYN蛋白表达均升高,Sch B高剂量组中表达水平升高明显（P<0.05）。结论:慢性酒精中毒可引起大鼠学习记忆能力障碍,其可能与海马组织中PSD-95和SYN蛋白表达下降、突触数量减少、突触间隙变宽、突触后膜致密物质变薄有关;五味子乙素可能通过上调大鼠海马组织中的PSD-95、SYN蛋白表达,影响突触结构与传递效能,促进神经细胞突触可塑性,进而改善学习和记忆,这可能是五味子乙素改善慢性酒精中毒大鼠学习记忆能力障碍的分子机制。
张晓岩[6]（2020）在《西红花苷预处理保护急性高原缺氧大鼠脑海马神经元的SIRT1/PGC-1a机制研究》文中指出背景及目的:青藏高原,平均海拔4000米以上,号称“世界屋脊”。但是由于空气稀薄、大气压低、紫外线强等因素导致大部分高原地区自然环境十分恶劣。而急性暴露于高原低压低氧环境下,存在着的发生高原疾病风险。人体在高原急性低氧等环境因素影响下会发生一系列的生理病理改变,其中急性低氧环境是导致这些改变的最主要因素。脑是机体最主要的耗氧器官之一,在急性缺氧状态下对缺氧损害具有很高的敏感性,尤其是脑海马结构和功能的损伤最明显。因此如何通过药物预防这种病理性损伤是高原医学脑科学的研究热点。沉默调节蛋白1（Silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1）为依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）的去乙酰化酶。SIRT1通过调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助因1α（peroxisome proliferators activated receptorγcoactivator 1α,PGC-1α）等相关因子在细胞线粒体生物合成、细胞的凋亡、组织细胞抗氧化以及在延长细胞寿命方面都起到了非常重要的调控作用。西红花苷是传统药材藏红花（Saffron,Crocus sativus L）的有效活性成分。现代医学研究发现西红花苷具有抗氧化、抗凋亡、抗癌、神经保护及防治心血管疾病等广泛的药理作用。基于课题组前期研究发现西红花苷可以上调高海拔急性低氧条件下大鼠脑海马SIRT1表达。所以针对性提出假设:在急性高海拔低氧条件下西红花苷预处理能否对海马神经元发挥保护作用,以及与SIRT1/PGC-1α通路调节有何联系?为回答以上问题,课题进行了四方面的研究（1）在海拔4200m现场建立大鼠高海拔急性低氧脑海马损伤模型;（2）通过西红花苷不同剂量（25mg/kg/d、50mg/kg/d、100mg/kg/d）预处理对大鼠高海拔急性低氧脑海马损伤模型低氧72小时的作用,明确保护作用及SIRT1/PGC-1α通路分子保护机制和西红花苷最佳有效浓度;（3）验证西红花苷最佳浓度预处理对大鼠高海拔急性低氧脑海马损伤模型在高海拔急性低氧1、3、5、7天的保护作用及SIRT1/PGC-1α通路分子保护机制;（4）在整体动物层面阐明西红花苷通过SIRT1/PGC-1α通路调节对大鼠高海拔急性低氧脑海马损伤模型的保护机制,同时以HT22细胞为研究对象,在细胞层面验证西红花苷对低氧条件下HT22细胞的保护作用,及通过相关通路发挥抗线粒体损伤、抗氧化应激、抗凋亡分子保护机制。方法:1.模型构建:雄性SD大鼠,从海拔2250m通过5小时急进海拔4200m现场建立大鼠高海拔急性低氧脑海马损伤模型。通Morris水迷宫实验检测学习和记忆能力;通过HE染色、Nissl染色观察海马组织病理学变化;透射电镜观察海马神经元超微结构的变化;检测脑海马SOD、GSH-Px和MDA表达;TUNEL法检测大鼠脑海马神经元凋亡率。2.西红花苷预处理通过SIRT1/PGC-1α通路调节对大鼠高海拔急性低氧脑海马损伤模型保护机制及最佳剂量筛选:雄性SD大鼠随机分为5组,低海拔对照组（2250m）、急性高海拔低氧组（4200m）、西红花苷低剂量+急性低氧组（25mg/kg/d）、西红花苷中剂量+急性低氧组（50mg/kg/d）、西红花苷高剂量+急性低氧组（100mg/kg/d）。用药组每天肌肉注射西红花苷1次,对照组每天肌肉注射相同体积的0.9%Nacl,连续给药3天后运至高海拔低氧环境（青海省果洛州甘德县,海拔4200米）72小时;Morris水迷宫实验检测学习和记忆能力;HE染色、Nissl染色、透射电镜观察海马组织病理学变化;免疫组织化学法、RT-PCR、Western blot检测脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、caspases-3、Bcl-2、Bax表达;检测脑海马SOD、GSH-Px和MDA表达及TUNEL法检测大鼠脑海马神经元凋亡率。3.验证西红花苷（100mg/kg/d）预处理对模型大鼠在高海拔急性低氧1、3、5、7天的保护作用及相关分子机制:设立低氧模型组和西红花苷组（100mg/kg/d）,利用Morris水迷宫实验检测高海拔低氧1、3、5、7天学习和记忆能力;HE染色、Nissl染色和透射电镜观察海马组织病理学变化;用免疫组织化学法、RT-PCR、Western blot检测低氧1、3、5、7天各组脑海马组织SIRT1、PGC-1α和TFAM、caspases-3、Bcl-2、Bax因子表达;检测高海拔低氧1、3、5、7天各组脑海马SOD、GSH-Px、MDA的水平;TUNEL法检测高海拔低氧1、3、5、7天各组脑海马神经元凋亡水平。4.验证西红花苷对低氧条件下HT22细胞的保护作用及通过SIRT1/PGC-1α通路分子机制:（1）建立（1%O2）低氧HT22细胞损伤模型;（2）通过CCK-8法检测西红花苷（0.001、0.01、0.1、1、10、100μmol/L）对HT22低氧（1%O2）12、24小时细胞活力影响,明确最佳剂量范围;（3）西红花苷对低氧条件下HT22细胞的保护分子机制:设常氧对照组、低氧（1%O2）组、SIRT1抑制剂（EX-527,100μmol/L）+低氧（1%O2）组、西红花苷25μmol/L+低氧（1%O2）组、西红花苷50μmol/L+低氧（1%O2）组、西红花苷100μmol/L+低氧（1%O2）组,通过透射电镜观察HT22细胞的超微结构变化,通过Western-blot、RT-PCR检测各组的SIRT1、PGC-1α和TFAM、caspases-3、Bcl-2、Bax表达,通过试剂盒检测各组SOD、GSH-Px、MDA的表达及流式细胞技术检测各组细胞调亡率。结果:1.高海拔急性低氧大鼠海马损伤模型构建成功。行为学Morris水迷宫实验显示,模型组寻台潜伏期和行进距离显着增加（P<0.05）,而目标象限百分比下降（P<0.05）;组织病理学结果显示模型组大鼠海马神经元细胞排列紊乱,核皱缩,局部有溶解性坏死（嗜酸性神经元）而且海马CA1区神经元Nissl染色IOD值明显减低（P<0.05）;透射电镜观察发现,模型组大鼠海马CA1区神经元结构欠清晰,线粒体数量明显减少,线粒体高度肿胀并见嵴破坏严重;模型组大鼠脑海马GSHPx和SOD活性明显下降（P<0.05）,MDA含量显着升高（P<0.05）,TUNEL染色结果显示,急性高海拔低氧组海马CA1区TUNEL凋亡阳性细胞数明显高于对照组（P<0.05）.2.西红花苷（25mg/kg/d、50mg/kg/d、100mg/kg/d）预处理通过SIRT1/PGC-1α通路对模型组大鼠发挥了保护作用,且呈剂量依赖效应。行为学Morris水迷宫实验显示,西红花预处理组的寻台潜伏期和行进距离显着降低（P<0.05）,而目标象限百分比升高（P<0.05）,呈剂量依赖性效应（P<0.05）;组织病理学结果显示,HE染色显示西红花苷预处理各组均能明显减轻急性高海拔低氧72小时大鼠脑海马神经元病理损伤,Nissl染色显示大鼠海马CA1区神经元IOD值明显升高（P<0.05）,透射电镜显示,西红花苷预处理各组大鼠海马CA1区神经元核结构恢复正常,线粒体肿胀减轻,线粒体脊结构均趋于正常,呈剂量依赖性效应;西红花苷预处理能显着提高大鼠脑海马GSHPx和SOD表达,降低MDA含量（P<0.05）同时西红花苷预处理减少凋亡阳性细胞的数量（P<0.05）,呈剂量依赖性效应（P<0.05）;西红花苷预处理能上调脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2m RNA和蛋白表达,下调Bax和Caspase-3的表达（P<0.05）,呈剂量依赖性效应（P<0.05）;结果显示西红花苷（100mg/kg/d）效果最佳。3.西红花苷（100mg/kg/d）对高海拔急性低氧1,3,5天大鼠脑海马神经元的保护作用明显,与SIRT1/PGC-1α通路分子保护机制相关。通过Morris水迷宫实验检测,与低氧模型组比较西红花苷预处理组大鼠急性高海拔低氧第1、3、5天的学习和记忆能力明显提高（P<0.05）;通过形态学观察发现急性高海拔低氧环境导致大鼠脑海马区神经细胞排列紊乱,局部有溶解性坏死,线粒体水肿及结构损伤,尤其在第1、3、5天损伤明显,通过西红花苷干预处理也明显减轻神经元及线粒体损伤;西红花苷预处理组能显着提高急性高海拔低氧1、3、5天大鼠脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2在m RNA和蛋白水平相对表达量（P<0.05）,而下调Bax、Caspase-3表达（P<0.05）,同时西红花苷预处理能显着提高急性高海拔低氧组1、3、5天大鼠脑海马GSH-Px和SOD活性,降低MDA含量;西红花苷预处理明显降低急性高海拔低氧1、3、5天大鼠脑海马神经元的凋亡（P<0.05）。4.西红花苷预处理对低氧条件下HT22细胞有明显保护作用与SIRT1/PGC-1α通路分子保护机制相关。透射电镜发现,HT22细胞O2%低氧模型组12、24小时胞质结构松散,核膜皱缩,线粒体肿胀明显,线粒体脊消失,24小时比12小时损伤严重且SIRT1抑制剂+低氧组损伤更明显;西红花苷（25、50、100μmol/L）+低氧组HT22细胞核结构逐渐恢复正常,线粒体和内质网肿胀减轻,线粒体脊结构均趋于正常,呈剂量依赖效应;与对照组相比,低氧组和SIRT1抑制剂+低氧组12、24小时SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2蛋白及m RNA水平表达显着降低（P<0.05）,而Bax、Caspase-3蛋白及m RNA表达明显升高（P<0.05）,抑制剂+低氧组比低氧组抑制作用更明显（P<0.05）;而各西红花苷（25、50、100μmol/L）+低氧组SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2蛋白及m RNA表达显着降低上调,而Bax、Caspase-3蛋白及m RNA表达明显下调（P<0.05）,呈剂量依赖表达（P<0.05）;与对照组比较低氧组和抑制剂+低氧组12、24小时SOD、GSH-Px活性下降、MDA的表达升高（P<0.05）,抑制剂+低氧组比低氧组抑制作用更明显（P<0.05）,而各西红花苷（25、50、100μmol/L）+低氧组中SOD、GSH-Px活性明显增强,MDA的下降,呈剂量依赖表达（P<0.05）;与对照组比较低氧组和抑制剂+低氧（1%O2）组12、24小时凋亡率明显升高（P<0.05）,抑制剂+低氧组比低氧组凋亡率更高（P<0.05）,而各西红花苷+低氧组凋亡率明显下降（P<0.05）,呈剂量依赖表达（P<0.05）。结论:1.成功构建高海拔急性低氧大鼠海马损伤模型。2.西红花苷（25mg/kg/d、50mg/kg/d、100mg/kg/d）预处理能明显改善高海拔急性低氧脑海马损伤模型大鼠认知功能障碍,改善脑海马神经元病理损伤,通过调控SIRT1/PGC-1α通路相关因子表达发挥抗线粒体损伤、抗氧化应激、抗凋亡中的作用,呈剂量依赖性效应。3.西红花苷（100mg/kg/d）预处理明显改善高海拔急性低氧第1、3、5天大鼠的学习和记忆能力,明显减轻脑海马神经元病理性损伤,也通过调控SIRT1/PGC-1α通路发挥抗线粒体损伤、抗氧化应激、抗凋亡的作用。4.西红花苷通过调控SIRT1/PGC-1α通路相关因子表达减轻HT22细胞在1%O2条件下12和24小时线粒体结构损伤,发挥抗氧化应激、抗凋亡作用。
陈晓彤[7]（2019）在《醒脑静注射液调节觉醒肽-腺苷神经功能治疗酒精性昏迷大鼠的作用机制研究》文中研究表明目的:急性酒精中毒,是指一次摄入过量的乙醇,使得乙醇的吸收大于代谢。据世界卫生组织,全球每年由于饮酒所致死亡（包括酒精中毒死亡和酒驾车祸死亡）人数己达250万,这对个人、家庭和社会都造成了严重影响。因此,寻求有效的解酒药物有着巨大且重要的现实意义。醒脑静注射液（Xingnaojing Injection,XNJI）是源于吴鞠通的《温病条辨》中的经典名方安宫牛黄丸,主要由麝香、冰片、郁金和栀子四味中药组成,具有疗效确切、应用广泛的特点,临床上常用于治疗各种昏迷证,如酒精昏迷等。酒精主要由肝脏代谢,其中在代谢过程中产生的乙醛和活性氧簇可诱发氧化应激反应,引起肝脏损伤;酒精对中枢神经系统有抑制作用,被吸收入血的乙醇可通过血脑屏障进入大脑,引起机体功能紊乱,造成记忆认知、运动协调等多种功能障碍。本研究通过腹腔注射34%乙醇建立急性酒精昏迷动物模型,给予三种不同剂量的XNJI处理,观察大鼠肝脏乙醇代谢酶活力、氧化应激反应和病理改变;另外,通过微透析实验,观察腺苷（Adenosine,AD）和觉醒肽（Orexin A）这对抑制-兴奋性神经递质的动态变化,以及两者相关的受体和蛋白的mRNA表达量。本文采用微透析、分子生物学等技术研究XNJI对酒精性昏迷的促醒和神经作用机制,为研发更有效的解酒促醒药物奠定基础。方法:1 XNJI对酒精性昏迷大鼠肝脏乙醇代谢酶和氧化应激的影响本实验采用34%乙醇建立急性酒精昏迷大鼠模型,研究XNJI对酒精性昏迷大鼠翻正反射消失（Loss of the righting reflex,LORR）维持时间的影响;采用试剂盒测定大鼠肝脏中乙醇脱氢酶（Alcohol dehydrogenase,ADH）、乙醛脱氢酶（Aldehyde dehydrogenase,ALDH）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）的活性以及还原型谷胱甘肽（Glutathione,GSH）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）的含量,采用苏木精-伊红染色法（Hematoxylin-eosin staining,HE）观察大鼠肝脏的病理学改变,以探讨XNJI对酒精性昏迷大鼠肝脏乙醇代谢酶和氧化应激的影响。2高效液相色谱法测定人工脑脊液中腺苷含量的条件优化本实验采用高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography,HPLC）测定AD在不同检测波长和不同流动相比例中的峰面积和保留时间,对AD的HPLC色谱条件进行优化使其有最大的吸收,为人工脑脊液中AD的测定提供可靠的检测方法。3醒脑静注射液对酒精性昏迷大鼠的促醒神经机制研究本实验采用微透析技术采集大鼠的脑脊液,HPLC联合紫外检测器测定脑脊液中AD的含量,酶联免疫吸附试剂盒（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定脑脊液中orexin A的含量;荧光定量PCR技术测定大鼠下丘脑区 OX1R、A1R、ENT1、ADK的mRNA表达量,探讨XNJI对酒精性昏迷大鼠下丘脑脑脊液中AD、orexin A的动态变化,以及OXiR、A1R、ENT1、ADK mRNA表达量的影响。结果:1 XNJI对酒精性昏迷大鼠肝脏乙醇代谢酶的影响与空白对照组相比,模型对照组肝脏中ADH和ALDH活性均有显着性下降（P<0.01）。醒脑静注射液中剂量组的LORR（2.92±0.24 h）比低剂量组（3.92±0.68 h）和高剂量组（3.59±1.16h）都短,而且与模型对照组（4.26±0.56h）相比有统计学意义（P<0.01）,其他各组与模型对照组相比均无统计学意义（P>0.05）;醒脑静中、高剂量组对大鼠肝脏中ADH和ALDH活性均有不同程度的提升（P<0.01）,醒脑静低剂量组对ADH、ALDH活性无影响（P>0.05）;2 XNJI对酒精性昏迷大鼠肝脏氧化应激反应的影响与空白对照组相比,模型对照组肝脏中的SOD活性显着下降（P<0.01）,MDA含量则明显升高（P<0.01）,而GSH含量无显着变化（P>0.05）。与模型对照组相比,醒脑静低剂量组SOD活性显着地提高（P<0.01）,MDA含量有效地降低（P<0.01）,对GSH含量无明显提高（P>0.05）;醒脑静中剂量组对SOD活性和GSH含量均有不同程度的提升（P<0.01）,同时明显地降低MDA含量（P<0.01）。醒脑静高剂量组有效提高GSH含量（P<0.01）,但SOD活性无明显变化（P>0.05）。醒脑静注射液能改善肝组织细胞病变,减轻肝细胞水肿,维持正常的肝细胞形态。3 HPLC测定AD的色谱条件优化AD在250-260 nm波长中的保留时间均约为5.9min,而AD的峰面积则随着波长的增加而增加;甲醇和8 mmol/LNaH2PO4的比例对AD的峰面积影响不大,但对其保留时间有着明显的作用,随着甲醇比例的增加,AD的出峰时间随之缩短。AD的HPLC最佳色谱条件为流动相A:流动相B=20%甲醇:8 mmol/LNaH2PO4,检测波长:260nm。4 XNJI对酒精性昏迷大鼠脑脊液中AD、orexin A水平的影响与空白对照组相比,模型对照组中腺苷水平在135min到270min显着高于空白对照组（P<0.01）。与模型对照组相比,醒脑静注射液低、高剂量组中腺苷水平均有下降的趋势,但是无统计学意义（P>0.05）;醒脑静注射液中剂量组腺苷水平在Omin到270min内均小于模型对照组,其中135min到270min内腺苷水平明显低于模型对照组（P<0.05）。与空白对照组相比,模型对照组给予34%乙醇造模后,orexinA水平并无明显变化（P>0.05）。与模型对照组相比,醒脑静注射液低、中、高剂量组在组间比较中均未见显着变化（P>0.05）。5 XNJI对酒精性昏迷大鼠外侧下丘脑OX1R、A1R、ENT1、ADK mRNA表达量的影响与空白对照组相比,模型对照组的OX1R、A1R、ENT1 mRNA的表达均呈现显着下降（P<0.05）,而ADK无明显差异。与模型对照组相比,醒脑静注射液低、中、高剂量组均能显着上调OX1R的表达（P<0.05）,而有效地下调AiR表达（P<0.05）。对于ENT1,醒脑静注射液中剂量组可显着降低其表达（P<0.05）,但低、高剂量组均未见明显改变（P>0.05）;而对于ADK,醒脑静注射液高剂量组可显着上调其表达（P<0.01）,但中、高剂量组均未见明显改变（P>0.05）。结论:醒脑静注射液对酒精性昏迷大鼠模型具有促醒作用,其机制可能与其抗氧化应激以及兴奋性神经递质觉醒肽和抑制性神经递质腺苷及其相关受体OX1R、A1R及蛋白ENT1、ADK mRNA的表达的调控有关。
张林[8]（2019）在《乙醇与1,2-二氯乙烷联合暴露对小鼠肝和脑组织的损伤作用及其机制研究》文中认为目的:1,2-二氯乙烷（1,2-dichloroethane,1,2-DCE）常温下是一种无色、无味、高挥发性的油状液体,属于高毒类。在工业生产中,1,2-DCE主要用于合成聚氯乙烯的单体。此外,作为有机溶剂也被广泛应用于粘合剂、脱脂剂和清洗剂等。作为有机溶剂,1,2-DCE极易挥发,主要通过呼吸道进入人体,并被快速吸收入血。由于具有脂溶性,1,2-DCE易于通过BBB进入脑组织。尽管已有150多年的使用历史,但在1990年以前,国内外有关职业接触1,2-DCE导致中枢神经系统损伤的人群和动物研究资料均极少[1]。但自1990年以后,由于作为粘合剂广泛应用于玩具、塑料和制鞋等行业,从广东省开始,在我国的多个省市陆续发生亚急性1,2-DCE职业中毒事故,临床表现以中毒性脑病和肝损伤为主。目前,亚急性1,2-DCE职业中毒已成为严重危害我国劳动者健康与生命的新职业病危害。然而,有关1,2-DCE亚急性毒性的资料仍很缺乏,亟待进行深入研究。研究资料显示,细胞色素（Cytochrome）P450 2E1（CYP2E1）是介导体内低分子化合物,特别是卤代烃类化合物代谢的关键酶,且大多数卤代烃类化合物在代谢过程中可促使CYP2E1表达上调。1,2-DCE经CYP2E1代谢可生成化学性质更活跃的中间产物氯乙醛和2-氯乙醇,最终被代谢为氯乙酸随尿液排出体外。与其它CYP450亚型相比,CYP2E1具有更强的NADPH氧化酶活性,在催化底物代谢的过程中易出现电子传递的解偶联现象,产生活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）,进而引起细胞的氧化损伤。我们前期的研究结果表明1,2-DCE染毒可使小鼠肝和脑组织中CYP2E1的表达上调,并引起小鼠肝和脑组织的氧化损伤。目前认为,CYP2E1是CYP450的一个亚型,主要分布在肝小叶中心区域,约占CYP450总量的7%。然而,大量研究数据显示,在人和实验动物的肝外组织中也有CYP2E1的表达分布。特别是脑组织的嗅球、海马、小脑以及大脑额叶皮质等区域的神经元和胶质细胞中有相对较高水平CYP2E1表达。乙醇是公认的CYP2E1特异性诱导剂。有研究报道,急性和慢性乙醇暴露均可导致肝和脑组织中CYP2E1蛋白水平和酶活性升高。乙醇在CYP2E1催化下生成乙醛和乙酸。乙醛是乙醇体内代谢的活性中间产物,可以与蛋白质和DNA等生物大分子反应产生加合物,是导致组织细胞损伤的重要原因。有研究证实,乙醇引起的脑组织损伤区域与其诱导CYP2E1高表达区域密切相关,这提示乙醇在脑组织的代谢是其产生神经毒性的主要原因[20,21]。已有研究证明,乙醇通过上调CYP2E1的蛋白水平和酶活性促进氯仿和四氯化碳等卤代烃化合物的代谢,并加重该类化学物引起的肝损伤。基于以上研究成果和我们的研究发现,我们推测乙醇和1,2-DCE联合暴露会加重肝和脑组织的损伤,导致酗酒工人对1,2-DCE毒性损伤的敏感性增强。综上所述,本研究拟以昆明种小鼠为实验对象,模拟饮酒工人职业暴露1,2-DCE的情况,在整体动物水平通过联合给予乙醇与1,2-DCE,探讨乙醇与1,2-DCE的联合暴露在引起小鼠肝和脑组织的损伤方面是否存在交互作用,为揭示1,2-DCE对饮酒工人的健康影响,为1,2-DCE职业中毒的防治工作提供实验参考数据。方法:1、实验动物1.1分组1.1.1动物选择:健康、性成熟、清洁级雌性昆明种小鼠60只,体重20-24克,适应性喂养一周。建立不同浓度乙醇与1,2-DCE联合暴露模型。实验动物随机分为6组,分别是空白对照组、乙醇对照组、1,2-DCE单纯染毒组及低、中和高剂量乙醇与1,2-DCE联合暴露组,每组10只小鼠。1.1.2处理（1）染毒前处理模型中,1,2-DCE染毒前3d,乙醇对照组和联合暴露组小鼠每天灌胃给予含乙醇3.0、0.75、1.5或3.0 g/Kg bw的水溶液0.2 ml,空白对照组和1,2-DCE单纯染毒组小鼠每天灌胃给予蒸馏水0.2 ml。（2）染毒模型中,各组小鼠灌胃后4 h,采用静式吸入方式染毒,将小鼠置于100 L的染毒柜中3.5 h/d,连续染毒3d。单纯染毒组和联合暴露组的染毒柜中1,2-DCE浓度为1.0 g/m3,空白对照组和乙醇对照组的染毒柜中不加入1,2-DCE。于末次染毒结束后的次日处死小鼠,快速取出血、肝脏和脑组织,检测如下指标。2、指标测定2.1脑脏器系数和脑含水量取脑组织,称重。脑脏器系数=脑组织重量/小鼠体重。分离大脑半球,取左侧大脑组织,用1/10000的分析天平称其湿重,将其放入100℃恒温烤箱中,烘烤48h至恒重后称取干重。脑含水量（%）=（脑湿重-脑干重）/脑湿重×100%。2.2小鼠脑和肝组织病理学观察取大脑和肝组织,经4%多聚甲醛液固定72 h,常规石蜡包埋,脑组织连续冠状切片,常规HE染色,光镜下观察脑和肝组织病理变化。2.3血清中ALT和AST活性:采用生化试剂盒法。2.4肝和脑组织中GSH和MDA含量及SOD活性:采用生化试剂盒法。2.5脑组织中CYP2E1、ZO-1、Occludin、AQP4、Nrf2、HO-1、g-GCSc、GR和g-GCSm蛋白和m RNA含量:Western blot法和Real time RT-PCR法。2.6肝组织中CYP2E1、Nrf2、HO-1、g-GCSc、GR和g-GCSm蛋白和m RNA含量:Western blot法和Real time RT-PCR。3、统计分析实验数据采用SPSS 16.0进行统计分析。多组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）,组间两两比较采用q检验（SNK）。以P<0.05作为差异有统计学意义的判定标准。结果:1、中毒表现空白对照组、乙醇对照组和1,2-DCE单纯染毒组的小鼠未见明显的中毒症状。而联合暴露组的部分小鼠出现了肢体震颤和四肢不能完全伸展等症状,将小鼠尾巴轻轻提起,使小鼠头朝下悬空时,小鼠的四肢不能完全伸展,出现双前肢和/或双后肢相互交叉的抱爪现象。低、中和高剂量联合暴露组小鼠的脑损伤（抱爪和死亡）行为学改变率分别为20%（2/10）、50%（5/10）、50%（5/10）,且只在高剂量联合暴露组出现死亡（20%）。2、脑水肿相关指标的改变与对照组相比,中和高剂量联合暴露组小鼠的脑脏器系数显着升高（P<0.05）。脑含水量随着乙醇暴露剂量增加而增加,而与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）;此外,中、高剂量联合暴露组小鼠的脑组织呈现细胞间质疏松,细胞核周围腔隙增宽,胞浆淡染,胞体肿胀变性,边缘模糊;部分细胞及毛细血管周围腔隙扩张的脑水肿典型病理改变。3、肝损伤相关指标的改变低、中、高剂量联合暴露组小鼠呈现肝损伤病理改变;与对照组相比,中、高剂量联合暴露组小鼠血清中AST活性明显升高（P<0.05）;与对照组、乙醇对照组相比,联合暴露组ALT活性明显升高（P<0.05）。4、肝和脑组织中氧化应激相关指标的改变4.1肝组织中氧化应激相关指标的改变与对照组相比,联合暴露组小鼠GSH含量显着下降（P<0.05）;与对照组、乙醇对照组相比,联合暴露组MDA含量明显升高（P<0.05）;各组SOD活性变化无明显差异（P>0.05）。4.2脑组织中氧化应激相关指标的改变与对照组、乙醇对照组、1,2-DCE单纯染毒组相、低剂量联合暴露组相比,中、高剂量联合暴露组MDA含量明显升高（P<0.05）,乙醇与1,2-DEC对MDA指标水平具有协同作用;各组GSH含量、SOD活性变化无明显差异（P>0.05）。5、乙醇与1,2-二氯乙烷联合暴露肝脑损伤发生机制5.1乙醇与1,2-DCE联合暴露对小鼠血脑屏障相关蛋白及m RNA的影响联合暴露组小鼠脑组织中Occludin、ZO-1蛋白出现不同程度含量下降,中、高剂量联合暴露组下降趋势更明显,在m RNA水平也检测到相同趋势;乙醇与1,2-DEC对脑损伤Occludin、ZO-1蛋白表达水平具有协同作用,对脑组织Occludin、ZO-1m RNA表达水平具有协同作用。5.2乙醇与1,2-DCE联合暴露对小鼠AQP4蛋白及m RNA的影响联合暴露组小鼠脑组织中AQP4蛋白出现不同程度含量下降,中、高剂量联合暴露组下降趋势更明显,在m RNA水平也检测到相同趋势。乙醇与1,2-DEC对脑组织AQP4m RNA表达水平具有协同作用。5.3乙醇与1,2-DCE联合暴露对CYP2E1的影响联合暴露组小鼠肝脑组织中CYP2E1蛋白出现不同程度的含量升高趋势,中、高剂量联合暴露组升高更显着,在m RNA水平也检测到上述相同趋势;乙醇与1,2-DEC对肝组织CYP2E1m RNA指标具有协同作用,乙醇与1,2-DEC对脑组织CYP2E1蛋白、m RNA指标具有协同作用。5.4乙醇与1,2-DCE联合暴露对小鼠NRF2信号通路相关蛋白及m RNA的影响联合暴露组小鼠肝脑组织中Nrf2、HO-1、γ-GCSc、GR蛋白出现不同程度的含量升高趋势,中、高剂量联合暴露组升高更显着,在m RNA水平也检测到上述相同趋势,而γ-GCSm在蛋白水平与基因水平均未检测到显着变化;乙醇与1,2-DEC对脑组织Nrf2蛋白指标具有协同作用,对肝组织Nrf2、γ-GCSc、GR蛋白指标具有协同作用,对肝、脑组织Nrf2、HO-1、γ-GCScm RNA指标具有协同作用。结论:1、乙醇与1,2-DCE联合暴露能够引起肝、脑联合毒作用,且乙醇增强1,2-二氯乙烷诱导肝脑损伤,随着乙醇暴露剂量增加,呈剂量效应关系。2、乙醇与1,2-DCE联合毒作用引起肝脑损伤,可能机制与乙醇增强1,2-二氯乙烷诱导表达CYP2E1,增加二氯乙烷代谢,产生大量活性氧自由基,产生氧化应激,引起肝、脑氧化损伤有关。3、乙醇与1,2-DCE联合毒作用引起肝、脑氧化应激进一步激活Nrf2信号通路,使机体大量表达抗氧化蛋白酶HO-1、γ-GCSc、GR。
玉苏甫江·台外库力[9]（2016）在《异常黑胆质成熟剂对抑郁症大鼠模型支配器官组织形态学的影响》文中研究指明目的观察异常黑胆质成熟剂（ASMq）对抑郁症大鼠模型“支配器官”（脑、心、肝）病理变化和超微结构的影响,从组织形态学角度探讨ASMq抗抑郁的可能作用机制。方法将雄性抑郁症模型大鼠60只,机分为5组:异常黑胆质成熟剂高、中、低剂量组（ASMq给药剂量为6.0、3.0、1.5 g/kg）,阳性对照组（氟西汀,3.5g/kg）,抑郁症模型对照组,每组12只,另设正常对照组（12只）。ASMq各剂量组和阳性对照组连续灌胃给药21d,1次/天,末次给药1h后颈椎脱臼处死动物取出支配器官固定,HE染色,采用光学显微镜观察“支配器官”病理变化,铅铀染色,制作常规电镜标本,扫描电镜观察支配器官超微结构改变。结果与模型组相比,ASMq高剂量组“支配器官”细胞修复性增强,而损伤性组织病理学改变显着减轻,ASMq低、中剂量组“支配器官”损伤性组织病理变化无显着差异。抑郁症模型组“支配器官”超微结构中除了脑组织神经元细胞外,其余组织细胞有不同程度的细胞水肿、基质密度明显降低,细胞变质等超微结构的损伤,但ASMq干预后,脑神经胶质细胞水肿明显降低、细胞基质密度、细胞器稀疏明显恢复,神经细胞突触部脑水肿明显的降低、可见轻微空泡样变;心肌细胞水肿明显消退、心肌细胞基质密度恢复明显,未见肌原纤维局灶性肌丝溶解,而心肌细胞内线粒体水肿明显消退,未见局部有异常收缩带;肝细胞水肿明显消退,基质密度明显恢复、细胞内可见轻微空泡、肝细胞内可见脂滴减小、肝细胞间隙增宽恢复明显、毛细胆管未扩张,肝细胞间未见胶原纤维增生。结论异常黑胆质成熟剂能够改善抑郁症大鼠模型动物“支配器官”病理变化和超微结构的改变。
朱力杰[10]（2014）在《北五味子总三萜、木脂素对酒精性肝损伤的保护作用及其机制的研究》文中指出北五味子（Schisandra chinensis （Turcz.） Baill）主要分布于东北亚地区,其果实和藤茎中富含大量木脂素、三萜等生物活性成分,被广泛应用于功能食品和药品领域。本研究以北五味子藤茎为原料,对北五味子总三萜、木脂素的化学成分进行分析,并对其干预急性和慢性酒精性肝损伤的效果及作用机制进行深入研究,以期为北五味子的产业化开发奠定基础。主要结论如下：1、将高速逆流色谱和制备型液相色谱两种技术相结合,建立了一种从北五味子中分离木脂素的方法。北五味子藤茎粉末经70%乙醇粗提后,采用AB-8型大孔吸附树脂进行梯度乙醇洗脱,得到的样品采用溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（1:1:1:1,V/V）的高逆流色谱和流动相为乙腈-水（50:50,V/V）的制备型液相色谱进行进一步分离,并对这两种色谱方法的效率和特点进行了比较分析。得到的6种木脂素单体采用紫外光谱、质谱和核磁共振谱进行结构鉴定,所有化合物的纯度均在91%以上。结合课题组的前期研究,将树脂纯化产物认定为北五味子总三萜、木脂素。2、采用小鼠建立了急性酒精性肝损伤模型,通过20d后血清和肝脏的生理生化指标、抗氧化活力以及肝脏HE染色病理切片考察北五味子总三萜、木脂素的保肝作用。小鼠在摄入50%乙醇后,肝组织及细胞出现严重损伤,血清及肝脏各指标出现异常；北五味子总三萜、木脂素各剂量组的病变明显减轻,炎症反应降低,肝功能及血脂水平恢复正常,抗氧化酶的活性得到增强。试验结果表明,北五味子总三萜、木脂素能够降低血清中ALT、AST、ALP、TC、TG和LDL-C的水平,提高HDL-C的水平；降低肝匀浆中MDA的含量,提高SOD、GSH、T-AOC的含量,对急性酒精性肝损伤有预防和治疗的作用。3、采用大鼠建立了慢性酒精性肝损伤模型,通过测定30d、60d和90d血清中肝功能指标、血脂水平及氧化-抗氧化能力的动态变化,发现机体对于酒精的摄入呈明显的剂量效应。在摄入30%乙醇后,TC、TG和MDA的水平显着升高,HDL-C、SOD、 GSH、GSH-Px和CAT的水平显着降低；随着时间的推移,酒精摄入引发的脂质过氧化作用逐渐增强,在90d较30d有较为明显的变化。北五味子总三萜、木脂素摄入后血清生化指标水平明显恢复,同30%乙醇组相比,高剂量组TC、TG和MDA的水平显着下降,HDL-C、SOD、GSH、GSH-Px和CAT的水平显着上升。4、采用大鼠灌胃给予不同浓度乙醇90d后,30%乙醇组肝脏发生较为明显的脂肪变性,肝细胞形态发生改变,血清ALT和AST水平升高,肝匀浆MDA、ROS水平升高,GSH、GSH-Px、CAT水平下降,肝微粒体CYP2E1的表达和活性增强,HO-1的表达和活性遭到抑制。在给予不同剂量,特别是高剂量北五味子总三萜、木脂素后,大鼠肝脏的脂肪病变明显减轻消退,肝功能显着恢复,抑制了CYP2E1的异常活化,HO-1的活性、RNA和蛋白表达水平显着升高。以上试验结果说明,北五味子总三萜、木脂素对于酒精摄入引发的急性和慢性肝损伤都具有明显的干预作用,其机制可能是：（1）北五味子总三萜、木脂素能够缓解乙醇代谢引发的脂质过氧化作用,清除氧自由基,保护肝细胞及细胞器的功能和结构；（2）北五味子总三萜、木脂素能够调控乙醇代谢中关键酶,尤其是CYP2E1的表达,从而减少ROS的生成,减轻对肝脏造成的氧化损伤；此外还能够诱导HO-1的表达,激活其被乙醇抑制的抗氧化作用,将CYP2E1作为底物降解从而降低其活力,增强机体的抗氧化能力,进而改善酒精摄入造成的氧化损伤。
二、乙醇对大鼠肝细胞和脑神经细胞超微结构的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、乙醇对大鼠肝细胞和脑神经细胞超微结构的影响（论文提纲范文）
（2）基于核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α研究酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠中枢SCN昼夜节律及能量代谢的并联调控机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 昼夜节律机制研究进展 |
| 2 能量代谢和昼夜节律紧密关联 |
| 3 基于核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α调控中枢昼夜节律与能量代谢的“并联型”整合模式 |
| 4 酸枣仁汤改善睡眠及调节睡眠昼夜节律的脑保护机制研究进展 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 酸枣仁汤的镇静催眠作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 分组和给药 |
| 2.2 观察酸枣仁汤对阈下剂量戊巴比妥钠所致各组小鼠入睡率的影响 |
| 2.3 观察酸枣仁汤对阈上剂量戊巴比妥钠所致各组小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的变化 |
| 2.4 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 实验二 酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠自主活动昼夜节律的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及给药 |
| 2.2 自主活动检测 |
| 2.3 动物取材 |
| 2.4 采用Real-Time PCR法检测各组大鼠下丘脑生物钟基因Clock、Bmal1 与钟控基因Rev-erbα、Rorα的 m RNA表达水平 |
| 2.5 免疫组织化学法检测各组大鼠下丘脑节律基因Clock、Bmal1 以及钟控基因Rev-erbα、Rorα的主要蛋白含量 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 实验三 酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠下丘脑核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α表达的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及给药 |
| 2.2 动物取材 |
| 2.3 采用Real-TimePCR法检测各组大鼠下丘脑核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α的 m RNA表达水平 |
| 2.4 采用Western Blot法检测各组大鼠下丘脑核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α的蛋白表达水平 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 实验四 酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠中枢下丘脑线粒体能量代谢的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及给药 |
| 2.2 动物取材 |
| 2.3 采用透射电镜观察各组大鼠下丘脑超微结构 |
| 2.4 采用比色法检测各组大鼠下丘脑ATP含量 |
| 2.5 采用定磷法检测各组大鼠下丘脑中Na~+-K~+-ATP、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性 |
| 2.6 采用Western Blot法检测各组大鼠下丘脑 Cyt C、Bcl-2、Bax及Caspase 3 蛋白表达水平 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 实验五 酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠心肌线粒体能量代谢的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及给药 |
| 2.2 动物取材 |
| 2.3 采用透射电镜观察各组大鼠心脏超微结构 |
| 2.3 采用比色法检测各组大鼠心肌ATP含量 |
| 2.4 采用分光光度法检测大鼠心肌MDA含量、总超氧化物歧化酶SOD活性 |
| 2.5 采用Real-TimePCR法检测各组大鼠心肌SIRT3、SOD2m RNA表达水平 |
| 2.6 采用Western Blot法检测各组大鼠心肌SIRT3、SOD2蛋白表达水平 |
| 2.7 采用免疫荧光染色法检测各组大鼠心肌SIRT3 的定位表达 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 实验六 酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠肝脏线粒体能量代谢的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及给药 |
| 2.2 动物取材 |
| 2.3 采用透射电镜观察各组大鼠肝脏超微结构 |
| 2.4 采用比色法检测各组大鼠肝脏ATP含量 |
| 2.5 采用比色法检测肝脏线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性 |
| 2.6 采用Western blot法检测CS、IDH、ATP5F1 蛋白的表达 |
| 3 结果 |
| 讨论 |
| 1 酸枣仁汤的镇静催眠作用 |
| 2 酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠自主活动昼夜节律的影响 |
| 3 酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠下丘脑核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α表达的影响 |
| 4 酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠中枢下丘脑线粒体能量代谢的影响 |
| 5 酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠心肌线粒体能量代谢的影响 |
| 6 酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠肝脏线粒体能量代谢的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 文献综述 失眠发病机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在校期间参加的课题及发表的学术论文 |
| 致谢 |
（3）基于内质网应激PERK-ATF4-CHOP通路探讨对药酸枣仁-合欢花抗抑郁作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 抑郁症的中医研究概况 |
| 1.1 古代文献对抑郁症的认识 |
| 1.1.1 秦汉时期 |
| 1.1.2 隋唐宋时期 |
| 1.1.3 金元时期 |
| 1.1.4 明清时期 |
| 1.2 现代中医对抑郁症的认识 |
| 2 内质网应激与抑郁症的相关研究 |
| 2.1 内质网应激与未折叠蛋白反应概述 |
| 2.1.1 PERK信号通路 |
| 2.1.2 ATF6信号通路 |
| 2.1.3 IRE1 信号通路 |
| 2.2 内质网应激诱导细胞凋亡 |
| 2.2.1 CHOP信号途径 |
| 2.2.2 JNK信号途径 |
| 2.2.3 Caspase-12 信号途径 |
| 2.3 内质网应激与抑郁症 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 相关材料的制备 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药品制备 |
| 1.3 主要仪器及试剂 |
| 1.3.1 主要仪器 |
| 1.3.2 主要试剂 |
| 2 动物实验方法 |
| 2.1 模型制备 |
| 2.2 动物分组及给药 |
| 2.3 取材 |
| 3 检测方法 |
| 3.1 旷场实验(Open filed test) |
| 3.2 糖水偏爱度实验(Sucrose preference test) |
| 3.3 透射电镜法(Transmission Electron Microscope,TEM) |
| 3.4 TUNEL法凋亡细胞原位检测 |
| 3.5 蛋白质印迹法(Western blot) |
| 3.6 统计分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 旷场实验结果 |
| 4.2 糖水偏爱度实验结果 |
| 4.3 透射电镜观察结果 |
| 4.4 TUNEL法检测细胞凋亡结果 |
| 4.5 Western blot检测结果 |
| 5 讨论 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 缩略词表 |
| 综述 中医药调节内质网应激的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介及攻读学位期间获得的科研成果 |
（4）痰瘀同治 清热解毒法防治AD的理论探讨及其调控HSP70介导的神经保护机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论探讨 |
| 1.中医学对AD的基本认识 |
| 2.古籍文献中的AD病名浅析 |
| 2.1 侧重症状描述 |
| 2.2 次症掩盖主症 |
| 2.3 兼夹其它疾病 |
| 2.4 名为“痴呆”并非AD |
| 2.5 “痴呆”即指AD相关病证 |
| 3.痰瘀同治、清热解毒法防治AD的理论探讨 |
| 3.1 脏腑虚衰为AD之始 |
| 3.2 内生痰瘀为AD之标 |
| 3.3 化热酿毒为AD之变 |
| 3.4 损伤脑络为AD之末 |
| 4.益智温胆汤源流浅析 |
| 5.黄连解毒汤源流浅析 |
| 6.HSP70 与AD的关系 |
| 6.1 HSP70 功能概述 |
| 6.2 热休克蛋白家族在AD中的作用 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 AD与痰、瘀病证结合动物模型的建立与评价 |
| 1.实验动物及材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材及试剂 |
| 2.病证结合动物模型的建立 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 实验动物造模 |
| 3.模型评价 |
| 3.1 Morris水迷宫法检测各组小鼠行为学变化 |
| 3.2 各组小鼠舌色客观变化 |
| 3.3 各组小鼠血液流变学变化 |
| 3.4 各组小鼠血脂变化 |
| 3.5 Western Blot法检测各组小鼠海马组织相关蛋白含量 |
| 4.统计学方法 |
| 5.实验结果 |
| 5.1 Morris水迷宫实验结果 |
| 5.2 舌色客观化比较实验结果 |
| 5.3 血液流变学检测实验结果 |
| 5.4 血脂检测实验结果 |
| 5.5 Western Blot实验结果 |
| 实验二 痰瘀同治、清热解毒法对AD-痰瘀模型小鼠行为学的影响 |
| 1.实验动物及材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 实验用药及其制备 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 实验动物造模 |
| 2.3 实验动物给药 |
| 3.行为学检测 |
| 3.1 Morris水迷宫实验 |
| 3.2 跳台实验 |
| 4.统计学方法 |
| 5.实验结果 |
| 5.1 Morris水迷宫实验结果 |
| 5.2 跳台实验结果 |
| 实验三 痰瘀同治、清热解毒法对AD-痰瘀模型小鼠病理改变的影响 |
| 1.实验动物及材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 刚果红染色法检测小鼠海马区SP |
| 2.2 甘氨酸银浸镀法检测小鼠海马区NFTs |
| 2.3 透射电镜法观察小鼠海马神经元超微结构 |
| 2.4 Western Blot法检测小鼠海马区AD相关蛋白含量 |
| 3.统计学方法 |
| 4.实验结果 |
| 4.1 刚果红染色实验结果 |
| 4.2 甘氨酸银浸镀实验结果 |
| 4.3 透射电镜实验结果 |
| 4.4 Western Blot实验结果 |
| 实验四 痰瘀同治、清热解毒法对AD-痰瘀模型小鼠脑神经炎症的影响 |
| 1.实验动物及材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 免疫荧光标记法检测小鼠相关蛋白表达及共定位关系 |
| 2.2 Western Blot法检测小鼠海马区相关蛋白含量 |
| 2.3 高尔基染色法观察小鼠海马神经元树突棘 |
| 3.统计学方法 |
| 4.实验结果 |
| 4.1 免疫荧光实验结果 |
| 4.2 Western Blot实验结果 |
| 4.3 高尔基染色实验结果 |
| 讨论 |
| 1.病证结合动物模型建立的思路与意义 |
| 2.痰瘀化热酿毒是AD的重要病理过程 |
| 3.痰瘀同治、清热解毒法可改善AD痰瘀模型小鼠的学习记忆能力 |
| 4.痰瘀同治、清热解毒法能有效改善AD痰瘀模型小鼠的病理形态 |
| 5.痰瘀同治、清热解毒法可调控HSP70 介导的神经保护机制 |
| 结语 |
| 1.结论 |
| 2.创新点 |
| 3.研究展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 AD研究进展及热休克蛋白在AD中的作用 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间科研经历、学术成果及获得奖励情况 |
| 致谢 |
（5）五味子乙素对慢性酒精中毒大鼠学习记忆的影响及其分子机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料与仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠一般状态观察和戒断评分结果 |
| 2.2 Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力 |
| 2.3 HE染色观察各组大鼠海马CA1区神经元形态改变 |
| 2.4 透射电镜观察各组大鼠海马CA1区神经元的超微结构及测定突触结构的形态参数 |
| 2.5 各组大鼠海马CA1区PSD-95、SYN蛋白免疫组化检测结果 |
| 2.6 Western Blot检测各组大鼠海马组织中PSD-95、SYN蛋白的表达水平 |
| 3 讨论 |
| 3.1 慢性酒精中毒对大鼠学习记忆能力的影响 |
| 3.2 五味子乙素对慢性酒精中毒大鼠学习记忆的影响 |
| 3.3 五味子乙素对慢性酒精中毒大鼠海马神经元及突触影响 |
| 3.4 五味子乙素对慢性酒精中毒大鼠海马组织PSD-95、SYN蛋白表达的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 五味子乙素药理作用及其分子机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（6）西红花苷预处理保护急性高原缺氧大鼠脑海马神经元的SIRT1/PGC-1a机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 引言 |
| 1 高原低氧对脑神经影响 |
| 2 SIRT1/PGC-1A通路调控机制及低氧条件下的脑保护作用 |
| 3 西红花苷对脑神经的影响 |
| 4 科学问题及研究内容 |
| 5 研究流程图 |
| 6 研究内容及目标 |
| 第二章 西红花苷对急性高海拔低氧脑海马损伤模型的保护作用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.2.2.1 Morris水迷宫检测 |
| 2.2.2.2 HE染色 |
| 2.2.2.3 透射电镜检测 |
| 2.2.2.4 Nissl染色 |
| 2.2.2.5 抗氧化指标 SOD, GSHPx, MDA 检测 |
| 2.2.2.6 免疫组织化学检测 |
| 2.2.2.7 Western Blot 实验检测蛋白表达 |
| 2.2.2.8 qRTPCR检测结果 |
| 2.2.2.9 TUNEL 凋亡检测 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 Morris水迷宫检测结果 |
| 2.3.2 HE染色结果 |
| 2.3.3 透射电镜观察海马细胞超微结构 |
| 2.3.4 Nissl染色结果 |
| 2.3.5 抗氧化SOD,GSHPx,MDA水平 |
| 2.3.6 Western blot检测结果 |
| 2.3.7 qRTPCR检测结果 |
| 2.3.8 免疫组织化学检测结果 |
| 2.3.9 TUNEL检测结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 西红花苷最佳剂量预处理急性高海拔低氧大鼠脑海马相关因子及凋亡的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 药物及试剂 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.2.4 方法 |
| 3.2.4.1 Morris水迷宫检测 |
| 3.2.4.2 HE染色观察大鼠脑海马CA1神经元形态 |
| 3.2.4.3 Nissl染色观察 |
| 3.2.4.4 透射电镜观察大鼠脑海马超微结构 |
| 3.2.4.5 抗氧化指标SOD、GSHPx、MDA检测 |
| 3.2.4.6 RT-PCR检测两组脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3 因子在m RNA水平表达 |
| 3.2.4.7 Western Blot检测两组脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3 因子蛋白表达 |
| 3.2.4.8 用TUNEL法观察脑海马神经元凋亡 |
| 3.2.5 统计学分析方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 Morris水迷宫检测 |
| 3.3.2 HE染色观察大鼠脑海马CA1神经元病理变化 |
| 3.3.3 Nissl染色观察大鼠脑海马CA1 神经元病理变化 |
| 3.3.4 透射观察大鼠脑海马神经元超微结构 |
| 3.3.5 抗氧化指标SOD、GSHPx、MDA检测结果 |
| 3.3.6 RT-PCR检测两组脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3 因子在mRNA水平表达 |
| 3.3.7 Wester blot检测两组脑海马SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3 因子在蛋白水平表达 |
| 3.3.8 TUNTL检测各组大鼠脑海马CA1 区凋亡细胞结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 西红花苷对急性低氧条件下HT22细胞保护作用的研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 研究对象及主要试剂 |
| 4.2.1 主要试剂 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.3 研究方法 |
| 4.3.1 HT22细胞传代培养 |
| 4.3.2 西红花苷对HT22细胞在低氧条件存活率的测定 |
| 4.3.3 通过透射电镜检测西红花苷对HT22细胞在低氧条件下形态结构变化 |
| 4.3.4 WesternBlot检测西红花苷对HT22 细胞在低氧条件下SIRT1、PGC-1a、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白的表达 |
| 4.3.5 RTPCR检测西红花苷对HT22细胞在低氧条件下 SIRT1、PGC-1a、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白的表达 |
| 4.3.6 西红花苷对 HT22 细胞在低氧条件下 SOD、GSHPx、MDA 水平的检测 |
| 4.3.7 西红花苷对HT22细胞低氧条件凋亡的影响 |
| 4.3.8 统计学处理 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 西红花苷对低氧 HT22 细胞存活率的检测 |
| 4.4.2 透射电镜示各组HT22细胞超微结构 |
| 4.4.3 Wester blot 检测西红花苷对低氧刺激12小时 HT22 细胞相关蛋白表达影响 |
| 4.4.4 Wester blot 检测西红花苷对低氧刺激 24 小时 HT22相关蛋白表达影响 |
| 4.4.5 qRT-PCR检测西红花苷对低氧12 小时HT22 细胞SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3m RNA水平表达影响 |
| 4.4.6 qRT-PCR检测西红花苷对低氧24 小时HT22 细胞SIRT1、PGC-1α、TFAM、Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA水平表达影响 |
| 4.4.7 西红花苷对低氧12 小时HT22 细胞抗氧化指标SOD、GSHPX、MDA检测结果 |
| 4.4.8 西红花苷对低氧24 小时HT22 细胞抗氧化指标SOD、GSHPX、MDA检测结果 |
| 4.4.9 西红花苷对低氧12小时HT22细胞凋亡结果 |
| 4.4.10 西红花苷对低氧 24 小时HT22细胞凋亡检测 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 全文讨论 |
| 参考文献 |
| 博士学位期间科研成果简介 |
| 致谢 |
| 附录 A(综述1)藏红花活性成分对神经系统疾病的作用 |
| 参考文献 |
（7）醒脑静注射液调节觉醒肽-腺苷神经功能治疗酒精性昏迷大鼠的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 酒精性昏迷的研究进展 |
| 一、酒精性昏迷的研究现状 |
| 二、酒精性昏迷的神经机制研究 |
| 三、酒精性昏迷的临床治疗研究 |
| 第二节 觉醒肽-腺苷神经功能的研究进展 |
| 一、觉醒肽对觉醒调节的研究现状 |
| 二、腺苷对酒精性昏迷的研究现状 |
| 第三节 醒脑静注射液的研究进展 |
| 一、醒脑静注射液的主要有效成分研究 |
| 二、醒脑静注射液的药理学机制研究 |
| 三、醒脑静注射液的促醒作用机制研究 |
| 第四节 总结与展望 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 醒脑静注射液对肝脏乙醇代谢酶活性和氧化应激的影响 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 第二节 高效液相色谱法测定人工脑脊液中腺苷含量方法的建立 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、小结 |
| 第三节 醒脑静注射液对酒精性昏迷大鼠的促醒神经机制研究 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文及参与课题情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（8）乙醇与1,2-二氯乙烷联合暴露对小鼠肝和脑组织的损伤作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:乙醇与 1,2-二氯乙烷联合暴露对小鼠肝损伤作用及其机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂与仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂配置 |
| 2.2 实验动物分组与染毒 |
| 2.2.1 实验动物选择 |
| 2.2.2 染毒与分组 |
| 2.3 检测指标及方法 |
| 2.3.1 ALT测定:采用生化试剂盒 |
| 2.3.2 AST测定:采用生化试剂盒 |
| 2.3.3 GSH测定:采用生化试剂盒 |
| 2.3.4 MDA测定:采用生化试剂盒 |
| 2.3.5 T-SOD测定:采用生化试剂盒 |
| 2.3.6 肝微粒体中CYP2E1蛋白提取 |
| 2.3.7 肝组织中相关蛋白水平测定 |
| 2.3.8 Real-time PCR检测肝组织中相关m RNA表达水平 |
| 2.3.9 肝组织病理观察 |
| 2.4 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同浓度乙醇与 1,2-DCE联合暴露对各组小鼠体重增长的影响 |
| 3.2 乙醇与 1,2-DCE联合暴露对小鼠肝组织损伤的病理观察 |
| 3.3 乙醇与 1,2-DCE联合暴露对小鼠血清中ALT和AST活性的影响 |
| 3.4 乙醇与 1,2-DCE联合暴露对小鼠肝组织中氧化应激的影响 |
| 3.5 乙醇与 1,2-DCE联合暴露对小鼠肝组织微粒体中CYP2E1表达水平的影响 |
| 3.6 乙醇与 1,2-DCE联合暴露对肝组织中Nrf2信号通路的影响 |
| 3.6.1 肝脏组织中NRF2蛋白及m RNA相对含量 |
| 3.6.2 肝脏组织中HO-1 蛋白及m RNA相对含量 |
| 3.6.3 肝脏组织中g-GCSc蛋白及m RNA相对含量 |
| 3.6.4 肝脏组织中GR蛋白及m RNA相对含量 |
| 3.6.5 肝脏组织中g-GCSm蛋白及m RNA相对含量 |
| 4 讨论 |
| 第二部分:乙醇与 1,2-二氯乙烷联合暴露对小鼠脑损伤作用及其机制研究 |
| 5 前言 |
| 6 材料与方法 |
| 6.1 主要试剂与仪器 |
| 6.1.1 主要试剂 |
| 6.1.2 主要仪器 |
| 6.1.3 主要试剂配置 |
| 6.2 实验动物分组与染毒 |
| 6.2.1 实验动物选择 |
| 6.2.2 染毒与分组 |
| 6.3 测定指标及方法 |
| 6.4 统计分析 |
| 7 结果 |
| 7.1 不同浓度乙醇与 1,2-DCE联合暴露对各组小鼠体重增长的影响 |
| 7.2 乙醇与 1,2-DCE联合暴露对各组小鼠脑脏器系数、脑含水量、行为学指标影响 |
| 7.3 乙醇与 1,2-DCE联合暴露对小鼠脑组织损伤的病理观察 |
| 7.4 乙醇与 1,2-DCE联合暴露对小鼠脑组织中氧化应激的影响 |
| 7.5 乙醇与 1,2-二氯乙烷暴露对脑组织中蛋白及m RNA表达水平的影响 |
| 7.5.1 乙醇与 1,2-二氯乙烷联合暴露对脑组织中CYP2E1、Occludin、ZO-1、AQP4蛋白及m RNA表达水平的影响 |
| 7.5.2 乙醇与 1,2-二氯乙烷联合暴露对脑组织中NRF2信号通路蛋白及m RNA表达水平的影响 |
| 8 讨论 |
| 8.1 乙醇与 1,2-DCE联合暴露对小鼠脑脏器系数、脑含水量、行为学指标、脑的形态学影响 |
| 8.2 乙醇与 1,2-DCE联合暴露对小鼠AQP4及血脑屏障相关蛋白及m RNA的表达水平影响 |
| 8.3 氧化应激在乙醇与 1,2-DCE联合暴露小鼠脑损伤中的作用 |
| 8.4 CYP2E1在乙醇与 1,2-DCE联合暴露致小鼠脑损伤中的作用 |
| 8.5 NRF2信号通路在乙醇与 1,2-DCE联合暴露致小鼠脑损伤中的作用 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（9）异常黑胆质成熟剂对抑郁症大鼠模型支配器官组织形态学的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 内容与方法 |
| 1.研究对象 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2 内容与方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 检测方法 |
| 2.3 异常黑胆质成熟剂对抑郁症大鼠模型支配器官组织形态学观察 |
| 2.4 异常黑胆质成熟剂对抑郁症大鼠模型支配器官组织细胞超微结构观 |
| 2.5 抑郁症动物模型支配器官（脑、心脏、肝脏）超微结果视觉评分方法 |
| 3 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学位论文 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（10）北五味子总三萜、木脂素对酒精性肝损伤的保护作用及其机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 Abstract 第一章 前言 |
| 1.1 五味子概述 |
| 1.1.1 五味子的种类 |
| 1.1.2 北五味子的化学成分 |
| 1.1.3 北五味子的保健功能 |
| 1.2 北五味子三萜、木脂素研究进展 |
| 1.2.1 北五味子三萜概述 |
| 1.2.2 北五味子三萜的生物活性 |
| 1.2.3 北五味子木脂素概述 |
| 1.2.4 北五味子木脂素的生物活性 |
| 1.2.5 三萜、木脂素的分离制备 |
| 1.2.6 三萜、木脂素的结构鉴定 |
| 1.3 酒精性肝损伤的研究进展 |
| 1.3.1 酒精性肝病概述 |
| 1.3.2 酒精性肝损伤的影响因素 |
| 1.3.3 酒精代谢与酒精性肝损伤 |
| 1.3.4 北五味子提取物干预酒精性肝损伤的研究概况 |
| 1.4 本课题的目的、意义及主要研究内容 |
| 1.4.1 研究目的和意义 |
| 1.4.2 主要研究内容 第二章 北五味子总三萜、木脂素的化学成分分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料与试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 北五味子总三萜、木脂素的制备 |
| 2.1.4 HSCCC两相溶剂系统的选择及样品的制备 |
| 2.1.5 HSCCC的样品分离 |
| 2.1.6 北五味子总三萜、木脂素及HSCCC各组分的HPLC分析条件 |
| 2.1.7 制备型HPLC的样品分离 |
| 2.1.8 单体化合物的紫外光谱、质谱及核磁共振检测条件 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 HSCCC溶剂系统的选择及分离 |
| 2.2.2 北五味子总三萜、木脂素及HSCCC各组分的HPLC分析 |
| 2.2.3 制备型HPLC的进一步分离 |
| 2.2.4 HSCCC和制备型HPLC的比较分析 |
| 2.2.5 单体化合物的结构鉴定 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 第三章 北五味子总三萜、木脂素对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料与试剂 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 小鼠急性酒精性肝损伤模型的建立 |
| 3.1.4 样品的采集与制备 |
| 3.1.5 检测指标及方法 |
| 3.1.6 统计学分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 一般情况观察 |
| 3.2.2 小鼠肝脏的总体观察 |
| 3.2.3 小鼠肝组织光镜检查 |
| 3.2.4 北五味子总三萜、木脂素对急性酒精性肝损伤小鼠肝功能的影响 |
| 3.2.5 北五味子总三萜、木脂素对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏脂肪代谢的影响 |
| 3.2.6 北五味子总三萜、木脂素对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏抗氧化能力的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 第四章 北五味子总三萜、木脂素对大鼠酒精摄入过程中血清脂质水平及抗氧化能力变化的干预作用 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料与试剂 |
| 4.1.2 主要仪器 |
| 4.1.3 剂量分组设置与样本采集 |
| 4.1.4 检测指标及方法 |
| 4.1.5 统计学分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 酒精摄入及北五味子总三萜、木脂素干预过程中大鼠血清脂质水平的动态变化 |
| 4.2.2 酒精摄入及北五味子总三萜、木脂素干预过程中大鼠血清氧化-抗氧化水平的动态变化 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 第五章 北五味子总三萜、木脂素对大鼠慢性酒精性肝损伤保护作用及其机制的研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 材料与试剂 |
| 5.1.2 主要仪器 |
| 5.1.3 剂量分组设置与样本采集 |
| 5.1.4 肝脏病理学检查 |
| 5.1.5 血清、肝脏及肝微粒体相关指标的检测 |
| 5.1.6 肝微粒体中CYP2E1和HO-1的mRNA表达水平分析 |
| 5.1.7 肝微粒体中CYP2E1和HO-1的蛋白表达水平分析 |
| 5.1.8 统计学分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 北五味子总三萜、木脂素对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏病理结构的影响 |
| 5.2.2 北五味子总三萜、木脂素对慢性酒精性肝损伤大鼠肝功能的影响 |
| 5.2.3 北五味子总三萜、木脂素对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏氧化-抗氧化水平的影响 |
| 5.2.4 北五味子总三萜、木脂素对慢性酒精性肝损伤大鼠肝微粒体CYP2E1表达的影响 |
| 5.2.5 北五味子总三萜、木脂素对慢性酒精性肝损伤大鼠肝微粒体HO-1表达的影响 |
| 5.2.6 北五味子总三萜、木脂素对慢性酒精性肝损伤大鼠肝微粒体CYP2E1及HO-1活性的影响 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 第六章 结论 参考文献 附录 缩略词表 致谢 攻读学位期间发表的论文 |
四、乙醇对大鼠肝细胞和脑神经细胞超微结构的影响（论文参考文献）
- [1]电针干预对缺血再灌注模型大鼠的神经保护与神经调节蛋白1/表皮生长因子受体4信号通路的关系[J]. 姚奇鹏,廖敏. 中国组织工程研究, 2022(23)
- [2]基于核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α研究酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠中枢SCN昼夜节律及能量代谢的并联调控机制[D]. 刘鑫. 湖北中医药大学, 2021(09)
- [3]基于内质网应激PERK-ATF4-CHOP通路探讨对药酸枣仁-合欢花抗抑郁作用机制[D]. 曹智怡. 广西中医药大学, 2021(02)
- [4]痰瘀同治 清热解毒法防治AD的理论探讨及其调控HSP70介导的神经保护机制研究[D]. 谭爱华. 湖北中医药大学, 2021
- [5]五味子乙素对慢性酒精中毒大鼠学习记忆的影响及其分子机制的研究[D]. 张丽凤. 右江民族医学院, 2020(04)
- [6]西红花苷预处理保护急性高原缺氧大鼠脑海马神经元的SIRT1/PGC-1a机制研究[D]. 张晓岩. 青海大学, 2020(01)
- [7]醒脑静注射液调节觉醒肽-腺苷神经功能治疗酒精性昏迷大鼠的作用机制研究[D]. 陈晓彤. 广州中医药大学, 2019(04)
- [8]乙醇与1,2-二氯乙烷联合暴露对小鼠肝和脑组织的损伤作用及其机制研究[D]. 张林. 中国医科大学, 2019(01)
- [9]异常黑胆质成熟剂对抑郁症大鼠模型支配器官组织形态学的影响[D]. 玉苏甫江·台外库力. 新疆医科大学, 2016(10)
- [10]北五味子总三萜、木脂素对酒精性肝损伤的保护作用及其机制的研究[D]. 朱力杰. 沈阳农业大学, 2014(01)