一、来源于骨髓和脐带血的基质细胞基本特性的比较（论文文献综述）
文瑞婷[1]（2020）在《单细胞水平解析体外扩增对脐带血造血干细胞自我更新和分化的影响》文中指出【目的】本研究拟在体外采用细胞因子联合不同小分子化合物扩增脐带血（cord blood,CB）来源的造血干细胞（hematopoietic stem cells,HSC）,探索体外诱导HSC高效扩增的最佳体系;通过免疫缺陷小鼠连续移植实验评价扩增后细胞的植入能力和长期自我更新能力;基于单细胞测序技术筛选调控HSC自我更新的关键分子,阐明其作用的信号通路,并从单细胞水平解析体外扩增体系对HSC自我更新和分化的影响。【方法】（1）CB来源的CD34+细胞在4种细胞因子（SCF、Flt3-L、TPO、IL-6）存在的条件下与UM171、SR1、和K1小分子单独或联合（USK）在无血清培养基中培养10 d,流式细胞术检测CD34+、CD34+CD38-、CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的比例以及CD33+、CD41+、CD3-CD56+、CD235a+、CD19+和CD3+细胞的比例;通过集落形成单位（colony forming units,CFU）实验评价扩增后的细胞向各系祖细胞分化的能力。（2）将500、2500及10000个未经培养的CB来源的CD34+细胞（Unculture）,或者500、2500及10000个起始细胞经Vehicle、USK体外培养10 d扩增后的细胞分别移植给首次移植NOD-Prkdcscid Il2rgnull（NPG）受鼠,通过流式细胞术检测移植后5、8、12、16周时小鼠外周血和16周时骨髓中h CD45+的比例。（3）取首次移植10000个起始细胞组的NPG小鼠骨髓分为2×106,5×106和1×107三个数量级分别移植给二次移植NPG受鼠,通过流式细胞术检测移植后16周时小鼠骨髓中h CD45+细胞的比例。（4）通过极限稀释分析（limiting dilution analysis,LDA）计算首次移植和二次移植小鼠体内NOD-SCID小鼠再植细胞（severe-combined immunodefcient mouse-repopulating cells,SRC）的数量。（5）采用单细胞RNA测序（single cell RNA sequencing,sc RNA-seq）技术从单细胞水平解析体外扩增体系对HSC分化的影响,筛选调控HSC自我更新的关键分子,阐明其作用的信号通路。【结果】（1）UM171、SR1、K1以及USK培养后CD34+细胞的比例均高于Vehicle培养组（P均<0.001）;USK以及UM171培养后CD34+CD38-细胞的比例较Vehicle培养组明显升高（P均<0.001）,SR1及K1培养组与Vehicle培养组比较无统计学差异（P均>0.05）;USK培养后CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞比例较Vehicle培养组明显升高（P<0.001）,其他组与Vehicle培养组比较无统计学差异（P均>0.05）。USK培养后CD34+细胞的比例与Unculture组比较无统计学差异（P均>0.05）,CD34+CD38-细胞以及CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的比例均高于Unculture组（P均<0.05）。（2）USK培养组及SR1培养组CD34+细胞扩增的倍数较Vehicle组显着增多（P均<0.05）;UM171培养组CD34+CD38-细胞扩增的倍数较Vehicle组升高（P<0.05）;Vehicle、UM171、SR1、K1、USK体外培养后CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的数量较培养前初始细胞数量分别增加了（61.58±47.51）、（248.56±193.44）、（210.05±201.46）、（133.08±118.93）和（543.33±365.20）倍,USK培养组CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞扩增的倍数较Vehicle组显着增多（P<0.001）。（3）USK及SR1培养组CD3-CD56+细胞比例均较Vehicle组增加（P<0.01）;UM171培养组CD33+细胞比例较Vehicle组增加（P<0.01）;UM171培养组CD41+细胞比例较Vehicle组降低（P<0.05）;各组之间CD235a+、CD19+和CD3+细胞比例均无统计学差异（P均>0.05）。USK、UM171、K1组CFU-G、M、GM、E以及GEMM的数量与Unculture组和Vehicle组比较均无统计学差异（P均>0.05）;SR1组CFU-G和GEMM的数量均较Unculture组减少（P<0.05）;Vehicle组GEMM的数量也较Unculture组减少（P<0.05）。（4）当移植500个起始细胞时,首次移植后第5周时USK组小鼠外周血中h CD45+细胞比例较Unculture组和Vehicle组均明显增加（P均<0.05）,移植后16周时USK组小鼠外周血和骨髓中h CD45+细胞比例与Unculture组比较无统计学差异（P>0.05）;当移植2500个起始细胞时,移植后5、8、12、16周时USK和Vehicle组小鼠外周血和骨髓中h CD45+细胞比例均较Unculture组明显降低（P均<0.05）。当移植10000个起始细胞时,移植后8、12、16周时USK组小鼠外周血中h CD45+细胞比例均较Unculture组减少（P均<0.05）。（5）当移植2×106、5×106或1×107个起始骨髓细胞时,二次移植后16周时USK组以及Vehicle组小鼠骨髓中h CD45+细胞的比例与Unculture组比较均未见明显差异（P均>0.05）。（6）首次移植时USK组每个起始细胞中含有SRC的数量（1/279）较Vehicle组（1/1379）增加了约5倍（P<0.05）,较Unculture组（1/543）增加了约2倍（P>0.05）。二次移植时各组每个起始细胞中含有SRC的数量无统计学差异（P均>0.05）。（7）sc RNA-seq数据采用UMAP降维可视化后,共分为17个细胞亚群。比较CB来源的CD34+细胞经USK体外培养与Unculture细胞群的变化,结果显示:CD34+细胞经USK体外培养10 d时Cluster 4（HSC）、Cluster 16（My SC）以及Cluster 10（MESC）细胞数量较体外培养前显着减少或消失,Cluster 1（My RP）、Cluster 2（GMP）、Cluster 3（Granulocyte）、Cluster 5（EMP）、Cluster 6（Ma/Ba/Eo）、Cluster7（Monocyte/m DC）、Cluster 8（Platelet）、Cluster 15（Erythroid）的细胞数量增多;比较CD34+细胞经USK培养与Vehicle培养之间细胞群的变化,结果显示:USK体外培养后10 d时Cluster 10、Cluster 0、Cluster 1、Cluster 5、Cluster 6以及Cluster15细胞数量较Vehicle培养组增多,Cluster 3、Cluster 7、Cluster 8、Cluster 13以及Cluster 14（B/p DC）细胞数量较Vehicle组显着减少。（8）sc RNA-seq基因表达分析显示:除研究已报道的HSC特异性标记AVP以及与HSC“干性”相关转录因子KLF2、HES1、MLLT3之外,HOPX和ID1也表达于Cluster 4（HSC）和Cluster 16（My HSC）。（9）比较USK组与Vehicle组差异性表达基因结果显示:USK体外培养上调了NRIP1、PRDX1、SELENOW基因表达并下调了CYP1B基因表达。比较USK组与Unculture组差异性表达基因结果显示:USK体外培养后细胞周期和细胞增殖相关基因（MKI67、TOP2A、HIST1H4C和TUBA1B）、髓系基因（IGLL1和MPO）、线粒体基因（MT-ND1和MT-CO3）表达上调,转录因子JUN、JUND、FOS、FOSB、IRF1、REL和NFKBIA表达下调。（10）比较Cluster 0（Multi RP）、Cluster 1（My RP）、Cluster 2（GMP）、Cluster10（MESC）与Cluster 4（HSC）细胞群之间的差异性基因表达结果显示:富集的上调基因包括PCLAF、TYMS、CENPF、MPO、IGLL1、HIST1H4C、TESC和PGAM1,富集的下调基因包括JUN、JUND、FOS、FOSB、KLF2、IRF1、NFKBIA、HES1、DNAJB1、HSPH1、HSPA1A和PNRC1;GO分析结果显示Cluster 0、Cluster 1、Cluster 2、Cluster 10与Cluster 4比较主要是促进了线粒体氧化磷酸化能量代谢,抑制了细胞分化的负向调节以及细胞的黏附作用;Pathway分析显示:Cluster 0、Cluster1、Cluster 2、Cluster 10与Cluster 4比较正向调节了氧化磷酸化能量代谢通路,负向调节了MAPK信号通路、FOXO通路以及REG/GR通路。（11）采用SCENIC分析sc RNA-seq数据,结果显示:转录因子FOS、FOSB、JUN、JUND、IRF1、REL在Cluster 4（HSC）、Cluster 16（My SC）中调控强度较高;这些关键分子主要作用于HSC“干性”相关基因、核受体基因、FOXO家族、低氧相关基因、HOX家族、NF-κB信号、TGF-β信号、Notch信号、m TOR信号以及MAPK信号相关基因。【结论】（1）4种细胞因子（SCF+Flt3-L+TPO+IL-6）与3种小分子（UM171+SR1+K1）组合能够使表型为CD34+CD38-CD45RA-CD90+的细胞体外扩增约543倍,其扩增效果明显优于4种细胞因子与其他单个小分子组合。（2）小分子化合物USK组合体外扩增的CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞在NPG小鼠体内可以短期植入,但在长期植入方面与Unculture和Vehicle组比较未见优势,提示CD34+CD38-CD45RA-CD90+可能并不能作为具有长期植入能力的HSC标记。（3）CB CD34+细胞经USK以及Vehicle体外培养后HSC、My SC、MESC显着减少或消失,“再生祖细胞”数量增多;但是与Vehicle培养体系比较,USK体外培养使MESC和“再生祖细胞”数量增多,成熟细胞数量减少。表明CB CD34+细胞经USK以及Vehicle体外培养后HSC发生了不同程度的分化,但是USK扩增组比Vehicle扩增组的分化程度低。（4）HOPX和ID1有望作为人功能性HSC的表型标记。（5）FOS、FOSB、JUN、JUND、IRF1、REL是调控HSC自我更新的关键分子;通过促进转录因子FOS、FOSB、JUN、JUND、IRF1、REL的表达和调节HSC的代谢途径、线粒体功能和ROS水平可能有助于维持HSC的自我更新并抑制其分化。
董忱[2]（2020）在《小分子化合物体外扩增造血干/祖细胞的研究》文中进行了进一步梳理背景造血干细胞是机体中能够进行自我更新和具有多向分化潜能的成体干细胞。造血干细胞移植可以在受者体内重建新的功能性造血系统,在临床上用于治疗血液系统恶性疾病以及其他恶性肿瘤,并用于基因治疗。造血干细胞的主要来源包括骨髓、动员外周血和脐带血。移植中回输造血干细胞的数量与成功植入和患者存活率相关。目前认为同种异体移植物中CD34+细胞数量≥2×106个/kg,自体移植物中CD34+细胞数量≥5×106个/kg,可以获得快速并持续的植入。造血干细胞移植作为重要的临床治疗手段得到了广泛的应用,然而不论是何种来源的造血干细胞,其数量都非常有限。脐带血中造血干细胞的数量相对较少,因此脐带血移植主要用于儿童患者,成年患者经脐带血移植后常常导致嗜中性粒细胞和血小板植入延迟,容易增加感染的风险。动员外周血造血干细胞采集便利,使供者免于骨髓穿刺和麻醉,但传统动员外周血方案的失败率较高。普乐沙福作为新一代的动员药物,可以挽救部分动员不佳或动员失败的患者,但对体内造血干细胞和骨髓微环境严重受损的患者仍然无法改善其动员结果。综上所述,造血干细胞数量不足是制约造血干细胞应用的关键问题之一。因此,体外有效扩增造血干细胞成为解决该问题的重要手段。高通量筛选小分子化合物文库发现嘧啶吲哚衍生物UM171和嘌呤衍生物SR1可以实现脐带血造血干细胞体外有效扩增,正在进行的临床试验得出了安全有效的初步结果,但其对不同来源造血干细胞的扩增作用及分子机制仍不明确。目的本研究旨在探讨小分子化合物UM171和SR1对人脐带血、供者动员外周血以及淋巴瘤患者自体动员外周血来源的造血干/祖细胞的体外扩增、多谱系分化能力以及造血干/祖细胞表面CXCR4表达的影响;探索淋巴瘤患者自体动员外周血造血干/祖细胞体外有效扩增的条件,为临床治疗动员不佳或动员失败的淋巴瘤患者提供挽救措施,并进一步探索小分子化合物作用于造血干/祖细胞的分子机制。方法1.获取脐带血、供者动员外周血和淋巴瘤患者自体动员外周血,通过人外周血淋巴细胞分离液和磁性细胞分选技术富集三种来源的CD34+细胞,以分选出的细胞作为未培养组。使用添加100 ng/m L SCF、100 ng/m L Flt-3L、100 ng/m L TPO、100 ng/m L IL-6的Stem Span TM SFEMⅡ组成的造血干细胞扩增培养基进行体外扩增培养。将三种来源的CD34+细胞分别分为对照组、UM171组、SR1组和UM171+SR1组在体外培养10天。通过流式细胞术和细胞计数检测CD34+细胞、CD34+CD38-细胞、CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的比例和绝对数量,由各体外培养组细胞数除以接种细胞数计算得出扩增倍数。2.收集对照组、UM171组、SR1组和UM171+SR1组三种来源体外培养10天后的细胞,通过集落形成实验和流式细胞术检测体外扩增后细胞的多谱系分化能力。3.三种来源的CD34+细胞经对照组、UM171组、SR1组和UM171+SR1组体外培养48小时,通过流式细胞术检测CD34+细胞、CD34+CD38-细胞和CD34+CD38-CD90+细胞上CXCR4的表达水平。4.根据动员结果的不同,将淋巴瘤患者分为动员不佳组（CD34+细胞采集量<2×106个/kg）和动员达标组（CD34+细胞采集量≥2×106个/kg）,将2组患者CD34+细胞添加UM171在体外培养10天,通过流式细胞术和细胞计数检测CD34+细胞、CD34+CD38-细胞、CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的比例和绝对数量,并计算扩增倍数。5.淋巴瘤患者自体动员外周血CD34+细胞经对照组和UM171组体外培养10天,收集细胞,提取RNA进行转录组测序,寻找差异表达基因并进行基因本体论富集分析,探索UM171促进淋巴瘤患者自体动员外周血造血干/祖细胞扩增的分子机制。结果1.脐带血来源的CD34+细胞经体外培养10天后,与对照组比较,UM171组、SR1组和UM171+SR1组CD34+细胞与CD34+CD38-细胞比例均升高,UM171+SR1组CD34+细胞与CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的扩增倍数均升高（P均<0.05）;总有核细胞的扩增倍数在各组之间的差异无统计学意义（P>0.05）。供者动员外周血来源的CD34+细胞经体外培养10天后,与对照组比较,UM171组、SR1组和UM171+SR1组CD34+细胞与CD34+CD38-细胞比例均升高,UM171组和UM171+SR1组CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞比例均升高,UM171组CD34+CD38-细胞与CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的扩增倍数均升高,UM171+SR1组CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的扩增倍数升高（P均<0.05）;总有核细胞的扩增倍数在各组之间的差异无统计学意义（P>0.05）。淋巴瘤患者自体动员外周血来源的CD34+细胞经体外培养10天后,与对照组比较,UM171组CD34+CD38-细胞与CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞比例均升高,UM171+SR1组CD34+细胞与CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞比例均升高,UM171组CD34+细胞、CD34+CD38-细胞与CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的扩增倍数均升高,UM171+SR1组CD34+细胞的扩增倍数升高（P均<0.05）;总有核细胞的扩增倍数在各组之间的差异无统计学意义（P>0.05）。2.集落形成实验结果显示,同一来源形成的粒细胞集落（CFU-G）、巨噬细胞集落（CFU-M）、粒髓系细胞混合集落（CFU-GM）、红系细胞集落（CFU-E、BFU-E）和多系细胞混合集落（CFU-GEMM）的数目在各组之间的差异均无统计学意义（P均>0.05）。流式检测结果显示,与对照组比较,UM171扩增后脐带血来源的CD33+（髓系）细胞比例升高,CD41+（巨核）细胞比例降低（P均<0.05）;SR1扩增后三种来源的CD3-CD56+（自然杀伤）细胞比例均升高（P均<0.05）。3.三种来源的CD34+细胞经体外培养48小时后,与未培养组比较,对照组、UM171组、SR1组和UM171+SR1组CD34+细胞、CD34+CD38-细胞与CD34+CD38-CD90+细胞上CXCR4的表达水平均升高,差异具有统计学意义（P均<0.05）。但与对照组比较,UM171组、SR1组和UM171+SR1组CD34+细胞、CD34+CD38-细胞和CD34+CD38-CD90+细胞上CXCR4表达水平的差异均无统计学意义（P均>0.05）。4.动员不佳组自体动员外周血来源的CD34+细胞经UM171体外培养10天后,CD34+细胞、CD34+CD38-细胞和CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的比例以及总有核细胞、CD34+细胞、CD34+CD38-细胞和CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的扩增倍数与动员达标组的差异均无统计学意义（P均>0.05）。5.分析转录组测序结果得知,与对照组比较,UM171组扩增的淋巴瘤患者自体动员外周血造血干/祖细胞鉴定出1,287个差异表达基因,包括840个上调基因和447个下调基因。上调的基因主要包括造血干细胞、肥大细胞和内皮细胞特异性基因以及调控肿瘤细胞增殖和分化的基因等,下调的基因主要包括巨核细胞和红细胞相关基因、趋化因子和细胞粘附相关基因以及转录因子相关基因等。基因本体论富集分析表明,这些差异表达基因主要集中在调节细胞粘附分子活性和趋化因子活性、细胞表面多种受体与配体结合、细胞表面通道蛋白和转运蛋白活性等分子功能,并调控了非经典Wnt信号通路、细胞对活性氧的应答、干细胞增殖、细胞分化和外源性凋亡信号通路,以及肿瘤坏死因子超家族细胞因子的产生、对转化生长因子β的应答等生物过程。结论1.小分子化合物UM171和SR1体外培养人脐带血、供者动员外周血和淋巴瘤患者自体动员外周血三种来源的造血干/祖细胞,均能够促进造血干/祖细胞比例的升高,UM171能够有效扩增三种来源造血干/祖细胞的数量。2.小分子化合物UM171和SR1体外扩增三种来源造血干/祖细胞的同时均能保持其多谱系分化的潜能。UM171促进脐带血来源造血干/祖细胞分化为髓系细胞并抑制其分化为巨核细胞。SR1促进三种来源造血干/祖细胞分化为自然杀伤细胞。提示SR1可能是参与诱导自然杀伤细胞产生的有效小分子化合物。3.小分子化合物UM171和SR1不影响三种来源造血干/祖细胞上归巢相关因子CXCR4的表达,但本研究所用的体外扩增培养体系使三种来源造血干/祖细胞上CXCR4的表达水平显着升高,有助于促进造血干/祖细胞归巢和长期植入。4.小分子化合物UM171能够促进动员不佳淋巴瘤患者自体动员外周血造血干/祖细胞的比例升高并有效扩增其数量,UM171扩增动员不佳淋巴瘤患者和动员达标淋巴瘤患者的自体动员外周血造血干/祖细胞的作用无显着差别。为动员不佳和动员失败的淋巴瘤患者提供了接受自体干细胞移植的机会。5.机制研究表明,小分子化合物UM171促进淋巴瘤患者自体动员外周血造血干/祖细胞扩增的机制与抑制红细胞和巨核细胞分化,激活非经典Wnt信号通路,细胞内活性氧水平的调控以及促炎和抗炎/解毒网络之间的平衡有关,转化生长因子β和肿瘤坏死因子等细胞因子也起到重要作用。此外,本研究鉴定出肥大细胞和内皮细胞特异性基因表达增加与造血干/祖细胞的扩增或自我更新有关,值得进一步研究。
杨最[3]（2020）在《地中海贫血症红细胞谱系发育分化基因筛查及机制研究》文中认为地中海贫血症是世界上最常见和发生率最高的一种单基因遗传病。目前临床上地中海贫血症没有可以普遍推广的根治方法。产前诊断在地中海贫血症的预防上有重要贡献。由于产前诊断技术的局限,导致地中海贫血症稀有突变类型不能被检测,不能完全避免地中海贫血症患儿出生。而外显子测序技术有可能弥补这一缺点,因此我们运用外显子测序技术对地中海贫血症基因携带者羊水样本进行检测,既能验证临床产前诊断结果,同时也是为了发现新的变异位点。我们通过外显子测序筛选出1344个共有变异位点。通过对这些共有变异位点进行GO富集分析筛选了26个term,涵盖膜的整体成分、跨膜信号受体活性、细胞外基质结构成分、钙离子结合等;通过KEGG富集分析筛选了13条信号通路,包括糖酵解/糖异生、ECM受体相互作用、补体与凝血级联反应等。这些基因和信号通路可能与地中海贫血症的发病机制密切相关,其结果需要进一步验证。另一方面,珠蛋白基因缺陷影响红细胞发育过程。红细胞的发育起源于造血干细胞,对造血干细胞的机理研究是根治地中海贫血症等一系列血液疾病的潜在突破口。我们利用磁珠分选和流式分选的方法从脐带血样本分离纯化CD34阳性细胞,在体外运用多种细胞因子成功对造血干细胞进行诱导分化,为体外培养造血干细胞模拟体内的造血过程奠定基础。
杨小萍[4]（2020）在《人骨骼肌源性血管外膜细胞的生物学特性及其对造血干/祖细胞体外支持作用的研究》文中指出目的从人骨骼肌组织中分离培养血管外膜细胞（pericytes/perivascular cells,PCs）并进行生物学特性鉴定,探究其对人脐带血（Umbilical cord blood,UCB）CD34+细胞的体外支持效力。方法1.利用多参数流式细胞术（multiparameter fluorescence-activated cell sorting,MP-FACS）从人骨骼肌中分选表型为CD146+CD56-CD34-CD144-CD45-的人骨骼肌血管外膜细胞（human skeletal muscle-derived pericytes/perivascular cells,hMD-PCs）,并对其进行生物学鉴定;2.采用密度梯度离心法分离获取人UCB单个核细胞（Mononuclear cells,MNCs）,利用免疫磁珠法分选UCB CD34+细胞;3.建立以CD146+hMD-PCs为滋养层的UCB CD34+细胞体外培养体系,同时设置以人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）为滋养层的阳性对照培养体系及无滋养层的UCB CD34+细胞单独培养体系为空白对照,分别于共培养1W、2W、4W对各培养体系的细胞数量、集落形成能力、免疫表型及培养上清液造血因子表达水平进行检测及统计分析。结果1.通过MP-FACS分选出CD146+hMD-PCs,回测纯度为（91.5±1.85）%（n=5）;其表达MSCs表面标志物CD105、CD90、CD73、CD44,不表达内皮细胞及造血细胞表面标志物CD31、CD34、CD45;经诱导分化培养可向软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞分化,并保留其成肌性;2.经免疫磁珠分选获取的脐血CD34+细胞阳性率为（85.35±3.25）%;3.UCB CD34+细胞按5×104/孔的密度分别与CD146+hMD-PCs、BM-MSCs共培养:（1）共培养1W后,CD146+hMD-PCs组、BM-MSCs组的细胞数分别为（5.36±2.63）×104、（4.08±1.88）×104,两组细胞数无显着增加,空白对照组的细胞数为（0.78±0.47）×104,细胞数明显下降;共培养2W后,CD146+hMD-PCs组、BM-MSCs组的细胞数分别为（5.78±1.41）×104、（5.2±1.59）×104,细胞数有所增长,而空白对照组几乎无细胞存活;共培养4W后,CD146+hMD-PCs组、BM-MSCs组细胞数呈下降趋势,分别为（3.55±2.65）×104、（2.86±1.27）×104;共培养至5W时几乎无细胞存活。经统计分析,实验组与阳性对照组1W,2W,4W的细胞数差异均无统计学意义（P>0.05,n=6）。空白对照组1W、2W的细胞数分别与实验组、阳性对照组相比,差异均有显着统计学意义（1W P<0.01,2W P<0.001,n=6）。（2）集落培养显示,CD146+hMD-PCs组、BM-MSCs组造血干祖细胞在共培养1W、2W、4W后的集落形成能力无显着统计学差异（P>0.05,n=5）,无滋养层培养体系因细胞数明显减少未能行集落培养。（3）经流式细胞术检测,CD146+hMD-PCs组共培养1W、2W、4W有核细胞中CD45+细胞、CD34+CD33-细胞、CD14+细胞、CD10+/CD19+细胞的比例与BM-MSCs组比较,无统计学差异（P>0.05,n=6）。（4）ELISA检测培养上清液细胞因子表达水平,CD146+hMD-PCs组与BM-MSCs组IL-3、IL-6、VEGF表达水平无统计学差异,CD146+hMD-PCs组HGF、MCSF、TNF-α及IFN-γ水平较BM-MSCs组高（P<0.05）,BM-MSCs组上清液中SCF及TPO较CD146+hMD-PCs组高（P<0.05）。结论CD146+hMD-PCs具有与BM-MSCs相似的生物学特性,且CD146+hMD-PCs做为滋养层细胞像BM-MSCs一样具有体外造血支持作用。
董利菊[5]（2020）在《新生儿脐带血调节性T细胞比率及T细胞上PD-1表达的初步研究》文中进行了进一步梳理研究背景及目的:脐带血（Cord blood,CB）是胎儿娩出、脐带结扎并离断后残留在胎盘和脐带中的血液,含有丰富的干细胞,脐带血以前被认为是一种生物废弃物,现已成为用于临床和研究应用的造血干细胞的有用替代来源。与骨髓移植或粒细胞集落刺激因子（Granulocyte colony stimulating factor,G-CSF）动员的外周血（Peripheral blood,PB）干细胞移植相比,使用脐带血移植物作为干细胞来源为移植受体带来了优点和缺点,例如允许更高程度的人类白细胞抗原（Human leukocyte antigen,HLA）匹配不同,降低移植物抗宿主病（Graft versus host disease,GVHD）的发病率与严重程度,延迟植入或更常见和严重的移植后感染。这些变化是由于脐带血的独特性质所致,信号传导机制改变导致细胞组成不同,例如,淋巴细胞数量占优势,嗜中性粒细胞减少,红细胞计数更高或细胞的免疫原性降低。尽管众所周知脐带血具有不同的生物学特性,但其分子基础仍然知之甚少。本研究通过血常规和流式细胞术分析,检测脐带血中免疫细胞的组成和免疫耐受相关细胞T细胞及表面分子程序性死亡受体1（Programmed death receptor 1,PD-1）的表达,比较新生儿脐带血与母亲外周血免疫耐受功能的差异,探讨其与GVHD发生发展的关系,从而更好地利用脐带血干细胞,降低GVHD的发病率和严重程度,以及提高免疫细胞与分子在临床免疫治疗中的应用。方法:（1）收集健康新生儿脐带血24例,与正常妊娠孕妇外周血23例。（2）通过肉眼观察分析脐带血与外周血血细胞成分差异并用血常规检测两种血液中细胞计数及分类。（3）流式细胞术检测两种新鲜血液中CD34+造血干细胞的含量、调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）的比率、T细胞亚群以及T细胞上PD-1的百分比。（3）两种血液进行植物血凝素（Phytohemagglutinin-L,PHA-L）（2.5μg/m L）体外刺激培养,三天后观察T细胞亚群增殖情况并检测T细胞上PD-1表达的变化情况。结果:（1）通过肉眼观察,新生儿脐带血与母亲外周血在颜色和成分上有明显的差异。血常规结果分析也显示脐带血中红细胞、白细胞含量都相对较高,淋巴细胞与单核细胞也具有明显的差异。（2）通过流式细胞术检测出新鲜脐带血中CD34+造血干细胞含量明显相对外周血高（P<0.05）。（3）流式细胞术检测出新鲜脐带血中Treg细胞比率也较新鲜外周血高（P<0.05）,新鲜脐带血中CD4+T细胞上PD-1的表达水平明显低于外周血（P<0.001）。（4）PHA-L体外刺激脐带血发现,PD-1在CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞上表达均升高（P均<0.05）;PHA-L体外刺激外周血发现,PD-1在CD3+CD4+T细胞上表达升高（P<0.05）,在CD3+CD8+T细胞上表达升高无统计学意义。结论:新生儿脐带血含有更多的造血干细胞,且与母亲外周血存在较大的生物学差异。新生儿脐带血Treg细胞比率较母亲外周血高,而脐带血T细胞上PD-1表达量较低,但活化后表达升高更明显,可能是脐带血作为移植物能够降低移植物抗宿主病（GVHD）发病率和严重程度的原因。
张妍生[6]（2020）在《间充质干细胞治疗炎症性肠病临床疗效和安全性Meta分析》文中研究指明目的探讨间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）治疗炎症性肠病（Inflammatory Bowel Disease,IBD）的临床疗效和安全性。方法以“炎症性肠病”、“溃疡性结肠炎”、“克罗恩病”、“间充质干细胞”等为中文检索词,以“Inflammatory Bowel Disease”、“Idiopathic Proctocolitis”、“Ulcerative Colitis”、“Crohn’s Enteritis”、“Mesenchymal Stem Cells”等为英文检索词,在中国知网、万方、CBM、维普、PubMed、Embase、Web of Science、Cochrane图书馆等8个数据库进行文献检索,另外在中国临床注册中心和美国临床注册中心查找没有发表过的,但是实验数据已上传至临床注册中心的原始研究。通过阅读检索出相关文献的题目、摘要或全文,结合纳入和排除标准,最终筛选出符合Meta分析要求的文献。通读全文后对最终筛选的文献进行质量评价,并提取有效数据。主要的结局指标包括临床应答率、内镜下缓解率、复发率、不良事件发生率等二分类变量和疾病活动指数、内镜下活动性评分、组织学评分、C-反应蛋白（C-reactive Protein,CRP）、粪钙保护蛋白（Fecal Calcium Protective Protein,FCP）等连续型变量。应用Review Manager 5.3和StataSE-64软件对结局指标进行Meta分析。结果从上述数据库中共检索出4712篇相关文献,最终筛选出符合要求的文献24篇,其中随机对照试验（Randomized Controlled Trials,RCT）4篇,非RCT 12篇,单臂研究8篇。Meta分析的结果显示:在单臂研究中,MSCs治疗IBD的临床应答率、内镜下缓解率、复发率、不良事件发生率分别为56%（95%CI 37%75%）、36%（95%CI19%55%）、18%（95%CI 6%32%）、12%（95%CI 1%27%）,且都具有统计学意义（p<0.05）。在RCT和非RCT研究中,MSCs组的临床应答率、复发率、不良事件发生率分别为对照组的2.33（95%CI 0.1830.78）倍、0.41（95%CI 0.035.20）倍、0.33（95%CI0.110.93）倍,前两者的结果统计学分析无显着性差别（p>0.05）,后者的结果具有统计学意义（p<0.05）。MSCs组的疾病活动指数、内镜下活动性评分、组织学评分、CRP、FCP分别比对照组低5.09（95%CI-7.88-2.30）、0.31（95%CI-2.341.71）、0.18（95%CI-0.480.11）、2.41（95%CI-4.58-0.25）、0.92（95%CI-2.881.05）,其中疾病活动指数、CRP的结果具有统计学意义（p<0.05）,内镜下活动性评分、组织学评分、FCP的结果不具有统计学意义（p>0.05）。结论1.MSCs治疗IBD可以达到临床缓解和内镜下缓解,也存在复发风险。2.MSCs与传统药物相比,治疗IBD的疗效差异存在不确定性,有待于进一步深入研究和长期观察。3.MSCs治疗IBD比传统药物更安全,大多数不良反应可以耐受。
潘政军[7]（2019）在《Bcl-xL基因修饰人脐带血干细胞移植修复兔关节软骨损伤的实验研究》文中认为研究目的:探讨抑制细胞调亡的B细胞淋巴瘤/白血病-xl基因（Bcl-xL）对人脐带血干细胞定向诱导分化的影响,观察Bcl-xL基因修饰的人脐带血干细胞定向诱导分化以后修复兔关节软骨损伤的疗效。研究内容:（1）人脐带血干细胞的获取,分离培养、定向诱导分化成软骨细胞;（2）慢病毒编码的抑制细胞凋亡基因Bcl-xL转染人脐带血干细胞;（3）检测Bcl-xL基因过表达对干细胞凋亡的影响;（4）检测Bcl-xL基因过表达对干细胞分泌II型胶原蛋白、半胱氨酸蛋白酶-3和基质金属蛋白酶3等蛋白的影响;（5）制造兔膝关节软骨损伤模型;（6）海藻酸钠盐支架包被Bcl-xL基因修饰的人脐带血干细胞,植入并修复兔软骨损伤;（7）检测植入的人脐带血干细胞是否能在异种动物体内存活;（8）HE、MASSON和改良蕃红O-固绿等染色方法观察软骨缺损的修复;（9）免疫组化、实时PCR、WB等方法检测Bcl-xL基因的表达对动物体内软骨细胞分泌II型胶原、半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3等蛋白影响。材料与方法:（1）在正常分娩过程中获得人脐带血,体外分离获取干细胞,贴壁培养。取P2代细胞用TGF-β1因子联合使用胰岛素样生长因-1和地塞米松诱导干细胞向软骨细胞方向分化,培养至细胞爬满玻片时,用甲苯胺蓝染色和免疫组化染色方法鉴定诱导分化的效果,并与对照组比较。（2）用编码Bcl-xL的慢病毒对人脐带血干细胞进行修饰,取第3代人脐带血干细胞接种于6孔板,当细胞融合达到5070%时,用编码Bcl-xL基因的慢病毒载体转染人脐带血干细胞。实验分四组进行,分别为对照组、诱导组、诱导+Bcl-xL慢病毒转染组、诱导+慢病毒空载组。对照组只分离培养干细胞,不加任何诱导因子;诱导组加入TGF-β1等诱导因子;诱导+Bcl-xL慢病毒转染组是在诱导组的基础上再加入编码Bcl-xL基因的慢病毒;空载组是在诱导组的基础上只加入未编码Bcl-xL基因的慢病毒。以上四组继续培养48h,在倒置显微镜下连续观察并记录细胞形态特征;甲苯胺蓝染色证实Bcl-xL基因转染后的干细胞仍具有软骨细胞的特征;通过流式细胞仪鉴定软骨细胞特征性的表面抗原如:CD90和CD105的表达。通过流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况,评价Bcl-xL基因对干细胞的凋亡的影响。实时PCR检测Bcl-xL基因在mRNA水平的表达;同时以β-actin为内参;Western blotting（WB）印迹法检测Bcl-xL基因在蛋白水平的表达;实时PCR及WB等方法检测Bcl-xL基因表达及其对II型胶原蛋白、半胱氨酸蛋白酶-3、基质金属蛋白酶3等蛋白表达的影响;SPSS17.0软件统计学分析比较各组间mRNA和蛋白水平表达的差异。（3）制备海藻酸钠支架,加入人脐带血干细胞形成细胞-支架复合物。将1.2%的海藻酸钠溶液滴入102m M氯化钙溶液在模具中凝固形成无细胞的海藻酸钠支架;将人脐带血干细胞加入1.2%的海藻酸钠溶液制成1×106/ml的单细胞悬液,滴入102m M氯化钙溶液在模具中凝固形成含人脐带血干细胞的海藻酸钠支架复合物。（4）制造兔软骨损伤模型,30只三个月大的日本大耳兔,分为5组,每组12只膝关节。麻醉后备皮,双侧后腿膝关节内侧切口进入膝关节,在股骨髁关节面用电钻造成一个直径4mm,深度约3mm柱状缺损,穿透软骨下骨,造成全层关节软骨损伤。按照5种不同的方式修复软骨缺损:假手术组（对照组）:只进行假手术,软骨无损伤;模型组:进行软骨损伤造模而未予其它治疗干预措施,然后直接缝合;空载体治疗组:慢病毒空载体转染人脐带血干细胞,海藻酸钠包被后植入软骨损伤缺损区域;干细胞治疗组:未经慢病毒转染的人脐带血干细胞,海藻酸钠包被后植入软骨损伤缺损区域。Bcl-xL基因修饰治疗组:Bcl-xL基因修饰慢病毒转染人脐带血干细胞,海藻酸钠包被后植入软骨损伤缺损区域。饲养8周后全部动物处死,获取膝关节标本。采用抗人细胞核特异性抗体鉴定植入软骨缺损处的干细胞在正常免疫功能的兔体内是否能存活;观察Bcl-xL基因修饰的人脐带血干细胞移植治疗关节软骨损伤的效果,用HE、MASSON、改良番红O-固绿等染色方法观察关节软骨损伤的修复效果,用免疫组化、实时PCR及WB等方法检测动物体内Bcl-xL基因的表达及其对II型胶原蛋白、半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3等蛋白表达的影响;用SPSS 17.0软件统计学分析比较各组间mRNA和蛋白水平表达的差异。结果:1、人脐带血中可成功分离出具有多向分化潜能的干细胞,并可体外培养、定向诱导分化软骨细胞;2、用编码Bcl-xL的慢病毒对人脐带血干细胞进行修饰,干细胞增殖分化后仍具有软骨细胞特征。干细胞内的Bcl-xL基因在mRNA和蛋白水平的表达均上调;Bcl-xL基因可抑制干细胞的调亡,Bcl-xL基因可促进软骨细胞II型胶原蛋白在mRNA和蛋白水平的表达,显着抑制半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3的表达,组间分析具有统计学意义,P<0.05。3、海藻酸钠盐支架-干细胞复合体植入动物体内,检测到干细胞存活;病理染色显示,各组软骨损伤均有修复,3种染色方式均显示:Bcl-xL基因修饰的干细胞组软骨结构修复最满意,而模型组的修复相对最不满意;免疫组化染色、实时PCR和WB检测结果基本一致:软骨损伤促进了II型胶原纤维在mRNA和蛋白水平的表达,而Bcl-xL基因修饰进一步增加了II型胶原纤维的表达;对于半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3的检测结果显示:与假手术组比较,模型组的半胱氨酸蛋白酶-3和基质金属蛋白酶3表达均明显上调（P<0.05）,而Bcl-xl基因修饰组人脐带血干细胞相对模型组明显下调。组间分析差异显着（P<0.05）。此外,与正常人脐带血干细胞相比,Bcl-xL修饰的干细胞可进一步降低软骨损伤诱导的半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3的表达,提高II型胶原蛋白的表达。结论:1、人脐带血干细胞可定向诱导分化成软骨细胞,Bcl-xL基因修饰可降低干细胞凋亡。2、移植人脐带血干细胞有利于修复软骨损伤,而Bcl-xL修饰则能提高人脐带血干细胞移植修复软骨损伤的疗效。
张秀秀[8]（2019）在《人诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞促进成体造血发生的研究》文中指出目的探索人诱导性多能干细胞（hiPSCs）在神经分化相关因子作用下生成的间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）对成体造血的影响。方法1)与神经相关的N-MSCs的获得:hiPSCs在向前脑类器官分化过程中分离纯化出一个性质稳定的细胞系,命名为N-MSCs。通过形态学观察、流式检测和向脂肪、成骨、软骨细胞分化实验对N-MSCs进行鉴定。2)分别对N-MSCs和脐带（umbilical cord）MSCs（UC-MSCs）进行转录组测序,比较二者的遗传学差异。3)N-MSCs对成体造血的影响:人胚胎干细胞（human embryonic stem cell,hESCs）与鼠AGM-S3细胞共培养10 d获得的CD34+细胞分别与AGM-S3（AGM-S3组）、N-MSCs（N-MSCs组）进行2次共培养,CD34+细胞单独悬浮培养为对照组（34+组）,在不同时间点通过流式细胞术、集落形成能力检测、MGG染色对实验结果进行分析。4)N-MSCs对人脐带血来源的巨噬细胞（cord blood macrophage,CB-Mφ）的影响:Mφ与UC-MSCs（M+UC-MSCs 组）、N-MSCs（M+N-MSCs组）在transwell中共培养3d,对照组为Mφ的单独培养（M组）,共培养后得到的Mφ再在IL-4作用下培养24h。通过MGG染色、流式细胞术、qRT-PCR等方法对Mφ形态学、M2型Mφ相关表面标记和基因表达情况进行分析。结果1)N-MSCs满足真正MSCs的鉴定标准。2)转录组测序分析结果表明N-MSCs与炎症反应、血管生成、突触的形成等有密切关系。3)CD34+细胞单独悬浮培养、分别与AGM-S3、N-MSCs共培养10 d后:N-MSCs组收获的CD34+CD45+细胞数量分别是34+组和AGM-S3组的6.67倍、4.63倍（P<0.01）;Mφ的数量分别是34+组和AGM-S3组的1.45倍、1.65倍（P<0.05）。4)在集落培养中,CD34+细胞与N-MSCs共培养4 d后的细胞向Mix和Mφ集落的分化潜能较强。5)M+N-MSCs组中M2型Mφ的表面标记CD206的表达量分别是M组、M+UC-MSCs 组的 1.28、1.07 倍（P<0.01、P<0.05）;IL-10 基因相对表达量分别是M组、M+UC-MSCs组的3.0、1.19倍（P<0.01）。结论N-MSCs能促进成体造血和CB-Mφ向M2型Mφ的转变。
王奔放[9]（2018）在《基质重塑相关基因7和糖基化终末产物对巨核细胞发育和造血系统的调控作用》文中研究说明造血干细胞（hemopoietic stem cells,HSCs）是一类多能的、具有自我增殖分化能力的原始造血细胞,其生长及生理功能的发挥依赖于造血微环境。造血细胞及其微环境之间相互依存,共同决定着造血细胞的命运以及造血功能的状态。骨髓造血微环境主要包括造血组织中的基质细胞、细胞外基质和各种造血因子,其可以通过各种微环境信号调控造血干细胞的自我更新、定向分化以及动员、增殖、迁移等。巨核细胞（Megakaryocyte,Mk）是HSCs经过一系列的成熟分化过程产生的血小板前体细胞。除了生成并释放血小板,Mk还在生理和病理条件下参与骨髓龛（niche）的建立和维持,构成能确保造血干/祖细胞恰当地分化成所有血细胞系的微环境。Mk与骨髓环境中的其他细胞和细胞外成分相互作用,以维持造血功能以及外周血的稳态和生理机能。有意义的是,Mk涉及到细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）的沉积和重塑;反过来,Mk的成熟分化也依赖于细胞外基质的参与。造血干细胞发育的活跃增生及Mk的成熟分化都与基质重塑密切相关。在研究Mk对造血调控的过程中,我们关注一个新基因,即MXRA7（matrix remodeling associated 7,暂译作基质重塑相关基因7）。该基因最初因总是与其他跟基质重塑相关的已知基因（如MMPs、TIMPs、BM40）等共同表达而被命名,提示MXRA7可能参与基质重塑,因此也便有可能参与Mk对造血的调控过程中。此外,病理状态也会影响造血功能,其中糖尿病对造血系统功能的影响是值得探讨的重要问题之一。糖尿病作为常见的代谢病,其首要靶器官是循环系统,其中糖基化终末产物（Advanced Glycation End Products,AGEs）的过度积累是糖尿病的典型特征,也是引起糖尿病微血管并发症的主要病理因素。已知高血糖会破坏骨髓微环境,但目前关于糖尿病对造血干细胞和造血微环境的影响仍不清楚。因此,本课题就MXRA7和AGEs对巨核细胞发育和造血系统调控的作用进行研究。第一部分 基质重塑相关基因7对巨核细胞发育和造血系统的调控作用目的:从造血微环境中寻找、鉴定作用于造血干细胞的分子,对阐明造血机制具有重要意义,也将对相关的临床实践（如造血疾病治疗、造血干细胞移植、造血重建等）具有指导作用。基质重塑相关基因7（MXRA7）是一个功能知之甚少的新基因,公共数据库显示MXRA7在造血系统细胞中有阶段依赖性表达,说明其可能参与造血过程。因此我们对MXRA7在造血系统中的作用进行研究。方法:1、首先比较正常野生型小鼠（WT小鼠）和MXRA7基因敲除鼠（MXRA7-/-小鼠）的造血系统是否有差异:采集小鼠的外周血,利用血细胞计数仪检测外周血中红细胞、白细胞、血小板的数量;分离获得脾脏和骨髓的单细胞悬液并进行细胞计数;取骨组织固定制备石蜡切片,进行HE染色;骨髓涂片瑞氏染色用于巨核细胞分类计数;流式染色分析骨髓细胞中巨核细胞的差异。2、研究MXRA7对造血干祖细胞细胞分化的影响:利用集落形成细胞实验（colony-forming cell,CFC）和诱导分化实验鉴定MXRA7基因缺失对造血干祖细胞增殖、分化的影响。3、比较WT小鼠和MXRA7-/-小鼠血小板功能的差异:利用尾出血时间、血小板聚集实验、血块收缩实验、血小板寿命检测、流式细胞术分析血小板的活化和凋亡等实验比较两者血小板的差异。4、体外细胞实验研究MXRA7对巨核祖细胞MEG-01生物学功能的影响:构建sh-MXRA7慢病毒载体,通过慢病毒感染的方法将sh-MXRA7转入MEG-01细胞建立干扰MXRA7的稳定细胞系;CCK8检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡;TPO诱导分化,利用流式细胞术检测巨核细胞分化标记、多倍体和血小板样颗粒;利用定量PCR检测巨核细胞发育相关基因的表达;利用光学显微镜检测巨核细胞前血小板形成（proplatelet formation,PPF）;荧光免疫染色检测巨核细胞β-Tubulin的重排;利用蛋白印迹技术检测ERK、AKT的磷酸化水平及促凋亡蛋白Bax的水平。5、在体内实验中,使用小鼠非清髓模型和骨髓细胞移植模型来研究MXRA7对造血细胞恢复和重建的作用:WT和MXRA7-/-小鼠经非清髓辐照后检测造血恢复情况;野生型小鼠经清髓辐照后移植WT和MXRA7-/-小鼠的骨髓细胞,然后检测造血重建情况。结果:1、血细胞分析检测结果显示MXRA7基因敲除后,小鼠的红细胞和白细胞没有明显变化,血小板数量比WT小鼠明显降低。2、骨髓组织HE染色及骨髓细胞流式分析结果表明MXRA7-/-小鼠骨髓中巨核细胞略少于野生型小鼠。3、WT和MXRA7-/-小鼠造血干祖细胞的集落形成实验表明CFU-GEMM、CFU-GM、BFU-E的形态或数量均未有明显变化。4、MXRA7-/-小鼠造血干祖细胞诱导分化的巨核细胞比WT小鼠少。5、在血小板功能实验中发现,MXRA7-/-小鼠的血小板活化降低,早期凋亡增加,聚集增强,血块收缩增强,但是尾出血时间和血小板寿命与WT小鼠没有差异。6、sh-MXRA7转染MEG-01细胞成功构建MXRA7敲低的稳定细胞系,而MXRA7的敲低抑制MEG-01的增殖、分化和多倍体形成,并且抑制PPF的形成,巨核细胞发育相关基因GATA1、FOG1、PU-1、NF-E2表达未发生明显变化。进一步的结果表明MXRA7的敲低主要抑制ERK信号的磷酸化、β-Tubulin重排及Bax表达水平。7、小鼠非清髓造血恢复和清髓后骨髓细胞移植实验结果表明MXRA7敲除不影响小鼠的外周血、脾脏和骨髓的细胞数目,也几乎不影响各系血细胞。结论:1、MXRA7的敲除会通过抑制巨核细胞的发育和分化、促进血小板的凋亡来下调血小板的数量。2、体外细胞实验中,MXRA7敲低可以抑制MEG-01细胞的增殖,并通过抑制p-ERK的表达、β-Tubulin重排来抑制向Mk细胞的分化。3、MXRA7的敲除对小鼠的造血恢复和造血重建影响不明显。第二部分 糖基化终末产物对巨核细胞发育分化及造血的调控作用目的:Mk作为血小板的前体细胞,近来被认定为参与造血干细胞静息-活化相互转变的调节细胞,其可以通过与骨髓基质及其他细胞成份相互作用调节造血微环境。而糖尿病是一种严重的全身性疾病,其是否会影响造血和骨髓微环境尚不清楚,糖基化终末产物（AGEs）的过度积累是糖尿病的典型特征,但AGEs也是机体维持内环境稳定和组织重建所必需的。为此,我们选择AGEs为代表研究糖尿病对巨核细胞发育分化及造血微环境调节的作用。方法:1、制备糖化牛血清白蛋白（BSA-AGEs）:将BSA与D-葡萄糖在磷酸盐缓冲液（0.2 M,pH 7.4）中孵育8周。孵育后通过PBS（0.2 M,pH 7.4）广泛透析除去未结合糖。孵育在无菌条件下进行。2、AGEs对MEG-01细胞生物学功能及分化的影响:用BSA-AGEs或高浓度葡萄糖进行处理,采用MTT法检测细胞增殖、流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期;PMA诱导巨核祖细胞MEG-01细胞分化,利用流式细胞术检测Mk分化标记、血小板样颗粒;利用实时定量PCR技术检测巨核细胞发育相关基因（NF-E2、GATA1、PU1）和造血微环境调节相关基因（IL-6、VEGFa、PDGFa、PF4、OPG）的表达水平。3、AGEs对TPO/SCF/IL-3诱导人脐血单核细胞向巨核细胞分化的影响:流式细胞术检测AGEs对Mk分化标记、Mk细胞周期分布的影响;利用实时定量PCR技术检测影响巨核细胞发育相关基因的表达水平。4、体内实验利用糖尿病ob/ob小鼠和STZ诱导小鼠糖尿病两种模型观察巨核细胞的发育和造血情况:血细胞计数仪测定小鼠血小板、红细胞、白细胞及骨髓有核细胞总数,流式细胞术测定骨髓中Mk表面标记,骨髓涂片行瑞氏染色后对巨核细胞进行分类。利用实时定量PCR技术检测巨核细胞发育相关基因及其造血微环境调节相关基因的表达水平。5、AGEs对小鼠造血干祖细胞分化的影响:分选小鼠骨髓中的造血干祖细胞,利用集落形成细胞实验评估AGEs对造血干祖细胞的增殖、分化的影响。结果:1、成功制备BSA-AGEs,通过预实验确定200μg/ml作为BSA-AGEs影响MEG-01的最优浓度。2、体外实验中,AGEs促进MEG-01细胞的生长而高糖抑制细胞的生长,AGEs促进其细胞受体RAGE的表达水平,并呈现为时间依赖的增加,但ROS水平没发生变化。3、AGEs增加PF4和VEGFα的mRNA表达水平,而不影响Mk发育相关基因的表达水平,对Mk的分化没有明显的作用,4、在ob/ob小鼠（AGEs升高）和STZ诱导小鼠的短期糖尿病（AGEs正常）条件下,与对照组相比,AGEs升高的ob/ob小鼠血小板数量增加,骨髓中表达CD41的巨核细胞增加,AGEs还会促进Mk发育相关基因的表达;而AGEs正常的STZ诱导的小鼠,血小板数量没有变化,骨髓中表达CD41和CD61巨核细胞会减少,Mk发育相关基因的表达的变化趋势也与AGEs升高的小鼠不同。5、集落形成实验表明AGEs可以促进GEMM集落的形成。结论:1、AGEs改变了 MEG-01细胞的部分生物学特性,并影响部分调控造血微环境相关基因mRNA的表达水平。2、AGEs对TPO/SCF/IL-3诱导脐血细胞分化为巨核细胞的过程没有显着作用。3、Ob/ob小鼠的血小板数量和骨髓中的巨核细胞增加,说明AGEs会影响巨核细胞的发育。
付强[10]（2014）在《AAV介导趋化因子受体CXCR4基因转染人脐带血内皮祖细胞的体外实验研究》文中提出第一部分:携带CXCR4基因的重组腺相关病毒的制备与鉴定目的:1.构建携带CXCR4基因的重组腺相关病毒载体和制备重组腺相关病毒。2.摸索聚乙烯亚胺（PEI）介导rAAV包装系统转染人胚肾293细胞（HEK293细胞）的转染条件。方法:1.RT-PCR扩增CXCR4基因后将其克隆入腺相关病毒表达质粒pAAV2.1-CMV-LacZnls,然后对构建的重组质粒pAAV2.1-CMV-CXCR4进行PCR、酶切和测序鉴定。2.用PEI介导表达绿色荧光蛋白（GFP）的rAAV包装系统（pAAV2.1-CMV-GFP,pAAV-RC2和pHelper）转染 HEK293 细胞;用ImagePro Plus6.0图像分析软件计算表达GFP的细胞比例来测定1、2、3、4、5、6 μg不同质粒剂量,1:1、3:1、5:1、7:1不同PEI/质粒比值及转染12、24、36、48、60、72h不同时间三个变量对转染效率的影响;以摸索PEI介导三质粒共转染HEK293细胞的合适条件。3.以最优的转染条件包装rAAV2-CXCR4和rAAV2-GFP,然后用PEG8000-NaCl-氯仿法纯化病毒,以SDS-PAGE法检测病毒纯度和qPCR法测定病毒滴度。结果:1.成功地构建了经PCR、酶切和测序鉴定正确的重组腺相关病毒表达质粒 pAAV2.1-CMV-CXCR4。2.质粒剂量为4 μg/孔,PEI/质粒比值为3:1-5:1时转染效率维持较高水平;转染效率-转染时间曲线为S型增长曲线,转染效率于60h达到平台期。3.纯化的rAAV2-CXCR4和rAAV2-GFP的滴度分别为2.8184X 109vg/μ1 和 3.2211×109vg/μ1。第二部分:内皮祖细胞（EPCs）的分离、培养与鉴定目的:1.分离出脐带血单个核细胞（MNCs）以将其诱导培养为EPCs。方法:1.采用密度梯度离心法从脐带血中分离MNCs后,种植在纤维连接蛋白包被的六孔板,以EGM-2培养基将其诱导分化为EPCs。培养第四天,弃去非贴细胞继续培养,每周换液2-3次。2.相差显微镜下观察内皮祖细胞的形态特征。3.流式细胞术检测EPCs的阳性标志CD34、KDR和阴性标志CD14。4.激光扫描共聚焦显微镜下观察EPCs摄取Dil-acLDL和结合FITC-UEA-1 的能力。结果:1.脐带血MNCs诱导培养第4天,全量换液后可见梭形或多角形贴壁细胞,镜下可见多个呈“血岛”样生长的细胞集落,集落中间为聚集成簇的圆形细胞,周边环绕放射状梭形细胞。培养初始2周,梭形细胞首尾相连呈条索样生长或两排细胞平行排列呈管样生长,并可见条索样或管样排列的细胞相互交错成网。培养至第3周,细胞呈现为铺路石样外观;经传代后具有次级集落形成能力。2.流式细胞术显示EPCs表面标志物CD34,KDR呈阳性,而单核、巨噬细胞系表面标志物CD14无表达。3.激光共聚焦显微镜下,EPCs胞吞Dil-ac-LDL,胞浆内可见围绕胞核呈红色荧光的内吞泡;胞膜结合FITC-UEA-1,呈现绿色荧光,并胞吞入胞浆与摄取的Dil-ac-LDL共同呈现为黄色荧光。第三部分:重组腺相关病毒介导CXCR4基因体外感染EPCs目的:1.基质细胞衍生因子1（SDF-1）及其受体CXCR4在调节EPCs定向趋化中起着至关重要的作用,因此本研究主要目的旨在探索CXCR4过表达对EPCs向SDF-1迁移的影响。2.摸索rAAV2-GFP感染EPCs的感染条件。方法:1.用ImagePro Plus6.0图像分析软件计算表达GFP的EPCs 比比例计算低感染复数（MOI10,000vg/cell）和高感染复数（100,000vg/cell）rAAV2-GFP 及其不同转染时间（12、24、48小时）的感染效率。2.以较优的感染条件将rAAV2-CXCR4、rAAV2-GFP感染EPCs后,Western Blot检测CXCR4蛋白表达水平。3.设立rAAV2-CXCR4感染组、rAAV2-GFP感染组和未感染组三组,以MTT法检测CXCR4过表达对EPCs增殖功能的影响;以transwell迁移实验检测CXCR4过表达对EPCs迁移功能的影响。结果:1.感染后12小时,低MOI（10,000vg/cell）组和高MOI（100,OOOvg/cell）组表达绿色荧光蛋白 EPCs（GFP-EPCs）比例分别为 0.2064±0.0266 和 0.3876±0.0242;感染后 24小时,GFP-EPCs比例分别增加至0.3459±0.0160和0.5941±0.0175;进一步延长感染时间,GFP-EPCs比例无进一步增加。与 MOI 为 10,000vg/cell 相比,MOI 为 100,000vg/cell时,各时间点rAAV2-GFP感染效率均较高（P<0.05）。2.rAAV2-CXCR4感染组EPCs中CXCR4蛋白的表达高于rAAV2-GFP感染组和未感染组。3.未感染组EPCs增殖呈现为S型曲线,细胞培养72小时后,融合达到增殖平台期。rAAV2-GFP感染组与rAAV2-CXCR4感染组的生长曲线相互拟合。4.Transwell迁移实验显示:在低浓度（10 ng/mL）SDF-1a和高浓度（100 ng/mL）SDF-1a情况下,与未感染组相比,rAAV2-CXCR4感染组明显增加EPCs向SDF-1a的迁移（416±33 V.S 234±16,P<0.001;504±21 V.S 413±-15,P<0.001）;低浓度（10 ng/mL）SDF-1a 较高浓度（100 ng/mL）SDF-1a 增加幅度较大（181±25 V.S 91±34,P<0.001）。无论是低浓度（10 ng/mL）SDF-1a还是高浓度（100 ng/mL）SDF-1a,与未感染组相比,rAAV2-GFP均不影响EPCs向SDF-1a的迁移（218±18 V.S 234±16,P>0.05;384±16 V.S 413±15,P>0.05）。在不存在SDF-1a的情况下,各组基线EPCs迁移数量无明显差异（53±14 V.S 55±19 V.S 51±25,P>0.05）。结论:1.CXCR4过表达能增强EPCs体外靶向性迁移能力;EPCs的迁移可能依赖于SDF-1/CXCR4信号轴。2.CXCR4过表达对EPCs体外增殖无影响。
二、来源于骨髓和脐带血的基质细胞基本特性的比较（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、来源于骨髓和脐带血的基质细胞基本特性的比较（论文提纲范文）
（1）单细胞水平解析体外扩增对脐带血造血干细胞自我更新和分化的影响（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1.细胞因子在HSC体外扩增中的研究现状 |
| 2.小分子化合物扩增HSC的研究现状 |
| 3.调节HSC自我更新的信号通路 |
| 4.单细胞RNA测序技术在HSC研究中的应用现状 |
| 第一章 脐带血造血干细胞体外扩增体系的建立 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 材料 |
| 1.1.2 方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 USK小分子组合体外培养增加了HSPC和LT-HSC 的比例和数量 |
| 1.2.2 USK体外培养促进了HSPC向NK细胞分化 |
| 1.2.3 USK体外培养维持了HSPC向各系祖细胞分化的能力 |
| 1.3 讨论 |
| 第二章 动物体内评价扩增后HSC的植入和自我更新能力 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 移植低数量级USK扩增后的细胞在首次移植早期的植入能力增加 |
| 2.2.2 USK扩增后的细胞在二次移植NPG小鼠体内的植入未见优势 |
| 2.2.3 USK扩增后的细胞在首次移植小鼠体内SRC数量增加 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 单细胞水平解析体外扩增体系对HSC功能的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 scRNA-seq数据质控结果 |
| 3.2.2 脐带血来源的CD34+细胞无监督聚类分群 |
| 3.2.3 scRNA-seq揭示了体外扩增体系对HSC谱系分化的影响 |
| 3.2.4 USK体外培养促进了HSPC特异性基因的表达 |
| 3.2.5 USK体外培养前后差异性基因的表达 |
| 3.2.6 scRNA-seq揭示了影响HSC自我更新的关键基因和信号通路 |
| 3.2.7 scRNA-seq揭示了调控HSC自我更新和分化的关键分子 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 造血干细胞体外扩增策略及分子机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 作者在学期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（2）小分子化合物体外扩增造血干/祖细胞的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 UM171和SR1体外扩增造血干/祖细胞的研究 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验细胞 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验耗材 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 CD34~+细胞分离富集 |
| 1.2.2 体外扩增培养 |
| 1.2.3 流式检测表型 |
| 1.2.4 集落形成实验 |
| 1.2.5 统计学分析 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 小分子化合物促进三种来源造血干/祖细胞体外扩增的效果 |
| 1.3.2 体外扩增后三种来源造血干/祖细胞的分化能力 |
| 1.3.3 体外扩增后三种来源造血干/祖细胞上CXCR4表达水平升高 |
| 1.4 讨论与分析 |
| 第二章 UM171促进淋巴瘤患者自体动员外周血造血干/祖细胞体外扩增的研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验细胞 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验耗材 |
| 2.1.4 实验设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 CD34~+细胞分离富集 |
| 2.2.2 体外扩增培养 |
| 2.2.3 流式检测表型 |
| 2.2.4 转录组测序及分析 |
| 2.2.5 统计学分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 病例介绍及其动员情况 |
| 2.3.2 UM171能够有效扩增动员不佳淋巴瘤患者自体动员外周血造血干/祖细胞 |
| 2.3.3 UM171扩增淋巴瘤患者自体动员外周血造血干/祖细胞的分子机制 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 第三章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 作者在学期间取得的学术成果 |
| 附件 |
| 主要简历 |
| 致谢 |
（3）地中海贫血症红细胞谱系发育分化基因筛查及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 |
| 1.2 地中海贫血的定义和分类 |
| 1.2.1 α地中海贫血 |
| 1.2.2 β地中海贫血 |
| 1.3 地中海贫血的治疗现状和预防 |
| 1.3.1 常规疗法 |
| 1.3.2 造血干细胞移植 |
| 1.3.3 基因活化疗法 |
| 1.3.4 地中海贫血预防现状 |
| 1.4 造血调控与造血干细胞的研究 |
| 1.4.1 血细胞发生的基本概念 |
| 1.4.2 造血细胞发育阶段和鉴别方法 |
| 1.4.3 早期造血的三个阶段 |
| 1.4.4 早期造血胎儿红细胞生成和血红蛋白合成 |
| 1.4.5 多能造血干细胞维持自我更新的分子基础 |
| 1.4.6 造血干细胞多态性 |
| 1.4.7 造血祖细胞多态性 |
| 1.4.8 造血干细胞和祖细胞的主要区别 |
| 1.4.9 造血干细胞和造血祖细胞表面标志 |
| 1.4.10 造血干细胞的体外和体内检测方法 |
| 1.4.11 造血干细胞和祖细胞富集方法 |
| 1.4.12 造血干细胞移植问题 |
| 1.4.13 造血干细胞体外扩增问题 |
| 1.5 造血调控的关键:细胞因子 |
| 1.5.1 最早研究的细胞因子:集落刺激因子 |
| 1.5.2 作用于早期造血细胞的细胞因子 |
| 1.5.3 其他类型参与造血调控的细胞因子 |
| 1.5.4 与红系分化相关的调控因子 |
| 1.5.5 转录因子在造血调控中的作用 |
| 1.6 红细胞系统发育以及相关调控 |
| 1.6.1 红系祖细胞阶段 |
| 1.6.2 红系前体细胞阶段 |
| 1.6.3 红细胞脱核和释放成熟阶段 |
| 1.6.4 红细胞生成的调控机制 |
| 1.7 本文的主要研究内容 |
| 第2章 实验方法与材料 |
| 2.1 样本来源 |
| 2.2 主要试剂和耗材 |
| 2.3 主要仪器设备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 羊水细胞培养 |
| 2.4.2 细胞冻存 |
| 2.4.3 细胞计数 |
| 2.4.4 脐带血分离单个核细胞 |
| 2.4.5 磁珠分选CD34阳性细胞 |
| 2.4.6 流式细胞仪分析和分选不同阶段的红细胞 |
| 2.4.7 体外造血集落检测 |
| 2.4.8 WES数据分析 |
| 第3章 地中海贫血携带者基因型调查研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 羊水细胞体外培养 |
| 3.3 地中海贫血携带者外显子测序结果 |
| 3.3.1 地中海贫血携带者临床和基因分类 |
| 3.3.2 全外显子组测序结果和数据分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 脐带血造血干细胞体外诱导分化研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 脐带血造血干细胞的分离纯化和鉴定 |
| 4.3 脐带血造血干细胞体外诱导分化和造血集落检测 |
| 4.4 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）人骨骼肌源性血管外膜细胞的生物学特性及其对造血干/祖细胞体外支持作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 人骨骼肌源性血管外膜细胞的分离、培养及鉴定 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 标本来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要材料及仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 人骨骼肌源性血管外膜细胞的分选 |
| 2.2 人骨骼肌源性血管外膜细胞的体外培养 |
| 2.3 人骨骼肌源性血管外膜细胞冻存 |
| 2.4 人骨骼肌源性血管外膜细胞的生物学特性鉴定 |
| 3.统计学方法 |
| 结果 |
| 1.人骨骼肌MNCs分离情况 |
| 2.多参数流式细胞术分选CD146~+hMD-PCs |
| 3.CD146~+hMD-PCs纯度回测 |
| 4.CD146~+hMD-PCs培养及形态学观察 |
| 5.CD146~+hMD-PCs生物学特性鉴定 |
| 讨论 |
| 第二部分 脐血CD34~+细胞的提取及体外共培养体系的建立 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 标本来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要材料及仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 脐血CD34~+细胞的分离与纯化 |
| 2.2 CD146~+hMD-PCs对脐血CD34~+细胞体外支持作用 |
| 3.统计学方法 |
| 结果 |
| 1.人脐血CD34~+细胞的分离 |
| 2.流式细胞术检测脐血CD34~+细胞的阳性率 |
| 3.共培养体系中脐血CD34~+细胞生长状态 |
| 4.共培养后脐血CD34~+细胞数变化 |
| 5.共培养后脐血CD34~+细胞的集落形成能力 |
| 6.流式细胞术分析共培养后造血细胞免疫表型的变化 |
| 7.各培养体系上清液细胞因子水平 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 个人简介 |
| 开题、中期及学位论文答辩委员组成 |
（5）新生儿脐带血调节性T细胞比率及T细胞上PD-1表达的初步研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 背景 |
| 1.2 造血干细胞 |
| 1.3 脐带血移植 |
| 1.4 新生儿细胞免疫系统 |
| 1.5 研究目的 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验标本来源 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 |
| 2.1.4 主要试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 血常规检测白细胞分类与计数 |
| 2.2.2 流式细胞术检测新鲜新生儿脐带血与母亲外周血 |
| 2.2.3 PHA-L体外刺激脐带血淋巴细胞两种全血培养方案的比较 |
| 2.2.4 流式细胞术检测培养三天后的全血T细胞上PD-1表达的变化情况 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 肉眼观察新生儿脐带血与母亲外周血的外观差异 |
| 3.2 血常规化验结果分析 |
| 3.2.1 新生儿脐带血与母亲外周血白细胞、红细胞及血小板计数比较分析 |
| 3.2.2 新生儿脐带血与母亲外周血白细胞分类及计数比较分析 |
| 3.3 流式细胞术检测新鲜血液结果分析 |
| 3.3.1 有无CD45抗体标记淋巴细胞群对实验结果影响的分析 |
| 3.3.2 流式细胞术检测CD34+造血干细胞在新鲜血液中的表达 |
| 3.3.3 流式细胞术检测新鲜血液中Treg细胞比率 |
| 3.3.4 流式细胞术检测新鲜脐带血与外周血中T细胞上PD-1的表达差异 |
| 3.4 PHA-L体外刺激全血细胞培养结果分析 |
| 3.4.1 PHA-L体外刺激全血细胞两种培养方案的比较 |
| 3.4.2 流式细胞术检测培养三天后全血T细胞上PD-1表达的变化结果分析 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 脐带血及脐带血干细胞研究进展 |
| 参考文献 |
（6）间充质干细胞治疗炎症性肠病临床疗效和安全性Meta分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 个人简介 |
| 开题、中期及学位论文答辩委员组成 |
（7）Bcl-xL基因修饰人脐带血干细胞移植修复兔关节软骨损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 人脐带干细胞定向诱导分化软骨细胞的实验研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 3 方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 第二部分 过表达Bcl-x L基因慢病毒载体对人脐带血干细胞的调控机理研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 海藻酸钠支架负载人脐带血干细胞复合物移植治疗兔关节软骨损伤 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在学期间发表的论文与成果 |
| 致谢 |
| 综述一 Bcl-x L 基因的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 干细胞定向诱导分化成软骨细胞的研究进展 |
| 参考文献 |
（8）人诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞促进成体造血发生的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录一: 常见英文缩写 |
| 附录二: 个人简历、硕士期间的成果 |
| 附录三: 致谢 |
（9）基质重塑相关基因7和糖基化终末产物对巨核细胞发育和造血系统的调控作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 基质重塑相关基因7对巨核细胞发育和造血系统的调控作用 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 糖基化终末产物对巨核细胞发育及造血系统的调控作用 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 巨核细胞在维持骨髄环境中的作用 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 本课题所受资助 |
| 附录 攻读博士学位期间的其它工作 |
| 中英文缩略语对照表 |
| 致谢 |
（10）AAV介导趋化因子受体CXCR4基因转染人脐带血内皮祖细胞的体外实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分:携带CXCR4基因的重组腺相关病毒的制备与鉴定 |
| 材料和方法 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 结果 |
| 1.人CXCR4基因的克隆 |
| 2.重组腺相关病毒表达质粒pAAV_(2.1)-CMV-CXCR4的构建 |
| 3.重组腺相关病毒表达质粒pAAV_(2.1)-CMV-CXCR4的鉴定 |
| 4.重组腺相关病毒的制备 |
| 5.重组腺相关病毒的纯度测定 |
| 6.重组腺相关病毒的滴度测定 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分: 内皮祖细胞的分离、培养与鉴定 |
| 材料和方法 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 结果 |
| 1.脐带血EPCs形态学特征 |
| 2.人脐带血EPCs的鉴定 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分: 重组腺相关病毒体介导CXCR4基因体外感染EPCs |
| 材料和方法 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 结果 |
| 1.rAAV_2-GFP感染EPCs及感染效率测定 |
| 2.CXCR4在EPCs中的表达 |
| 3.EPCs的生长曲线测定 |
| 4.Transwell检测EPCs的迁移功能 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文缩写词表 |
| 在读期间发表的主要学术论文及参与课题 |
| 致谢 |
四、来源于骨髓和脐带血的基质细胞基本特性的比较（论文参考文献）
- [1]单细胞水平解析体外扩增对脐带血造血干细胞自我更新和分化的影响[D]. 文瑞婷. 军事科学院, 2020(02)
- [2]小分子化合物体外扩增造血干/祖细胞的研究[D]. 董忱. 军事科学院, 2020(02)
- [3]地中海贫血症红细胞谱系发育分化基因筛查及机制研究[D]. 杨最. 哈尔滨工业大学, 2020(01)
- [4]人骨骼肌源性血管外膜细胞的生物学特性及其对造血干/祖细胞体外支持作用的研究[D]. 杨小萍. 宁夏医科大学, 2020(08)
- [5]新生儿脐带血调节性T细胞比率及T细胞上PD-1表达的初步研究[D]. 董利菊. 安徽医科大学, 2020
- [6]间充质干细胞治疗炎症性肠病临床疗效和安全性Meta分析[D]. 张妍生. 宁夏医科大学, 2020(08)
- [7]Bcl-xL基因修饰人脐带血干细胞移植修复兔关节软骨损伤的实验研究[D]. 潘政军. 安徽医科大学, 2019(07)
- [8]人诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞促进成体造血发生的研究[D]. 张秀秀. 北京协和医学院, 2019(02)
- [9]基质重塑相关基因7和糖基化终末产物对巨核细胞发育和造血系统的调控作用[D]. 王奔放. 苏州大学, 2018(06)
- [10]AAV介导趋化因子受体CXCR4基因转染人脐带血内皮祖细胞的体外实验研究[D]. 付强. 湖南师范大学, 2014(04)