一、2790例支气管哮喘患者血中嗜酸粒细胞的观察（论文文献综述）
余涛[1]（2021）在《益气温阳护卫法对哮喘大鼠Th17细胞/Treg细胞免疫失衡的影响及作用机理研究》文中研究指明研究目的:本研究以哮喘Th17/Treg细胞免疫失衡为切入点,通过体内与体外实验研究,探讨益气温阳护卫法对哮喘大鼠Th17/Treg失衡的调节作用及具体调控机制,为该法防治哮喘提供可靠实验依据,丰富益气温阳护卫法的科学内涵。研究方法:第一章理论探讨搜集并梳理先秦至明清时期有关哮喘病名、病因病机及治疗方面的相关文献,初步总结现代医家对哮喘的认识与辨治经验。阐述国医大师洪广祥运用益气温阳护卫法防治哮喘的理论依据;以哮喘免疫失衡为切入点,将中医“气阳虚弱,卫气不足”理论与现代医学免疫失衡机制深入联系。第二章实验研究第一节体内实验研究建立哮喘大鼠模型,分为对照组（Control）、模型组（Model）、益气温阳护卫汤低剂量组（1g/m L）、益气温阳护卫汤中剂量组（2g/m L）、益气温阳护卫汤高剂量组（4g/m L）和地塞米松组（Dex）,每组分别于激发1周、2周、4周末三个时间点处理大鼠8只。各时期观察及检测指标:1.雾化激发时观察大鼠一般状态及行为学改变。2.肺组织病理切片HE染色。3.支气管肺泡灌洗液中炎症细胞计数及分类。4.流式细胞术分别检测肺泡灌洗液Th17、Treg细胞比例。5.RT-PCR检测肺组织中Th17细胞分化因子TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21m RNA表达量,以及Treg细胞分化因子Foxp3、IL-10 m RNA表达量。6.Western-blot检测肺组织中Th17细胞分化因子TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21蛋白水平,以及Treg细胞分化因子Foxp3、IL-10蛋白水平。第二节体外实验研究通过诱导因子构建体外Th17/Treg细胞失衡模型,给予益气温阳护卫汤含药血清干预,观察益气温阳护卫汤含药血清对体外Th17/Treg细胞失衡的调节作用及具体调节机制。1.制备益气温阳护卫汤含药血清。2.CD4+T细胞原代分离、培养、鉴定。3.益气温阳护卫汤含药血清的细胞毒作用。4.构建体外Th17/Treg细胞失衡模型:分为对照组（Control）、模型组（Model）、益气温阳护卫组（YQWYHW）、地塞米松组（Dex）,除对照组外,其余组中分别加入等量的TGF-β、IL-6、IL-23溶液,诱导CD4+T细胞向Th17细胞分化。5.益气温阳护卫含药血清对体外Th17/Treg细胞失衡的影响及机制:给予相应的含药血清干预,处理48h后,采用流式细胞技术检测各组Th17和Treg细胞比例。RT-PCR、Western blot分别检测Th17细胞分化因子TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21及Treg细胞分化因子Foxp3、IL-10 m RNA和蛋白表达水平。研究结果:第一章理论探讨本文总结了中医对哮喘病名、病因病机及治疗的认识演变过程,归纳了部分现代医家对哮喘的认识与辨治经验。在此基础之上,阐述了国医大师洪广祥“气阳虚弱,卫气不足”的哮喘发病观特点及运用益气温阳护卫法防治哮喘的理论依据,将免疫失衡机制与中医“气阳虚弱,卫气不足”理论深入联系,为后续的实验研究奠定了坚实的理论依据。第二章实验研究第一节体内实验研究结果1.益气温阳护卫汤对哮喘大鼠行为学的影响:模型组、各药物治疗组大鼠在激发1周后均出现哮喘样症状及毛发粗糙失泽,食欲下降,食量减少,喜蜷卧,精神欠佳等“气阳虚弱、卫气不足”的现象,对照组未见明显的异常表现,经益气温阳护卫汤、地塞米松分别干预后,大鼠的一般状态及行为学改变较模型组均有不同程度的改善。2.益气温阳护卫汤对哮喘大鼠肺组织病理的影响:与同期对照组比较,模型组肺组织支气管管壁明显增厚,管腔明显狭窄变形,平滑肌增生,肺泡组织、管腔黏膜水肿,黏性分泌物明显增多,支气管上皮细胞排列紊乱,可见大量炎性细胞浸润。与同期模型组比较,益气温阳护卫低、中、高剂量组及地塞米松组肺组织炎症浸润情况得到不同程度改善,主要表现为支气管管腔狭窄程度及平滑肌增厚程度减轻,炎症细胞浸润程度及黏性分泌物减少。3.益气温阳护卫汤对哮喘大鼠BALF中炎症细胞的影响:与同期对照组比较,模型组嗜酸性粒细胞及淋巴细胞比例均显着升高（P<0.01）;与同期模型组比较,益气温阳护卫汤中、高剂量组及地塞米松组嗜酸性粒细胞、淋巴细胞比例均显着减少（P<0.05,P<0.01）。4.益气温阳护卫汤对哮喘大鼠Th17细胞、Treg细胞比例的影响:与同期对照组比较,模型组大鼠BALF中Th17细胞比例均显着升高（P<0.05）、Treg细胞比例均显着下降（P<0.05）;与同期模型组比较,益气温阳护卫汤中、高剂量组及地塞米松组BALF中Th17细胞比例均显着下降（P<0.05）、Treg细胞比例均显着上升（P<0.05）。5.益气温阳护卫汤对哮喘大鼠肺组织Th17细胞、Treg细胞分化因子基因的影响:（1）对Th17细胞分化因子基因的影响:与同期对照组比较,模型组TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21 m RNA相对表达量均显着上升（P<0.05,P<0.01）;与同期模型组比较,益气温阳护卫汤中、高剂量组及地塞米松TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21 m RNA相对表达量均显着降低（P<0.05,P<0.01）。（2）对Treg细胞分化因子基因的影响:与同期对照组比较,模型组Foxp3、IL-10 m RNA相对表达量均显着降低（P<0.05,P<0.01）;与同期模型组比较,益气温阳护卫汤中、高剂量组及地塞米松组Foxp3、IL-10 m RNA相对表达量均显着上升（P<0.05,P<0.01）。6.益气温阳护卫汤对哮喘大鼠肺组织Th17细胞、Treg细胞分化因子蛋白的影响:（1）对Th17细胞分化因子蛋白的影响:与同期对照组比较,模型组TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21蛋白相对表达水平均显着上升（P<0.05）;与同期模型组比较,益气温阳护卫汤中、高剂量组及地塞米松组TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21蛋白相对表达水平均显着下降（P<0.05）。（2）对Treg细胞分化因子蛋白的影响:与同期对照组比较,模型组Foxp3、IL-10蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,与同期模型组比较,益气温阳护卫汤中、高剂量组及地塞米松组中Foxp3、IL-10蛋白表达水平均显着上升（P<0.05）。第二节体外实验研究结果1.体外Th17/Treg细胞失衡模型的构建结果:与对照组比较,模型组Th17细胞比例、Th17/Treg比例均显着上升（P<0.01）,Treg细胞比例显着下降（P<0.01）,表明成功构建体外Th17/Treg细胞失衡模型。2.益气温阳护卫汤含药血清对体外Th17细胞、Treg细胞比例的影响:与模型组比较,益气温阳护卫组及地塞米松组Th17细胞比例、Th17/Treg比例均显着降低（P<0.05或P<0.01）,Treg细胞比例显着上升（P<0.05或P<0.01）。3.益气温阳护卫汤含药血清对体外Th17细胞、Treg细胞分化因子m RNA的影响:（1）对体外Th17细胞分化因子m RNA的影响:与对照组比较,模型组TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21 m RNA相对表达量均显着升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,益气温阳护卫组及地塞米松组TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21 m RNA相对表达量均显着降低（P<0.05）。（2）对体外Treg细胞分化因子m RNA的影响:与对照组比较,模型组Foxp3、IL-10 m RNA相对表达量均显着降低（P<0.01）;与模型组比较,益气温阳护卫组及地塞米松组Foxp3、IL-10 m RNA相对表达量均显着升高（P<0.05,P<0.01）。4.益气温阳护卫汤含药血清对体外Th17细胞、Treg细胞分化因子蛋白的影响:（1）对体外Th17细胞分化因子蛋白的影响:与对照组比较,模型组TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21蛋白相对表达水平均显着升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,益气温阳护卫组及地塞米松组TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21蛋白相对表达水平均显着降低（P<0.05,P<0.01）。（2）对体外Treg细胞分化因子蛋白的影响:与对照组比较,模型组Foxp3、IL-10蛋白表达水平显着降低（P<0.01）;与模型组比较,益气温阳护卫组及地塞米松组Foxp3、IL-10蛋白相对表达水平显着升高（P<0.05,P<0.01）。结论1.益气温阳护卫法能有效改善哮喘大鼠Thl7/Treg失衡及体外Thl7/Treg失衡。2.益气温阳护卫法治疗哮喘的机制可能与抑制IL-6-STAT3信号通路,下调促炎因子IL-17、IL-21以抑制Th17细胞分化及功能相关。3.益气温阳护卫法治疗哮喘的机制可能与上调Foxp3、IL-10表达以促进Treg细胞分化及功能相关。
司东旭[2]（2021）在《肺脾为核心脏腑整体辨证支气管哮喘慢性持续期免疫调控研究》文中进行了进一步梳理目的基于前期支气管哮喘慢性持续期（Chronic duration of bronchial asthma,CDBA）中医干预方案研究成果,温润方组（Wenrunformulagroup,WRFG）良好控制率75.44%,明显优于常规辨证组（Routine syndrome differentiation group,RSDG）良好控制率 48.33%。本研究进一步通过分子生物学研究,证明“肺脾为核心脏腑整体辨证”的中医干预思路充分反映了中医治疗CDBA的优势与特色。构建基于“肺脾为核心脏腑整体辨证”CDBA免疫调控的生物学依据。方法本研究工作主要依托课题——支气管哮喘慢性持续期中医干预方案,分别在山东中医药大学附属医院、安徽中医药大学第一附属医院、北京中医药大学东直门医院、中国中医科学院西苑医院等四个研究中心,开展同时期、多中心、随机、对照、三盲的临床实用性随机对照优效设计研究。应用“肺脾为核心脏腑整体辨证”观指导思想下形成的“温润辛金培本”原理系列方药（简称温润方）为中医干预方案。共纳入符合研究要求病例128例,将入组病例随机分为WRFG和RSDG。为进一步观察两组治疗前血清免疫球蛋白、白介素谱系分布特点,以及治疗后血清免疫球蛋白、白介素谱系变化趋势,对符合要求的入组患者进行了二次筛选。同时,招募健康人群作为健康对照组（Healthy group,HG）,并收集受试者血清标本。采用ELISA竞争检测方法进行血清标本检测,开展“肺脾为核心脏腑整体辨证”治疗CDBA调节血清免疫球蛋白及血清白介素水平的免疫调控研究。结果1病例信息分析本研究根据现有各组血清病例数,结合纳入排除标准,确定纳入WRFG24例,RSDG 14例、HG 14例。WRFG与RSDG两组患者治疗前中医单项症状体征积分及中医症状体征总积分比较中,只有腰膝酸软1（1,2）（WRFG）、0（0,1）（RSDG）,具有统计学差异。其他单项中医症状体征及中医症状体征总积分均无统计学差异;WRFG与RSDG两组患者治疗后中医单项症状体征积分及中医症状体征总积分比较中,均无统计学差异;WRFG组患者疗前疗后中医单项症状体征积分及中医症状体征总积分比较中,喘息、乏力、口干、心悸、头晕、畏寒肢冷、腰膝酸软、咳嗽、咳嗽性质、咳痰不爽、总分具有统计学差异。其他单项中医症状体征均有下降趋势,但无统计学差异;RSDG组患者疗前疗后中医单项症状体征积分及中医症状体征总积分比较中,气短、乏力、口干、畏寒肢冷、咳嗽、咳嗽性质、总分具有统计学差异。其他单项中医症状体征多有下降趋势,但无统计学差异;WRFG与RSDG中医单项症状体征积分及中医症状体征总积分差值比较中,WRFG在喘息、口苦、口干、心悸、纳呆、腹胀、口渴喜饮、大便不调、夜尿频、头晕、腰膝酸软、总分等方面较RSDG症状积分降低,但均无统计学差异;WRFG与RSDG疗前疗后肺功能比较,两组患者在FEV1%FVC、PEF%等方面无统计学差异。2血清免疫球蛋白2.1治疗前组间比较WRFG血清IgA、IgG水平较RSDG和HG低,具有统计学差异。WRFG血清IgE水平较RSDG无统计学差异,较HG低,具有统计学差异。RSDG血清IgA、IgG、IgE水平较HG无统计学差异。2.2治疗后组间比较WRFG血清IgA、IgG水平较RSDG和HG无统计学差异。WRFG血清IgE水平较RSDG高,具有统计学差异,较HG无统计学差异。RSDG血清IgA、IgG、IgE水平较HG无统计学差异。3血清促炎白介素3.1治疗前组间比较WRFG 血清 IL-1β、IL-2、IL-5、IL-7、IL-8、IL-13、IL-20、IL-25、IL-36y 水平较RSDG、HG 低,具有统计学差异。WRFG 血清 IL-3、IL-4、IL-6、IL-9、IL-33 水平较RSDG无统计学差异,较HG低,具有统计学差异。RSDG 血清 IL-1β、IL-7、IL-8、IL-9、IL-13、IL-20、IL-25、IL-33、IL-36γ 水平较HG无统计学差异。RSDG血清IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6水平较HG低,具有统计学差异。3.2治疗后组间比较WRFG 血清 IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-33、IL-36γ 水平较 RSDG 无统计学差异,较HG低,具有统计学差异。WRFG血清IL-2、IL-3、IL-8、IL-13、IL-20、IL-25水平较RSDG、HG无统计学差异。RSDG 血清 IL-1β、IL-3、IL-7、IL-8、IL-13、IL-20、IL-33 水平较 HG 无统计学差异。RSDG 血清 IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-25、IL-36γ 水平较 HG 低,具有统计学差异。4血清抗炎白介素4.1治疗前组间比较WRFG 血清 IL-10、IL-21、IL-27、IL-28A、IL-35 水平较 RSDG、HG 低,具有统计学差异;WRFG血清IL-29水平较RSDG低,具有统计学差异,较HG无统计学差异;血清IL-12、IL-37水平较RSDG无统计学差异,较HG低,具有统计学差异。RSDG 血清 IL-10、IL-12、IL-21、IL-27、IL-28A、IL-29、IL-35、IL-37 水平较 HG无统计学差异。4.2治疗后组间比较WRFG血清IL-10、IL-12、IL-21水平较RSDG无统计学差异,较HG低,具有统计学差异;WRFG血清IL-27、IL-29、IL-35、IL-37水平较RSDG、HG无统计学差异;WRFG血清IL-28A水平较RSDG低,具有统计学差异,较HG无统计学差异。RSDG 血清 IL-10、IL-12、IL-21、IL-27、IL-28A、IL-29、IL-35、IL-37 水平较 HG无统计学差异。结论1 WRFG组在改善哮喘患者喘息、咳嗽、咳嗽性质、咳痰不爽、乏力、口干、心悸、头晕、畏寒肢冷、腰膝酸软、总分等全身症状体征方面具有明显的优势。体现了WRFG“肺脾为核心脏腑整体辨证”,整体诊治CDBA的优势与特色。2 WRFG治疗后血清免疫球蛋白、血清促炎和抗炎白介素水平升高并接近健康人水平,可能与温润方减轻了哮喘患者气道慢性炎症这一基础病理损害,使哮喘患者气道炎症局部对较高的血清促炎白介素水平耐受性增强,提高了气道对损伤因子的免疫防御及修复能力有关。3 CDBA具有多种免疫细胞及细胞组分参与的慢性气道炎症病理变化基础,炎症、免疫参与了疾病宏观表现的微观病理变化。反之,不同的微观炎症免疫调控失衡状态影响着宏观中医哮喘的病机演变。CDBA存在着“肺脾为核心多脏虚”的关键病机共性规律。“肺脾为核心脏腑整体辨证”是在全面客观认识CDBA脏腑关系与病机演变规律基础上对中医整体观念、脏腑辨证的继承、发展、应用,强调以“肺脾为核心”的整体观揭示哮喘发病机制。
郑炜东[3]（2021）在《麻杏石甘汤对过敏性哮喘大鼠辅助T淋巴细胞调控作用机制研究》文中研究指明目的:本研究使用卵清蛋白（OVA）复制过敏性哮喘模型大鼠,验证麻杏石甘汤的抗过敏作用,进而探究麻杏石甘汤对过敏性哮喘模型大鼠辅助T淋巴细胞Th2、Th9、Th17的调控作用和主要调控细胞;并使用体外培养外周血淋巴细胞的方式探究麻杏石甘汤干预过敏性哮喘的作用靶点;探讨麻杏石甘汤干预过敏性哮喘细胞免疫的主要机制,为阐明麻杏石甘汤抗过敏性哮喘和作用机理提供实验依据。材料与方法:1.麻杏石甘汤对过敏性哮喘模型大鼠的抗过敏作用观察。观察麻杏石甘汤对过敏性模型大鼠血清Ig E,肺组织病理（HE染色）,腹腔肥大细胞脱颗粒的调控作用。采用OVA致敏、激发的方法复制过敏哮喘模型大鼠,然后给予麻杏石甘汤经口灌胃干预,采用ELISA法检测大鼠血清中Ig E,HE染色法观察肺组织病理,腹腔肥大细胞脱颗粒实验观察麻杏石甘汤对肥大细胞膜的稳定作用。2.麻杏石甘汤对过敏性哮喘大鼠Th2、Th9、Th17的调控作用观察麻杏石甘汤对过敏性哮喘模型大鼠血清IL-4、TGF-β、IL-9、IL-5、IL-10、IL-17含量的影响。观察麻杏石甘汤对过敏性哮喘模型大鼠肺组织中IL-4、TGF-β、IL-9表达的影响。观察麻杏石甘汤对过敏性哮喘模型大鼠外周血淋巴细胞Th2、Th9、Th17比例的影响。采用OVA致敏、激发的方法复制过敏性哮喘模型大鼠,然后给予麻杏石甘汤经口灌胃干预,采用ELISA法检测大鼠血清IL-4、TGF-β、IL-9、IL-5、IL-10、IL-17的含量。采用Western-Blot及免疫组化法检测大鼠肺组织中IL-4、TGF-β、IL-9的表达。采用流式细胞法检测大鼠外周血淋巴细胞Th2、Th9、Th17的比例。3.麻杏石甘汤调控CD4+T细胞Th2、Th9、Th17亚型的作用采用体外培养大鼠外周血淋巴细胞,使用细胞因子和含药血清体外干预CD4+T细胞发育,采用免疫荧光法和ELISA法观察麻杏石甘汤对PBMC中Th2、Th9、Th17阳性率和细胞因子含量,阐述麻杏石甘汤调控Th2、Th9、Th17的抗过敏机制。结果:1.动物体内实验部分1.1采用腹腔注射OVA后再行雾化吸入OVA可成功诱导大鼠过敏性哮喘模型。1.2麻杏石甘汤可明显改改善造模大鼠的一般状态,麻杏石甘组大鼠肺组织HE染色气管黏膜完整,未断裂,支气管黏膜慢性炎症较轻,黏膜增生突起、杯状细胞增生较轻,肺气肿及肺间质性炎性改变较轻,周围存在少数肥大细胞、嗜酸性粒细胞等炎细胞浸润。说明麻杏石甘汤可整体改善大鼠过敏性哮喘肺组织病变程度。1.3在肥大细胞脱颗粒检测中,西药对照组、麻杏石甘组大鼠肥大细胞计数、脱颗粒的肥大细胞计数、脱颗粒率均明显降低（p<0.05）;与西药对照组比较,麻杏石甘组大鼠肥大细胞计数、脱颗粒的肥大细胞计数、脱颗粒率差异无统计学意义（p>0.05）。提示麻杏石甘组可降低肥大细胞在肺组织中的募集、减少肥大细胞脱颗粒,缓解气道炎症。且与西药效果相当。1.4 OVA造模大鼠血清中Ig E含量明显增高,空白组大鼠血清Ig E未见明显变化与文献报道结果一致。其余两组经药物干预后与模型对照组比较,麻杏石甘组和西药对照组中大鼠血清Ig E水平均明显下调（p<0.05）。虽然组间差异无统计学意义（p>0.05）,但对比数据,麻杏石甘组对Ig E的调控效果略优于西药对照组。推测示中药复方颗粒剂可能是通过抑制Ig E,增强抗过敏作用,从而减轻气道炎症反应。1.5采用流式细胞术和ELISA分别测定辅助T淋巴细胞比例和细胞因子含量。结果显示与空白对照组相比,模型对照组的大鼠肺组织中IL-4、TGF-β、IL-9、IL-5、IL-10、IL-17表达明显上调（p<0.05）,Th2细胞、Th9细胞、Th17细胞比例均增大。说明Th2、Th9、Th17及其主要细胞因子在支气管哮喘发病过程中起重要作用,与文献报道一致。实验还发现Th2细胞因子（IL-4,IL-5）上调趋势明显同时流式检测Th2细胞阳性率最高,证实了Th2细胞在哮喘的发展过程中占主导地位。经过药物治疗后,与模型对照组比较,麻杏石甘组和西药对照组大鼠肺组织中IL-4、TGF-β、IL-9、IL-5、IL-10、IL-17表达均有不同程度的下调（p<0.05）,麻杏石甘组指标皆优于西药对照组且麻杏石甘组中IL-4、TGF-β、IL-9表达下调较为明显（p<0.05）,尤其在流式检测中,麻杏石甘组Th9细胞阳性率大体与空白对照组相当（p>0.05）且明显低于西药对照组（p<0.05）,证明麻杏石甘汤在调控Th2、Th9、Th17方面都有很好的效果,但麻杏石甘汤最可能是通过调控Th9细胞来干预过敏性哮喘。1.6进一步对肺组织中与Th9分化发育有关的IL-4、TGF-β和Th9分泌的特异性细胞因子IL-9进行研究。IHC结果提示在上皮细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、平滑肌细胞、杯状细胞、肥大细胞中可检测到IL-4、TGF-β、IL-9,western blot结果表明麻杏石甘汤可下调IL-4、TGF-β、IL-9表达（p<0.05）。横向观察IHC、western blot及ELISA法所测得的各组数值,显示出麻杏石甘汤可显着下调IL-9的表达（p<0.05）,同时抑制IL-4和TGF-β表达（p<0.05）,说明麻杏石甘汤可能同时抑制CD4+T细胞向Th9细胞分化和Th2细胞向Th9细胞的转化。推测麻杏石甘汤可能是通过调控细胞因子来干预Th9细胞的发育与分化以达到治疗过敏性哮喘的目的。2.动物体外实验部分2.1使用Ficoll-paque（菲科帕克）成功提取PBMC。2.2通过免疫荧光法证明Th9细胞的分化与IL-4和TGF-β协同作用密不可分,含有麻杏石甘汤成分的血清能够有效调控CD4+T细胞增殖能力。2.3麻杏石甘汤有效调控PBMC中IL-4、TGF-β、IL-9、IL-5、IL-10、IL-17表达在检测IL-4时,细胞因子对照组和含药血清组中IL-4含量均比空白对照组明显增加（p<0.05）,其中IL-4组增加最明显（p<0.05）,含药血清组增加最少（p<0.05）。说明在IL-4高表达的情况下,原始CD4+T细胞可能向Th2细胞分化,当同时存在TGF-β表达时CD4+T细胞可能向非Th2细胞分化,麻杏石甘汤可能具有抑制Th2细胞分化的作用。在检测TGF-β时,IL-4组中TGF-β含量是细胞因子组中最低的（p<0.05）。含药血清组TGF-β含量较细胞因子组降低（p<0.05）,证明麻杏石甘汤可能具有调控TGF-β表达的作用。在检测IL-5含量时,IL-4组和IL-4+TGF-β组无统计学差异且TGF-β组含量很少（p<0.05）,证明IL-5主要由Th2细胞分泌,而含药血清组IL-5含量与TGF-β组基本相当（p>0.05）,证明麻杏石甘汤可能具有抑制IL-5表达的作用。在检测IL-10时,IL-4+TGF-β组中IL-10含量较余下细胞因子组明显增高（p<0.05）,IL-4组和TGF-β组IL-10含量无统计学差异（p>0.05）,上述结果与文献一致。含药血清组IL-10含量明显降低,证明麻杏石甘汤可能具有干预Th9细胞表达IL-10的作用。为了进一步验证麻杏石甘汤对Th9细胞的干预能力,我们检验Th9最主要细胞因子IL-9在各组中的含量,结果显示IL-4+TGF-β组的IL-9含量为细胞因子组中最高（p<0.05）,含药血清组IL-9含量明显下降（p<0.05）,进一步证明麻杏石甘汤可通过干预细胞因子IL-9调控Th9细胞。最后在检测IL-17时,TGF-β组和IL-4+TGF-β组中IL-17高表达（p<0.05）,证明TGF-β是Th17细胞分化的必要细胞因子,含药血清组IL-17表达降低（p<0.05）,说明麻杏石甘汤可能具有抑制IL-17表达的作用。结论:1.通过动物体内实验,揭示麻杏石甘汤可降低哮喘大鼠肥大细胞脱颗粒率,使大鼠血清中Ig E的含量降低,发挥治疗气道炎症的作用;麻杏石甘汤还可通过干预IL-4、TGF-β、IL-9、IL-5、IL-10、IL-17等表达来调控Th2、Th9、Th17细胞以达到控制哮喘的目的。同时麻杏石甘汤可以显着下调IL-9、IL-4和TGF-β的表达,推测麻杏石甘汤可能主要通过干预Th9细胞的分化与IL-9的分泌来达到抗哮喘的作用。2.通过动物体外实验,进一步验证了IL-4和TGF-β对于Th9细胞分化起决定性作用;麻杏石甘汤能够有效抑制CD4+T细胞中Th2、Th9、Th17增殖能力,其中抑制Th9细胞增殖能力最强;进一步证明麻杏石甘汤能够有效干预Th9细胞的分化和相应细胞因子的表达来发挥抗哮喘作用。
邢江楠[4]（2021）在《基于CCL24/CCR3通路探讨疏风通络方对小鼠嗜酸细胞CCR3受体、ERK磷酸化及基因表达影响研究》文中提出目的:围绕CCL24/CCR3嗜酸细胞活化途径的变化,以小鼠嗜酸性粒细胞为研究对象,从细胞-分子水平中观察疏风通络方含药血清调控小鼠嗜酸性粒细胞活化CCL24/CCR3的通路影响嗜酸性粒细胞中CCR3受体蛋白含量、细胞总ERK磷酸化水平以及嗜酸细胞CCR3基因表达水平、ERK基因水平表达的变化,为今后疏风通络方的临床治疗提供一定的依据。方法:1.本实验选取64只平均体重为18-22g（8-12周龄）SPF级雄性野生型C57BL/6小鼠,并将64只小鼠随机划分为空白对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。每组16只,适应性喂养2周后除空白对照组,其余各组用疏风通络方进行灌胃,每天一次,连续灌胃7天,制备相应的含药血清。空白组给予生理盐水灌胃,中药组则给予小鼠不同浓度的疏风通络方进行灌胃。2.对嗜酸性粒细胞进行原代培养并建立体外实验模型。3.通过瑞氏染色法观察嗜酸性粒细胞形态学的特征。4.各组分别给予相应拮抗剂干预处理,加入趋化因子CCL24诱导1小时后,最后加入不同剂量含药血清后,将实验进行分组:将体外培养的嗜酸性粒细胞分为空白对照组、CCL24+空白血清组、CCL24组、CCL24+中药低剂量血清组、CCL24+中药中剂量血清组、CCL24+中药高剂量血清组、CCL24+SB328437组（CCR3受体拮抗剂）、CCL24+SB203580组（P38蛋白激酶拮抗剂）、CCL24+PD98059组（MEK1/MEK2激酶拮抗剂）、CCL24+Wortmannin（PI3K蛋白拮抗剂）。5.检测:采用Western blot法测定嗜酸性细胞CCR3受体蛋白含量、细胞总ERK磷酸化水平;采用RT-PCR测定小鼠嗜酸性粒细胞中CCR3、ERK基因水平表达。结果:1)Western blot检测结果显示:（1）嗜酸性粒细胞中CCR3蛋白受体的含量比较:与空白对照组相比,CCL24+空白血清组中CCR3蛋白受体含量表达增高（P<0.05）。与CCL24+空白血清组相比,中药低剂量血清组中CCR3蛋白受体含量表达增高,中药中、高剂量血清组中蛋白表达降低,其中低、高剂量血清组与其对比有意义（P<0.05）;拮抗剂组中CCR3蛋白受体含量表达均降低,与其对比,皆有统计学差异（P<0.05）。与CCL24组相比,中药低剂量血清组中CCR3蛋白表达含量升高,而中药高剂量血清组中CCR3蛋白含量降低（P<0.05）;拮抗剂组SB203580组、SB328437组、Wortmannin组中CCR3蛋白表达含量降低,对比具有统计学差异（P<0.05）,而PD98059组中蛋白含量的表达与其对比无显着性差异（P>0.05）。（2）ERK磷酸化水平的比较:1)ERK水平:与空白对照组相比,CCL24+空白血清组、CCL24组中的ERK水平增高（P<0.05）。与CCL24+空白血清组相比,中药低、中、高血清组中ERK水平的表达均降低,对比统计学具有差异（P<0.05）,拮抗剂组中ERK水平都降低（P<0.05）。与CCL24组相比,中药含药血清组中ERK水平表达均降低,统计学具有差异（P<0.05）,各拮抗剂组中ERK水平降低（P<0.05）。2)p-ERK水平比较:与空白对照组相比,CCL24+空白血清组、CCL24组中水平升高（P<0.05）。与CCL24+空白血清组和CCL24组相比,中药低、中、高剂量血清组中p-ERK水平升高,组间对比无明显差异（P>0.05）,而拮抗剂组中SB203580组、SB328437组以及Wortmannin组分别与其对比p-ERK统计学无差异（P>0.05）。2)RT-PCR检测结果比较:（1）CCR3m RNA表达水平的比较:与空白对照组相比,CCL24+空白血清组、CCL24组中CCR3m RNA表达水平上升（P<0.05）。与CCL24+空白血清组相比,中药低、中、高剂量血清组中CCR3m RNA表达水平降低,其中中药低、高剂量含药血清组与其对比有明显差异（P<0.05）;拮抗剂组中CCR3m RNA表达水平都降低,其中SB203580组、PD98059组对比有显着差异（P<0.05）。与CCL24组相比,中药低、中、高剂量血清组中CCR3m RNA表达水平降低,其中中药低、高剂量含药血清组与其对比有明显差异（P<0.05）;拮抗剂组中CCR3m RNA表达水平都降低,其中SB203580组、PD98059组对比有显着差异（P<0.05）。（2）ERKm RNA水平比较:CCL24+空白血清组、CCL24组ERKm RNA水平较空白对照组上调（P>0.05）。与CCL24+空白血清组相比,中药中剂量血清组中ERKm RNA水平表达降低,其余组中基因表达水平上升,与其对比统计学无明显差异（P>0.05）。与CCL24组相比,含药血清组中低、中剂量组、PD98059组中ERKm RNA水平表达降低,其他组基因水平表达上涨,组间对比无统计学差异（P>0.05）。结论:1.疏风通络方能够降低嗜酸性粒细胞中CCR3蛋白含量的表达以及ERK的水平。2.疏风通络方能够降低小鼠嗜酸性粒细胞中CCR3基因表达的水平。3.疏风通络方对小鼠嗜酸细胞中p-ERK水平和ERK基因水平无影响。4.疏风通络方能够通过降低小鼠嗜酸性粒细胞中CCR3及ERK的水平表达,从而调节CCL24/CCR3通路,减轻或抑制哮喘的发作,改善哮喘气道的炎症。
马晓伟[5]（2021）在《奥马珠单抗联合布地奈德福莫特罗对IgE介导的哮喘患者临床疗效评价》文中研究说明目的支气管哮喘是一种异质性疾病,并具有不同的临床表型,其中,过敏性哮喘代表了最广泛和最容易识别的表型哮喘。针对哮喘表型及其发病机制的治疗,即哮喘的生物靶向治疗。免疫球蛋白E的产生是导致过敏性哮喘症状持续存在、病情加重的重要因素,如何阻断IgE在免疫反应中的作用,为过敏性哮喘的治疗开辟了新道路。奥马珠单抗通过靶向结合IgE,有效抑制肥大细胞和嗜碱性粒细胞的活化和脱颗粒,从根源上阻断其介导的炎症级联反应,并减少哮喘的发作。尽管目前ICS+LABA联合用药,显示出良好的临床疗效,目前已经成为哮喘控制的首选用药,但是仍有部分患者存在控制不佳、敏感性下降等问题。奥马珠单抗作为其附加疗法,在治疗过敏性哮喘和其他过敏性疾病方面展示了靶向IgE治疗的优点。本研究将探讨在常规ICS+LABA治疗的基础上,加用奥马珠单抗对哮喘患者血中嗜酸性粒细胞百分比、血清总IgE水平、肺功能及临床症状改善、ACT评分的影响。资料与方法本研究收集了 2020年4月至2020年12月在山东大学附属山东省千佛山医院呼吸科门诊接受奥马珠单抗治疗的中重度过敏性哮喘患者32例。奥马珠单抗治疗前组:男性17例,女性15例,年龄19-64岁;奥马珠单抗治疗后组:均为接受规律皮下注射奥马珠单抗的治疗前组患者。两组性别、年龄构成比的差异无统计学意义（P>0.05）。监测患者应用奥马珠单抗治疗前及治疗16周后血中嗜酸性粒细胞百分比、血清总IgE水平、FEV1、FEV1%pred、ACT评分及FeNO测定等指标的变化并进行比较。结果经过连续16周奥马珠单抗的皮下注射,哮喘患者血清总IgE水平（340.44±157.96）IU/ml 较治疗前的（296.72±157.38）IU/ml 明显升高,差异有统计学意义（t=11.509,P<0.01）;血中嗜酸性粒细胞百分比从治疗前的（0.23±0.09）%下降至（0.17±0.07）%,治疗前后差异有统计学意义（t=8.925,P<0.01）;FEV1由治疗前的（2.53±0.25）L升至（2.65±0.25）L,差异有统计学意义（t=9.251,P<0.01）;FEV1%pred 由治疗前的（83.02±8.65）%升至（86.33±7.58）%,治疗前后差异有统计学意义（t=9.251,P<0.01）;FeNO由治疗前的（137.00±63.71）ppb 降至（69.16±36.09）ppb,差异有统计学意义（t=9.994,P<0.01）;ACT评分由治疗前的（19.63±1.96）升至（23.56± 1.05）治疗前后差异有统计学意义（t=13.876,P<0.01）。结论布地奈德/福莫特罗粉吸入剂是哮喘患者长期治疗的基石,在此基础上,评估体内过敏状态,并加用奥马珠单抗,能够有效抑制气道炎症。在改善肺功能、减少急性发作及提高生活质量等方面均优于单用布地奈德/福莫特罗,并且奥马珠单抗显现了良好的安全性和耐受性,开辟了哮喘生物靶向治疗的新途径。但是,这些结果还需要更大样本的前瞻性研究来进一步验证。
张清[6]（2021）在《奥马珠单抗治疗重度哮喘患者的生物标志物和对免疫细胞的影响》文中指出目的探讨奥马珠单抗治疗重度哮喘患者疗效的生物标志物和对免疫系统细胞的影响,为奥马珠单抗治疗重度哮喘患者的个体化精准治疗提供依据。方法第一部分利用免疫细胞浸润xCell分析、加权基因共表达网络WGCNA分析、GO富集分析、KEGG通路分析、PPI网络分析等生物信息学方法和逻辑回归方法分析GSE134544数据集中的转录组芯片数据和临床信息,寻找预测奥马珠单抗治疗疗效的生物标志物。第二部分采用卡方检验、逻辑回归、亚组分析等临床统计学方法回顾性分析2018年1月至2020年12月在中日友好医院接受奥马珠单抗治疗至少16周的重度哮喘患者基线特征和基线生物标志物水平,以期发现能够用来预测奥马珠单抗疗效的生物标志物和临床模型。指南推荐根据临床表型选择奥马珠单抗进行治疗,第三部分采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,使用奥马珠单抗进行体外干预后,采用流式细胞术检测免疫细胞的表型和蛋白质抗体芯片技术检测细胞上清液中细胞因子和抗体的浓度。结果生物信息学分析GSE134544数据集结果显示红色模块中的CD3E、CD19、CD34、CD79A、CD5、MME、CR2、CD40、CD28、CD40LG、MS4A1、CXCR5、CCR7、ADORA3、CCR3、GPR55、GPR18、PNOC、C5AR1、CCR4 为关键基因。20个关键基因在应答组和不应答组中的表达情况采用Wilcoxon检验进行比较,只有CD3E和CD79A具有统计学意义,P值分别为0.014和0.037。将CD3E和CD79A与年龄、性别、ACT评分、FEV1%占预计值和血清IgE等临床信息一起进行单因素和多因素逻辑回归,只有CD3E在单因素和多因素逻辑回归中均有意义,P值分别为0.0188和0.0116。CD3E对奥马珠单抗反应性的ROC曲线下面积为0.758,为其他曲线下面积的最大值。接着,我们回顾性分析了 2018年1月至2020年12月在中日友好医院接受奥马珠单抗治疗至少16周的32例重度哮喘患者的基线临床特征和基线生物标志物对奥马珠单抗治疗疗效的影响,结果显示奥马珠单抗治疗重度哮喘的应答率为71.875%。单因素逻辑回归结果显示年龄（P=0.6720）、性别（P=0.6436）、体重指数BMI（P=0.6029）、FeNO（P=0.2700）、诱导痰嗜酸性粒细胞百分比（P=0.8347）、血清总IgE（P=0.7438）、血嗜酸性粒细胞绝对数（P=0.2166）、血嗜酸性粒细胞百分比（P=0.1588）、血嗜碱性粒细胞绝对数（P=0.3822）、血嗜碱性粒细胞百分比（P=0.2111）、FEV1（P=0.3813）、FEV1%占预计值（P=0.5950）、是否行支气管热成形手术（P=0.2061）、是否口服糖皮质激素（P=0.7610）、是否有过敏性鼻炎（P=0.1521）、是否有鼻息肉（P=0.8335）、是否有鼻窦炎（P=0.4989）、是否有胃食管反流（P=0.2061）、是否有皮炎（P=0.9952）均不能影响奥马珠单抗治疗重度哮喘的疗效。上述指标的亚组分析结果P值仍全部大于0.05,不具有统计学意义。最后,我们从9例符合纳入标准的重度哮喘患者的外周血中采用密度梯度离心法分离PBMC细胞,使用125μg/ml的奥马珠单抗进行干预18小时,加入1μg/ml的兔抗人IgE促进IgE与FcεRI的交联,培养96小时后采用流式细胞术检测免疫细胞的表型,结果显示初始CD4+T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞的比例在奥马珠单抗组（27.49±10.59）%高于对照组（25.91±9.967）%,P值等于0.0292。效应CD4+T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞的比例在奥马珠单抗组（23.65±7.89）%中低于对照组（25.04±8.38）%,P值为0.0104。活化的CD8+T淋巴细胞占CD8+T淋巴细胞比例在奥马珠单抗组6.11%[1.96%-8.02%]中高于对照组3.03%[1.69%-5.03%],P=0.0391。经典单核细胞占单核细胞比例在奥马珠单抗组99.64%[99.01%-99.84%]较对照组 99.82%[99.62%-99.90%]低,非经典单核细胞在奥马珠单抗组0.36%[0.16%-0.99%]中高于对照组0.18%[0.105%-0.385%],P值均为0.0117。浆细胞样树突状细胞（P=0.2351）和髓树突状细胞（P=0.0977）占树突状细胞的比例在两组之间比较虽然P值大于0.05,没有统计学意义,但在奥马珠单抗组{（19.23±11.10）%、17.5%[7.27%-37.72%]}中均高于对照组{（16.00±6.65）%、12.93%[7.80%-22.81%]}。其他细胞如辅助性T淋巴细胞、调节性T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞奥马珠单抗组和对照组比较P值均大于0.05,没有统计学意义。蛋白质抗体芯片检测细胞上清液中细胞因子和抗体的分泌,结果显示只有IL-2在奥马珠单抗组（53.23±36.24）pg/ml中的浓度低于对照组（70.28±49.93）pg/ml,P值为0.0273;余细胞因子和抗体在两组之间均没有统计学意义。结论1、CD3E可以作为中重度哮喘患者奥马珠单抗治疗疗效的独立预测生物标志物。2、重度哮喘患者奥马珠单抗治疗疗效与基线水平生物标志物（如外周血嗜酸性粒细胞、外周血嗜碱性粒细胞、血清总IgE、诱导痰嗜酸性粒细胞百分比、FeNO和FEV1%占预计值）和基线临床特征（如年龄、性别、体重指数BMI、是否接受支气管热成型手术、是否口服糖皮质激素、是否存在包括过敏性鼻炎、鼻窦炎、鼻息肉、胃食管反流、皮炎在内的合并症）无关。3、奥马珠单抗可以导致体外CD4+T淋巴细胞中的初始CD4+T淋巴细胞比例升高,效应CD4+T淋巴细胞比例下降,活化的CD8+T淋巴细胞比例上升;单核细胞中的经典单核细胞比例下降,非经典单核细胞比例升高。4、奥马珠单抗导致细胞因子IL-2分泌下降,余细胞因子分泌无影响。5、奥马珠单抗对体外淋巴细胞中CD3+T淋巴细胞比例、CD4+T淋巴细胞比例、CD8+T淋巴细胞比例、B淋巴细胞比例、NK细胞比例均没有影响;对包括Th1、Th2、Th9、Th17、Th22、Tfh在内的辅助性T淋巴细胞和调节性T淋巴细胞在CD4+T淋巴细胞中的比例没有影响;对树突状细胞及其中的浆细胞样树突状细胞和髓样树突状细胞的比例没有影响;对抗体的分泌没有影响。
张赟[7]（2020）在《诱导痰液IL-25水平在儿童支气管哮喘发病中的临床意义研究》文中指出研究背景:在儿童时期,支气管哮喘（Bronchial asthma）是一种最常见的慢性呼吸道炎症疾病,支气管哮喘全球发病率逐年升高,在发达国家和发展中国家,儿童和成人哮喘发病患者总人数已上升到3亿以上,尤其是儿童哮喘,发病人数占35%以上,并且我国是支气管哮喘病死率最高的国家之一,造成了严重的医疗负担和社会负担。虽然近些年来《全球哮喘倡议指南》（GINA指南）得到很大的推广及应用,但是我国儿童哮喘控制情况仍然不尽如人意,哮喘儿童每年哮喘急性发作人数占全部患者人数的比率达66%,因此探寻支气管哮喘的发病机制是我们的重要任务。免疫学界认为支气管哮喘的发生与Th1/Th2平衡的破坏有重要关系,当变应原或其他因素进入哮喘患者体内后,过敏原可通过抗原呈递细胞激活气道黏膜上的T细胞,因此活化和促进Th2型气道炎症反应,产生IL-4、IL-10和IL-13等多种活性细胞因子,从而激活肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞及肺泡巨噬细胞等多种肺部炎症细胞,造成炎症细胞在气道中浸润和聚集。这些炎症细胞还能相互作用并且分泌出多种活性细胞炎症介质,从而成了一个相互作用的复杂免疫网络,从而导致气道平滑肌收缩,黏液分泌增加,血管通透性增加,炎症细胞浸润,产生气道高反应性及气道重塑等支气管哮喘病理生理特征。由于哮喘对儿童的严重不良影响,因此,获取有效的炎症评估指标及优质的抗哮喘药物一直是迫切需要解决的问题。目前已有许多研究证实,在支气管哮喘发病中,有多种类型的炎症细胞和细胞因子发挥了重要的作用。作为白介素17（Interleukin-17,IL-17）家族中的新成员,白细胞介素-25（Interleukin-25,IL-25）是一种免疫促炎性细胞因子,目前被公认在支气管哮喘的免疫功能方面发挥了十分重要的作用。IL-25在不同类型的肺细胞中表达增加,不仅包括肺结构细胞,如气道内皮细胞和上皮细胞,还包括嗜酸性粒细胞、T细胞和肥大细胞。当暴露于过敏原后,支气管粘膜下层的这些细胞会增加,并且分泌IL-25或对IL-25产生迅速的免疫反应。IL-25能活化Th2型细胞产生一系列免疫反应,可以产生Th2型细胞因子如IL-4、IL-10、IL-15等,也可以产生嗜酸性粒细胞趋化因子,从而导致血清特异性IgE升高和嗜酸性粒细胞的浸润。在活体模型中证实肺组织发生了明显的病理变化,IL-25能够引起气道炎症和气道重塑以及增强过敏性炎症反应。而通过阻断IL-25,气道高反应性和肺组织轻微的嗜酸性粒细胞浸润以及杯状细胞增生也得到了显着的改善。因此,IL-25在哮喘的发病中发挥了重要作用,受到研究者们的广泛的关注。诱导痰作为一种相对安全、无创的方法,可以通过分析痰液细胞组成和可溶性炎症介质来评价气道炎症。并且通过诱导痰细胞分析评价痰嗜酸粒细胞增多的百分比,能够直接评估气道炎症反应,是一种客观监测哮喘的方法。有研究者对哮喘儿童进行了痰细胞测定,发现不同的细胞组分可以介导不同炎症细胞,如中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞,产生的气道炎症,其中嗜中性粒细胞气道炎症占主导地位。最近的研究也得出结论,诱导痰的分析可以识别与肺功能参数、哮喘控制和体重指数（BMI）相关的不同“高细胞因子”模式。目前罕见对支气管哮喘患儿痰中IL-25（Sputum interleukin-25,SpIL-25）的研究报道,并且IL-25在儿童支气管哮喘气道炎症中的作用机制及对治疗的反应的机制尚不明确,我们通过对IL-25在支气管哮喘儿童痰液中的表达变化及作用机制研究,将为支气管哮喘的诊断及治疗提供新的临床思路及理论依据。研究目的:1.探讨哮喘儿童诱导痰液中IL-25浓度水平变化及其与血液中IL-25表达水平的相关性。2.探讨哮喘患儿诱导痰液IL-25表达水平和呼出气一氧化氮水平、肺功能、诱导痰细胞计数百分比等临床数据的相关性。3.在蛋白及基因水平探讨哮喘患儿痰液中IL-25表达水平与临床指标及抗哮喘治疗效果的相关性,探索IL-25是否可作为一种炎症介质评估治疗效果。研究方法:1.研究对象及分组:选择2013年6月至2016年12月于山东大学齐鲁儿童医院确诊为支气管哮喘的儿童62例,他们为为轻-中度哮喘患者,男29例,女33例,年龄6～18岁。所有患者诊断均符合《全球哮喘倡议指南》诊断标准。选取18例（女8例,男10例）年龄匹配的非哮喘健康儿童作为对照组,纳入研究儿童要求能够独立完成肺功能,并且所有受试者的FEV1>预测值的75%。哮喘儿童根据其抗哮喘药物的使用分为A组:未接受抗哮喘药物治疗的未控制的哮喘儿童;B组:应用抗哮喘药物治疗控制哮喘儿童。2.完善临床指标的测试及标本收集,包括采用德国耶格-8800肺功能仪测定儿童基线肺活量,进行乙酰胆碱激发试验及诱导痰试验;并且测定并收集研究人群呼出气一氧化氮（Fractional exhaled nitric oxide,FENO）水平、血清总免疫球蛋白E（Immunoglobulin E,IgE）、全血C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、外周血嗜酸性粒细胞计数等数据。3.采用ELISA（Enzyme linked immunosorbent assay）方法检测血清及诱导痰液上清液IL-25水平表达变化。4.采用免疫印迹法（Western blot）检测诱导痰液中IL-25蛋白表达。5.采用qRT-PCR法检测研究对象血液及诱导痰液IL-25基因表达水平。研究结果:1.支气管哮喘儿童痰液IL-25水平与临床指标的相关性检测1.1血清及痰液中IL-25水平变化通过ELASE方法检测IL-25水平发现,A组诱导痰液中IL-25水平为（47.16±13.50 pg/ml）显着升高（P<0.001）,明显高于其他两组（B组39.14±9.03 pg/ml,对照组36.76±6.48 pg/ml）,A组和B组诱导痰IL-25浓度水平和血清中IL-25水平显着相关（A组r=0.669,P<0.01;B组r=0.576,P<0.05）。1.2诱导痰中细胞计数通过对诱导痰液细胞计数发现,A组哮喘儿童的诱导痰嗜中性粒细胞计数百分比下降（P<0.001）,而嗜酸性粒细胞的计数百分比显着增加（P<0.001）。A组患者诱导痰液嗜酸性粒细胞和中性粒细胞计数百分比与诱导痰液IL-25水平呈正相关（分别为r=0.886,P<0.01;r=0.655,P<0.01）。1.3肺功能检测结果通过对入选儿童肺功能测定发现,在A组中,SpIL-25水平与FEV1（pred）（r=0.956,P<0.01）和PC20（mg/ml）（r=0.549,P<0.05）具有显着相关性。1.4 FENO检测结果通过对入选儿童FENO检测发现,A组哮喘患者的FENO水平明显升高（P<0.001）。A组血清SpIL-25水平与FENO水平具有相关性（r=-0.77,P<0.01）。我们发现哮喘儿童SpIL-25水平与血液IL-25水平（r=0.669,P<0.01）、FENO（r=-0.483,P<0.05）和嗜酸性粒细胞（r=0.405,P<0.05）均具有相关性。1.5肺功能、诱导痰液细胞计数与诱导痰液IL-25水平相关性分析通过统计分析发现哮喘儿童的FEV1/FVC%预测值、FEF25-75%的预测、诱导痰巨噬细胞（%）CRP与诱导痰液IL-25浓度水平无相关性。2.0支气管哮喘儿童诱导痰液IL-25蛋白及基因的表达2.1诱导痰液IL-25蛋白表达通过Western blot方法检测发现,各研究组诱导痰中IL-25蛋白表达水平不同。通过对比蛋白表达的比值,支气管哮喘儿童IL-25蛋白的表达水平明显增加,A组表达水平最高,表达量最多。与B组和健康对照组相比,A组诱导痰中IL-25蛋白水平的比值显着升高（P<0.001）。2.2诱导痰液IL-25mRNA表达2.2.1实时荧光定量qRT-PCR结果显示3组儿童血液及诱导痰液IL-25mRNA的相对表达量的总体均数具有显着统计学差异（P均<0.001）。A组中诱导痰液和血液IL-25的相对表达量均高于B组和健康对照组（分别P<0.05;P<0.001）。2.2.2诱导痰液和血液中IL-25mRNA表达水平相关性分析显示A组和B组支气管哮喘患儿IL-25mRNA表达呈线性相关、表达水平存在显着差异性。两组患儿诱导痰液和血液中IL-25mRNA的表达呈线性相关性（r=0.379,F=68.3,P=0.009）。A组患者诱导痰液和血液IL-25mRNA的相对表达量明显高于B组（P<0.05）和健康对照组（P<0.001）。B组患者和健康对照组相比无显着统计学差异（P=0.168）。2.2.3哮喘患儿LI-25mRNA的表达水平与病情严重度和抗哮喘治疗分组相关性分析结果哮喘患儿血液和痰液LI-25mRNA的表达水平与哮喘患儿疾病严重程度具有显着差异性（分别P=0.04和P=0.042）;经过抗哮喘治疗,哮喘患儿血液和痰液LI-25mRNA的表达水平均显着下降（分别P=0.021和P=0.026）,提示IL-25可以作为评估哮喘疾病严重程度和抗哮喘治疗效果的一种炎症介质。2.2.4哮喘息儿痰液LI-25mRNA的表达水平与血液CRP、FENO、FEV1/FVC（%）及诱导痰液嗜酸性粒细胞计数（%）相关性分析显示统计分析发现,支气管哮喘患儿痰液LI-25mRNA的表达与血液CRP水平相关性（r=0.361,P=0.007）;哮喘患儿痰液LI-25mRNA的表达水平与哮喘患儿呼出气NO水平具有线性相关（r=0.26,P=0.04）;哮喘患儿FEV1/FVC（%）和痰液LI-25mRNA的表达呈负相关性（r=-0.344,P=0.01）,痰液IL-25mRNA在支气管哮喘患儿中的表达与诱导痰液嗜酸性粒细胞计数（%）具有显着相关性（r=0.404,P=0.03）,提示IL-25可以作为一种炎症介质用来评估哮喘儿童气道炎症。结论:1.支气管哮喘儿童的诱导痰液和血液IL-25浓度升高,同时IL-25的表达在蛋白及基因水平明显升高。2.哮喘儿童痰液IL-25浓度水平和血液IL-25浓度水平、FENO、诱导痰嗜酸性粒细胞计数具有线性相关性。3.哮喘儿童诱导痰液LI-25mRNA的表达水平与血液CRP、FENO、FEV1/FVC（%）及诱导痰液嗜酸性粒细胞计数（%）、病情严重程度和抗哮喘治疗有明显相关性。4.诱导痰中IL-25水平在抗哮喘治疗后在浓度水平下降,同时在蛋白及基因水平也明显下降,提示IL-25表达水平能够作为评估药物疗效和哮喘控制状态的重要生物标志物。
李成刚[8]（2020）在《儿童湿热哮喘临床指标相关性及加味茵陈蒿汤对湿热哮喘模型鼠Th17细胞影响的研究》文中提出目的:1.探讨中医理论指导下的湿热哮喘大鼠模型与现代医学不同表型哮喘模型的相关性;2.探讨加味茵陈蒿汤对湿热哮喘模型大鼠的疗效机制;3.探讨儿童湿热哮喘急性发作期与临床常见理化指标的相关性。方法:实验研究:1.采用高脂饲料喂养+长期湿热环境暴露+卵清蛋白致敏激发,多因素联合干预,建立湿热哮喘大鼠模型。采用高脂饲料喂养+长期湿热环境暴露,内外湿双因素联合干预,建立单纯湿热证大鼠模型。以正常大鼠和卵清蛋白致敏激发的哮喘大鼠为对照,通过多种生物学检测评价模型;2.实验大鼠随机分为6组:空白组,模型对照组,地塞米松组,加味茵陈蒿汤低、中、高剂量组。记录各组大鼠一般状态,检测肺泡灌洗液细胞计数及IL-8、IL-17,血清HDL、LDL,血浆FIB,肺组织病理学,肺组织ROR-γtm RNA。探讨加味茵陈蒿汤对湿热哮喘的疗效机制。临床研究:制定临床病例回顾分析表,对符合标准的病例进行相关信息的统计学描述,并通过Logistic回归分析、ROC曲线分析探寻儿童湿热哮喘发病的微观辨证指标。结果:1.湿热哮喘模型较传统的“单纯OVA激发哮喘模型”的肺泡灌洗液中中细粒细胞比例明显升高;“内外湿”双因素建立的单纯湿热模型出现了明显的气道炎性反应;2.加味茵陈蒿汤可改善湿热哮喘模型大鼠的湿热证候和哮喘症状,上调HDL水平,下调LDL、HIB水平,改善气道炎症;可明显降低肺组织中RORγtm RNA的表达,下调IL-8、IL-17水平,下调肺泡灌洗液中中性粒细胞比例;3.湿热哮喘发病以男童居多,学龄前期儿童高发,住院患儿多处在哮喘急性发作期;湿热哮喘多发于秋季,冬季少发,与非湿热哮喘发病季节差异有统计学意义（P<0.05）;EB病毒检测阳性对于区别是否是湿热哮喘无统计学意义（P>0.05）;哮喘患儿MP检测阳性多提示属湿热哮喘,较非湿热哮喘有统计学意义（P<0.01）;呼吸道八项病原学检测初步提示湿热哮喘病毒阳性检出率较高;4.WBC、L、M、N、EO、BASO、RDW-CV、PLT、PDW、CRP、NLR、PLR、ELR、ENR、EMR、NMR、MLR、K、Na、Cl、Ca、CO2、ALT、AST、ALP、UREA、β2MG、Ig E、CK-MB、LDH、ESR、GLU对于辅助诊断是否湿热哮喘无统计学意义（P>0.05）。RBC、HGB、BLR、TP、TBIL、CREA升高对于辅助诊断是否湿热哮喘有统计学意义（P<0.05）。结论:1.高脂饲料喂养+长期湿热环境暴露+卵清蛋白致敏激发建立的湿热哮喘大鼠模型可作为一种新型中性粒细胞型哮喘模型;2.高脂饲料喂养+长期湿热环境暴露的“内外湿”联合干预可以导致大鼠出现明显的气道炎性浸润;3.加味茵陈蒿汤可以减弱肺组织中RORγtm RNA的表达,下调IL-8、IL-17水平,减轻气道中性粒细胞聚集,其治疗机制可能与Th17细胞通路有关;4.湿热哮喘与秋季发病、MP感染及RBC、HGB、BLR、TP、TBIL、CREA检测升高有一定相关性。
于明霞[9]（2020）在《肺卫功能与支气管哮喘血清总IgE、气道反应性的关系探讨》文中认为研究目的:在临床实践中发现支气管哮喘患者发作多出现在季节交替时,多因受外邪诱发,这些症状多与中医肺气虚,卫外不固有关,同时在临床中发现支气管哮喘患者发病过程中伴有血清总IgE的升高。西医通过使用抗IgE抗体药物降低血清中游离IgE的水平,起到最终抑制炎症的作用,但作用有限,而且会加重患者经济负担。目前关于肺卫功能失常症状（气短、汗出、畏寒肢冷、咳嗽、易感冒）与支气管哮喘血清总IgE、气道反应性是否有相关性的文献报道较少,基于此,本研究探索了支肺卫功能特征与气管哮喘疾病演变过程中血清总IgE、气道反应之间的相互关系,以期为临床提供依据。研究方法:在临床流行病学与循证医学的指导下,采用回顾性研究方式,按照支气管哮喘疾病的诊断标准、纳入标准、排除标准,制定临床病例信息采集表,采集中日友好医院病案室保存完好、从2016年9月至2019年9月在中日友好医院中医肺病二部住院患者的一般信息（姓名、年龄、身高、体重、疾病分期、易过敏）、肺卫功能临床特征（汗出、畏寒肢冷、易感冒、咳嗽、气短）、病情分期、血清总IgE、气道反应性指标（FVC%、FEV1%、FEV1%FVC、PEF%、MEF75%、MMEF 75/25）,如实记录相关信息。采用描述性统计方法总结支气管哮喘患者肺卫症状的分布特征,采用秩和检验分析支气管哮喘在疾病不同时期肺卫症状的差异性,Spearman相关性分析肺卫功能症状与血清总IgE、气道反应性指标相关性。研究结果:1.通过对支气管哮喘患者肺卫症状分布描述统计分析,超过50%患者有咳嗽、气短、易汗出、易感冒等症状,不足50%的患者有不同程度的畏寒肢冷。对三组不同严重程度支气管哮喘患者的肺卫功能总积分进行比较,统计结果存在差异,支气管哮喘越严重,肺卫功能失常积分越高。对哮喘不同分期患者的肺卫症状进行比较,统计结果示单项症状畏寒肢冷在疾病急性发作期和慢性持续期分布存在差异。2.肺卫功能与支气管哮喘血清总IgE存在相关性。按照年龄不同分层,将肺卫功能失常总症状、单项症状作为单因素与血清总IgE、气道反应性检测指标做Spearman相关分析,结果显示年龄≤30岁支气管哮喘患者易感冒症状严重程度与血清总IgE呈正相关,年龄在30-40岁之间的支气管哮喘患者肺卫功能失常总症状严重程度与血清总IgE呈正相关,畏寒肢冷、咳嗽症状严重程度与血清总IgE呈正相关;年龄>70岁支气管哮喘患者畏寒肢冷症状严重程度与血清总IgE呈正相关。3.肺卫功能症状与气道高反应性指标可能存在正相关性。按患者年龄不同分层,将肺卫症状与气道反应指标做Spearman秩相关分析,结果显示年龄≤30岁支气管哮喘患者气短、咳嗽症状严重程度与MMEF75/25呈正相关;年龄在40-50岁患者肺卫功能总积分症状程度与FVC%呈负相关,气短症状严重程度与FVC%呈负相关;年龄在50-60岁的支气管哮喘患者咳嗽症状严重程度与FEV1%、FEV1%FVC、MEF75%呈负相关;年龄>70岁支气管哮喘患者气短症状严重程度与FVC%、FEV1%、PEF%、MEF75%、MMEF75/25指标呈负相关,咳嗽症状严重程度与FEV1%FVC呈正相关,汗出症状严重程度与PEF%呈负相关。4.老年患者的血清总IgE与气道反应性指标存在相关性,通过Spearman秩相关分析,年龄在60-70岁的支气管哮喘患者血清总IgE与FEV1%FVC、MMEF75/25呈负相关;年龄>70岁支气管哮喘患者血清总IgE与FEV1%FVC呈负相关。结论:1.通过对支气管哮喘患者肺卫症状分布描述统计分析,在支气管哮喘发病过程中,超过50%患者有不同程度咳嗽、气短、易汗出、易感冒等症状,不足50%的患者有不同程度的畏寒肢冷。对三组不同严重程度支气管哮喘患者的肺卫功能总积分进行比较,统计结果示支气管哮喘越严重,肺卫功能失常积分越高。对哮喘不同分期患者的肺卫症状进行比较,统计结果示单项症状畏寒肢冷在疾病急性发作期和慢性持续期分布存在差异。2.通过Spearman相关分析,肺卫功能与支气管哮喘血清总IgE存在相关性,与支气管哮喘疾病演变过程中的气道反应呈相关性。支气管哮喘疾病老年患者的血清总IgE与气道反应性指标存在相关性。
王成[10]（2020）在《基于“痰瘀同源”理论运用射干麻黄汤合桂枝茯苓丸治疗哮喘急性发作期的临床观察》文中提出目的:观察射干麻黄汤合桂枝茯苓丸辅助治疗支气管哮喘急性发作期（痰瘀阻肺证）的临床疗效和安全性,为支气管哮喘的临床治疗提供新的思路。方法:将符合纳入标准的66例支气管哮喘急性发作期患者随机分为试验组和对照组。两组均给予西医常规治疗,包括多索茶碱静滴,特布他林联合布地奈德雾化吸入等。试验组在西医常规治疗的基础上加用射干麻黄汤合桂枝茯苓丸汤剂口服。两组疗程均为10天,比较两组患者治疗后中医证候评分、ACQ7评分、肺功能（FEV1%、FEV1/FVC、PEF）等指标,评估临床疗效及安全性。结果:1、试验组总有效率为93.5%,对照组总有效率为87.50%,两组患者总有效率均大于85%。试验组临床疗效优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）,2、治疗后试验组中医证候总积分低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;两组间喘息、咳嗽、胸闷、咯痰证候积分比较,试验组改善情况优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;哮鸣音比较差异不具有统计学意义（P>0.05）。3、两组患者治疗后ACQ7评分均改善,试验组优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。4、两组患者治疗后FEV1%、FEV1/FVC、PEF均较前改善,试验组改善情况优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。5、本研究中两组患者治疗前及治疗后PLT比较差异均不具有统计学意义（P>0.05）。6、两组患者在治疗过程中均未发生明显不良反应。结论:射干麻黄汤合桂枝茯苓丸能辅助改善支气管哮喘急性发作期（痰瘀阻肺证）患者的喘息、咳嗽、胸闷、咯痰症状,降低ACQ7评分,改善肺功能,提高临床疗效,且安全性良好。
二、2790例支气管哮喘患者血中嗜酸粒细胞的观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、2790例支气管哮喘患者血中嗜酸粒细胞的观察（论文提纲范文）
（1）益气温阳护卫法对哮喘大鼠Th17细胞/Treg细胞免疫失衡的影响及作用机理研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 注释表 |
| 引言 |
| 第一章 理论探讨 |
| 第一节 古代文献关于哮病的认识 |
| 1.病名源流追溯 |
| 2.病因认识 |
| 3.病位认识 |
| 4.病机认识 |
| 5.治疗概述 |
| 第二节 现代医家对哮喘的认识与辨治 |
| 第三节 现代医学哮喘发病机制和治疗进展 |
| 1.哮喘发病机制 |
| 2.治疗进展 |
| 第四节 Th17/Treg免疫失衡与哮喘 |
| 1.Th17 细胞功能及分化 |
| 2.Treg细胞功能及分化 |
| 第五节 益气温阳护卫法调节哮喘Th17/Treg免疫失衡理论依据 |
| 1.益气温阳护卫法防治哮喘理论依据 |
| 2.益气温阳护卫法立法组方特点 |
| 3.“气阳虚弱,卫气不足”与免疫失衡相关 |
| 小结 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 体内实验研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 第二节 体外实验研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 全文总结 |
| 结论 |
| 创新性 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简历 |
（2）肺脾为核心脏腑整体辨证支气管哮喘慢性持续期免疫调控研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 支气管哮喘慢性持续期免疫调控研究 |
| 前言 |
| 1 支气管哮喘慢性持续期的免疫调控特征 |
| 2 支气管哮喘慢性持续期炎性因子与免疫调控的相互关系 |
| 3 免疫调控对支气管哮喘慢性持续期预后转归的影响 |
| 4 支气管哮喘慢性持续期免疫调控的临床需求 |
| 5 支气管哮喘慢性持续期免疫调控的临床局限与未来展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医支气管哮喘慢性持续期免疫调控研究 |
| 前言 |
| 1 支气管哮喘慢性持续期的中医观 |
| 2 支气管哮喘慢性持续期中医临床特征与免疫炎症的相关性 |
| 3 支气管哮喘慢性持续期中医病机演变与免疫调控的相互关系 |
| 4 中医干预对支气管哮喘慢性持续期炎性因子与免疫调控的作用 |
| 5 中医通过免疫调控影响支气管哮喘慢性持续期预后转归 |
| 6 支气管哮喘慢性持续期中医免疫调控的优势与特色 |
| 7 支气管哮喘慢性持续期中医免疫调控面临的问题与发展趋势 |
| 参考文献 |
| 第二部分 支气管哮喘慢性持续期“肺脾为核心脏腑整体辨证”理论研究 |
| 1 “脏腑整体辨证”观 |
| 1.1 整体观念 |
| 1.2 脏腑辨证 |
| 1.3 “脏腑整体辨证”的含义 |
| 2 “肺脾为核心脏腑整体辨证”观 |
| 2.1 支气管哮喘慢性持续期关键病机的共性规律特征 |
| 2.2 “肺脾为核心脏腑整体辨证”的含义 |
| 3 “温润辛金培本”原理方药的临床应用 |
| 3.1 “温润辛金培本”治则理论基础 |
| 3.2 “温润辛金培本”原理方药系列疗法 |
| 3.3 温润辛金培本原理内服方药 |
| 3.4 温润方 |
| 4 支气管哮喘慢性持续期“肺脾为核心脏腑整体辨证”与西医免疫调控的异同 |
| 4.1 免疫调控失衡的认识思路不同 |
| 4.2 免疫调控的方法有别 |
| 4.3 免疫调控的目的一致 |
| 5 “肺脾为核心脏腑整体辨证”继承与发展了中医解决支气管哮喘慢性持续期问题的优势与特色 |
| 参考文献 |
| 第三部分 肺脾为核心脏腑整体辨证支气管哮喘慢性持续期免疫调控研究 |
| 研究一 基于RCT的肺脾为核心脏腑整体辨证支气管哮喘慢性持续期患者临床信息分析及血清标本收集 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究二 肺脾为核心脏腑整体辨证治疗支气管哮喘慢性持续期调节免疫球蛋白水平的免疫调控机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究三 肺脾为核心脏腑整体辨证治疗支气管哮喘慢性持续期调节促炎ILs水平的免疫调控机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究四 肺脾为核心脏腑整体辨证治疗支气管哮喘慢性持续期调节抗炎ILs水平的免疫调控机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 结论 |
| 2 特色与创新 |
| 3 问题与展望 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
| 附录 |
| 附件1 支气管哮喘慢性持续期实用性随机对照研究方案 |
| 附件2 试验过程的标准作业程序质量控制(即SOP管理) |
| 附件3 各中心血清采集及哮喘控制情况 |
（3）麻杏石甘汤对过敏性哮喘大鼠辅助T淋巴细胞调控作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 麻杏石甘汤对过敏性哮喘模型大鼠的抗过敏作用观察 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 麻杏石甘汤对过敏性哮喘大鼠Th2、Th9、Th17的调控作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 麻杏石甘汤对体外培养PBMC中Th2、Th9、Th17的调控作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述一 辅助T细胞亚群对过敏性哮喘的调控作用机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 麻杏石甘汤治疗支气管哮喘研究进展综述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（4）基于CCL24/CCR3通路探讨疏风通络方对小鼠嗜酸细胞CCR3受体、ERK磷酸化及基因表达影响研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验细胞株 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 药物制备 |
| 2.2 小鼠分组与给药 |
| 2.3 含药血清制备 |
| 2.4 细胞培养与观察 |
| 2.5 小鼠嗜酸性粒细胞分组与处理 |
| 3 实验指标检测 |
| 3.1 嗜酸性粒细胞的瑞氏染色 |
| 3.2 Western blot 法检测嗜酸性粒细胞中 CCR3 蛋白含量水平、总 ERK 磷酸化水平 |
| 3.3 RT-PCR 法检测嗜酸粒细胞中 CCR3、ERK基因表达水平 |
| 3.4 统计分析处理 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 小鼠嗜酸性粒细胞形态学观察与瑞氏染色形态 |
| 4.2 Western blot 法检测嗜酸性粒细胞中 CCR3 蛋白含量水平、总 ERK 磷酸化水平结果比较比较 |
| 4.3 RT-PCR 检测小鼠嗜酸性粒细胞中 CCR3、ERK 基因水平表达 |
| 讨论 |
| 1.中药含药血清制备方法 |
| 2.中医风痰与哮喘的认识 |
| 3.疏风通络方组方分析 |
| 4.EOS 与 Eotaxin-2/CCR3 |
| 5.疏风通络方对小鼠嗜酸细胞 CCR3 受体,ERK 磷酸化及基因表达的影响 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述一 Eotaxin及其受体CCR3 在支气管哮喘中研究进展 |
| 1 嗜酸性粒细胞与哮喘 |
| 2 趋化因子 |
| 2.1 趋化因子的分类 |
| 2.2 嗜酸性粒细胞的趋化因子Eotaxin |
| 2.3 Eotaxin与哮喘 |
| 3 趋化因子受体及其分类 |
| 3.1 嗜酸性粒细胞趋化因子受体-3(CCR3) |
| 3.2 CCR3 与哮喘 |
| 4 Eotaxin/CCR3 通路 |
| 5 小结 |
| 综述二 中医对支气管哮喘病因病机的认识 |
| 1 夙根学说 |
| 2 外邪因素 |
| 3 脏腑亏虚 |
| 4 肝肺关系学说 |
| 5 饮食不洁,体虚劳倦 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）奥马珠单抗联合布地奈德福莫特罗对IgE介导的哮喘患者临床疗效评价（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 综述 奥马珠单抗治疗过敏性哮喘的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（6）奥马珠单抗治疗重度哮喘患者的生物标志物和对免疫细胞的影响（论文提纲范文）
| 中英文缩略表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1. 本课题的理论意义和现实意义 |
| 2. 国内外相关研究成果述评 |
| 2.1. 预测奥马珠单抗治疗重度哮喘疗效的生物标志物 |
| 2.2. 奥马珠单抗治疗支气管哮喘的细胞水平机制进展 |
| 2.2.1. 与游离IgE结合,阻断IgE与FcεR I的结合 |
| 2.2.2. IgE高亲和力受体(FcεR I~+)细胞数量下降 |
| 2.2.3. 降低细胞表面FcεR I受体的表达 |
| 2.2.4. 加速与FcεRI结合的IgE解离 |
| 2.2.5. 增加嗜碱性粒细胞的内在敏感性 |
| 2.2.6. 诱导嗜酸性粒细胞凋亡 |
| 2.2.7. 减少膜IgE~+B淋巴细胞数量和减少IgE的合成 |
| 2.2.8. 对T淋巴细胞及细胞因子的影响 |
| 2.2.9. 与补体结合和激活中性粒细胞 |
| 3. 本论文所要解决的问题 |
| 4. 本论文主要的方法、基本思路和论文结构 |
| 第一部分 利用生物信息学探讨中重度支气管哮喘患者奥马珠单抗治疗反应性的生物标志物 |
| 1. 方法 |
| 1.1. 查找数据集和数据集简介 |
| 1.2. 免疫细胞浸润分析——xCell |
| 1.3. 加权基因共表达网络分析(WGCNA) |
| 1.4. GO富集分析和KEGG通路分析 |
| 1.5. PPI蛋白互作网络 |
| 1.6. 根据临床分组对关键基因再次进行筛选 |
| 1.7. 逻辑回归 |
| 1.8. 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1. GSE134544基线表达矩阵的获取和矩阵基本信息 |
| 2.2. 奥马珠单抗应答组和不应答组免疫细胞浸润差异 |
| 2.3. 加权基因共表达网络分析(WGCNA) |
| 2.4. GO富集分析、KEGG通路分析和PPI网络分析 |
| 2.5. 关键基因在不同奥马珠单抗反应性中的差异表达 |
| 2.6. 逻辑回归 |
| 2.7. ROC曲线 |
| 3. 讨论 |
| 4. 研究不足与展望 |
| 5. 小结 |
| 第二部分 回顾性分析重度哮喘患者奥马珠单抗治疗反应性的生物标志物 |
| 1. 方法 |
| 1.1. 研究设计和参与者 |
| 1.2. 患者的纳入标准和排除标准 |
| 1.3. 结局指标 |
| 1.4. 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1. 重度哮喘患者的筛选 |
| 2.2. 基线的人口学和临床特征 |
| 2.3. 连续性变量多重共线性 |
| 2.4. 逻辑回归 |
| 2.5. 奥马珠单抗治疗反应性的亚组分析 |
| 3. 讨论 |
| 4. 研究不足与展望 |
| 5. 小结 |
| 第三部分 奥马珠单抗对重度哮喘患者免疫细胞影响的体外研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1. 重度哮喘患者的选择 |
| 1.2. 人口学特征、临床资料采集和外周血标本采集 |
| 1.3. 外周血单个核细胞(PBMC)分离和培养 |
| 1.3.1. 实验器材和试剂 |
| 1.3.2. 细胞完全培养基的配制 |
| 1.3.3. PBMC细胞分离和培养实验步骤 |
| 1.4. 奥马珠单抗干预PBMC实验 |
| 1.4.1. 实验器材和实验试剂 |
| 1.4.2. 实验试剂的配制 |
| 1.4.3. 奥马珠单抗干预PBMC实验步骤 |
| 1.5. 流式细胞术检测细胞亚群 |
| 1.5.1. 实验器材和实验试剂 |
| 1.5.2. 试剂配制 |
| 1.5.3. 实验步骤 |
| 1.6. 蛋白质芯片技术检测细胞上清液细胞因子和抗体 |
| 1.6.1. 实验器材和实验试剂 |
| 1.6.2. 试剂配制 |
| 1.6.3. 实验步骤 |
| 1.7. 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1. 纳入的重度哮喘患者的人口学特征和临床资料 |
| 2.2. 奥马珠单抗对人PBMC分化的影响 |
| 2.2.1. 奥马珠单抗对T细胞的影响 |
| 2.2.2. 奥马珠单抗对辅助性T细胞的影响 |
| 2.2.3. 奥马珠单抗对调节性T细胞的影响 |
| 2.2.4. 奥马珠单抗对B淋巴细胞的影响 |
| 2.2.5. 奥马珠单抗对树突状细胞的影响 |
| 2.2.6. 奥马珠单抗对单核细胞和NK细胞的影响 |
| 2.3. 奥马珠单抗对细胞上清液细胞因子和抗体的影响 |
| 3. 讨论 |
| 4. 研究不足与展望 |
| 5. 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 细胞水平探讨奥马珠单抗治疗支气管哮喘的研究进展 |
| 参考文献 |
（7）诱导痰液IL-25水平在儿童支气管哮喘发病中的临床意义研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 儿童支气管哮喘痰液IL-25水平与临床指标的相关性研究 |
| 材料方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 支气管哮喘儿童诱导痰液IL-25蛋白及基因的表达 |
| 材料方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 细胞因子IL-25与支气管哮喘 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 附英文论文一 |
| 附英文论文二 |
（8）儿童湿热哮喘临床指标相关性及加味茵陈蒿汤对湿热哮喘模型鼠Th17细胞影响的研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第1章 湿热哮喘模型的建立与评价 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 主要实验试剂及耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 一般情况记录 |
| 2.4 麻醉及取材 |
| 2.5 血清HDL、LDL测定 |
| 2.6 血浆FIB测定 |
| 2.7 BALF中 EOS、NEU比例测定 |
| 2.8 肺组织病理学检测 |
| 2.9 酶联免疫吸附法检测步骤 |
| 2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组动物一般情况 |
| 3.2 血清HDL、LDL测定结果 |
| 3.3 血浆FIB测定结果 |
| 3.4 BALF中 EOS、NEU比例测定结果 |
| 3.5 肺组织病理学检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 现代哮喘鼠模型研究进展 |
| 4.2 人哮喘表型与动物哮喘表型相关性的研究 |
| 4.3 中西医理论指导下的湿热哮喘大鼠模型的建立 |
| 4.4 实验结果分析 |
| 5 结论 |
| 第2章 加味茵陈蒿汤对湿热哮喘模型大鼠的疗效验证 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验用药 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 主要实验试剂及耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 模型制备 |
| 2.2 实验分组 |
| 2.3 给药方法 |
| 2.4 一般情况观察 |
| 2.5 麻醉及取材 |
| 2.6 血清HDL、LDL测定 |
| 2.7 血浆FIB测定 |
| 2.8 BALF中 EOS、NEU比例测定 |
| 2.9 肺组织病理学检测 |
| 2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组动物一般情况 |
| 3.2 血清HDL、LDL测定结果 |
| 3.3 血浆FIB测定结果 |
| 3.4 BALF中 EOS、NEU比例测定结果 |
| 3.5 肺组织病理学检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 加味茵陈蒿汤立法依据及组成 |
| 4.2 加味茵陈蒿汤的实验研究进展 |
| 4.3 实验结果分析 |
| 5 结论 |
| 第3章 加味茵陈蒿汤治疗湿热哮喘相关机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验标本 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 酶联免疫吸附法测肺泡灌洗液IL-8、IL-17 含量 |
| 2.2 逆转录聚合酶链反应技术检测肺组织ROR-γtm RNA表达 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠BALF中 IL-8、IL-17 含量的ELISA检测结果 |
| 3.2 大鼠肺组织ROR-γtm RNA表达结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 Th17 细胞相关机制与哮喘的相关性 |
| 4.2 实验结果分析 |
| 5 结论 |
| 第4章 儿童湿热型哮喘临床回顾性分析 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入及排除标准 |
| 1.4 病例分组 |
| 1.5 信息采集 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 哮喘患儿病例信息统计描述 |
| 3.2 湿热与非湿热哮喘患儿临床生化检测分析 |
| 3.3 哮喘患儿病原学检查情况 |
| 3.4 湿热哮喘患儿诊断线性回归分析结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 湿热与炎症关系的研究进展 |
| 4.2 湿热哮喘的临床研究进展 |
| 4.3 临床研究结果分析 |
| 5 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1 综述一儿童湿热型哮喘研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录2 综述二支气管哮喘炎症表型研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录3 实验图片 |
| 附录4 英文缩略语对照表 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 已发表论文 |
（9）肺卫功能与支气管哮喘血清总IgE、气道反应性的关系探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一部分: 文献综述部分 |
| 综述一: 支气管哮喘疾病演变中肺卫功能的认识 |
| 1.中医对哮喘的基本认识 |
| 2.中医对肺卫功能的认识与研究 |
| 2.1 中医脏腑互相联系下认识肺卫功能 |
| 2.2 中医脏腑整体功能下认识肺卫功能 |
| 3.中医肺卫理论指导下对支气管哮喘的辨证施治 |
| 4.小结 |
| 参考文献 |
| 综述二: 支气管哮喘血清总IGE及气道反应研究进展 |
| 1.西医对支气管哮喘基本认识 |
| 2.支气管哮喘疾病病理演变过程中对血清总IgE的认识 |
| 3.支气管哮喘血清总IgE与气道反应研究现状 |
| 3.1 支气管哮喘免疫机制下的血清总IgE |
| 3.2 支气管哮喘中的气道高反应性 |
| 3.3 支气管哮喘免疫调节机制下血清总IgE与气道反应的关系 |
| 3.4 支气管哮喘血清总IgE指导下对气道反应的临床干预 |
| 4.小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分: 肺卫功能与支气管哮喘血清总IGE,气道反应相关性的临床研究 |
| 1.研究目的 |
| 2.研究对象 |
| 2.1 病例来源 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.3 纳入标准 |
| 2.4 排除标准 |
| 3.研究方法 |
| 3.1 研究类型 |
| 3.2 样本含量估算方法 |
| 3.3 临床信息采集内容 |
| 3.4 研究因素 |
| 3.5 资料收集 |
| 3.6 数据处理 |
| 3.7 质量控制 |
| 3.8 统计方法 |
| 4.研究结果 |
| 4.1 临床一般资料结果 |
| 4.2 肺卫症状统计描述结果 |
| 4.3 肺卫功能总症状、单项症状与血清总IgE、气道反应性指标Spearman相关性分析结果 |
| 4.4 血清总IgE、气道反应指标的spearman相关性分析结果 |
| 5.讨论分析 |
| 5.1 基本资料分析 |
| 5.2 哮喘肺卫症状分布特征分析 |
| 5.3 肺卫功能症状与血清总IgE、气道反应性指标相关性分析 |
| 5.4 总结 |
| 6.结语 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 支气管哮喘的西医诊断标准 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）基于“痰瘀同源”理论运用射干麻黄汤合桂枝茯苓丸治疗哮喘急性发作期的临床观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 引言 |
| 临床研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究对象 |
| 3 诊断标准 |
| 3.1 西医诊断标准以及分期、分级 |
| 3.2 中医证候诊断标准 |
| 4 病例选择 |
| 4.1 纳入标准 |
| 4.2 排除标准 |
| 4.3 剔除标准 |
| 4.4 脱落标准 |
| 5 研究方法 |
| 5.1 分组方法 |
| 5.2 治疗方案 |
| 6 观察指标 |
| 6.1 患者基本信息 |
| 6.2 安全性指标 |
| 6.3 疗效观察指标及判断标准 |
| 7 统计分析 |
| 8 研究结果 |
| 8.1 一般资料比较 |
| 8.2 治疗前后疗效性指标比较 |
| 8.3 不良反应与安全性评价 |
| 讨论 |
| 1 中医对支气管哮喘的认识 |
| 2 痰瘀是支气管哮喘的重要因素 |
| 2.1 痰饮伏肺为哮病的夙根 |
| 2.2 痰瘀同源,支气管哮喘多兼夹血瘀 |
| 2.3 活血化瘀法常用于支气管哮喘的临床治疗 |
| 2.4 部分活血化瘀药物具有干预支气管哮喘的药理作用 |
| 2.5 从痰瘀论治支气管哮喘或优于单用活血或化痰治法 |
| 3 西医对支气管哮喘的认识与治疗现状 |
| 3.1 支气管哮喘的定义与流行病学 |
| 3.2 支气管哮喘的发病机制与病理特点 |
| 3.3 支气管哮喘的西医治疗 |
| 4 支气管哮喘凝血功能的分析 |
| 5 射干麻黄汤、桂枝茯苓丸分析 |
| 6 研究结果分析 |
| 7 不足与展望 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 活血化瘀法治疗支气管哮喘的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附件1:中医证候积分量表 |
| 附件2:哮喘控制问卷(ACQ7) |
| 附件3:在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
四、2790例支气管哮喘患者血中嗜酸粒细胞的观察（论文参考文献）
- [1]益气温阳护卫法对哮喘大鼠Th17细胞/Treg细胞免疫失衡的影响及作用机理研究[D]. 余涛. 江西中医药大学, 2021(01)
- [2]肺脾为核心脏腑整体辨证支气管哮喘慢性持续期免疫调控研究[D]. 司东旭. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]麻杏石甘汤对过敏性哮喘大鼠辅助T淋巴细胞调控作用机制研究[D]. 郑炜东. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [4]基于CCL24/CCR3通路探讨疏风通络方对小鼠嗜酸细胞CCR3受体、ERK磷酸化及基因表达影响研究[D]. 邢江楠. 天津中医药大学, 2021(01)
- [5]奥马珠单抗联合布地奈德福莫特罗对IgE介导的哮喘患者临床疗效评价[D]. 马晓伟. 山东大学, 2021(12)
- [6]奥马珠单抗治疗重度哮喘患者的生物标志物和对免疫细胞的影响[D]. 张清. 北京协和医学院, 2021(02)
- [7]诱导痰液IL-25水平在儿童支气管哮喘发病中的临床意义研究[D]. 张赟. 山东大学, 2020(04)
- [8]儿童湿热哮喘临床指标相关性及加味茵陈蒿汤对湿热哮喘模型鼠Th17细胞影响的研究[D]. 李成刚. 山东中医药大学, 2020(01)
- [9]肺卫功能与支气管哮喘血清总IgE、气道反应性的关系探讨[D]. 于明霞. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]基于“痰瘀同源”理论运用射干麻黄汤合桂枝茯苓丸治疗哮喘急性发作期的临床观察[D]. 王成. 成都中医药大学, 2020(02)